CN108144034A - 一种降血脂和/或改善记忆力的中药组合物及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种中药组合物及其在制备辅助降血脂、改善记忆力方面的药物或保健品中的应用。其由银杏叶或其提取物、葛根或其提取物、山楂或其提取物、葡萄籽或其提取物、生姜或其提取物和绿茶或其提取物组成,各组分用量按上述顺序以重量份比率表示为,0.5‑8.0∶0.8‑4.8∶0.9‑4.8∶0.3‑3.5∶0.5‑2.5∶1。本发明中药组合物组方合理,具有降血脂、改善记忆力的功能,效果显著,无遗传毒性,在制备辅助降血脂、改善记忆力方面的药物或保健品中有良好的应用。

Description

一种降血脂和/或改善记忆力的中药组合物及其应用
技术领域
本发明涉及食品和药品领域,具体涉及一种降血脂和/或改善记忆力的中药组合物、其药学上可接受的口服制剂及其应用。
背景技术
传统医学认为,高脂血症是由于饮食不当、年高脏衰或其它病诱发,导致脾肾肝三脏失常,或使脂质不能正常运转,或多余脂质排泄不及,成为脂浊,阻于脉道,气血不畅,机体脏器失养之症,日久则可引发胸痹中风等病。现代医学认为,血液是神智的物质基础,但是淤血形成之后,瘀阻心脑致使心神不宁,心悸失眠,健忘痴呆。现代医学研究结果表明,高血脂可导致脑动脉和毛细血管内皮细胞功能受损,降低大脑血流量,使脑代谢受损,减少了脑动脉的营养和氧供应,从而增加了认知功能障碍和痴呆的危险性,还可直接影响与认知功能障碍有关的神经元变性,临床上老年痴呆患者中伴有血脂高的人所占比例较高,也提示了高血脂与痴呆的发生有一定的关联。
中国专利文献已公开了许多降血脂或改善记忆的保健食品,其中部分产品选用了葛根、银杏叶、山楂及其提取物作原料。申请号为CN201510685443.3一种改善记忆功能保健茶的制备方法的中国发明专利公开了一种改善记忆力的保健食品,配方是以银杏叶、葛根、山楂为主要原料,经粉碎、灭菌而制成,工艺过于简单,服用量大,未严格按照国家监管部门公布的改善记忆功能评价方法进行功能验证和安全性评价。申请号为201510234146.7一种降低血脂粘稠度的中药组合物及制备方法及应用的发明专利公开了一种含有银杏叶、葛根原料的降低血脂的产品制备方法,所用药材品种高达38味,组方过于庞杂,银杏叶、葛根作为主要功能原料,工艺简单、功能和安全性试验评价资料缺乏,难以评估其降低血脂保健功能。
综上所述,现有技术中具有降血脂或改善记忆力的保健食品存在组分过于简单、服用量大且功能和安全性试验评价资料缺乏,难以评估其降低血脂保健功能的缺陷。
发明内容
为了解决现有技术中存在的组分过于简单、服用量大且功能和安全性试验评价资料缺乏,难以评估其降低血脂保健功能的问题,本发明提供一种降血脂和/或改善记忆力的中药组合物、其药学上可接受的口服制剂及其应用。
本发明的第一方面提供了一种降血脂和/或改善记忆力的中药组合物,该组合物由银杏叶或其提取物、葛根或其提取物、山楂或其提取物、葡萄籽或其提取物、生姜或其提取物和绿茶或其提取物组成,各组分按重量份比率表示为,银杏叶或其提取物为0.5-8.0,葛根或其提取物为0.8-4.8,山楂或其提取物为0.9-4.8,葡萄籽或其提取物为0.3-3.5,生姜或其提取物为0.5-2.5,绿茶或其提取物为1。
本发明组合物各组分优选重量份比率为:银杏叶或其提取物为2.0-7.5,葛根或其提取物为1.6-4.2,山楂或其提取物为0.8-4.0,葡萄籽或其提取物为0.8-3.2,生姜或其提取物为0.6-2.1,绿茶或其提取物为1。
本发明组合物各组分进一步优选重量份比率为:银杏叶或其提取物为4.2-7.0,葛根或其提取物为2.0-4.0,山楂或其提取物为1.2-3.8,葡萄籽或其提取物为1.0-3.0,生姜或其提取物为1.0-1.9,绿茶或其提取物为1。
本发明组合物各组分最佳重量份比率为:银杏叶或其提取物为6.7、葛根或其提取物为3.8、山楂或其提取物为3.6、葡萄籽或其提取物为2.8、生姜或其提取物为1.8、绿茶或其提取物为1。
同时,所述重量比遵从以下前提条件:要么各组分都用生药原料药,要么各组分都用各自的提取物。
上述葛根提取物、生姜提取物、山楂提取物、葡萄籽提取物、银杏叶提取物、绿茶提取物的提取制备方法中,所用的溶剂可以是水或乙醇等;所用的方法是指中药提取的常用方法,可以是煎煮法、回流提取法、浸渍法、渗漉法或连续提取法等。例如葛根可以用乙醇回流提取或水提醇沉法得到葛根提取物;银杏叶可以用乙醇回流提取或水提柱层析法得到银杏叶提取物。本发明提供了葛根提取物、生姜提取物、山楂提取物、葡萄籽提取物、银杏叶提取物、绿茶提取物的优选制备工艺,具体如下。
