CN108139399A

CN108139399A - 用于鉴定用于诊断和治疗tlr4依赖性障碍的患者群体的方法和组合物

Info

Publication number: CN108139399A
Application number: CN201680058462.6A
Authority: CN
Inventors: L.尚; E.莫内
Original assignee: Novimmune SA
Current assignee: Novimmune SA
Priority date: 2015-08-06
Filing date: 2016-08-05
Publication date: 2018-06-08
Also published as: CA2994772A1; US20170038381A1; AU2016303033A1; JP2018523827A; WO2017021552A1; EP3332256A1

Abstract

本发明主要涉及用于鉴定用于诊断和治疗Toll样受体4(TLR4)依赖性障碍的患者群体的方法和组合物。具体地讲，本发明涉及检测抗瓜氨酸化蛋白抗体(ACPA)和瓜氨酸化肽的水平，以鉴定患有TLR4依赖性疾病的患者和鉴定可能应答于抗TLR4疗法的患者。本发明还涉及使用干扰或者以其他方式拮抗TLR‑4信号传导的药物(包括中和性抗TLR4抗体)，在具有升高水平的ACPA和瓜氨酸化肽的患者中治疗障碍、延缓其进展或者以其他方式改善其症状的方法。

Description

用于鉴定用于诊断和治疗TLR4依赖性障碍的患者群体的方法和组合物

相关申请

本申请要求2015年8月6日提交的美国临时申请第62/201918号的权益，其内容通过参照以其全部结合于此。

发明领域

本发明主要涉及用于鉴定用于诊断和治疗Toll样受体4(TLR4)依赖性障碍的患者群体的方法和组合物。具体地讲，本发明涉及检测抗瓜氨酸化蛋白抗体(ACPA)和/或针对特定瓜氨酸化蛋白和/或肽的抗体水平，以鉴定患有TLR4依赖性疾病的患者和鉴定可能应答于抗TLR4疗法的患者。本发明还涉及使用干扰或者以其他方式拮抗TLR-4信号传导的药物(包括中和性抗TLR4抗体)，在具有升高水平的ACPA和/或针对特定瓜氨酸化蛋白和/或肽的抗体的患者中治疗障碍、延缓其进展或者以其他方式改善其症状的方法。

发明背景

在果蝇中首次发现的Toll受体为I型跨膜蛋白，具有在蛋白的胞外部分中的富含亮氨酸的重复序列(LRR)及一或两个富含半胱氨酸的结构域。果蝇Toll受体的哺乳动物同源物称为“Toll样受体”(TLR)。TLR通过识别微生物颗粒并激活针对这些微生物颗粒来源的免疫细胞而在先天免疫中发挥作用。在人中，已鉴定了11种Toll样受体TLR1-11，特征为其胞内结构域与IL-1受体胞内结构域的同源性以及存在胞外富含亮氨酸的重复序列。不同类型的TLR由不同类型的微生物颗粒激活。例如，TLR4主要由脂多糖(LPS)激活。已显示TLR4与辅助蛋白(髓样分化蛋白-2(MD-2))相关。已发现该蛋白与TLR4直接相互作用，和MD-2具有使得TLR4能够进行翻译后修饰以及促进其向细胞表面转运的能力。TLR4和MD-2在细胞表面上形成复合物。

TLR4涉及许多障碍，并且正在开发抗TLR4药物作为治疗药物。并非所有患者都应答于当前的标准护理疗法。因此，需要用于鉴定可能为特定治疗(例如用特定抗TLR4疗法治疗)候选者的患者的组合物和方法。

发明概述

本文提供的组合物和方法可用于鉴定或者以其他方式精选(refine)患有障碍的患者群体，其中患者具有升高水平的一种或多种TLR4配体或其他TLR4相关生物标志物。这些患者被鉴定为用干扰或者以其他方式拮抗TLR4信号传导并中和TLR4的至少一种生物活性的药物(例如抗体或其他基于多肽的治疗剂、基于肽的治疗剂、小分子抑制剂、基于核酸的治疗剂及其衍生物)(单独或在辅助蛋白MD-2的情况下作为TLR4/MD-2复合物)治疗的合适候选者。

在一些患有或疑似患有障碍的患者中，流体和其他生物样品含有升高水平的TLR4配体，比如含有ACPA和瓜氨酸化蛋白和/或肽的免疫复合物。这些TLR4配体刺激细胞产生促炎性细胞因子。然而，本文显示，使用干扰或者以其他方式拮抗TLR4信号传导的抗TLR4拮抗剂(例如中和性抗TLR4抗体或其他抗TLR4药物)在呈现升高的一种或多种TLR4配体和/或其他相关生物标志物的表达水平的患者中阻断该刺激。因此，通过给予呈现升高的一种或多种TLR4配体和/或相关生物标志物的表达水平的患者抗TLR4拮抗剂(例如中和性抗TLR4抗体或其他基于多肽的治疗剂、基于肽的治疗剂、小分子抑制剂、基于核酸的治疗剂及其衍生物)，组合物和方法可用于治疗依赖于TLR4信号传导、TLR4配体表达和/或活性异常(例如升高)、促炎性细胞因子产生异常和/或其组合、被其驱动或者以其他方式与其相关的障碍、延缓其进展或者以其他方式改善其症状。可能为用抗TLR4拮抗剂例如中和性抗TLR4抗体(比如本文描述的那些)治疗的合适候选者的患者通过检测一种或多种TLR4配体或其他相关生物标志物的水平来鉴定。

用于鉴定可能候选者的合适的TLR4配体和其他相关生物标志物包括ACPA和/或针对一种或多种特定瓜氨酸化蛋白和/或肽的抗体。在一些实施方案中，瓜氨酸化肽源自瓜氨酸化纤维蛋白原(cFb)。在一些实施方案中，瓜氨酸化肽源自瓜氨酸化纤维蛋白原α(cFbα)。在一些实施方案中，瓜氨酸化肽源自瓜氨酸化纤维蛋白原β(cFbβ)。在一些实施方案中，瓜氨酸化肽源自瓜氨酸化组蛋白。在一些实施方案中，瓜氨酸化肽源自瓜氨酸化组蛋白2A。

在一些实施方案中，瓜氨酸化肽包含氨基酸序列NTKESSSHHPGIAEFPS-Cit-GK(SEQID NO: 1)，其中Cit=瓜氨酸。该肽在本文称为cFbα 556-575。

在一些实施方案中，瓜氨酸化肽包含氨基酸序列HHPGIAEFPS-Cit-GKSSSYSKQF(SEQ ID NO: 2)，其中Cit=瓜氨酸。该肽在本文称为citFbβ 563-583。

在一些实施方案中，瓜氨酸化肽包含氨基酸序列MSG-Cit-GKQGGKA-Cit-AKAKS-Cit-SS(SEQ ID NO: 3)，其中Cit=瓜氨酸。该肽在本文称为citH2A 1-20。

在本文提供的方法中，在生物样品中检测ACPA和/或针对一种或多种特定瓜氨酸化蛋白和/或肽的抗体表达水平。在一些实施方案中，在生物样品的组合中检测ACPA和/或针对一种或多种特定瓜氨酸化蛋白和/或肽的抗体表达水平。在一些实施方案中，生物样品为滑液。在一些实施方案中，生物样品为血液或源自血液。在一些实施方案中，生物样品为血清。在一些实施方案中，生物样品为滑液和血清样品的组合。

将具有升高水平的一种或多种这些标志物的患者鉴定为用一种或多种抗TLR4拮抗剂(例如本文描述的中和性抗TLR4抗体)的疗法的合适候选者。本文使用的短语“升高的表达水平”指的是表达水平高于来自不患有或疑似患有障碍患者的样品或其他对照样品中的ACPA和/或针对一种或多种特定瓜氨酸化蛋白和/或肽的抗体的基线表达水平。在一些实施方案中，升高的ACPA和/或针对一种或多种特定瓜氨酸化蛋白和/或肽的抗体表达水平为显著的水平升高。

用抗TLR4抗体治疗能够阻断(部分或完全)类风湿性关节炎单核细胞中的细胞因子产生的患者被鉴定为“应答者”，而用抗TLR4抗体治疗不能阻断(部分或完全)细胞因子产生的患者被鉴定为“无应答者”。

除了检测ACPA和/或针对一种或多种特定瓜氨酸化蛋白和/或肽的抗体水平以外，用抗TLR4拮抗剂治疗的合适患者还可通过评估许多另外的生物和临床参数中的任一种来鉴定，所述另外的生物和临床参数将改善生物标志物用于鉴定或者以其他方式精选患者群体的灵敏度和特异性。或者，这些另外的生物和临床参数可单独用作鉴定用抗TLR4拮抗剂或其他合适疗法治疗的合适候选患者的手段。作为非限制性实例，这些生物和临床参数包括以下任一种：类风湿因子水平、C反应蛋白(CRP)水平、血细胞计数、血细胞亚群上TLR4受体的存在、TLR4多态性、人白细胞抗原(HLA)多态性、肽基精氨酸脱亚胺酶(PAD)酶和PAD酶多态性、Fcγ受体IIa(FcγIIa)多态性、MD-2水平、可溶性CD14水平、基线患者人口统计学数据(例如体重指数(BMI)、性别、年龄等)和/或患者病史(例如诊断时的残疾评估量表(DAS28)、治疗开始时的DAS 28、病程、发病年龄、基于DAS28、美国风湿病学会(ACR)和/或欧洲抗风湿病联盟(EULAR)应答标准的对先前治疗的应答等)。

本发明的组合物和方法有用的障碍包括其中TLR4表达和/或活性异常(例如升高)、具有异常TLR4/MD-2激活和/或异常TLR4配体活性(例如异常刺激促炎性细胞因子产生比如异常刺激IL-6、TNFα和/或IL-8产生)的任何障碍。例如，一些TLR4配体据信与各种障碍相关。作为非限制性实例，已知LPS与障碍比如脓毒症、急性肺损伤和/或RA相关；已知肌腱蛋白(tenascin) C与障碍比如关节炎、肝脏和/或心脏缺血再灌注相关；已知HMGB1与障碍比如RA、骨关节炎(OA)、缺血/再灌注、1型糖尿病、胰岛移植、狼疮和/或脓毒症相关；已知S100A8/A9与障碍比如RA、OA、幼年特发性关节炎(JIA)、糖尿病、移植排斥、狼疮、动脉粥样硬化、脓毒症和/或癌症相关；已知瓜氨酸化纤维蛋白原与障碍比如RA和动脉粥样硬化相关；已知ACPA与障碍比如RA、牛皮癣关节炎、系统性红斑狼疮(SLE)、斯耶格伦综合征、阿尔茨海默病和/或动脉粥样硬化相关。

作为非限制性实例，本文提供的方法和组合物适合于诊断和/或治疗障碍比如自身免疫性和/或炎性障碍。作为非限制性实例，合适的自身免疫性和/或炎性障碍包括与TLR4信号传导异常相关的自身免疫性和/或炎性障碍、与TLR4配体表达和/或活性异常(例如升高)相关的自身免疫性和/或炎性障碍、与促炎性细胞因子产生异常相关的自身免疫性和/或炎性障碍及其组合。

在一些实施方案中，障碍为关节炎病症，作为非限制性实例包括RA、骨关节炎(OA)、牛皮癣关节炎或幼年特发性关节炎(JIA)。在一些实施方案中，障碍为类风湿性关节炎(RA)。在一些实施方案中，障碍为癌症。在一些实施方案中，障碍为炎性肠病(IBD)。在一些实施方案中，障碍为动脉粥样硬化。在一些实施方案中，障碍与缺血再灌注相关，作为非限制性实例包括肝脏和/或心脏缺血/再灌注。在一些实施方案中，障碍为脓毒症。在一些实施方案中，障碍为急性肺损伤。在一些实施方案中，障碍为1型糖尿病。在一些实施方案中，障碍与胰岛移植相关。在一些实施方案中，障碍为狼疮。在一些实施方案中，障碍与移植排斥相关或为与细胞、组织和/或器官移植相关的其他障碍。在一些实施方案中，障碍为系统性红斑狼疮(SLE)。在一些实施方案中，障碍为斯耶格伦综合征。在一些实施方案中，障碍为阿尔茨海默病。

一旦患者被鉴定为具有升高水平的ACPA和/或针对一种或多种特定瓜氨酸化蛋白和/或肽的抗体，那么然后用抗TLR4拮抗剂治疗他们。例如，抗TLR4拮抗剂为中和性抗TLR4抗体或其免疫活性(例如抗原结合)片段。合适的中和性抗TLR4抗体包括本文描述的任何抗TLR4抗体和对Fc受体(FcR)亲和力增加和/或通过与FcR相互作用而对细胞表面结合的亲和力增加的其他抗体。

在一些实施方案中，结合TLR4的抗体或其免疫活性片段包含：含有与GGYSWH(SEQID NO: 139)的氨基酸序列具有至少90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列的可变重链互补决定区1(VH CDR1)；含有与YIHYSGYTDFNPSLKT(SEQ ID NO: 140)的氨基酸序列具有至少90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列的VHCDR2区；和含有与KDPSDAFPY(SEQ ID NO：141)的氨基酸序列具有至少90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列的VH CDR3区；含有与RASQSISDHLH(SEQ ID NO:4)的氨基酸序列具有至少90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列的可变轻链互补决定区1(VL CDR1)；含有与YASHAIS(SEQ ID NO: 5)的氨基酸序列具有至少90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列的VL CDR2区；和含有与QQGHSFPLT(SEQ ID NO: 6)的氨基酸序列具有至少90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列的VL CDR3区。在一些实施方案中，结合TLR4的抗体或其免疫活性片段进一步包含与重链可变氨基酸序列QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGYSITGGYSWHWIRQPPGKGLEWMGYIHYSGYTDFNPSLKTRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDPSDAFPYWGQGTLVTVSS(SEQID NO: 7)具有至少90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列和与轻链可变氨基酸序列EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSISDHLHWYQQKPDQSPKLLIKYASHAISGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQQGHSFPLTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO: 8)具有至少90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，结合TLR4的抗体或其免疫活性片段进一步包含与重链氨基酸序列MGWSWIFLFLLSGTAGVHCQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGYSITGGYSWHWIRQPPGKGLEWMGYIHYSGYTDFNPSLKTRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDPSDAFPYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSSKAFPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO: 9)具有至少90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列和与轻链氨基酸序列MEWSWVFLFFLSVTTGVHSEIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSISDHLHWYQQKPDQSPKLLIKYASHAISGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQQGHSFPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:10)具有至少90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，抗TLR4抗体或其免疫活性片段为或源自在2005年6月14日提交并作为WO 20071110678公开的PCT/IB2005/004206中描述的抗体，其内容特此通过参照以其全部结合。

在一些实施方案中，抗TLR4抗体或其免疫活性片段为或源自在2008年5月14日提交并作为WO 2009/101479公开的PCT申请PCT/IB2008/003978中描述的抗体，其内容特此通过参照以其全部结合。

在一些实施方案中，抗TLR4抗体或其免疫活性片段为或源自称为HTA125的抗TLR4抗体，其描述于例如Shimazu, 等人, J. Exp. Med., val. 189:1777-1782(1999);Nijhuis 等人, Clin Diag. Lab. Immunol., val. 10(4): 558-63(2003); 和Pivarcsi等人, Intl. Immunopharm., vol. 15(6):721-730(2003)中，其每一个的内容特此通过参照以其全部结合。