所述的银杏叶提取物优选提取制备工艺为:取所述重量份的银杏叶,加入70%乙醇,回流提取,滤过,合并滤液,回收乙醇,加水适量,离心滤过,通过大孔吸附树脂,先后用水和70%乙醇洗脱,收集70%乙醇洗脱液,回收乙醇,浓缩至相对密度1.08-1.12(60℃),浸膏液干燥,粉碎,过筛,得银杏叶提取物。
所述的葛根提取物优选提取制备工艺为:取所述重量份的葛根,破碎成20目的粗粒,加入70%乙醇10倍量,回流提取2次,滤过,合并滤液,回收乙醇,浓缩至相对密度1.05-1.15(60℃),浸膏液喷雾干燥,粉碎,过筛,得葛根提取物。
所述的山楂提取物优选提取制备工艺为:取所述重量份的山楂,破碎成20目的粗粒,加入70%乙醇10倍量,回流提取2次,滤过,合并滤液,回收乙醇,浓缩至相对密度1.04-1.08(60℃),浸膏液干燥,粉碎,过筛,得山楂提取物。
所述的葡萄籽提取物优选提取制备工艺为:取所述重量份的葡萄籽,破碎成20目的粗粒,加入30%乙醇,回流提取,滤过,合并滤液,回收乙醇,加水适量,离心滤过,通过大孔吸附树脂,先后用水和50%乙醇洗脱,收集50%乙醇洗脱液,回收乙醇,浓缩至相对密度1.08-1.12(60℃),浸膏液干燥,粉碎,过筛,得葡萄籽提取物。
所述的生姜提取物优选提取制备工艺为:取所述重量份的生姜,切薄片,加入75%乙醇12倍量,回流提取2次,滤过,合并滤液,回收乙醇,浓缩至相对密度1.08-1.12(60℃),浸膏液干燥,粉碎,过筛,得生姜提取物。
所述的绿茶提取物优选提取制备工艺为:取所述重量份的绿茶,用60-80℃纯化水浸提,用10μm精滤膜精滤,滤液通过聚酰胺柱层析,先用纯化水洗脱,再用20-85%乙醇洗脱,洗脱液回收乙醇,在70-85℃,0.06-0.08MPa条件下浓缩,冷却结晶,真空干燥,粉碎,过筛,得绿茶提取物。
本发明第二方面提供了一种根据本发明第一方面的降血脂和/或改善记忆力的中药组合物制备的药学上可接受的口服制剂。
本发明中药组合物中的银杏叶或其提取物、葛根或其提取物、山楂或其提取物、葡萄籽或其提取物、生姜或其提取物和绿茶或其提取物可以分别用适宜的溶剂和方法单独提取加工得到提取物,再加入药学上可接受的辅料制得药学上可接受的口服制剂。所述的“单独提取”是指银杏叶、葛根、山楂、葡萄籽、生姜、绿茶每一味药材分别通过不同的工艺单独提取得到提取物。
该药学上可接受的口服制剂的制备方法为:将上述银杏叶提取物、葛根提取物、山楂提取物、葡萄籽提取物、生姜提取物、绿茶提取物,加入二氧化硅、硬脂酸镁等口服制剂常用的辅料,混匀,充填,制成各种口服制剂。
优选地,药学上可接受的口服制剂选自胶囊、颗粒、片剂、丸剂、口服液或软胶囊。
本发明的第三方面提供了根据第一方面的降血脂和/或改善记忆力的中药组合物在制备辅助降血脂、改善记忆力方面的药物或保健品中的应用。
本发明一种降血脂和/或改善记忆力的中药组合物配方合理,无遗传毒性,在制备辅助降血脂、改善记忆力方面的药物或保健品中得以广泛应用,效果明显。
具体实施方式
以下为本发明的具体实施方式,所述的实施例是为了进一步描述本发明,而不是限制本发明。
以下给出本发明降血脂和/或改善记忆力的中药组合物的全方粉末、胶囊、片剂、丸剂、口服液和软胶囊的制备方法。
实施例1-5、本发明降血脂和/或改善记忆力的中药组合物的全方粉末的制备方法
表A1本发明降血脂和/或改善记忆力的中药组合物的全方粉末的配方
本发明为制备本发明降血脂和/或改善记忆力的中药组合物的全方粉末,在实施例1到5提供了五种配方组分,各组分的用量配方表参见表A1。
根据表A1的组分用量称取葛根、山楂、生姜、银杏叶、葡萄籽和绿茶,然后对各组分进行以下工序得到相应的提取物:
葛根破碎成粗粒,加入70%乙醇10倍量,回流提取2次,滤过,合并滤液,回收乙醇,浓缩至适量,浸膏液喷干,粉碎,过筛,得葛根提取物;
山楂破碎成粗粒,加入70%乙醇10倍量,浸泡1小时,回流提取2次,滤过,合并滤液,回收乙醇,浓缩至适量,浸膏液喷干,粉碎,过筛,得山楂提取物;
生姜破碎成粗粒,加入75%乙醇12倍量,浸泡1小时,回流提取2次,滤过,合并滤液,回收乙醇,浓缩至适量,浸膏液喷干,粉碎,过筛,得生姜提取物;
绿茶加入纯化水,60-80℃提取2次,提取液用10μm超滤膜滤过,上聚酰胺层析柱分离,50%乙醇洗脱,洗脱液回收乙醇,60℃真空浓缩,冷却结晶,析出物0.06-0.08Mpa,25℃真空干燥,粉碎,过筛,得绿茶提取物;
银杏叶破碎,加50%乙醇回流提取,滤过,滤液管式离心,上大孔吸附树脂,分别用纯化水和30%乙醇洗涤,弃去,最后用70%乙醇洗脱,收集洗脱液,回收乙醇,喷雾干燥,得银杏叶提取物;
葡萄籽破碎,加70%乙醇回流提取2次,滤过,滤液管式离心,上大孔吸附树脂,分别用纯化水和30%乙醇洗涤,弃去,最后用70%乙醇洗脱,收集洗脱液,回收乙醇,喷雾干燥,得葡萄籽提取物。
取上述葛根提取物、生姜提取物、山楂提取物、银杏叶提取物、葡萄籽提取物、绿茶芪提取物,混和得到本发明的全方粉末。
实施例6-11、本发明降血脂和/或改善记忆力的中药组合制备的胶囊的制备方法
表A2本发明降血脂和/或改善记忆力的中药组合物的胶囊的配方
本发明为制备本发明降血脂和/或改善记忆力的中药组合物的胶囊,在实施例6到11提供了六种配方组分,各组分的用量配方表参见表A2。
根据表A2的组分用量称取葛根、山楂、生姜、银杏叶、葡萄籽和绿茶,然后对各组分进行以下工序得到相应的提取物:
葛根破碎成粗粒,加入70%乙醇10倍量,回流提取2次,滤过,合并滤液,回收乙醇,浓缩至适量,浸膏液喷干,粉碎,过筛,得葛根提取物;
山楂破碎成粗粒,加入70%乙醇10倍量,浸泡1小时,回流提取2次,滤过,合并滤液,回收乙醇,浓缩至适量,浸膏液喷干,粉碎,过筛,得山楂提取物;
生姜破碎成粗粒,加入75%乙醇12倍量,浸泡1小时,回流提取2次,滤过,合并滤液,回收乙醇,浓缩至适量,浸膏液喷干,粉碎,过筛,得生姜提取物;
绿茶加入纯化水,60-80℃提取2次,提取液用10μm超滤膜滤过,上聚酰胺层析柱分离,50%乙醇洗脱,洗脱液回收乙醇,60℃真空浓缩,冷却结晶,析出物0.06-0.08Mpa,25℃真空干燥,粉碎,过筛,得绿茶提取物;
银杏叶破碎,加50%乙醇回流提取,滤过,滤液管式离心,上大孔吸附树脂,分别用纯化水和30%乙醇洗涤,弃去,最后用70%乙醇洗脱,收集洗脱液,回收乙醇,喷雾干燥,得银杏叶提取物;
葡萄籽破碎,加70%乙醇回流提取2次,滤过,滤液管式离心,上大孔吸附树脂,分别用纯化水和30%乙醇洗涤,弃去,最后用70%乙醇洗脱,收集洗脱液,回收乙醇,喷雾干燥,得葡萄籽提取物。
取上述葛根提取物、生姜提取物、山楂提取物、银杏叶提取物、葡萄籽提取物、绿茶芪提取物,加入胶囊剂常用的辅料,混匀,充填,制成胶囊1000粒。
实施例12、本发明降血脂和/或改善记忆力的中药组合物片剂制备方法
取葛根提取物、山楂提取物、生姜提取物、银杏叶提取物、葡萄籽提取物、绿茶提取物粉碎过80目筛备用,按照表3量称取原料和辅料,将PVP溶于50%乙醇中制成2%的溶液备用,将葛根提取物150g、山楂提取物72g、生姜提取物40g、银杏叶提取物36g、葡萄籽提取物30g、绿茶提取物70g、淀粉30g、微晶纤维素8g混合均匀,加入2%PVP50%乙醇溶液适量,搅拌均匀,制成适宜软材,过20目筛制成颗粒,颗粒在70℃条件下干燥,制好的颗粒加入硬脂酸镁3g和羧甲基淀粉钠10g,过18目筛整粒,混合均匀,压制片剂1000片。
实施例13、本发明降血脂和/或改善记忆力的中药组合物颗粒型冲剂制备方法
将蔗糖粉碎过100目筛备用,另取葛根提取物、山楂提取物、生姜提取物、银杏叶提取物、葡萄籽提取物、绿茶提取物粉碎过80目筛备用,按照处方量称取原料和辅料,将PVP、矫味剂溶于50%乙醇中制成2%的溶液备用,将葛根提取物2000g、山楂提取物1600g、生姜提取物1450g、银杏叶提取物450g、葡萄籽提取物480g、绿茶提取物1067g、糖粉1057g混合均匀,加入2%PVP50%乙醇溶液适量,搅拌均匀,制成适宜软材,过20目筛制成颗粒,颗粒在70℃条件下干燥,过18目筛整粒,混合均匀,分装即得颗粒1000袋。葛根提取物、山楂提取物、生姜提取物、银杏叶提取物、葡萄籽提取物、绿茶提取物按照实施例的制备工艺制得。
实施例14、本发明降血脂和/或改善记忆力的中药组合物丸剂制备方法
取葛根2000g,山楂2000g,生姜2000g,银杏叶1067g、葡萄籽1067g、绿茶800g,粉碎,混匀后按照中药丸剂的制备方法将其制成中药丸剂。
实施例15、本发明降血脂和/或改善记忆力的中药组合物软胶囊制备方法
取葛根提取物150g,山楂提取物180g,生姜提取物70g,银杏叶提取物35g、葡萄籽提取物37g、绿茶提取物70g,混匀后按照中药软胶囊的制备方法将其制成中药软胶囊。
实施例16、本发明降血脂和/或改善记忆力的中药组合物口服液制备方法
取葛根1200g,山楂1520g,生姜1100g,银杏叶1440g、葡萄籽1200g、绿茶780g,破碎成粗粒,混匀后按照中药口服液的制备方法将其制成中药中服液。
实验表明,上述的中药组合物具有辅助降血脂、改善记忆力方面的保健功能。
实验例1本发明中药组合物降血脂作用实验观察
为验证本发明中药组合物的降血脂作用,发明人进行了动物实验,表明其具有降血脂作用,且无毒副作用,现报告如下。
1、材料与方法
1.1样品来源与处理:本发明中药组合物胶囊复合粉由桂林金可保健品有限公司提供,样品内容物为淡黄色粉末,临用前用蒸馏水配制成所需浓度。