在一些实施方案中，抗TLR4抗体或其免疫活性片段为或源自结构域抗体，比如在2009年5月15日提交并作为WO 2009/13848公开的PCT申请PCT/EP2009/055926中描述的结合TLR4的结构域抗体，其内容特此通过参照以其全部结合。

在一些实施方案中，抗TLR4抗体或其免疫活性片段为或源自识别细胞表面上表达的人和/或食蟹猴TLR4/MD-2受体的单克隆抗体。抗体能够阻断(例如中和)受体激活和随后胞内信号传导诱导的TLR4配体，例如LPS或本文描述的任何其他TLR4配体。本发明的抗体包括结合人和食蟹猴TLR4/MD-2受体复合物并且还独立于MD-2的存在而结合TLR4的抗体。

在一些实施方案中，抗TLR4抗体或其免疫活性片段例如通过阻断受体激活和随后LPS诱导的胞内信号传导，干扰或者以其他方式拮抗经细胞表面表达的人和/或食蟹猴TLR4/MD-2受体的信号传导。这些实施方案的示例性单克隆抗体包括：1A1、1A6、1B12、1C7、1C10、1C12、1D10、1E11、1E11 N103D、1G12、1E11.C1、1E11.C2、1E11.C3、1E11.C4、1E11.C5、1E11.C6、1E11.E1、1E11.E2、1E11.E3、1E11.E4、1E11.E5、1E11.C2E1、1E11.C2E3、1E11.C2E4和1E11.C2E5。

这些抗体具有不同的特异性。一些抗体对人和食蟹猴TLR4两者和/或人和食蟹猴TLR4/MD-2受体复合物两者均显示出特异性，并且已显示其抑制受体激活和随后经LPS的胞内信号传导。例如，1C12、1E11、1E11 N103D、1E11.C1、1E11.C2、1E11.C3、1E11.C4、1E11.C5、1E11.C6、1E11.C2E1、1E11.C2E2、1E11.C2E3、1E11.C2E4和1E11.C2E5独立于人或食蟹猴MD-2的存在而结合人和食蟹猴TLR4两者。1A1、1A6、1B12、1C7、1C10、1D10和1G12独立于食蟹猴MD-2的存在而仅结合于食蟹猴TLR4。1E11.E1、1E11.E2、1E11.E3、1E11.E4和1E11.E5独立于人MD-2的存在而仅结合于人TLR4。

本发明的人源化抗体含有具有本文显示的氨基酸序列的重链可变区。本发明的人源化抗体含有具有本文显示的氨基酸序列的轻链可变区。

3个重链CDR包括与以下具有至少90%、92%、95%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列：选自G(F/Y)PI(R/G/W)(Y/F/G)GYS(SEQ ID NO: 14)、GYSITGGYS(SEQ ID NO: 15)、GFPIRYGYS(SEQ ID NO: 16)、GYPIRFGYS(SEQ ID NO: 17)、GYPIRHGYS(SEQ ID NO: 18)、GFPIGQGYS(SEQ ID NO: 19)、GYPIWGGYS(SEQ ID NO: 20)和GYPIGGGYS(SEQ ID NO: 21)的可变重链互补决定区1(VH CDR1，本文也称为CDRH1)氨基酸序列；IHYSGYT(SEQ ID NO: 22)的可变重链互补决定区2(VH CDR2，本文也称为CDRH2)氨基酸序列；及选自ARKDSG(N/Q/D/E)X₁X₂PY(SEQ ID NO: 23)(其中X₁和X₂各自独立地为任何疏水性氨基酸)、ARKDSGNYFPY(SEQ ID NO: 24)、ARKDSGRLLPY(SEQ ID NO: 25)、ARKDSGKWLPY(SEQ ID NO: 26)、ARKDSGHLMPY(SEQ ID NO: 27)、ARKDSGHNYPY(SEQ ID NO: 28)、ARKDSGKNFPY(SEQ ID NO:29)、ARKDSGQLFPY(SEQ ID NO: 30)、ARKDSGHNLPY(SEQ ID NO: 31)、ARKDSGDYFPY(SEQ IDNO: 32)和ARKDSGRYWPY(SEQ ID NO: 33)的可变重链互补决定区3(VH CDR3，本文也称为CDRH3)氨基酸序列。3个轻链CDR包括与以下具有至少90%、92%、95%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列：QSISDH(SEQ ID NO: 34)的可变轻链互补决定区1(VL CDR1，本文也称为CDRL1)氨基酸序列；YAS(SEQ ID NO: 35)的可变轻链互补决定区2(VL CDR2，本文也称为CDRL2)氨基酸序列；及选自QQG(Y/N)(D/E)(F/Y)PXT(SEQ ID NO: 36)(其中X为任何疏水性氨基酸)、QQGHSFPLT(SEQ ID NO: 6)、 QQGNDFPVT(SEQ ID NO: 37)、QQGYDEPFT(SEQ IDNO: 38)、QQGYDFPFT(SEQ ID NO: 39)、QQGYDYPFT(SEQ ID NO: 40)和QQGYEFPFT(SEQ IDNO: 41)的可变轻链互补决定区3(VL CDR3，本文也称为CDRL3)氨基酸序列。抗体结合于人和食蟹猴TLR4/MD-2复合物、结合于人和食蟹猴TLR4(当不与人和食蟹猴MD-2复合时)、结合于人TLR4/MD-2复合物、结合于人TLR4(当不与人MD-2复合时)、结合于食蟹猴TLR4/MD-2复合物或食蟹猴TLR4(当不与食蟹猴MD-2复合时)。

本发明的抗TLR4抗体还包括包含与本文显示的氨基酸序列具有至少90%、92%、95%、97%、98%、99%或更多同一性的重链可变氨基酸序列和/或与本文显示的氨基酸序列具有至少90%、92%、95%、97%、98%、99%或更多同一性的轻链可变氨基酸的抗体。

在一些实施方案中，本文描述的抗TLR4抗体还包括在例如Fc区或其FcR结合片段内的至少一个特定氨基酸取代(例如在IgG恒定结构域内具有氨基酸取代的多肽)，使得与未改变的抗体相比，修饰的抗体引起抗原依赖性效应子功能的改变，同时保持与抗原的结合。例如，改变的抗体引起防止促炎性介质释放。在一个优选的实施方案中，改变的抗体为人IgG1同种型。

本发明的抗TLR4抗体包括其中抗体Fc部分恒定区中至少一个氨基酸残基已被修饰的改变的抗体。例如，Fc部分的CH2结构域中至少一个氨基酸已被不同残基置换，即氨基酸取代。在本文描述的改变的抗体中，与未改变的抗体相比，对应于残基325、326和328位的一个或多个氨基酸残基用不同残基取代。γ重链中残基的编号为EU索引(EU index)的编号(参见Edelman, G.M. 等人, 1969; Kabat, E.A., T.T. Wu, H.M. Perry, K.S.Gottesman, and C. Foeller., 1991. Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. U.S. Dept. of Health and Human Services, Bethesda, MD, NIHPublication n. 91-3242)。在一个优选的实施方案中，γ重链恒定区的EU氨基酸325位用丝氨酸取代，和γ重链恒定区的EU氨基酸328位用苯丙氨酸取代，使得改变的人IgG1抗体的γ重链恒定区的EU 325-328位包含氨基酸序列SKAF(SEQ ID NO: 13)。

本发明还提供通过鉴定适合于用中和性抗TLR4药物(例如中和性抗TLR4抗体)的疗法的患者，并将所述药物例如本发明的单克隆抗体(例如鼠单克隆或人源化单克隆抗体)给予期望这种治疗或预防的受试者，来治疗或预防与TLR4/MD-2激活异常、TLR4信号传导异常、TLR4配体表达和/或活性异常(例如升高)、促炎性细胞因子产生异常及其组合相关的病理学或者缓解与这种病理学相关的症状的方法。待治疗的受试者为例如人。单克隆抗体以足以治疗、预防或缓解与病理学相关的症状的量给予。足以在受试者中治疗或预防病理学的单克隆抗体的量为例如足以减少TLR4配体诱导的一种或多种促炎性细胞因子(例如IL-6、IL-8、TNFα)产生的量。本文使用的术语“减少”指的是在存在本发明单克隆抗体的情况下促炎性细胞因子的产生减少，其中所述产生为例如局部促炎性细胞因子产生(例如在发炎组织部位)或系统性促炎性细胞因子产生。当在存在本发明单克隆抗体的情况下促炎性细胞因子产生的水平低于对照水平的促炎性细胞因子产生(即在不存在单克隆抗体的情况下促炎性细胞因子产生的水平)，减低程度大于或等于5%、10%、20%、25%、30%、40%、50%、60%、70%、75%、80%、90%、95%、99%或100%时，TLR4配体诱导的促炎性细胞因子的产生减少。测量促炎性细胞因子产生的水平。本领域技术人员应该意识到，促炎性细胞因子产生的水平可使用多种测定来测量，包括例如本文描述的方法以及市售可得到的ELISA试剂盒。

本发明的药用组合物可包括本发明的抗TLR4抗体和载体。这些药用组合物可包含在试剂盒比如诊断试剂盒中。

本发明还提供用于实施本文提供的任何方法的试剂盒。例如，在一些实施方案中，试剂盒包括对ACPA和/或针对一种或多种特定瓜氨酸化蛋白和/或肽的抗体特异性的检测试剂以及用于检测检测试剂的工具。

附图简述

图1A、1B、1C和1D为一系列图表，描绘用在本文称为NI-0101的抗TLR4抗体处理阻断分离自类风湿性关节炎(RA)患者的合并的类风湿性关节炎滑液(RASF)-刺激的单核细胞产生IL-6(A)、TNFα(B)、IL-1β(C)和IL-8(D)。TLR4信号传导用抗人TLR4单克隆抗体(NI-0101)阻断。对单核细胞显示的代表性数据得自7名RA患者供体中的1名。数据呈现为平均值+/-SEM。实施曼-惠特尼U检验以分析组间差异。**p<0.01，***p<0.001。

图2A和2B为一系列图表，描绘RASF样品刺激细胞因子产生和应答于TLR4阻断的异质性能力。如果NI-0101能够阻断(部分或完全) RASF诱导的自RA单核细胞产生IL6，则来自患者(Pat)的RASF样品被分类为NI-0101应答者(R)。其他被分类为NI-0101无应答者(NR)。描绘无应答者RASF(Pat#13、#35)和应答者RASF(Pat#27、#18)的代表性实例。在所测试的36个RASF样品中，18个被分类为NI-0101应答者(50%)和18个被分类为NI-0101应答者(50%)。实施曼-惠特尼U检验以分析组间差异。***p<0.001，*p<0.05。

图3A、3B、3C、3D、3E和3F为一系列图表，描绘非RA和RA患者的滑液样品中ACPA和TLR4配体的表达水平及其与NI-0101应答的相关性。A-C，来自非RA受试者(非RASF，n=4个样品)和RA患者(RASF，n=36个样品)的滑液中ACPA(A)、HMGB1(B)和S100A8/A9(C)的表达水平。D-F，ACPA(D)和TLR4配体(E&F)水平与NI-0101应答的相关性。根据图2中的定义将RASF样品分类为NI-0101无应答者(NR)或NI-0101应答者(R)。实施曼-惠特尼U检验以分析组间差异。*p<0.05，**p<0.01。

图4A、4B、4C、4D、4E和4F为一系列图表，描绘RA患者的滑液样品中的ACPA精细(fine)特异性及其与NI-0101应答的相关性。针对源自纤维蛋白原-α(cFbα 556-575，图4A，图4D)、纤维蛋白原-β(cFbβ 563-583，图4B，图4E)和组蛋白-2A(cH2A 1-20，图4C，图4F)的瓜氨酸化肽的抗体反应性在来自RA患者的滑液中通过ELISA测定，并与对NI-0101的应答相关联。图4A-4C，来自ACPA阳性RA患者的RASF样品。图4D-4F，来自ACPA+和ACPA- RA患者的RASF样品。RASF样品被分类为NI-0101无应答者(NR)或NI-0101应答者(R)。OD的差异(ΔOD)计算为针对瓜氨酸肽的免疫反应性减去针对精氨酸对照肽的免疫反应性。数据显示为任意单位，其中每个RASF样品的ΔOD通过用非RA SF样品计算的阈值(设定为1，虚线)归一化，在所述阈值以上的样品认为是阳性的。实施曼-惠特尼U检验以比较观察到的变化。***p<0.001，**p<0.01，*p<0.05。

图5A、5B、5C、5D、5E、5F、5G和5H为一系列图表，描绘RA患者成对血清样品中的ACPA精细特异性及其与RASF对NI-0101的应答的相关性。图5A描绘成对RA血清和滑液中ACPA水平之间的相关性(n=22)。图5B描绘根据RASF对NI-0101的应答(NI-0101无应答者(NR)或NI-0101应答者(R))分类的成对RA血清中的ACPA水平。图5C-5H描述针对源自纤维蛋白原-α(cFbα 556-575，图5C，图5F)、纤维蛋白原-β(cFbβ 563-583，图5D，图5G)和组蛋白-2A(cH2A1-20，图5E，图5H)的瓜氨酸化肽的抗体反应性，在来自RA患者的成对血清中通过ELISA测定并与对NI-0101的应答相关联。C-E，来自ACPA阳性RA患者的成对血清样品(n=10)。图5F-5H，来自ACPA+和ACPA- RA患者的成对RA血清样品。OD的差异(ΔOD)计算为针对瓜氨酸肽的免疫反应性减去针对精氨酸对照肽的免疫反应性。数据显示为任意单位，其中每个RA血清样品的ΔOD通过用非RA血清样品计算的阈值(设定为1，虚线)归一化，在所述阈值以上的样品认为是阳性的。实施曼-惠特尼U检验以比较观察到的变化。**p<0.01，*p<0.05。

发明详述

本文提供的组合物和方法可用于鉴定或者以其他方式精选患有TLR4相关障碍的患者群体，其中患者具有升高水平的抗瓜氨酸化蛋白抗体(ACPA)和/或针对特定瓜氨酸化肽的抗体。这些患者被鉴定为用干扰或者以其他方式拮抗TLR4信号传导并中和TLR4的至少一种生物活性的药物(例如抗体或其他基于多肽的治疗剂、基于肽的治疗剂、小分子抑制剂、基于核酸的治疗剂及其衍生物)(单独或在辅助蛋白MD-2的情况下作为TLR4/MD-2复合物)治疗的合适候选者。

在患有类风湿性关节炎(RA)的患者亚组中，已报道Toll样受体4(TLR4)及其内源性配体的表达增加。然而，尚未阐明TLR4配体的表达增加是否会在这些患者中驱动炎症。本文呈现的研究被设计使用来自RA患者的原代细胞研究RA患者的滑液样品(RASF)中存在的特定TLR4激活剂对RASF诱导的促炎性细胞因子产生的作用。

简而言之，通过ELISA分析RASF刺激细胞因子自RA单核细胞产生的能力。RASF中TLR4激活剂的存在通过测量抗瓜氨酸化蛋白抗体(ACPA)(对特定瓜氨酸化肽以及其他TLR4配体(例如HMGB1)具有反应性的ACPA亚型)的水平证实。TLR4信号传导的中和作用使用NI-0101(一种靶向TLR4的新治疗抗体)进行了研究。评价了TLR4激活剂与中和作用之间的相关性。