1.2实验动物及环境:雄性健康SD小鼠,体重180-214g,由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供(合格证号:SCXK(沪)2012-0002号)。合格证号:2013001809678。实验期间全部动物给予清洁级全价鼠颗粒饲料和灭菌水自由食用。
1.3实验方法
1.3.1剂量与分组:降血脂试验及各项生化指标所用动物均各按体重随机分成5组,每组12只,设120、230和700mg/Kg.bw/d 3个剂量组(相当于成人每日每千克体重推荐摄入量的5、10、30倍)和空白对照组、模型组(纯净水)。
1.3.2受试物的给予:低、中、高剂量组配制浓度分别为12mg/mL、23mg/mL、70mg/mL,空白对照组和模型组每日灌胃量为10mL/Kg.bw,连续灌胃32d。
1.3.3饲料组成
基础维持饲料:由苏州双狮实验动物饲料科技有限公司提供,批准文号:苏饲审(2009)05032。
模型饲料主要组成:53.8%维持饲料、1.2%胆固醇、20%蔗糖、15%猪油、0.2%胆酸钠、9%酪蛋白、0.8%磷酸氢钙。
1.3.4试验方法:
1.3.4.1适应期:在实验环境下,大鼠喂饲维持饲料。
1.3.4.2造模期:按体重随机分成2组,10只大鼠给予维持饲料作空白对照组,40只给予模型饲料作为模型组。每周称量体重1次。模型组给予模型饲料喂养7d后,空白对照组和模型组大鼠不禁食眼眶内眦静脉取血,采血后尽快分离血清,用全自动生化分析仪分别测定血清中胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)的水平。根据TC水平将模型组随机分成4组,每组10只,分组后空白对照组和模型组比较TC、TG、LDL-C、HDL-C差异均有统计学意义。
1.3.4.3给样期:分组后,3个剂量组每天经口给予相应浓度的受试样品,空白对照组和模型对照组同时给予同体积溶剂,空白对照组继续给予维持饲料,模型对照组及3个剂量组继续给予模型饲料,并每周称量体重,于实验结束时不禁食采血,采血后尽快分离血清,测定血清中TC、TG、LDL-C、HDL-C水平。
1.4统计方法:实验数据用spss10.0软件进行统计分析。
2、结果
2.1造模期大鼠体重及血清TC、TG、LDL-C、HDL-C的结果:造模1周后模型组体重与空白对照组比较,体重变化如下表1,结果表明空白对照组体重与模型组的初始体重比较,差异无统计学意义(P>0.05)。
表1造模期大鼠的体重
各组的TC、TG、LDL-C、HDL-C用t检验进行统计处理,模型组的TC、TG、LDL-C水平高于空白对照组,HDL-C水平低于空白对照组,结果见表2。
表2造模期大鼠血清TC、TG、HDL-C、LDL-C的水平(mmol/L)
2.2给样期本发明降血脂和/或改善记忆力的中药组合物对大鼠体重及血清TC、TG、LDL-C、HDL-C水平的影响:
造模期结束后,按TC水平将模型组大鼠分为三个剂量组和一个模型对照组,各剂量组体重和模型对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。给样32d,每周称量体重,将终末体重进行方差齐性检验,满足方差齐性要求,用单因素方差分析方法中多个实验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。两组间比较用t检验。由表3可见,0g/Kg.bw/d组(模型对照组)终末体重大于0g/Kg.bw/d组(空白对照组),差异有统计学意义(P<0.05)。0.12g/Kg.bw/d、0.23g/Kg.bw/d、0.7g/Kg.bw/d组终末体重与0g/Kg.bw/d组(模型对照组)比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。
表3本发明降血脂和/或改善记忆力的中药组合物对大鼠体重的影响
造模结束后,按TC水平将模型组大鼠分为三个剂量组及一个模型对照组,各组的血清TC、TG、HDL-C及LDL-C进行方差齐性检验,满足方差齐性要求,用单因素方差分析方法中多个实验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。两组间比较用t检验。由表4可见,0g/Kg.bw/d组(模型对照组)血清TC、TG、LDL-C的水平高于0g/Kg.bw/d组(空白对照组),HDL-C的水平低于0g/Kg.bw/d(空白对照组),差异有统计学意义(P<0.05)。0.12g/Kg.bw/d、0.23g/Kg.bw/d、0.7g/Kg.bw/d组血清TC、TG、HDL-C及LDL-C的水平与0g/Kg.bw/d(模型对照组)比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。表明给样前大鼠血清中TC、TG、HDL-C及LDL-C水平在各组间较为均衡。
表4给样前大鼠血清TC、TG、HDL-C、LDL-C(mmol/L)的水平
各组大鼠给样32d后,眼眶取血,测血清TC、TG、HDL-C及LDL-C的水平,对其进行方差齐性检验,TC、LDL-C不满足方差齐性要求,用秩和检验进行统计处理。TG、HDL-C满足方差齐性要求,用单因素方差分析方法中多个实验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。两组间比较用t检验。由表5可见,0g/Kg.bw/d(模型对照组)血清TC、LDL-C的水平高于0g/Kg.bw/d组(空白对照组),HDL-C的水平低于0g/Kg.bw/d组(空白对照组),0.7g/Kg.bw/d组血清中TC、TG及LDL-C的水平低于0g/Kg.bw/d组(模型对照组),差异有统计学意义(P<0.05)。0.12g/Kg.bw/d、0.23g/Kg.bw/d、0.7g/Kg.bw/d组血清HDL-C水平与0g/Kg.bw/d组(模型对照组)比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。
表5给样后大鼠血清TC、TG、HDL-C、LDL-C(mmol/L)的水平
根据国食药监保化[2012]107号,符合辅助降血脂功能标准,证明本品具有较好的辅助降血脂功能。
为了说明本发明的降血脂和/或改善记忆力的中药组合物具有辅助降血脂、改善记忆力方面的保健功能,对该中药组合物进行如下动物试验。
实验例2本发明中药组合物改善记忆作用实验观察
为验证本发明中药组合物的改善记忆作用,发明人进行了动物实验,表明其具有改善记忆作用,且无毒副作用,现报告如下。
1、材料与方法
1.1样品来源与处理:本发明中药组合物胶囊复合粉由桂林金可保健品有限公司提供,批号:20131101,样品内容物为淡黄色粉末,临用前用蒸馏水配制成所需浓度,受试样品人体推荐剂量为1.4g/人/日。
1.2实验动物及环境:选用上海西普尔-必凯实验动物有限公司繁殖的SPF级CI/FI代健康雌性小鼠240只,实验动物生产许可证号为SCXK(沪)2013-0016,合格证号:20080016451756,2008001651944。
第一组实验动物为小鼠120只,各平行实验组初始体重范围为18.0-21.9g,小鼠按体重随机分为I、II、III三个大组,每大组40只小鼠,分成4个剂量组,每个剂量组10只。I组进行小鼠跳台试验,II组进行小鼠避暗试验,III组进行小鼠水迷宫试验。
重复实验动物为小鼠120只,各平行实验组初始体重范围为18.2-21.8g,小鼠按体重随机分为I、II、III三个大组,每大组40只小鼠,分成4个剂量组,每个剂量组10只。I组进行小鼠跳台试验,II组进行小鼠避暗试验,III组进行小鼠水迷宫试验。
试验动物在温度为20-25℃、相对湿度为40%-70%的本中心屏障环境中饲养。实验动物使用许可证号:SYXK(苏)2015-0009。辐照灭菌饲料由苏州双狮实验动物饲料科技有限公司提供,批准文号:苏饲审(2009)05032。
1.3实验方法
1.3.1剂量与分组:受试样品人体推荐剂量1.4g/人/日(以60Kg体重计),设0.12、0.23和0.7g/Kg.bw/d三个剂量组(相当于成人每日每千克体重推荐摄入量的5、10、30倍),另设0.0g/Kg.bw/d组以无菌水代替受试物,
1.3.2受试物的给予:小鼠灌胃量为0.1mL/10g.bw。连续1个月后测量各项改善记忆功能指标。
1.3.3主要仪器
YLS-3TB跳台记录仪、YLS-17B避暗穿梭测试仪、SMG-2型水迷宫仪、T-1000型电子天平。
1.3.4试验方法:按《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)之辅助改善记忆功能检验方法进行。
1.3.4.1跳台试验
各剂量组动物连续灌胃1个月。末次给样后的次日,将小鼠放入反应箱内适应3min,然后将小鼠放置于反应箱内的铜栅上,立即通以36V的交流电,小鼠受到电击,跳回平台。训练一次后,将小鼠放在反应箱内的平台上,记录5min内各鼠第一次跳下平台时间(潜伏期)和跳下平台的错误次数。24h进行重测试,将小鼠放在平台上,记录各鼠第一次跳下平台的潜伏期、各鼠3min内受电击次数和受电击的小鼠总数,计算出现错误反应的小鼠百分率。停止训练5天后再按重测试方法重复测试一次。
若受试样品组与对照组比较,潜伏期明显延长,错误次数或跳下平台的动物数明显少于对照组,差异有显著性,以上三个指标中,任一项指标阳性,均可判定该项实验阳性。
1.3.4.2避暗试验