来自单个RA患者的RASF揭示了诱导通过来自RA患者的单核细胞产生促炎性细胞因子的异质性能力。在RASF亚组中，刺激为TLR4依赖性的，因为NI-0101能够抑制细胞因子产生。生物标志物分析证实，TLR4依赖性细胞因子诱导与ACPA阳性和RASF中的HMGB1水平正相关。然而，一小组ACPA+样品以独立于TLR4的方式诱导细胞因子。ACPA+ RASF以及成对RA血清样品通过其对不同瓜氨酸化肽的反应性的概况分析鉴定出具有更高特异性的TLR4依赖性亚组。

这些研究体外证实TLR4对RA患者亚组炎性过程的贡献。使用ACPA和特定瓜氨酸化肽反应性的组合，使用精细概况分析以鉴定患有TLR4驱动的疾病的患者。

在一些实施方案中，ACPA表达水平连同SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2和/或SEQ IDNO: 3中的一种或多种肽一起检测。

在一些实施方案中，ACPA表达水平连同SEQ ID NO: 2肽和SEQ ID NO: 3肽一起检测。

本文提供的方法使用中和TLR4活性(例如TLR4介导的信号传导)并有效地基本或完全阻断通过来自患有或处于患有障碍风险下的患者的样品中的激活细胞产生促炎性细胞因子的药物。当与不存在与抗TLR4拮抗剂相互作用(例如结合)的情况下通过激活细胞产生促炎性细胞因子的水平相比，在存在抗TLR4的情况下通过激活细胞产生促炎性细胞因子的水平减少至少95%(例如96%、97%、98%、99%或100%)时，抗TLR4拮抗剂被认为完全阻断通过激活细胞产生促炎性细胞因子。当与不存在与抗TLR4拮抗剂相互作用(例如结合)的情况下通过激活细胞产生促炎性细胞因子的水平相比，在存在抗TLR4的情况下通过激活细胞产生促炎性细胞因子的水平减少至少50%(例如55%、60%、75%、80%、85%或90%)时，抗TLR4拮抗剂被认为部分阻断通过激活细胞产生促炎性细胞因子。

本发明的组合物和方法有用的障碍包括其中TLR4表达和/或活性异常(例如升高)、具有异常TLR4/MD-2激活和/或异常TLR4配体活性(例如异常刺激促炎性细胞因子产生比如异常刺激IL-6、TNFα和/或IL-8产生)的任何障碍。例如，一些TLR4配体据信与各种障碍相关，比如(作为非限制性实例)类风湿性关节炎、骨关节炎和其他炎性关节疾病、幼年特发性关节炎(JIA)、牛皮癣关节炎、脓毒症、急性肺损伤、缺血再灌注比如肝脏和/或心脏缺血再灌注、1型糖尿病、胰岛移植、狼疮、移植排斥、动脉粥样硬化、斯耶格伦综合征、阿尔茨海默病和/或癌症。

本发明的中和性抗TLR4抗体包括例如以下表2A中显示的重链互补决定区(CDR)、表2B中显示的轻链CDR及其组合。

表2A. 来自结合并中和TLR4的抗体克隆的VH CDR序列

表2B. 来自结合并中和TLR4的抗体克隆的VL CDR序列

本发明的TLR4抗体包括例如具有以下显示的重链和轻链序列组合的抗体。

本发明的示例性抗体包括例如在2005年6月14日提交并作为WO 2007/110678公开的PCT/IB2005/004206中描述的抗TLR4抗体、在2008年5月14日提交并作为WO 2009/101479公开的PCT申请PCT/IB2008/003978中描述的抗TLR4抗体(其每一个的内容特此通过参照以其全部结合)以及市售可得到的抗体比如HTA125。

本发明的示例性抗体包括例如在本文称为NI-0101的抗体，其在本文和附图中也称为“hu15C1”，其结合人TLR4/MD2复合物并且还独立于MD-2的存在而结合TLR4。以下显示NI-1101(hu15c1)抗体的序列，CDR序列在VH和VL氨基酸序列中加下划线：

NI-0101重链核苷酸序列：

ATGGGATGGAGCTGGATCTTTCTCTTCCTCCTGTCAGGAACTGCAGGTGTACATTGCCAGGTGCAGCTTCAGGAGTCCGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGACACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGGTTACTCCATCACCGGTGGTTATAGCTGGCACTGGATACGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATGGGGTATATCCACTACAGTGGTTACACTGACTTCAACCCCTCCCTCAAGACTCGAATCACCATATCACGTGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGTGGACACTGCAGTGTATTACTGTGCGAGAAAAGATCCGTCCGACGCCTTTCCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTTCCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAATGCAAGGTCTCCAGTAAAGCTTTCCCTGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATAG(SEQ ID NO: 11)

NI-0101重链氨基酸序列：

MGWSWIFLFLLSGTAGVHCQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGYSITGGYSWHWIRQPPGKGLEWMGYIHYSGYTDFNPSLKTRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDPSDAFPYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSSKAFPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO: 9)

NI-0101轻链核苷酸序列：

ATGGAATGGAGCTGGGTCTTTCTCTTCTTCCTGTCAGTAACTACAGGTGTCCACTCCGAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGACTTTCAGTCTGTGACTCCAAAGGAAAAAGTCACCATCACCTGCAGGGCCAGTCAGAGTATCAGCGACCACTTACACTGGTACCAACAGAAACCTGATCAGTCTCCCAAGCTCCTCATCAAATATGCTTCCCATGCCATTTCTGGGGTCCCATCGAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAATAGCCTAGAGGCTGAAGATGCTGCAACGTATTACTGTCAGCAGGGTCACAGTTTTCCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(SEQ ID NO: 12)

NI-0101轻链氨基酸序列：

MEWSWVFLFFLSVTTGVHSEIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSISDHLHWYQQKPDQSPKLLIKYASHAISGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQQGHSFPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO: 10)

NI-0101(hu15c1)抗体包括具有序列GGYSWH(SEQ ID NO: 139)、YIHYSGYTDFNPSLKT(SEQ ID NO: 140)和KDPSDAFPY(SEQ ID NO: 141)的VH CDR及具有序列RASQSISDHLH(SEQID NO: SEQ ID NO: 4)、YASHAIS(SEQ ID NO: 5)和QQGHSFPLT(SEQ ID NO: 6)的VL CDR。

以下显示抗TLR4/MD2抗体的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)的氨基酸和核酸序列。包含Chothia 等人 1989, E.A. Kabat 等人, 1991定义的互补决定区(CDR)的氨基酸在下文以下划线和斜体文本突出显示(参见Chothia, C, 等人, Nature 342:877-883(1989); Kabat, EA, 等人, Sequences of Protein of immunological interest,Fifth Edition, US Department of Health and Human Services, US GovernmentPrinting Office(1991))。

抗TLR4抗体包括在2004年12月10日提交的美国专利第7312320号和2005年6月14日提交的美国专利第7674884号以及在2004年12月10日提交的WO 05/065015和2005年6月14日提交的2007/110678中描述的抗体，其每一个特此通过参照以其全部结合。几种示例性抗体包括其中称为18H10、1607、15C1和7E3的抗体。

以下显示几种示例性抗体的序列。

15C1 Hu V_H版本4-28

QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGYSIX₁GGYSWHWIRQPPGKGLEWX₂GYIHYSGYTDFNPSLKTRX₃TX₄SRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDPSDGFPYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO: 42)，其中X₁为Thr或Ser，X₂为Ile或Met，X₃为Val或Ile，和X₄为Met或Ile

CDR 1: GGYSWH(SEQ ID NO: 139)

CDR 2: YIHYSGYTDFNPSLKT(SEQ ID NO: 140)

CDR 3: KDPSDGFPY(SEQ ID NO: 137)

15C1 Hu V_H版本3-66

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAX₁SGYSITGGYSWHWVRQAPGKGLEWX₂SYIHYSGYTDFNPSLKTRFTISRDNSKNTX₃YLQMNSLRAEDTAVYYCARKDPSDGFPYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO: 43)，其中X₁为Ala或Val，X₂为Val或Met，和X₃为Leu或Phe。

CDR 1: GGYSWH(SEQ ID NO: 139)

CDR 2: YIHYSGYTDFNPSLKT(SEQ ID NO: 140)

CDR 3: KDPSDGFPY(SEQ ID NO: 137)

15C1 Hu VL版本L6

EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSISDHLHWYQQKPGQAPRLLIX₁YASHAISGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQNGHSFPLTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO: 44)，其中X₁为Lys或Tyr。

CDR1: RASQSISDHLH(SEQ ID NO: 4)

CDR2: YASHAIS(SEQ ID NO: 5)

CDR3: QNGHSFPLT(SEQ ID NO: 138)

15C1 Hu VL版本A26

EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSISDHLHWYQQKPDQSPKLLIKYASHAISGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQNGHSFPLTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO: 45)

CDR1: RASQSISDHLH(SEQ ID NO: 4)

CDR2: YASHAIS(SEQ ID NO: 5)

CDR3: QNGHSFPLT(SEQ ID NO: 138)

18H10 Hu VH版本1-69

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGFNIKDSYIHWVRQAPGQGLEWX₁GWTDPENVNSIYDPRFQGRVTITADX₂STSTAYX₃ELSSLRSEDTAVYYCARGYNGVYYAMDYWGQGTTVTVSS(SEQ ID NO: 46)，其中X₁为Met或Ile，X₂为Lys或Thr，和X₃为Met或Leu。

CDR1: DSYIH(SEQ ID NO: 47)

CDR2: WTDPENVNSIYDPRFQG(SEQ ID NO: 48)

CDR3: GYNGVYYAMDY(SEQ ID NO: 49)

18H10 Hu VL版本L6

EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSASSSVIYMHWYQQKPGQAPRLLIYRTYNLASGIPARFSGSGSGTDX₁TLTISSLEPEDFAVYYCHQWSSFPYTFGQGTKVEIK(SEQ ID NO: 50)，其中X₁为Phe或Tyr。

CDR1: SASSSVIYMH(SEQ ID NO: 51)

CDR2: RTYNLAS(SEQ ID NO: 52)

CDR3: HQWSSFPYT(SEQ ID NO: 53)

7E3 Hu VH版本2-70

QVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLX₁TYNIGVGWIRQPPGKALEWLAHIWWNDNIYYNTVLKSRLTX₂SKDTSKNQVVLTMTNMDPVDTATYYCX₃RMAEGRYDAMDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO: 54)，其中X₁为Ser或Thr，X₂为Ile或Phe，和X₃为Ile或Ala。

CDR1: TYNIGVG(SEQ ID NO: 55)

CDR2: HIWWNDNIYYNTVLKS(SEQ ID NO: 56)

CDR3: MAEGRYDAMDY(SEQ ID NO: 57)

7E3 Hu VH版本3-66

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAX₁SGFSLTTYNIGVGWVRQAPGKGLEWX₂SHIWWNDNIYYNTVLKSRLTX₃SX₄DNSKNTX₅YLQMNSLRAEDTAVYYCX₆RMAEGRYDAMDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO: 58)，其中X₁为Phe或Ala，X₂为Val或Leu，X₃为Ile或Phe，X₄为Lys或Arg，X₅为Leu或Val，和X₆为Ile或Ala。

CDR1: TYNIGVG(SEQ ID NO: 59)

CDR2: HIWWNDNIYYNTVLKS(SEQ ID NO: 60)

CDR3: MAEGRYDAMDY(SEQ ID NO: 61)

7E3 Hu VL版本L19

DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQDITNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSKLHSGVPSRFSGSGSGTDX₁TLTISSLQPEDFATYX₂CQQGNTFPWTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO: 62)，其中X₁为Phe或Tyr，和X₂为Tyr或Phe。

CDR1: RASQDITNYLN(SEQ ID NO: 63)

CDR2: YTSKLHS(SEQ ID NO: 64)

CDR3: QQGNTFPWT(SEQ ID NO: 65)

抗TLR4抗体包括在2008年5月14日提交的PCT/IB2008/003978(PCT公开号WO 2009/101479)中描述的抗体，其内容特此通过参照以其全部结合。这些抗TLR4抗体被修饰以在CDR3部分包括一个或多个突变。以下显示几种示例性抗体的序列。

15C1人源化VH突变体1氨基酸序列：

QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGYSITGGYSWHWIRQPPGKGLEWMGYIHYSGYTDFNPSLKTRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDPSDAFPYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO: 7)

15C1人源化VH突变体1核酸序列：

CAGGTGCAGCTTCAGGAGTCCGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGACACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGGTTACTCCATCACCGGTGGTTATAGCTGGCACTGGATACGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATGGGGTATATCCACTACAGTGGTTACACTGACTTCAACCCCTCCCTCAAGACTCGAATCACCATATCACGTGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGTGGACACTGCAGTGTATTACTGTGCGAGAAAAGATCCGTCCGACGCCTTTCCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTTCC(SEQ ID NO: 66)

15C1人源化VH突变体2氨基酸序列：

QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGYSITGGYSWHWIRQPPGKGLEWMGYIHYSGYTDFNPSLKTRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDPSEGFPYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO: 67)

15C1人源化VH突变体2核酸序列：

CAGGTGCAGCTTCAGGAGTCCGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGACACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGGTTACTCCATCACCGGTGGTTATAGCTGGCACTGGATACGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATGGGGTATATCCACTACAGTGGTTACACTGACTTCAACCCCTCCCTCAAGACTCGAATCACCATATCACGTGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGTGGACACTGCAGTGTATTACTGTGCGAGAAAAGATCCGTCCGAGGGATTTCCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTTCC(SEQ ID NO: 68)

15C1人源化VL突变体1氨基酸序列：

EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSISDHLHWYQQKPDQSPKLLIKYASHAISGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQNSHSFPLTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO: 69)

15C1人源化VL突变体1核酸序列：

GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGACTTTCAGTCTGTGACTCCAAAGGAAAAAGTCACCATCACCTGCAGGGCCAGTCAGAGTATCAGCGACCACTTACACTGGTACCAACAGAAACCTGATCAGTCTCCCAAGCTCCTCATCAAATATGCTTCCCATGCCATTTCTGGGGTCCCATCGAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAATAGCCTAGAGGCTGAAGATGCTGCAACGTATTACTGTCAGAATAGTCACAGTTTTCCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA(SEQ ID NO: 70)

15C1人源化VL突变体2氨基酸序列：

EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSISDHLHWYQQKPDQSPKLLIKYASHAISGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQQGHSFPLTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO: 8)

15C1人源化VL突变体2核酸序列：

GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGACTTTCAGTCTGTGACTCCAAAGGAAAAAGTCACCATCACCTGCAGGGCCAGTCAGAGTATCAGCGACCACTTACACTGGTACCAACAGAAACCTGATCAGTCTCCCAAGCTCCTCATCAAATATGCTTCCCATGCCATTTCTGGGGTCCCATCGAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAATAGCCTAGAGGCTGAAGATGCTGCAACGTATTACTGTCAGCAGGGTCACAGTTTTCCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA(SEQ ID NO: 71)

15C1人源化VL突变体3氨基酸序列：

EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSISDHLHWYQQKPDQSPKLLIKYASHAISGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQNSSSFPLTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO: 72)

15C1人源化VL突变体3核酸序列：

GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGACTTTCAGTCTGTGACTCCAAAGGAAAAAGTCACCATCACCTGCAGGGCCAGTCAGAGTATCAGCGACCACTTACACTGGTACCAACAGAAACCTGATCAGTCTCCCAAGCTCCTCATCAAATATGCTTCCCATGCCATTTCTGGGGTCCCATCGAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAATAGCCTAGAGGCTGAAGATGCTGCAACGTATTACTGTCAGAATAGTAGTAGTTTTCCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA(SEQ ID NO: 73)

15C1人源化VL突变体4氨基酸序列：

EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSISDHLHWYQQKPDQSPKLLIKYASHAISGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQQSHSFPLTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO: 74)

15C1人源化VL突变体4核酸序列：

GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGACTTTCAGTCTGTGACTCCAAAGGAAAAAGTCACCATCACCTGCAGGGCCAGTCAGAGTATCAGCGACCACTTACACTGGTACCAACAGAAACCTGATCAGTCTCCCAAGCTCCTCATCAAATATGCTTCCCATGCCATTTCTGGGGTCCCATCGAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAATAGCCTAGAGGCTGAAGATGCTGCAACGTATTACTGTCAGCAGAGTCACAGTTTTCCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA(SEQ ID NO: 75)

本发明的抗体干扰或者以其他方式拮抗经人和/或食蟹猴TLR4和/或人和/或食蟹猴TLR4/MD-2复合物的信号传导。在一些实施方案中，抗体结合于包括人和/或食蟹猴TLR4上的一个或多个氨基酸残基的表位，所述TLR4具有以下序列：

>人TLR4氨基酸序列

MMSASRLAGTLIPAMAFLSCVRPESWEPCVEVVPNITYQCMELNFYKIPDNLPFSTKNLDLSFNPLRHLGSYSFFSFPELQVLDLSRCEIQTIEDGAYQSLSHLSTLILTGNPIQSLALGAFSGLSSLQKLVAVETNLASLENFPIGHLKTLKELNVAHNLIQSFKLPEYFSNLTNLEHLDLSSNKIQSIYCTDLRVLHQMPLLNLSLDLSLNPMNFIQPGAFKEIRLHKLTLRNNFDSLNVMKTCIQGLAGLEVHRLVLGEFRNEGNLEKFDKSALEGLCNLTIEEFRLAYLDYYLDDIIDLFNCLTNVSSFSLVSVTIERVKDFSYNFGWQHLELVNCKFGQFPTLKLKSLKRLTFTSNKGGNAFSEVDLPSLEFLDLSRNGLSFKGCCSQSDFGTTSLKYLDLSFNGVITMSSNFLGLEQLEHLDFQHSNLKQMSEFSVFLSLRNLIYLDISHTHTRVAFNGIFNGLSSLEVLKMAGNSFQENFLPDIFTELRNLTFLDLSQCQLEQLSPTAFNSLSSLQVLNMSHNNFFSLDTFPYKCLNSLQVLDYSLNHIMTSKKQELQHFPSSLAFLNLTQNDFACTCEHQSFLQWIKDQRQLLVEVERMECATPSDKQGMPVLSLNITCQMNKTIIGVSVLSVLVVSVVAVLVYKFYFHLMLLAGCIKYGRGENIYDAFVIYSSQDEDWVRNELVKNLEEGVPPFQLCLHYRDFIPGVAIAANIIHEGFHKSRKVIVVVSQHFIQSRWCIFEYEIAQTWQFLSSRAGIIFIVLQKVEKTLLRQQVELYRLLSRNTYLEWEDSVLGRHIFWRRLRKALLDGKSWNPEGTVGTGCNWQEATSI(SEQID NO: 76)

>食蟹猴TLR4氨基酸序列1

MTSALRLAGTLIPAMAFLSCVRPESWEPCVEVVPNITYQCMELKFYKIPDNIPFSTKNLDLSFNPLRHLGSYSFLRFPELQVLDLSRCEIQTIEDGAYQSLSHLSTLILTGNPIQSLALGAFSGLSSLQKLVAVETNLASLENFPIGHLKTLKELNVAHNLIQSFKLPEYFSNLTNLEHLDLSSNKIQNIYCKDLQVLHQMPLSNLSLDLSLNPINFIQPGAFKEIRLHKLTLRSNFDDLNVMKTCIQGLAGLEVHRLVLGEFRNERNLEEFDKSSLEGLCNLTIEEFRLTYLDCYLDNIIDLFNCLANVSSFSLVSVNIKRVEDFSYNFRWQHLELVNCKFEQFPTLELKSLKRLTFTANKGGNAFSEVDLPSLEFLDLSRNGLSFKGCCSQSDFGTTSLKYLDLSFNDVITMSSNFLGLEQLEHLDFQHSNLKQMSQFSVFLSLRNLIYLDISHTHTRVAFNGIFDGLLSLKVLKMAGNSFQENFLPDIFTDLKNLTFLDLSQCQLEQLSPTAFDTLNKLQVLNMSHNNFFSLDTFPYKCLPSLQVLDYSLNHIMTSNNQELQHFPSSLAFLNLTQNDFACTCEHQSFLQWIKDQRQLLVEAERMECATPSDKQGMPVLSLNITCQMNKTIIGVSVFSVLVVSVVAVLVYKFYFHLMLLAGCIKYGRGENIYDAFVIYSSQDEDWVRNELVKNLEEGVPPFQLCLHYRDFIPGVAIAANIIHEGFHKSRKVIVVVSQHFIQSRWCIFEYEIAQTWQFLSSRAGIIFIVLQKVEKTLLRQQVELYRLLSRNTYLEWEDSVLGQHIFWRRLRKALLDGKSWNPEEQ(SEQ ID NO: 77)

本发明的抗体干扰或者以其他方式拮抗经人和/或食蟹猴TLR4和/或人和/或食蟹猴TLR4/MD-2复合物的信号传导。在一些实施方案中，抗体结合于包括SEQ ID NO: 76(人TLR4)和/或SEQ ID NO: 77(食蟹猴TLR4)的残基289和375位之间的人和/或食蟹猴TLR4上的一个或多个氨基酸残基的表位。例如，TLR4抗体特异性地结合于包括SEQ ID NO: 76(人)和/或SEQ ID NO: 77(食蟹猴)的残基349位的表位。在一些实施方案中，表位还包括另外的残基，例如选自以下的残基：至少SEQ ID NO: 76(人)和/或SEQ ID NO: 77(食蟹猴)的残基328和329位、至少SEQ ID NO: 76(人)和/或SEQ ID NO: 77(食蟹猴)的残基351位；及至少SEQ ID NO: 76(人)和/或SEQ ID NO: 77(食蟹猴)的残基369至371位；及其任何组合。

在一些实施方案中，本发明提供特异性地结合Toll样受体4(TLR4)的分离的抗体，其中抗体结合于至少包括SEQ ID NO: 76的残基349位的表位和至少包括SEQ ID NO: 76的残基349位的表位。在一些实施方案中，抗体包含：具有3个互补决定区(CDR)的重链[所述互补决定区包括GYSITGGYS(SEQ ID NO: 15)的可变重链互补决定区1(CDRH1)氨基酸序列、IHYSGYT(SEQ ID NO: 22)的可变重链互补决定区2(CDRH2)氨基酸序列和ARKDSG(X₁)(X₂)(X₃)PY(SEQ ID NO: 14)的可变重链互补决定区3(CDRH3)氨基酸序列(其中X ₁为N、Q、D或E，X₂为任何疏水性氨基酸，和X₃为任何疏水性氨基酸)]；和具有3个CDR的轻链[所述CDR包括QSISDH(SEQ ID NO: 34)的可变轻链互补决定区1(CDRL1)氨基酸序列、YAS(SEQ ID NO:35)的可变轻链互补决定区2(CDRL2)氨基酸序列和QQGHSFPLT(SEQ ID NO: 6)的可变轻链互补决定区3(CDRL3)氨基酸序列]。在一些实施方案中，表位还至少包括SEQ ID NO: 76及SEQ ID NO: 76的残基328和329位。在一些实施方案中，表位进一步至少包括SEQ ID NO:76及SEQ ID NO: 76的残基351位。在一些实施方案中，表位还包括SEQ ID NO: 76及SEQ IDNO: 76的残基369至371位之间的一个或多个残基。在一些实施方案中，表位进一步至少包括SEQ ID NO: 76及SEQ ID NO: 76的残基369至371位。在一些实施方案中，抗体特异性地结合于至少包括SEQ ID NO: 76及SEQ ID NO: 76的残基328、329、349、351和369至371位的表位。在一些实施方案中，抗体还包括在EU氨基酸325位的γ重链恒定区中的氨基酸取代和EU氨基酸328位的氨基酸取代。在一些实施方案中，在EU氨基酸325位取代的氨基酸为丝氨酸，和其中在EU氨基酸328位取代的氨基酸为苯丙氨酸。

示例性TLR4单克隆抗体为本文描述的1E11抗体。如以下显示的那样，1E11抗体包括由SEQ ID NO: 79显示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 78)和由SEQ ID NO:80显示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 8)。

>1E11 VH核酸序列

CAGGTGCAGCTTCAGGAGTCCGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGACACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGGTTACTCCATCACCGGTGGTTATAGCTGGCACTGGATACGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATGGGGTATATCCACTACAGTGGTTACACTGACTTCAACCCCTCCCTCAAGACTCGAATCACCATATCACGTGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGTGGACACTGCAGTGTATTACTGTGCGAGAAAAGATTCGGGCAACTACTTCCCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTTCC(SEQ ID NO: 79)

>1E11 VH氨基酸序列

QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGYSITGGYSWHWIRQPPGKGLEWMGYIHYSGYTDFNPSLKTRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDSGNYFPYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO: 78)

>1E11 VL核酸序列

GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGACTTTCAGTCTGTGACTCCAAAGGAAAAAGTCACCATCACCTGCAGGGCCAGTCAGAGTATCAGCGACCACTTACACTGGTACCAACAGAAACCTGATCAGTCTCCCAAGCTCCTCATCAAATATGCTTCCCATGCCATTTCTGGGGTCCCATCGAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAATAGCCTAGAGGCTGAAGATGCTGCAACGTATTACTGTCAGCAGGGTCACAGTTTTCCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA(SEQ ID NO: 80)

>1E11 VL氨基酸序列

包含互补决定区(CDR)的氨基酸如由M.P. Lefranc(参见Lefranc, M.-P., CurrentProtocols in Immunology, J. Wiley and Sons, New York supplement 40, Al.P.l-A.1P.37(2000) LIGM:230)定义的那样。1E11抗体的重链CDR具有以下序列：GYSITGGYS(SEQID NO: 15)、IHYSGYT(SEQ ID NO: 22)和ARKDSGNYFPY(SEQ ID NO: 24)。1E11抗体的轻链CDR具有以下序列：QSISDH(SEQ ID NO: 34)、YAS(SEQ ID NO: 35)和QQGHSFPLT(SEQ IDNO: 6)。

示例性TLR4单克隆抗体为本文描述的1A1抗体。如以下显示的那样，1A1抗体包括由SEQ ID NO: 81显示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 82)和由SEQ ID NO: 80显示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 8)。

>1A1 VH核酸序列

CAGGTGCAGCTTCAGGAGTCCGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGACACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGGTTACTCCATCACCGGTGGTTATAGCTGGCACTGGATACGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATGGGGTATATCCACTACAGTGGTTACACTGACTTCAACCCCTCCCTCAAGACTCGAATCACCATATCACGTGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGTGGACACTGCAGTGTATTACTGTGCGAGAAAAGATTCCGGCCGCCTCCTCCCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTTCC(SEQ ID NO: 81)

>1A1 VH氨基酸序列

QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGYSITGGYSWHWIRQPPGKGLEWMGYIHYSGYTDFNPSLKTRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDSGRLLPYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO: 82)

>1A1 VL核酸序列

>1A1 VL氨基酸序列

包含互补决定区(CDR)的氨基酸如由M.P. Lefranc(参见Lefranc, M.-P., CurrentProtocols in Immunology, J. Wiley and Sons, New York supplement 40, Al.P.l-A.1P.37(2000) LIGM:230)定义的那样。1A1抗体的重链CDR具有以下序列：GYSITGGYS(SEQID NO: 15)、IHYSGYT(SEQ ID NO: 22)和ARKDSGRLLPY(SEQ ID NO: 25)。1A1抗体的轻链CDR具有以下序列：QSISDH(SEQ ID NO: 34)、YAS(SEQ ID NO: 35)和QQGHSFPLT(SEQ IDNO: 6)。

示例性TLR4单克隆抗体为本文描述的1A6抗体。如以下显示的那样，1A6抗体包括由SEQ ID NO: 83显示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 84)和由SEQ ID NO: 80显示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 8)。

>1A6 VH核酸序列

CAGGTGCAGCTTCAGGAGTCCGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGACACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGGTTACTCCATCACCGGTGGTTATAGCTGGCACTGGATACGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATGGGGTATATCCACTACAGTGGTTACACTGACTTCAACCCCTCCCTCAAGACTCGAATCACCATATCACGTGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGTGGACACTGCAGTGTATTACTGTGCGAGAAAAGATAGCGGCAAGTGGTTGCCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTTCC(SEQ ID NO: 83)

>1A6 VH氨基酸序列

QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGYSITGGYSWHWIRQPPGKGLEWMGYIHYSGYTDFNPSLKTRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDSGKWLPYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO: 84)

>1A6 VL核酸序列

>1A6 VL氨基酸序列

包含互补决定区(CDR)的氨基酸如由M.P. Lefranc(参见Lefranc, M.-P., CurrentProtocols in Immunology, J. Wiley and Sons, New York supplement 40, Al.P.l-A.1P.37(2000) LIGM:230)定义的那样。1A6抗体的重链CDR具有以下序列：GYSITGGYS(SEQID NO: 15)、IHYSGYT(SEQ ID NO: 22)和ARKDSGKWLPY(SEQ ID NO: 26)。1A6抗体的轻链CDR具有以下序列：QSISDH(SEQ ID NO: 34)、YAS(SEQ ID NO: 35)和QQGHSFPLT(SEQ IDNO: 6)。

示例性TLR4单克隆抗体为本文描述的1B12抗体。如以下显示的那样，1B12抗体包括由SEQ ID NO: 85显示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 86)和由SEQ ID NO:80显示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 8)。

>1B12 VH核酸序列

CAGGTGCAGCTTCAGGAGTCCGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGACACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGGTTACTCCATCACCGGTGGTTATAGCTGGCACTGGATACGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATGGGGTATATCCACTACAGTGGTTACACTGACTTCAACCCCTCCCTCAAGACTCGAATCACCATATCACGTGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGTGGACACTGCAGTGTATTACTGTGCGAGAAAAGATAGCGGGCACCTCATGCCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTTCC(SEQ ID NO: 85)

>1B12 VH氨基酸序列

QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGYSITGGYSWHWIRQPPGKGLEWMGYIHYSGYTDFNPSLKTRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDSGHLMPYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO: 86)

>1B12 VL核酸序列

>1B12 VL氨基酸序列

包含互补决定区(CDR)的氨基酸如由M.P. Lefranc(参见Lefranc, M.-P., CurrentProtocols in Immunology, J. Wiley and Sons, New York supplement 40, Al.P.l-A.1P.37(2000) LIGM:230)定义的那样。1A6抗体的重链CDR具有以下序列：GYSITGGYS(SEQID NO: 15)、IHYSGYT(SEQ ID NO: 22)和ARKDSGHLMPY(SEQ ID NO: 27)。1B12抗体的轻链CDR具有以下序列：QSISDH(SEQ ID NO: 34)、YAS(SEQ ID NO: 35)和QQGHSFPLT(SEQ IDNO: 6)。