各剂量组动物连续灌胃1个月。末次给样后次日开始训练,将小鼠面部背向洞口放入明室同时启动计时器。小鼠穿过洞口进入暗室受到电击,计时器停止,取出小鼠,记录每鼠从放入明室至第一次进入暗室遭电击时间(潜伏期),并记录5min内受电击次数。24h重测试,记录每只小鼠的潜伏期、5min内受电击次数及5min内进入暗室的小鼠百分率。停止训练5天后再按重测试方法重复测试一次。
若受试样品组小鼠进入暗室的潜伏期明显长于对照组,5min内进入暗室的错误次数或5min内进入暗室的动物数少于对照组,且差异有显著性,以上三项指标中任一项指标阳性,均可判定该实验阳性。
1.3.4.3水迷宫试验
各剂量组动物连续灌胃1个月。末次给样后次日开始训练。迷宫泳道水深9cm,水温20℃。小鼠训练时间限定120S。每次训练前将小鼠放在梯子附近,背朝楼梯,使其自动爬上1次。从A处开始测试,记录从A处到达终点的时间、发生错误的次数。第二次从B点开始,测试训练3次,分别记录3次从B处到达终点的时间和发生错误的次数。末次从起点进行,将小鼠背向终点放在起点,记录从起点到达终点的时间和发生错误的次数。停止训练5天后从起点进行重复测试。
试验组与对照组比较,试验组到达终点所用的时间或到达终点前的错误次数明显少于对照组,或2min内到达终点的动物数明显多于对照组,且经统计学检验有显著性差异。任一项指标阳性,均可判定该实验阳性。
以上三项试验,用另一批小鼠重复试验一次,方法同上。
测试条件:测试环境为隔音、避光的专用行为实验室,实验室温度为20-25℃,相对湿度40%-70%。
1.4统计方法:实验数据用spss10.0软件进行统计分析。
2、结果
2.1跳台试验的结果:经口给予小鼠不同剂量的本发明降血脂和/或改善记忆力的中药组合物1个月,第一次试验中,小鼠训练期、24h及5d后重测试时的潜伏期、错误次数不满足方差齐性要求,用秩和检验进行统计处理。其它指标满足方差齐性要求,用单因素方差分析方法进行统计处理。24h及5d后重测试时跳下平台的动物数用确切概率法进行统计处理。由表6、7、8、9可见,0.70g/kg.bw/d组小鼠训练期及24h重测试时的潜伏期长于0g/kg.bw/d组,24h重测试时的错误次数少于0g/kg.bw/d组,差异有统计学意义(P<0.05)。0.70g/kg.bw/d组24h重测试时跳下平台的动物数少于0g/kg.bw/d组,差异有统计学意义(P<0.05)。
第二次重复试验中,小鼠24h重测试时的潜伏期不满足方差齐性要求,用秩和检验进行统计。其它指标满足方差齐性要求,用单因素方差分析方法进行统计处理。24h及5d后重测试时跳下平台的动物数用确切概率法进行统计处理。由表6、7、8、9可见,0.70g/kg.bw/d组24h及5d后重测试时的潜伏期长于0g/kg.bw/d组,5d后重测试时的错误次数少于0g/kg.bw/d组,差异有统计学意义(P<0.05)。24h及5d后重测试时跳下平台的动物数各剂量组与0g/kg.bw/d组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。
表6本发明中药组合物对小鼠跳台试验训练测试的影响(N=10)
表7本发明中药组合物对小鼠跳台试验24h重测试的影响(N=10)
表8本发明中药组合物对小鼠跳台试验5d重测试的影响(N=10)
表9小鼠跳台试验中跳下平台动物数的比较(N=10)
2.2避暗试验的结果:经口给予小鼠不同剂量的本发明降血脂和/或改善记忆力的中药组合物1个月,第一次试验中,小鼠24h重测试时的潜伏期、错误次数不满足方差齐性要求,用秩和检验进行统计处理。其它指标满足方差齐性要求,用单因素方差分析方法进行统计处理。24h及5d后重测试时进入暗箱的动物数用确切概率法进行统计处理。由表10、11、12、13可见,0.70g/kg.bw/d组小鼠24h重测试时的潜伏期长于0g/kg.bw/d组,24h重测试时的错误次数少于0g/kg.bw/d组,24h重测试时错误次数少于0g/kg.bw/d组,差异均有统计学意义(P<0.05)。24h及5d后重测试时进入暗箱的动物数0.12g/kg.bw/d、0.23g/kg.bw/d、0.70g/kg.bw/d组与0g/kg.bw/d组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。
第二次重复试验中,小鼠5d后重测试时的潜伏期、错误次数不满足方差齐性要求,用秩和检验进行统计。其它指标均满足方差齐性要求,用单因素方差分析方法进行统计处理。24h及5d后进入暗箱的动物数用确切概率法进行统计处理。由表10、11、12、13可见,0.23g/kg.bw/d、小鼠5d后重测试时的潜伏期长于0g/kg.bw/d组,错误次数少于0g/kg.bw/d组,差异有统计学意义(P<0.05)。5d后重测试时进入暗箱的动物数0.70g/kg.bw/d组少于0g/kg.bw/d组,差异有统计学意义(P<0.05)。