示例性TLR4单克隆抗体为本文描述的1C7抗体。如以下显示的那样，1C7抗体包括由SEQ ID NO: 87显示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 88)和由SEQ ID NO: 80显示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 8)。

>1C7 VH核酸序列

CAGGTGCAGCTTCAGGAGTCCGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGACACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGGTTACTCCATCACCGGTGGTTATAGCTGGCACTGGATACGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATGGGGTATATCCACTACAGTGGTTACACTGACTTCAACCCCTCCCTCAAGACTCGAATCACCATATCACGTGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGTGGACACTGCAGTGTATTACTGTGCGAGAAAAGATTCCGGGCACAACTACCCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTTCC(SEQ ID NO: 87)

>1C7 VH氨基酸序列

QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGYSITGGYSWHWIRQPPGKGLEWMGYIHYSGYTDFNPSLKTRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDSGHNYPYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO: 88)

>1C7 VL核酸序列

>1C7 VL氨基酸序列

包含互补决定区(CDR)的氨基酸如由M.P. Lefranc(参见Lefranc, M.-P., CurrentProtocols in Immunology, J. Wiley and Sons, New York supplement 40, Al.P.l-A.1P.37(2000) LIGM:230)定义的那样。1C7抗体的重链CDR具有以下序列：GYSITGGYS(SEQID NO: 15)、IHYSGYT(SEQ ID NO: 22)和ARKDSGHNYPY(SEQ ID NO: 28)。1C7抗体的轻链CDR具有以下序列：QSISDH(SEQ ID NO: 34)、YAS(SEQ ID NO: 35)和QQGHSFPLT(SEQ IDNO: 6)。

示例性TLR4单克隆抗体为本文描述的1C10抗体。如以下显示的那样，1C10抗体包括由SEQ ID NO: 89显示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 90)和由SEQ ID NO:80显示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 8)。

>1C10 VH核酸序列

CAGGTGCAGCTTCAGGAGTCCGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGACACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGGTTACTCCATCACCGGTGGTTATAGCTGGCACTGGATACGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATGGGGTATATCCACTACAGTGGTTACACTGACTTCAACCCCTCCCTCAAGACTCGAATCACCATATCACGTGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGTGGACACTGCAGTGTATTACTGTGCGAGAAAAGATAGCGGCAAGAACTTCCCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTTCC(SEQ ID NO: 89)

>1C10 VH氨基酸序列

QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGYSITGGYSWHWIRQPPGKGLEWMGYIHYSGYTDFNPSLKTRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDSGKNFPYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO: 90)

>1C10 VL核酸序列

>1C10 VL氨基酸序列

包含互补决定区(CDR)的氨基酸如由M.P. Lefranc(参见Lefranc, M.-P., CurrentProtocols in Immunology, J. Wiley and Sons, New York supplement 40, Al.P.l-A.1P.37(2000) LIGM:230)定义的那样。1C10抗体的重链CDR具有以下序列：GYSITGGYS(SEQID NO: 15)、IHYSGYT(SEQ ID NO: 22)和ARKDSGKNFPY(SEQ ID NO: 29)。1C10抗体的轻链CDR具有以下序列：QSISDH(SEQ ID NO: 34)、YAS(SEQ ID NO: 35)和QQGHSFPLT(SEQ IDNO: 6)。

示例性TLR4单克隆抗体为本文描述的1C12抗体。如以下显示的那样，1C12抗体包括由SEQ ID NO: 91显示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 92)和由SEQ ID NO:80显示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 8)。

>1C12 VH核酸序列

CAGGTGCAGCTTCAGGAGTCCGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGACACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGGTTACTCCATCACCGGTGGTTATAGCTGGCACTGGATACGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATGGGGTATATCCACTACAGTGGTTACACTGACTTCAACCCCTCCCTCAAGACTCGAATCACCATATCACGTGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGTGGACACTGCAGTGTATTACTGTGCGAGAAAAGATAGCGGCCAGTTGTTCCCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTTCC(SEQ ID NO: 91)

>1C12 VH氨基酸序列

QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGYSITGGYSWHWIRQPPGKGLEWMGYIHYSGYTDFNPSLKTRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDSGQLFPYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO: 92)

>1C12 VL核酸序列

>1C12 VL氨基酸序列

包含互补决定区(CDR)的氨基酸如由M.P. Lefranc(参见Lefranc, M.-P., CurrentProtocols in Immunology, J. Wiley and Sons, New York supplement 40, Al.P.l-A.1P.37(2000) LIGM:230)定义的那样。1C12抗体的重链CDR具有以下序列：GYSITGGYS(SEQID NO: 15)、IHYSGYT(SEQ ID NO: 22)和ARKDSGQLFPY(SEQ ID NO: 30)。1C12抗体的轻链CDR具有以下序列：QSISDH(SEQ ID NO: 34)、YAS(SEQ ID NO: 35)和QQGHSFPLT(SEQ IDNO: 6)。

示例性TLR4单克隆抗体为本文描述的1D10抗体。如以下显示的那样，1D10抗体包括由SEQ ID NO: 93显示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 94)和由SEQ ID NO:80显示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 8)。

>1D10 VH核酸序列

CAGGTGCAGCTTCAGGAGTCCGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGACACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGGTTACTCCATCACCGGTGGTTATAGCTGGCACTGGATACGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATGGGGTATATCCACTACAGTGGTTACACTGACTTCAACCCCTCCCTCAAGACTCGAATCACCATATCACGTGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGTGGACACTGCAGTGTATTACTGTGCGAGAAAAGATAGCGGCCACAACTTGCCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTTCC(SEQ ID NO: 93)

>1D10 VH氨基酸序列

QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGYSITGGYSWHWIRQPPGKGLEWMGYIHYSGYTDFNPSLKTRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDSGHNLPYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO: 94)

>1D10 VL核酸序列

>1D10 VL氨基酸序列

包含互补决定区(CDR)的氨基酸如由M.P. Lefranc(参见Lefranc, M.-P., CurrentProtocols in Immunology, J. Wiley and Sons, New York supplement 40, Al.P.l-A.1P.37(2000) LIGM:230)定义的那样。1D10抗体的重链CDR具有以下序列：GYSITGGYS(SEQID NO: 15)、IHYSGYT(SEQ ID NO: 22)和ARKDSGHNLPY(SEQ ID NO: 31)。1D10抗体的轻链CDR具有以下序列：QSISDH(SEQ ID NO: 34)、YAS(SEQ ID NO: 35)和QQGHSFPLT(SEQ IDNO: 6)。

示例性TLR4单克隆抗体为本文描述的1E11 N103D抗体。如以下显示的那样，1E11N103D抗体包括由SEQ ID NO: 95显示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 96)和由SEQ ID NO: 80显示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 8)。

>1E11 N103D VH核酸序列

CAGGTGCAGCTTCAGGAGTCCGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGACACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGGTTACTCCATCACCGGTGGTTATAGCTGGCACTGGATACGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATGGGGTATATCCACTACAGTGGTTACACTGACTTCAACCCCTCCCTCAAGACTCGAATCACCATATCACGTGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGTGGACACTGCAGTGTATTACTGTGCGAGAAAAGATTCGGGCGACTACTTCCCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTTCC(SEQ ID NO: 95)

>1E11 N103D VH氨基酸序列

QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGYSITGGYSWHWIRQPPGKGLEWMGYIHYSGYTDFNPSLKTRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDSGDYFPYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO: 96)

>1E11 N103D VL核酸序列

>1E11 N103D VL氨基酸序列

包含互补决定区(CDR)的氨基酸如由M.P. Lefranc(参见Lefranc, M.-P., CurrentProtocols in Immunology, J. Wiley and Sons, New York supplement 40, Al.P.l-A.1P.37(2000) LIGM:230)定义的那样。1E11 N103D抗体的重链CDR具有以下序列：GYSITGGYS(SEQ ID NO: 15)、IHYSGYT(SEQ ID NO: 22)和ARKDSGDYFPY(SEQ ID NO: 32)。1E11 N103D抗体的轻链CDR具有以下序列：QSISDH(SEQ ID NO: 34)、YAS(SEQ ID NO: 35)和QQGHSFPLT(SEQ ID NO: 6)。

示例性TLR4单克隆抗体为本文描述的1G12抗体。如以下显示的那样，1012抗体包括由SEQ ID NO: 97显示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 98)和由SEQ ID NO:80显示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 8)。

>1G12 VH核酸序列

CAGGTGCAGCTTCAGGAGTCCGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGACACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGGTTACTCCATCACCGGTGGTTATAGCTGGCACTGGATACGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATGGGGTATATCCACTACAGTGGTTACACTGACTTCAACCCCTCCCTCAAGACTCGAATCACCATATCACGTGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGTGGACACTGCAGTGTATTACTGTGCGAGAAAAGATTCCGGGCGGTACTGGCCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTTCC(SEQ ID NO: 97)

>1G12 VH氨基酸序列

QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGYSITGGYSWHWIRQPPGKGLEWMGYIHYSGYTDFNPSLKTRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDSGRYWPYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO: 98)

>1G12 VL核酸序列

>1G12 VL氨基酸序列

包含互补决定区(CDR)的氨基酸如由M.P. Lefranc(参见Lefranc, M.-P., CurrentProtocols in Immunology, J. Wiley and Sons, New York supplement 40, Al.P.l-A.1P.37(2000) LIGM:230)定义的那样。1012抗体的重链CDR具有以下序列：GYSITGGYS(SEQID NO: 15)、IHYSGYT(SEQ ID NO: 22)和ARKDSGRYWPY(SEQ ID NO: 33)。1E11 N103D抗体的轻链CDR具有以下序列：QSISDH(SEQ ID NO: 34)、YAS(SEQ ID NO: 35)和QQGHSFPLT(SEQID NO: 6)。

示例性TLR4单克隆抗体为本文描述的1E1l.C1抗体。如以下显示的那样，1E1l.C1抗体包括由SEQ ID NO: 99显示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 100)和由SEQID NO: 80显示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 8)。

>1E1l.C1 VH核酸序列

CAGGTGCAGCTTCAGGAGTCCGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGACACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGGTTTCCCGATCCGCTACGGGTATAGCTGGCACTGGATACGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATGGGGTATATCCACTACAGTGGTTACACTGACTTCAACCCCTCCCTCAAGACTCGAATCACCATATCACGTGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGTGGACACTGCAGTGTATTACTGTGCGAGAAAAGATTCGGGCAACTACTTCCCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTTCC(SEQ ID NO: 99)

>1E1l.C1 VH氨基酸序列

QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGFPIRYGYSWHWIRQPPGKGLEWMGYIHYSGYTDFNPSLKTRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDSGNYFPYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO: 100)

>1E1l.C1 VL氨基酸序列

包含互补决定区(CDR)的氨基酸如由M.P. Lefranc(参见Lefranc, M.-P., CurrentProtocols in Immunology, J. Wiley and Sons, New York supplement 40, Al.P.l-A.1P.37(2000) LIGM:230)定义的那样。1E1l.C1抗体的重链CDR具有以下序列：GFPIRYGYS(SEQ ID NO: 16)、IHYSGYT(SEQ ID NO: 22)和ARKDSGNYFPY(SEQ ID NO: 24)。1E1l.C1抗体的轻链CDR具有以下序列：QSISDH(SEQ ID NO: 34)、YAS(SEQ ID NO: 35)和QQGHSFPLT(SEQ ID NO: 6)。

示例性TLR4单克隆抗体为本文描述的1E1l.C2抗体。如以下显示的那样，1E1l.C2抗体包括由SEQ ID NO: 101显示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 102)和由SEQID NO: 8显示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 80)。

>1E1l.C2 VH核酸序列

CAGGTGCAGCTTCAGGAGTCCGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGACACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGGTTACCCGATCCGGTTCGGCTATAGCTGGCACTGGATACGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATGGGGTATATCCACTACAGTGGTTACACTGACTTCAACCCCTCCCTCAAGACTCGAATCACCATATCACGTGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGTGGACACTGCAGTGTATTACTGTGCGAGAAAAGATTCGGGCAACTACTTCCCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTTCC(SEQ ID NO: 101)

>1E1l.C2 VH氨基酸序列

QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGYPIRFGYSWHWIRQPPGKGLEWMGYIHYSGYTDFNPSLKTRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDSGNYFPYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO: 102)

>1E1l.C2 VL核酸序列

>1E1l.C2 VL氨基酸序列

包含互补决定区(CDR)的氨基酸如由M.P. Lefranc(参见Lefranc, M.-P., CurrentProtocols in Immunology, J. Wiley and Sons, New York supplement 40, Al.P.l-A.1P.37(2000) LIGM:230)定义的那样。1E1l.C2抗体的重链CDR具有以下序列：GYPIRFGYS(SEQ ID NO: 17)、IHYSGYT(SEQ ID NO: 22)和ARKDSGNYFPY(SEQ ID NO: 24)。1E1l.C1抗体的轻链CDR具有以下序列：QSISDH(SEQ ID NO: 34)、YAS(SEQ ID NO: 35)和QQGHSFPLT(SEQ ID NO: 6)。

示例性TLR4单克隆抗体为本文描述的1E1l.C3抗体。如以下显示的那样，1E1l.C3抗体包括由SEQ ID NO: 103显示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 104)和由SEQID NO: 80显示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 8)。

>1E1l.C3 VH核酸序列

CAGGTGCAGCTTCAGGAGTCCGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGACACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGGTTACCCCATCCGGCACGGGTACAGCTGGCACTGGATACGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATGGGGTATATCCACTACAGTGGTTACACTGACTTCAACCCCTCCCTCAAGACTCGAATCACCATATCACGTGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGTGGACACTGCAGTGTATTACTGTGCGAGAAAAGATTCGGGCAACTACTTCCCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTTCC(SEQ ID NO: 103)

>1E1l.C3 VH氨基酸序列

QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGYPIRHGYSWHWIRQPPGKGLEWMGYIHYSGYTDFNPSLKTRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDSGNYFPYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO: 104)

>1E1l.C3 VL核酸序列

>1E1l.C3 VL氨基酸序列

包含互补决定区(CDR)的氨基酸如由M.P. Lefranc(参见Lefranc, M.-P., CurrentProtocols in Immunology, J. Wiley and Sons, New York supplement 40, Al.P.l-A.1P.37(2000) LIGM:230)定义的那样。1E1l.C3抗体的重链CDR具有以下序列：GYPIRHGYS(SEQ ID NO: 18)、IHYSGYT(SEQ ID NO: 22)和ARKDSGNYFPY(SEQ ID NO: 24)。1E1l.C1抗体的轻链CDR具有以下序列：QSISDH(SEQ ID NO: 34)、YAS(SEQ ID NO: 35)和QQGHSFPLT(SEQ ID NO: 6)。

示例性TLR4单克隆抗体为本文描述的1E1l.C4抗体。如以下显示的那样，1E1l.C4抗体包括由SEQ ID NO: 105显示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 106)和由SEQID NO: 80显示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 8)。

>1E1l.C4 VH核酸序列

CAGGTGCAGCTTCAGGAGTCCGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGACACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGGTTTCCCGATCGGCCAGGGGTATAGCTGGCACTGGATACGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATGGGGTATATCCACTACAGTGGTTACACTGACTTCAACCCCTCCCTCAAGACTCGAATCACCATATCACGTGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGTGGACACTGCAGTGTATTACTGTGCGAGAAAAGATTCGGGCAACTACTTCCCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTTCC(SEQ ID NO: 105)