表10本发明中药组合物对小鼠避暗试验训练测试的影响(N=10)
表11本发明中药组合物对小鼠避暗试验24h重测试的影响(N=10)
表12本发明中药组合物对小鼠避暗试验5d重测试的影响(N=10)
表13小鼠避暗试验中进入暗箱动物数的比较(N=10)
2.2水迷宫试验的结果:经口给予小鼠不同剂量的本发明降血脂和/或改善记忆力的中药组合物1个月,第一次试验中,小鼠水迷宫试验训练期5次总成绩及5d后重测试时的到达终点时间、错误次数均满足方差齐性的要求,用单因素方差分析方法进行统计处理。到达终点的动物数用确切概率法进行统计处理。由表14、15可见,0.12g/kg.bw/d、0.23g/kg.bw/d、0.70g/kg.bw/d组训练期5次总成绩及5d后重测试时在2min内到达终点动物数与0g/kg.bw/d组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。
第二次试验中,小鼠水迷宫试验训练期5次总成绩及5d后重测试时的到达终点时间、错误次数均满足方差齐性的要求,用单因素方差分析方法进行统计处理。到达终点的动物数用确切概率法进行统计处理。由表16、17可见,0.70g/kg.bw/d组5d后重测试时到达终点时间少于0g/kg.bw/d组,差异有统计学意义(P<0.05)。0.70g/kg.bw/d组5d后测试时在2min内到达终点动物数多于0g/kg.bw/d组,差异有统计学意义(P<0.05)。
表14本发明中药组合物对小鼠水迷宫试验的影响(N=10)(第一次试验5次总成绩)
表15本发明中药组合物对小鼠水迷宫试验的影响(N=10)(第一次试验5d后重测试)
表16本发明降血脂和/或改善记忆力的中药组合物对小鼠水迷宫试验的影响( N=10)(第二次试验5次总成绩)
表17本发明中药组合物对小鼠水迷宫试验的影响(N=10)(第二次试验5d后重测试)
3、结论
用跳台试验、避暗试验、水迷宫试验评价了本发明降血脂和/或改善记忆力的中药组合物的辅助改善记忆功能。本发明降血脂和/或改善记忆力的中药组合物按0.12g/kg.bw/d、0.23g/kg.bw/d、0.70g/kg.bw/d剂量连续灌胃1个月,结果显示:
3.1跳台试验:第一次试验中,0.70g/kg.bw/d组小鼠训练期及24h重测试时的潜伏期长于0g/kg.bw/d组,24h重测试时的错误次数少于0g/kg.bw/d组,差异有统计学意义(P<0.05)。0.70g/kg.bw/d组24h重测试时跳下平台的动物数少于0g/kg.bw/d组,差异有统计学意义(P<0.05)。
第二次试验中,0.70g/kg.bw/d组24h及5d后重测试时的潜伏期长于0g/kg.bw/d组,5d后重测试时的错误次数少于0g/kg.bw/d组,差异有统计学意义(P<0.05)。24h及5d后重测试时跳下平台的动物数各剂量组与0g/kg.bw/d组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。
3.2避暗试验:第一次试验中,0.70g/kg.bw/d组小鼠24h后重测试时的潜伏期长于0g/kg.bw/d组,0.23g/kg.bw/d、0.70g/kg.bw/d组24h重测试时的错误次数少于0g/kg.bw/d组,差异均有统计学意义(P<0.05)。24h和5d后重测试时进入暗箱的动物数0.12g/kg.bw/d、0.23g/kg.bw/d、0.70g/kg.bw/d组与0g/kg.bw/d组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。
第二次试验中,0.23g/kg.bw/d、0.70g/kg.bw/d组小鼠5d后重测试时的潜伏期长于0g/kg.bw/d组、错误次数少于0g/kg.bw/d组,差异有统计学意义(P<0.05)。5d后重测试时进入暗箱的动物数0.70g/kg.bw/d组少于0g/kg.bw/d组,差异有统计学意义(P<0.05)。
3.3水迷宫试验:第一次试验中,0.12g/kg.bw/d、0.23/kg.bw/d、0.70g/kg.bw/d组训练期5次总成绩及5d后重测试时的到达终点时间、错误次数与0g/kg.bw/d组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。0.12g/kg.bw/d、0.23/kg.bw/d、0.70g/kg.bw/d组训练期5次总成绩及5d后重测试时在2min内到达终点动物数与0g/kg.bw/d组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。