>1E1l.C4 VH氨基酸序列

QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGFPIGQGYSWHWIRQPPGKGLEWMGYIHYSGYTDFNPSLKTRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDSGNYFPYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO: 106)

>1E1l.C4 VL核酸序列

>1E1l.C4 VL氨基酸序列

包含互补决定区(CDR)的氨基酸如由M.P. Lefranc(参见Lefranc, M.-P., CurrentProtocols in Immunology, J. Wiley and Sons, New York supplement 40, Al.P.l-A.1P.37(2000) LIGM:230)定义的那样。1E1l.C4抗体的重链CDR具有以下序列：GFPIGQGYS(SEQ ID NO: 19)、IHYSGYT(SEQ ID NO: 22)和ARKDSGNYFPY(SEQ ID NO: 24)。1E1l.C1抗体的轻链CDR具有以下序列：QSISDH(SEQ ID NO: 34)、YAS(SEQ ID NO: 35)和QQGHSFPLT(SEQ ID NO: 6)。

示例性TLR4单克隆抗体为本文描述的1E1l.C5抗体。如以下显示的那样，1E1l.C5抗体包括由SEQ ID NO: 107显示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 108)和由SEQID NO: 80显示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 8)。

>1E1l.C5 VH核酸序列

CAGGTGCAGCTTCAGGAGTCCGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGACACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGGTTACCCGATCTGGGGGGGCTATAGCTGGCACTGGATACGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATGGGGTATATCCACTACAGTGGTTACACTGACTTCAACCCCTCCCTCAAGACTCGAATCACCATATCACGTGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGTGGACACTGCAGTGTATTACTGTGCGAGAAAAGATTCGGGCAACTACTTCCCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTTCCGCCTCCACC(SEQ ID NO: 107)

>1E1l.C5 VH氨基酸序列

QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGYPIWGGYSWHWIRQPPGKGLEWMGYIHYSGYTDFNPSLKTRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDSGNYFPYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO: 108)

>1E1l.C5 VL核酸序列

>1E1l.C5 VL氨基酸序列

包含互补决定区(CDR)的氨基酸如由M.P. Lefranc(参见Lefranc, M.-P., CurrentProtocols in Immunology, J. Wiley and Sons, New York supplement 40, Al.P.l-A.1P.37(2000) LIGM:230)定义的那样。1E1l.C5抗体的重链CDR具有以下序列：GYPIWGGYS(SEQ ID NO: 20)、IHYSGYT(SEQ ID NO: 22)和ARKDSGNYFPY(SEQ ID NO: 24)。1E1l.C1抗体的轻链CDR具有以下序列：QSISDH(SEQ ID NO: 34)、YAS(SEQ ID NO: 35)和QQGHSFPLT(SEQ ID NO: 6)。

示例性TLR4单克隆抗体为本文描述的1E1l.C6抗体。如以下显示的那样，1E1l.C6抗体包括由SEQ ID NO: 109显示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 110)和由SEQID NO: 80显示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 8)。

>1E1l.C6 VH核酸序列

CAGGTGCAGCTTCAGGAGTCCGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGACACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGGTTACCCCATCGGCGGCGGCTATAGCTGGCACTGGATACGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATGGGGTATATCCACTACAGTGGTTACACTGACTTCAACCCCTCCCTCAAGACTCGAATCACCATATCACGTGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGTGGACACTGCAGTGTATTACTGTGCGAGAAAAGATTCGGGCAACTACTTCCCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTTCC(SEQ ID NO: 109)

>1E1l.C6 VH氨基酸序列

QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGYPIGGGYSWHWIRQPPGKGLEWMGYIHYSGYTDFNPSLKTRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDSGNYFPYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO: 110)

>1E1l.C6 VL核酸序列

>1E1l.C6 VL氨基酸序列

包含互补决定区(CDR)的氨基酸如由M.P. Lefranc(参见Lefranc, M.-P., CurrentProtocols in Immunology, J. Wiley and Sons, New York supplement 40, Al.P.l-A.1P.37(2000) LIGM:230)定义的那样。1E1l.C6抗体的重链CDR具有以下序列：GYPIGGGYS(SEQ ID NO: 21)、IHYSGYT(SEQ ID NO: 22)和ARKDSGNYFPY(SEQ ID NO: 24)。1E1l.C1抗体的轻链CDR具有以下序列：QSISDH(SEQ ID NO: 34)、YAS(SEQ ID NO: 35)和QQGHSFPLT(SEQ ID NO: 6)。

示例性TLR4单克隆抗体为本文描述的1E1l.E1抗体。如以下显示的那样，1E1l.E1抗体包括由SEQ ID NO: 77显示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 78)和由SEQID NO: 111显示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 112)。

>1E1l.E1 VH核酸序列

>1E1l.E1 VH氨基酸序列

>1E1l.E1 VL核酸序列

GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGACTTTCAGTCTGTGACTCCAAAGGAAAAAGTCACCATCACCTGCAGGGCCAGTCAGAGTATCAGCGACCACTTACACTGGTACCAACAGAAACCTGATCAGTCTCCCAAGCTCCTCATCAAATATGCTTCCCATGCCATTTCTGGGGTCCCATCGAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAATAGCCTAGAGGCTGAAGATGCTGCAACGTATTACTGTCAGCAGGGGAACGACTTCCCGGTGACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA(SEQ ID NO: 111)

>1E1l.E1 VL氨基酸序列

EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSISDHLHWYQQKPDQSPKLLIKYASHAISGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQQGNDFPVTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO: 112)

包含互补决定区(CDR)的氨基酸如由M.P. Lefranc(参见Lefranc, M.-P., CurrentProtocols in Immunology, J. Wiley and Sons, New York supplement 40, Al.P.l-A.1P.37(2000) LIGM:230)定义的那样。1E1l.E1抗体的重链CDR具有以下序列：GYSITGGYS(SEQ ID NO: 15)、IHYSGYT(SEQ ID NO: 22)和ARKDSGNYFPY(SEQ ID NO: 24)。1E1l抗体的轻链CDR具有以下序列：QSISDH(SEQ ID NO: 34)、YAS(SEQ ID NO: 35)和QQGNDFPVT(SEQID NO: 37)。

示例性TLR4单克隆抗体为本文描述的1E1l.E2抗体。如以下显示的那样，1E1l.E2抗体包括由SEQ ID NO: 79显示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 78)和由SEQID NO: 113显示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 114)。

>1E1l.E2 VH核酸序列

>1E1l.E2 VH氨基酸序列

>1E1l.E2 VL核酸序列

GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGACTTTCAGTCTGTGACTCCAAAGGAAAAAGTCACCATCACCTGCAGGGCCAGTCAGAGTATCAGCGACCACTTACACTGGTACCAACAGAAACCTGATCAGTCTCCCAAGCTCCTCATCAAATATGCTTCCCATGCCATTTCTGGGGTCCCATCGAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAATAGCCTAGAGGCTGAAGATGCTGCAACGTATTACTGTCAGCAGGGGTACGACGAGCCGTTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA(SEQ ID NO: 113)

>1E1l.E2 VL氨基酸序列

EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSISDHLHWYQQKPDQSPKLLIKYASHAISGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQQGYDEPFTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO: 114)

包含互补决定区(CDR)的氨基酸如由M.P. Lefranc(参见Lefranc, M.-P., CurrentProtocols in Immunology, J. Wiley and Sons, New York supplement 40, Al.P.l-A.1P.37(2000) LIGM:230)定义的那样。1E1l.E2抗体的重链CDR具有以下序列：GYSITGGYS(SEQ ID NO: 15)、IHYSGYT(SEQ ID NO: 22)和ARKDSGNYFPY(SEQ ID NO: 24)。1E1l抗体的轻链CDR具有以下序列：QSISDH(SEQ ID NO: 34)、YAS(SEQ ID NO: 35)和QQGYDEPFT(SEQID NO: 38)。

示例性TLR4单克隆抗体为本文描述的1E1l.E3抗体。如以下显示的那样，1E1l.E3抗体包括由SEQ ID NO: 79显示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 78)和由SEQID NO: 115显示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 116)。

>1E1l.E3 VH核酸序列

>1E1l.E3 VH氨基酸序列

>1E1l.E3 VL核酸序列

GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGACTTTCAGTCTGTGACTCCAAAGGAAAAAGTCACCATCACCTGCAGGGCCAGTCAGAGTATCAGCGACCACTTACACTGGTACCAACAGAAACCTGATCAGTCTCCCAAGCTCCTCATCAAATATGCTTCCCATGCCATTTCTGGGGTCCCATCGAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAATAGCCTAGAGGCTGAAGATGCTGCAACGTATTACTGTCAGCAGGGCTACGACTTCCCGTTGACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA(SEQ ID NO: 115)

>1E1l.E3 VL氨基酸序列

EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSISDHLHWYQQKPDQSPKLLIKYASHAISGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQQGYDFPLTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO: 116)

包含互补决定区(CDR)的氨基酸如由M.P. Lefranc(参见Lefranc, M.-P., CurrentProtocols in Immunology, J. Wiley and Sons, New York supplement 40, Al.P.l-A.1P.37(2000) LIGM:230)定义的那样。1E1l.E3抗体的重链CDR具有以下序列：GYSITGGYS(SEQ ID NO: 15)、IHYSGYT(SEQ ID NO: 22)和ARKDSGNYFPY(SEQ ID NO: 24)。1E1l抗体的轻链CDR具有以下序列：QSISDH(SEQ ID NO: 34)、YAS(SEQ ID NO: 35)和QQGYDFPLT(SEQID NO: 39)。

示例性TLR4单克隆抗体为本文描述的1E1l.E4抗体。如以下显示的那样，1E1l.E4抗体包括由SEQ ID NO: 79显示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 79)和由SEQID NO: 117显示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 118)。

>1E1l.E4 VH核酸序列

>1E1l.E4 VH氨基酸序列

>1E1l.E4 VL核酸序列

GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGACTTTCAGTCTGTGACTCCAAAGGAAAAAGTCACCATCACCTGCAGGGCCAGTCAGAGTATCAGCGACCACTTACACTGGTACCAACAGAAACCTGATCAGTCTCCCAAGCTCCTCATCAAATATGCTTCCCATGCCATTTCTGGGGTCCCATCGAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAATAGCCTAGAGGCTGAAGATGCTGCAACGTATTACTGTCAGCAGGGCTACGACTACCCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA(SEQ ID NO: 117)

>1E1l.E4 VL氨基酸序列

EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSISDHLHWYQQKPDQSPKLLIKYASHAISGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQQGYDYPLTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO: 118)

包含互补决定区(CDR)的氨基酸如由M.P. Lefranc(参见Lefranc, M.-P., CurrentProtocols in Immunology, J. Wiley and Sons, New York supplement 40, Al.P.l-A.1P.37(2000) LIGM:230)定义的那样。1E1l.E4抗体的重链CDR具有以下序列：GYSITGGYS(SEQ ID NO: 15)、IHYSGYT(SEQ ID NO: 22)和ARKDSGNYFPY(SEQ ID NO: 24)。1E1l抗体的轻链CDR具有以下序列：QSISDH(SEQ ID NO: 34)、YAS(SEQ ID NO: 35)和QQGYDYPLT(SEQID NO: 40)。

示例性TLR4单克隆抗体为本文描述的1E1l.E5抗体。如以下显示的那样，1E1l.E5抗体包括由SEQ ID NO: 79显示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 78)和由SEQID NO: 119显示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 120)。

>1E1l.E5 VH核酸序列

>1E1l.E5 VH氨基酸序列

>1E1l.E5 VL核酸序列

GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGACTTTCAGTCTGTGACTCCAAAGGAAAAAGTCACCATCACCTGCAGGGCCAGTCAGAGTATCAGCGACCACTTACACTGGTACCAACAGAAACCTGATCAGTCTCCCAAGCTCCTCATCAAATATGCTTCCCATGCCATTTCTGGGGTCCCATCGAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAATAGCCTAGAGGCTGAAGATGCTGCAACGTATTACTGTCAGCAGGGCTACGAGTTCCCGTTGACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA(SEQ ID NO: 119)

>1E1l.E5 VL氨基酸序列

EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSISDHLHWYQQKPDQSPKLLIKYASHAISGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQQGYEFPLTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO: 120)

包含互补决定区(CDR)的氨基酸如由M.P. Lefranc(参见Lefranc, M.-P., CurrentProtocols in Immunology, J. Wiley and Sons, New York supplement 40, Al.P.l-A.1P.37(2000) LIGM:230)定义的那样。1E1l.E5抗体的重链CDR具有以下序列：GYSITGGYS(SEQ ID NO: 15)、IHYSGYT(SEQ ID NO: 22)和ARKDSGNYFPY(SEQ ID NO: 24)。1E1l抗体的轻链CDR具有以下序列：QSISDH(SEQ ID NO: 34)、YAS(SEQ ID NO: 35)和QQGYEFPLT(SEQID NO: 41)。

示例性TLR4单克隆抗体为本文描述的1E1l.C2E1抗体。如以下显示的那样，1E1l.C2E1抗体包括由SEQ ID NO: 101显示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO:102)和由SEQ ID NO: 121显示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 122)。

>1E1l.C2E1 VH核酸序列

>1E1l.C2E1 VH氨基酸序列

>1E1l.C2E1 VL核酸序列

GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGACTTTCAGTCTGTGACTCCAAAGGAAAAAGTCACCATCACCTGCAGGGCCAGTCAGAGTATCAGCGACCACTTACACTGGTACCAACAGAAACCTGATCAGTCTCCCAAGCTCCTCATCAAATATGCTTCCCATGCCATTTCTGGGGTCCCATCGAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAATAGCCTAGAGGCTGAAGATGCTGCAACGTATTACTGTCAGCAGGGGAACGACTTCCCGGTGACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA(SEQ ID NO: 121)

>1E1l.C2E1 VL氨基酸序列

EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSISDHLHWYQQKPDQSPKLLIKYASHAISGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQQGNDFPVTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO: 122)

包含互补决定区(CDR)的氨基酸如由M.P. Lefranc(参见Lefranc, M.-P., CurrentProtocols in Immunology, J. Wiley and Sons, New York supplement 40, Al.P.l-A.1P.37(2000) LIGM:230)定义的那样。1E1l.C2E1抗体的重链CDR具有以下序列：GYPIRFGYS(SEQ ID NO: 17)、IHYSGYT(SEQ ID NO: 22)和ARKDSGNYFPY(SEQ ID NO: 24)。1E1l抗体的轻链CDR具有以下序列：QSISDH(SEQ ID NO: 34)、YAS(SEQ ID NO: 35)和QQGNDFPVT(SEQ ID NO: 37)。

示例性TLR4单克隆抗体为本文描述的1E1l.C2E3抗体。如以下显示的那样，1E1l.C2E3抗体包括由SEQ ID NO: 101显示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO:102)和由SEQ ID NO: 123显示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 124)。