第二次试验中,0.70g/kg.bw/d组5d后重测试时到达终点的时间少于0g/kg.bw/d组,差异有统计学意义(P<0.05)。0.70g/kg.bw/d组5d重测试时在2min内到达终点动物数多于0g/kg.bw/d组,差异有统计学意义(P<0.05)。
3.4结论
由以上结果可见,跳台试验和暗箱试验结果阳性,且重复试验结果一致。根据《保健食品检验与评价技术规范》之辅助改善记忆功能试验的结果判定,在本试验条件下,本发明降血脂和/或改善记忆力的中药组合物具有辅助改善记忆功能。
上述说明示出并描述了本申请的若干优选实施例,但如前所述,应当理解本申请并非局限于本文所披露的形式,不应看作是对其他实施例的排除,而可用于各种其他组合、修改和环境,并能够在本文所述发明构想范围内,通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离本申请的精神和范围,则都应在本申请所附权利要求的保护范围内。

Claims (10)

1.一种降血脂和/或改善记忆力的中药组合物,其特征在于,所述的组合物由银杏叶或其提取物、葛根或其提取物、山楂或其提取物、葡萄籽或其提取物、生姜或其提取物和绿茶或其提取物组成,各组分按重量份比率表示为,银杏叶或其提取物为0.5-8.0,葛根或其提取物为0.8-4.8,山楂或其提取物为0.9-4.8,葡萄籽或其提取物为0.3-3.5,生姜或其提取物为0.5-2.5,绿茶或其提取物为1。
2.根据权利要求1所述的降血脂和/或改善记忆力的中药组合物,其特征在于,各组分重量份比率为:银杏叶或其提取物为4.2-7.0,葛根或其提取物为2.0-4.0,山楂或其提取物为1.2-3.8,葡萄籽或其提取物为1.0-3.0,生姜或其提取物为1.0-1.9,绿茶或其提取物为1。
3.根据权利要求1所述的降血脂和/或改善记忆力的中药组合物,其特征在于,各组分重量份比率为:银杏叶或其提取物为6.7、葛根或其提取物为3.8、山楂或其提取物为3.6、葡萄籽或其提取物为2.8、生姜或其提取物为1.8、绿茶或其提取物为1。
4.根据权利要求1所述的降血脂和/或改善记忆力的中药组合物,其特征在于,所述的银杏叶提取物提取制备工艺为:
取所述重量份的银杏叶,加入70%乙醇,回流提取,滤过,合并滤液,回收乙醇,加水适量,离心滤过,通过大孔吸附树脂,先后用水和70%乙醇洗脱,收集70%乙醇洗脱液,回收乙醇,浓缩至相对密度1.08-1.12(60℃),浸膏液干燥,粉碎,过筛,得银杏叶提取物。
5.根据权利要求1所述的降血脂和/或改善记忆力的中药组合物,其特征在于,所述的葛根提取物提取制备工艺为:取所述重量份的葛根,破碎成20目的粗粒,加入70%乙醇10倍量,回流提取2次,滤过,合并滤液,回收乙醇,浓缩至相对密度1.05-1.15(60℃),浸膏液喷雾干燥,粉碎,过筛,得葛根提取物。
6.根据权利要求1所述的降血脂和/或改善记忆力的中药组合物,其特征在于,所述的山楂提取物提取制备工艺为:取所述重量份的山楂,破碎成20目的粗粒,加入70%乙醇10倍量,回流提取2次,滤过,合并滤液,回收乙醇,浓缩至相对密度1.04-1.08(60℃),浸膏液干燥,粉碎,过筛,得山楂提取物。
7.根据权利要求1所述的降血脂和/或改善记忆力的中药组合物,其特征在于,所述的葡萄籽提取物提取制备工艺为:取所述重量份的葡萄籽,破碎成20目的粗粒,加入30%乙醇,回流提取,滤过,合并滤液,回收乙醇,加水适量,离心滤过,通过大孔吸附树脂,先后用水和50%乙醇洗脱,收集50%乙醇洗脱液,回收乙醇,浓缩至相对密度1.08-1.12(60℃),浸膏液干燥,粉碎,过筛,得葡萄籽提取物。
8.根据权利要求1所述的降血脂和/或改善记忆力的中药组合物,其特征在于,所述生姜提取物提取制备工艺为:取所述重量份的生姜,切薄片,加入75%乙醇12倍量,回流提取2次,滤过,合并滤液,回收乙醇,浓缩至相对密度1.08-1.12(60℃),浸膏液干燥,粉碎,过筛,得生姜提取物。
9.根据权利要求1所述的降血脂和/或改善记忆力的中药组合物,其特征在于,所述的绿茶提取物提取制备工艺为:取所述重量份的绿茶,用60-80℃纯化水浸提,用10μm精滤膜精滤,滤液通过聚酰胺柱层析,先用纯化水洗脱,再用20-85%乙醇洗脱,洗脱液回收乙醇,在70-85℃,0.06-0.08MPa条件下浓缩,冷却结晶,真空干燥,粉碎,过筛,得绿茶提取物。
10.权利要求1-3任一权利要求所述的降血脂和/或改善记忆力的中药组合物在制备辅助降血脂、改善记忆力方面的药物或保健品中的应用。
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