>1E1l.C2E3 VH核酸序列

>1E1l.C2E3 VH氨基酸序列

>1E1l.C2E3 VL核酸序列

GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGACTTTCAGTCTGTGACTCCAAAGGAAAAAGTCACCATCACCTGCAGGGCCAGTCAGAGTATCAGCGACCACTTACACTGGTACCAACAGAAACCTGATCAGTCTCCCAAGCTCCTCATCAAATATGCTTCCCATGCCATTTCTGGGGTCCCATCGAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAATAGCCTAGAGGCTGAAGATGCTGCAACGTATTACTGTCAGCAGGGCTACGACTTCCCGTTGACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA(SEQ ID NO: 123)

>1E1l.C2E3 VL氨基酸序列

EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSISDHLHWYQQKPDQSPKLLIKYASHAISGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQQGYDFPLTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO: 124)

包含互补决定区(CDR)的氨基酸如由M.P. Lefranc(参见Lefranc, M.-P., CurrentProtocols in Immunology, J. Wiley and Sons, New York supplement 40, Al.P.l-A.1P.37(2000) LIGM:230)定义的那样。1E1l.C2E3抗体的重链CDR具有以下序列：GYPIRFGYS(SEQ ID NO: 17)、IHYSGYT(SEQ ID NO: 22)和ARKDSGNYFPY(SEQ ID NO: 24)。1E1l抗体的轻链CDR具有以下序列：QSISDH(SEQ ID NO: 34)、YAS(SEQ ID NO: 35)和QQGYDFPLT(SEQ ID NO: 39)。

示例性TLR4单克隆抗体为本文描述的1E1l.C2E4抗体。如以下显示的那样，1E1l.C2E4抗体包括由SEQ ID NO: 101显示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO:102)和由SEQ ID NO: 125显示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 126)。

>1E1l.C2E4 VH核酸序列

>1E1l.C2E4 VH氨基酸序列

>1E1l.C2E4 VL核酸序列

GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGACTTTCAGTCTGTGACTCCAAAGGAAAAAGTCACCATCACCTGCAGGGCCAGTCAGAGTATCAGCGACCACTTACACTGGTACCAACAGAAACCTGATCAGTCTCCCAAGCTCCTCATCAAATATGCTTCCCATGCCATTTCTGGGGTCCCATCGAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAATAGCCTAGAGGCTGAAGATGCTGCAACGTATTACTGTCAGCAGGGCTACGACTACCCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA(SEQ ID NO: 125)

>1E1l.C2E4 VL氨基酸序列

EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSISDHLHWYQQKPDQSPKLLIKYASHAISGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQQGYDYPLTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO: 126)

包含互补决定区(CDR)的氨基酸如由M.P. Lefranc(参见Lefranc, M.-P., CurrentProtocols in Immunology, J. Wiley and Sons, New York supplement 40, Al.P.l-A.1P.37(2000) LIGM:230)定义的那样。1E1l.C2E4抗体的重链CDR具有以下序列：GYPIRFGYS(SEQ ID NO: 17)、IHYSGYT(SEQ ID NO: 22)和ARKDSGNYFPY(SEQ ID NO: 24)。1E1l抗体的轻链CDR具有以下序列：QSISDH(SEQ ID NO: 34)、YAS(SEQ ID NO: 35)和QQGYDYPLT(SEQ ID NO: 40)。

示例性TLR4单克隆抗体为本文描述的1E1l.C2E5抗体。如以下显示的那样，1E1l.C2E5抗体包括由SEQ ID NO: 101显示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO:102)和由SEQ ID NO: 127显示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 128)。

>1E1l.C2E5 VH核酸序列

>1E1l.C2E5 VH氨基酸序列

>1E1l.C2E5 VL核酸序列

GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGACTTTCAGTCTGTGACTCCAAAGGAAAAAGTCACCATCACCTGCAGGGCCAGTCAGAGTATCAGCGACCACTTACACTGGTACCAACAGAAACCTGATCAGTCTCCCAAGCTCCTCATCAAATATGCTTCCCATGCCATTTCTGGGGTCCCATCGAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAATAGCCTAGAGGCTGAAGATGCTGCAACGTATTACTGTCAGCAGGGCTACGAGTTCCCGTTGACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA(SEQ ID NO: 127)

>1E1l.C2E5 VL氨基酸序列

EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSISDHLHWYQQKPDQSPKLLIKYASHAISGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQQGYEFPLTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO: 128)

包含互补决定区(CDR)的氨基酸如由M.P. Lefranc(参见Lefranc, M.-P., CurrentProtocols in Immunology, J. Wiley and Sons, New York supplement 40, Al.P.l-A.1P.37(2000) LIGM:230)定义的那样。1E1l.C2E5抗体的重链CDR具有以下序列：GYPIRFGYS(SEQ ID NO: 17)、IHYSGYT(SEQ ID NO: 22)和ARKDSGNYFPY(SEQ ID NO: 24)。1E1l抗体的轻链CDR具有以下序列：QSISDH(SEQ ID NO: 34)、YAS(SEQ ID NO: 35)和QQGYEFPLT(SEQ ID NO: 41)。

在一些实施方案中，TLR4抗体被格式化为IgG同种型。在一些实施方案中，TLR4抗体被格式化为IgG1同种型。

示例性IgG1格式化抗体为包含以下显示的SEQ ID NO: 130的重链序列和SEQ IDNO: 132的轻链序列的IgG1格式化1E11抗体：

>1E1l重链氨基酸序列

QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGYSITGGYSWHWIRQPPGKGLEWMGYIHYSGYTDFNPSLKTRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDSGNYFPYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:130)

>1E1l轻链氨基酸序列

EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSISDHLHWYQQKPDQSPKLLIKYASHAISGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQQGHSFPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:132)

>1E1l轻链核酸序列

ATGAGTGTGCCCACTCAGGTCCTGGGGTTGCTGCTGCTGTGGCTTACAGATGCCAGATGTGAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGACTTTCAGTCTGTGACTCCAAAGGAAAAAGTCACCATCACCTGCAGGGCCAGTCAGAGTATCAGCGACCACTTACACTGGTACCAACAGAAACCTGATCAGTCTCCCAAGCTCCTCATCAAATATGCTTCCCATGCCATTTCTGGGGTCCCATCGAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAATAGCCTAGAGGCTGAAGATGCTGCAACGTATTACTGTCAGCAGGGTCACAGTTTTCCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAA(SEQ ID NO: 131)

>1E1l重链核酸序列

ATGGAATGGAGCTGGGTCTTTCTCTTCTTCCTGTCAGTAACTACAGGTGTCCACCAGGTGCAGCTTCAGGAGTCCGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGACACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGGTTACTCCATCACCGGTGGTTATAGCTGGCACTGGATACGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATGGGGTATATCCACTACAGTGGTTACACTGACTTCAACCCCTCCCTCAAGACTCGAATCACCATATCACGTGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGTGGACACTGCAGTGTATTACTGTGCGAGAAAAGATCCGTCCGACGCCTTTCCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTTCCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACAGTCTCGTGGAACTCAGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACTGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTATACCCTGCCCCCATCTCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACTTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTTAA(SEQ ID NO: 129)

示例性IgG1格式化抗体为包含以下显示的SEQ ID NO: 134的重链序列和SEQIDNO:136的轻链序列的IgG1格式化1E11.C11抗体：

>1E11.C1轻链氨基酸序列

EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSISDHLHWYQQKPDQSPKLLIKYASHAISGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQQGHSFPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:136)

>1E11.C1重链氨基酸序列

QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGFPIRYGYSWHWIRQPPGKGLEWMGYIHYSGYTDFNPLKTRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDSGNYFPYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:134)

>1E11.C1轻链核酸序列

ATGAGTGTGCCCACTCAGGTCCTGGGGTTGCTGCTGCTGTGGCTTACAGATGCCAGATGTGAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGACTTTCAGTCTGTGACTCCAAAGGAAAAAGTCACCATCACCTGCAGGGCCAGTCAGAGTATCAGCGACCACTTACACTGGTACCAACAGAAACCTGATCAGTCTCCCAAGCTCCTCATCAAATATGCTTCCCATGCCATTTCTGGGGTCCCATCGAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAATAGCCTAGAGGCTGAAGATGCTGCAACGTATTACTGTCAGCAGGGTCACAGTTTTCCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAA(SEQ ID NO: 135)

>1E11.C1重链核酸序列

ATGGAATGGAGCTGGGTCTTTCTCTTCTTCCTGTCAGTAACTACAGGTGTCCACCAGGTGCAGCTTCAGGAGTCCGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGACACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGGTTTCCCGATCCGCTACGGGTATAGCTGGCACTGGATACGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATGGGGTATATCCACTACAGTGGTTACACTGACTTCAACCCCTCCCTCAAGACTCGAATCACCATATCACGTGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGTGGACACTGCAGTGTATTACTGTGCGAGAAAAGATTCGGGCAACTACTTCCCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTTCCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACAGTCTCGTGGAACTCAGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACTGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTATACCCTGCCCCCATCTCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACTTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTTAA(SEQ ID NO: 133)

在一些实施方案中，本发明的TLR4抗体特异性地结合人和/或食蟹猴TLR4/MD-2复合物，其中抗体结合于包括SEQ ID NO: 76(人)和SEQ ID NO: 77(食蟹猴)的残基325与374位之间的人和/或食蟹猴TLR4上的一个或多个氨基酸残基的表位。或者，单克隆抗体为与1A1、1A6、1B12、1C7、1C10、1C12、1D10、1E11、1E11 N103D、1G12、1E11.C1、1E11.C2、1E11.C3、1E11.C4、1E11.C5、1E11.C6、1E11.E1、1E11.E2、1E11.E3、1E11.E4、1E11.E5、1E11.C2E1、1E11.C2E3、1E11.C2E4和1E11.C2E5结合于相同表位的抗体。

本发明的抗TLR4抗体包括改变的抗体，其中抗体Fc部分CH2结构域中的至少EU325位的氨基酸残基和至少EU 328位的氨基酸残基已被修饰。例如，至少EU 325位的氨基酸残基已用丝氨酸取代，和至少EU 328位的氨基酸残基已用苯丙氨酸取代。

与未改变的抗体相比，这些具有修饰的Fc部分的抗TLR4抗体引起修饰的效应子功能，例如修饰的Fc受体活性。例如，人Fc受体为CD32A。在一些实施方案中，与未改变的抗体相比，这些抗TLR4抗体在连接于CD32A后引起防止促炎性介质释放。因此，这些抗TLR4抗体引起修饰的Fc受体活性，比如防止促炎性介质释放，同时保持结合靶抗原的能力。在一些实施方案中，这些抗TLR4抗体为中和性抗体，其中抗TLR4抗体引起修饰的Fc受体活性，同时保持中和靶抗原的一种或多种生物活性的能力。

例如，本发明的抗TLR4抗体包括结合人TLR4/MD-2受体复合物的单克隆抗体。该受体复合物被脂多糖(LPS)激活，后者为革兰阴性菌外膜的主要组分。本发明的抗TLR4抗体抑制受体激活和随后经LPS的胞内信号传导。因此，抗TLR4抗体中和TLR4/MD-2受体复合物的激活。具体地讲，本发明提供识别细胞表面表达的TLR4/MD-2受体复合物的抗TLR4抗体。这些抗TLR4抗体阻断LPS诱导的和其他TLR4配体诱导的促炎性细胞因子(例如IL-6、IL-8、TNFα)产生。另外，本发明的一些抗TLR4抗体还在不与MD-2复合时识别TLR4。改变的抗体为例如人源化抗体。

定义：

除非另外定义，与本发明相关使用的科学和技术术语应具有本领域普通技术人员通常理解的含义。进一步地，除非上下文另外需要，单数形式的术语应包括复数形式，和复数形式的术语应包括单数形式。通常，与本文描述的细胞和组织培养、分子生物学以及蛋白和寡或聚核苷酸化学及杂交相关使用的命名以及技术为本领域熟知和常用的那些。标准技术用于重组DNA、寡核苷酸合成以及组织培养和转化(例如电穿孔、脂质体转染)。酶促反应和纯化技术根据制造商的说明书或如本领域通常完成的那样或如本文描述的那样实施。通常根据本领域熟知的常规方法和如整个本说明书引用和讨论的各种通用和更具体的参考文献中描述的那样实施前述技术和程序。参见例如Sambrook 等人Molecular Cloning: ALaboratory Manual(2d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold SpringHarbor, N.Y.(1989))。与本文描述的分析化学、合成‘有机化学’以及医药和药物化学相关使用的命名以及实验室程序和技术为本领域熟知和常用的那些。标准技术用于化学合成、化学分析、药物制备、配制和递送以及患者治疗。

抗TLR4抗体的用途

应该意识到，给予本发明的治疗实体将与合适的载体、赋形剂和掺入制剂中以提供改善的转运、递送、耐受性等的其他物质一起给予。在所有药物化学家已知的处方集中可发现许多合适的制剂：Remington’s Pharmaceutical Sciences(15th ed., Mack PublishingCompany, Easton, PA(1975)), 特别是其中Blaug, Seymour的第87章。这些制剂包括例如散剂、糊剂、软膏剂、胶冻剂、蜡状物、油类、脂类、含脂质(阳离子或阴离子)的囊泡(比如Lipofectin^TM)、DNA缀合物、无水吸收糊剂、水包油和油包水乳剂、聚乙二醇乳剂(各种分子量的聚乙二醇)、半固体凝胶和含有聚乙二醇的半固体混合物。任何前述混合物可适合于本发明的治疗和疗法，条件是制剂中的活性成分不会被制剂灭活，并且制剂为生理学上相容的且可耐受给予途径。也参见Baldrick P.“Pharmaceutical excipient development:the need for preclinical guidance.”Regul. Toxicol Pharmacol. 32(2):210-8(2000), Wang W.“Lyophilization and development of solid proteinpharmaceuticals.”Int. J. Pharm. 203(1-2):1-60(2000), Charman WN“Lipids,lipophilic drugs, and oral drug deliverysome emerging concepts.”J Pharm Sci.89(8):967-78(2000), Powell 等人“Compendium of excipients for parenteralformulations”PDA J Pharm Sci Technol. 52:238-311(1998)以及其中对于药物化学家熟知的与制剂、赋形剂和载体相关的另外信息的引用文献。

包括本发明抗TLR4抗体的本发明治疗制剂用于治疗或缓解与免疫相关障碍相关的症状。本发明还提供治疗或缓解与免疫相关障碍相关的症状的方法。治疗方案通过使用标准方法鉴定患有免疫相关障碍(或处于出现免疫相关障碍的风险下)的受试者例如人患者来实施。例如，本发明的抗TLR4抗体为治疗自身免疫性疾病和/或炎性障碍的有用治疗工具。在某些实施方案中，考虑使用调节例如抑制、中和或干扰TLR信号传导的抗TLR4抗体用于治疗自身免疫性疾病和/或炎性障碍。

自身免疫性疾病包括例如获得性免疫缺陷综合征(AIDS，其为一种具有自身免疫性组分的病毒性疾病)、斑秃、强直性脊柱炎、抗磷脂综合征、自身免疫性艾迪生病、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性肝炎、自身免疫性内耳疾病(AIED)、自身免疫性淋巴增殖综合征(ALPS)、自身免疫性血小板减少性紫癜(ATP)、白塞病、心肌病、口炎性腹泻-疱疹样皮炎、慢性疲劳免疫功能障碍综合征(CFIDS)、慢性炎性脱髓鞘性多神经病(CIPD)、瘢痕性类天疱疮、冷凝集素病、CREST综合征、克罗恩病、德戈斯病、幼年型皮肌炎、盘状狼疮、原发性混合型冷球蛋白血症、纤维肌痛-纤维肌炎、格雷夫斯病、吉兰-巴雷综合征、桥本甲状腺炎、特发性肺纤维化、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、IgA肾病、胰岛素依赖性糖尿病、幼年型慢性关节炎(斯蒂尔病)、幼年型类风湿性关节炎、美尼尔氏病、混合性结缔组织病、多发性硬化症、重症肌无力、恶性贫血、结节性多动脉炎、多软骨炎、多腺性综合征、风湿性多肌痛、多肌炎和皮肌炎、原发性无丙种球蛋白血症、原发性胆汁性肝硬化、牛皮癣、牛皮癣关节炎、雷诺现象、赖特综合征、风湿热、类风湿性关节炎、结节病、硬皮病(进行性系统性硬化症(PSS)，也称为系统性硬化症(SS))、斯耶格伦综合征、僵人综合征、系统性红斑狼疮、高安动脉炎、颞动脉炎/巨细胞动脉炎、溃疡性结肠炎、葡萄膜炎、白癜风和韦格纳肉芽肿。

炎性障碍包括例如慢性和急性炎性障碍。炎性障碍的实例包括阿尔茨海默病、哮喘、特应性变态反应、变态反应、动脉粥样硬化、支气管哮喘、湿疹、肾小球肾炎、移植物抗宿主病、溶血性贫血、骨关节炎、脓毒症、中风、组织和器官移植、血管炎、糖尿病性视网膜病变和呼吸机诱发性肺损伤。

例如，抗TLR4抗体可用于治疗由微生物产物(例如LPS)诱发的急性炎症和脓毒症以及由该急性炎症导致的恶化，比如慢性阻塞性肺疾病和哮喘(参见O’Neill, Curr.Opin. Pharmacol. 3: 396-403(2003)，特此通过参照以其全部结合)。这种抗体也可用于治疗神经退行性自身免疫性疾病(Lehnardt 等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 100:8514-8519(2003)，特此通过参照以其全部结合)。

另外，本发明的抗体还可用作治疗由应激例如细胞应激引起的疾病比如骨关节炎的治疗试剂，所述应激转而诱导触发TLR4的内源性可溶性“应激”因子。内源性可溶性应激因子包括例如Hsp60(参见Ohashi 等人, J. Immunol. 164: 558 561(2000))和纤连蛋白(参见Okamura 等人, J. Biol. Chem. 276:10229 10233(2001)和硫酸肝素、透明质烷、gp96、[3防御素(Defensin)-2或表面活性蛋白A(参见例如Johnson 等人, Crit. Rev.Immunol., 23(1-2):15-44(2003)，其每一个特此通过参照以其全部结合)。本发明的抗体还可用于治疗多种与应激比如与被置于呼吸器、呼吸机和其他呼吸辅助装置的受试者和患者相关的细胞应激相关的障碍。例如，本发明的抗体可用于治疗呼吸机诱发性肺损伤(“VILI”)，也称为通气相关性肺损伤(“VALI”)。

其中抑制TLR4功能可能有益的其他疾病领域包括例如慢性炎症(例如与变态反应性病症和哮喘相关的慢性炎症)、自身免疫性疾病(例如炎性肠病)和动脉粥样硬化(参见O’Neill, Curr. Opin. Pharmacol. 3: 396-403(2003)，特此通过参照以其全部结合)。

与这些免疫相关障碍相关的症状包括例如炎症、发热、全身不适、发热、疼痛(通常局限于发炎区域)、脉率快、关节疼痛或疼痛(关节痛)、呼吸急促或其他呼吸模式异常、畏寒、意识错乱、定向障碍、躁动、头晕、咳嗽、呼吸困难、肺部感染、心力衰竭、呼吸衰竭、水肿、体重增加、粘液脓性复发、恶病质、哮喘鸣、头痛和腹部症状比如腹痛、腹泻或便秘。

治疗的有效性与用于诊断或治疗特定免疫相关障碍的任何已知方法联合测定。免疫相关障碍的一种或多种症状的缓解表明抗体赋予临床益处。

本发明的抗体(包括多克隆、单克隆、人源化和完全人抗体)可用作治疗药物。这种药物通常用于在受试者中治疗或预防与给定靶标的表达或激活异常相关的疾病或病理学。给予受试者抗体制剂，优选地为对其靶抗原具有高特异性和高亲和力的抗体制剂，并且通常由于其与靶标结合而具有作用。给予抗体可消除或抑制或干扰靶标的信号传导功能。给予抗体可消除或抑制或干扰靶标与其天然结合的内源性配体的结合。例如，抗体结合于靶标并中和TLR4配体诱导的促炎性细胞因子产生。

本发明抗体的治疗有效量主要涉及实现治疗目标需要的量。如以上指出的那样，这可以是抗体与其靶抗原之间的结合相互作用，这种相互作用在某些情况下会干扰靶标行使功能。此外，需要给予的量进一步取决于抗体对其特定抗原的结合亲和力，并且还将取决于给予的抗体自给予它的其他受试者的自由体积耗尽的速率。作为非限制性实例，本发明的抗体或抗体片段的治疗有效剂量的常用范围可为约0.1 mg/kg体重-约50 mg/kg体重。常用给药频率可例如在每天两次至一周一次的范围内。

可以药用组合物的形式给予本发明的抗体或其片段用于治疗多种疾病和障碍。涉及制备这种组合物的原则和考虑因素以及选择组分的指南提供在例如Remington: TheScience And Practice Of Pharmacy 19th ed.(Alfonso R. Gennaro, 等人, editors)Mack Pub. Co., Easton, Pa.: 1995; Drug Absorption Enhancement: Concepts,Possibilities, Limitations, And Trends, Harwood Academic Publishers,Langhorne, Pa., 1994; 和Peptide And Protein Drug Delivery(Advances InParenteral Sciences, Vol. 4), 1991, M. Dekker, New York中。

药用组合物可与给药说明书一起包括在容器、包装或分配器中。

制剂还可含有多于一种活性化合物，例如对正治疗的特定适应症必要的抗TLR4拮抗剂，优选地为具有互补活性且不会彼此产生不利影响的那些活性化合物。或者或另外，组合物可包含增强其功能的物质，比如细胞毒药物、细胞因子、化疗药物或生长抑制药物。这种分子适当地以对预期目的有效的量组合存在。

在一个实施方案中，活性化合物(例如抗TLR4拮抗剂)以组合疗法给予，即与一种或多种可用于治疗病理学病症或障碍(比如各种形式的癌症、自身免疫性障碍和炎性疾病)的另外药物组合。术语“组合”在该上下文中意指基本上同时(或同时或序贯)给予药物。如果序贯给予，则在开始给予第二种化合物时，两种化合物中的第一种优选地在治疗部位仍可以有效浓度检测到。

例如，组合疗法可包括与一种或多种另外的治疗药物(例如一种或多种细胞因子和生长因子抑制剂、免疫抑制剂、抗炎药物、代谢抑制剂、酶抑制剂和/或细胞毒或细胞生长抑制药物)共同配制和/或共同给予的一种或多种本发明的中和性抗TLR4抗体，如以下更详细描述的那样。这种组合疗法可有利地使用较低剂量给予治疗药物，因此避免与各种单一疗法相关的可能的毒性或并发症。

与本发明的中和性抗TLR4抗体组合使用的优选的治疗药物为在炎性应答的不同阶段进行干扰的那些药物。在一个实施方案中，本文描述的一种或多种中和性抗TLR4抗体可与一种或多种另外的药物比如其他细胞因子或生长因子拮抗剂(例如可溶性受体、肽抑制剂、小分子、配体融合物)、或者结合于其他靶标的抗体或其抗原结合片段(例如结合于其他细胞因子或生长因子、其受体或其他细胞表面分子的抗体)、以及抗炎细胞因子或其激动剂共同配制和/或共同给予。

当使用抗体片段时，特异性地结合于靶蛋白的结合结构域的最小抑制片段和/或干扰或者以其他方式拮抗TLR4信号传导的最小抑制片段为优选的。例如，基于抗体的可变区序列，肽分子可被设计保持结合靶蛋白序列的能力。这种肽可化学合成和/或通过重组DNA技术产生(参见例如Marasco 等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 7889-7893(1993))。制剂还可含有多于一种对正治疗的特定适应症必要的活性化合物，优选地为具有互补活性且不会彼此产生不利影响的那些活性化合物。或者或另外，组合物可包含增强其功能的物质，比如细胞毒药物、细胞因子、化疗药物或生长抑制药物。这种分子适当地以对预期目的有效的量组合存在。

使用多种标准检测技术中的任一种检测TLR4配体和其他相关生物标志物的水平。检测剂可用于检测样品中给定靶标(或其蛋白片段)的存在。在一些实施方案中，检测剂含有可检测标记。在一些实施方案中，检测剂为抗体(或其片段)或探针。在一些实施方案中，药物或探针被标记。就探针或抗体而言，术语“标记的” 旨在包括通过将可检测物质偶联(即物理连接)于探针或抗体来直接标记探针或抗体，以及通过与直接标记的另一种试剂的反应性来间接标记探针或抗体。间接标记的实例包括使用荧光标记的二次抗体检测一次抗体和用生物素对DNA探针进行末端标记，使得其可用荧光标记的链霉亲和素进行检测。

术语“生物样品”旨在包括自受试者分离的组织、细胞和生物流体，以及存在于受试者体内的组织、细胞和流体。因此，在术语“生物样品”的使用范围内包括血液和血液的一部分或组分，包括血清、血浆或淋巴液。体液可为自受试者体内任何地方(优选地为外周位置)分离的流体，包括(但不限于)例如血液、血浆、血清、滑液、尿、痰、脊髓液、脑脊髓液、胸膜液、呼吸道、肠道和泌尿生殖道的流体、唾液、器官系统内流体、腹水、肿瘤囊肿液、羊水及其组合。生物样品还包括所有前述流体的实验分离部分。生物样品还包括含有均质化固体材料(比如粪便、组织和活检样品)的溶液或混合物。本发明的检测方法可用于在体外以及体内检测生物样品中的分析物mRNA、蛋白或基因组DNA。例如，用于检测分析物mRNA的体外技术包括RNA印迹杂交和原位杂交。用于检测分析物蛋白的体外技术包括酶联免疫吸附测定(ELISA)、蛋白质印迹、免疫沉淀和免疫荧光。用于检测分析物基因组DNA的体外技术包括DNA印迹杂交。用于实施免疫测定的程序描述于例如“ELISA: Theory and Practice:Methods in Molecular Biology””, Vol. 42, J.R. Crowther(Ed.) Human Press,Totowa, NJ, 1995;“Immunoassay”, E. Diamandis and T. Christopoulus, AcademicPress, Inc., San Diego, CA, 1996; 和“Practice and Theory of EnzymeImmunoassays”, P. Tijssen, Elsevier Science Publishers, Amsterdam, 1985中。此外，用于检测分析物蛋白的体内技术包括向受试者引入标记的抗分析物蛋白抗体。例如，抗体可用放射性标志物标记，后者在受试者中的存在情况和位置可通过标准成像技术检测。

药用组合物

可将本发明的抗体或可溶性嵌合多肽(本文也称为“活性化合物”)及其衍生物、片段、类似物和同源物掺入到适合于给予的药用组合物中。这种组合物代表性地包含抗体或可溶性嵌合多肽和药学上可接受的载体。本文使用的术语“药学上可接受的载体”旨在包括与药用给予相容的任何和所有溶剂、分散介质、包衣材料、抗细菌和抗真菌物质、等渗和吸收延缓物质等。合适的载体描述于Remington's Pharmaceutical Sciences的最新版本中(该领域的标准参考文本)，本文通过参照结合。这种载体或稀释剂的优选实例包括(但不限于)水、盐水、林格氏液、右旋糖溶液和5%人血清白蛋白。也可使用脂质体和非水性溶媒比如不挥发油。这种介质和物质用于药用活性物质的用途为本领域熟知的。除非任何常规介质或物质与活性化合物不相容，考虑将其用于组合物中。补充性活性化合物也可掺入到组合物中。

本发明的药用组合物被配制成与其预期给药途径相容。给药途径的实例包括肠胃外，例如静脉内、皮内、皮下、经口(例如吸入)、经皮(即局部)、经粘膜和直肠给予。用于肠胃外、皮内或皮下应用的溶液剂或混悬剂可包括以下组分：无菌稀释剂比如注射用水、盐水溶液、不挥发油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他合成溶剂；抗细菌物质比如苄醇或尼泊金甲酯；抗氧化剂比如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂比如乙二胺四乙酸(EDTA)；缓冲剂比如乙酸盐、枸橼酸盐或磷酸盐，以及用于调节张力的物质比如氯化钠或右旋糖。pH可用酸或碱比如盐酸或氢氧化钠调节。肠胃外制剂可封装于安瓿、一次性注射器或者由玻璃或塑料制成的多剂量小瓶中。

适合于注射使用的药用组合物包括无菌水溶液剂(当为水溶性时)或分散体和用于临时制备无菌注射用溶液剂或分散体的无菌散剂。对于静脉内给予，合适的载体包括生理盐水、抑菌水、Cremophor EL^TM(BASF, Parsippany, N.J.)或磷酸缓冲盐水(PBS)。在所有情况下，组合物必须为无菌的，并且为流体，其程度为存在易于注射性。其必须在制造和储存条件下稳定，并且必须针对微生物比如细菌和真菌的污染作用防腐。载体可为含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)及其合适的混合物的溶剂或分散介质。适当的流动性可例如通过使用包衣材料比如卵磷脂，通过在分散体的情况下保持需要的粒度和通过使用表面活性剂来保持。预防微生物的作用可通过各种抗细菌和抗真菌物质例如尼泊金类、氯丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞等实现。在许多情况下，优选的是在组合物中包括等渗物质，例如糖类、多元醇类比如甘露醇、山梨醇、氯化钠。可注射组合物的延长吸收可通过在组合物中包含延缓吸收的物质例如单硬脂酸铝和明胶来实现。

无菌注射用溶液剂可通过将活性化合物以需要的量掺入合适的溶剂中(根据需要与以上列举的成分中的一种或其组合一起)并随后过滤灭菌来制备。通常，分散体通过将活性化合物掺入到含有基本分散介质和来自以上列举的那些的需要的其他成分的无菌溶媒中来制备。在用于制备无菌注射用溶液剂的无菌散剂的情况下，制备方法为真空干燥和冷冻干燥，自其先前无菌过滤的溶液得到活性成分加上任何另外期望的成分的散剂。

经口组合物通常包括惰性稀释剂或可食用载体。其可封装于明胶胶囊中或压制成片剂。为了经服治疗给予的目的，活性化合物可与赋形剂掺混，并以片剂、锭剂或胶囊剂的形式使用。经口组合物也可使用流体载体制备以用作漱口剂，其中流体载体中的化合物经口应用并漱口和吐出或咽下。可包括药学上相容的粘合剂和/或佐剂材料作为组合物的部分。片剂、丸剂、胶囊剂、锭剂等可含有任何以下成分或性质类似的化合物：粘合剂比如微晶纤维素、黄蓍胶或明胶；赋形剂比如淀粉或乳糖；崩解剂比如海藻酸、Primogel或玉米淀粉；润滑剂比如硬脂酸镁或Sterotes；助流剂比如胶体二氧化硅；甜味剂比如蔗糖或糖精；或矫味剂比如薄荷、水杨酸甲酯或橙味矫味剂。

对于通过吸入给予，化合物以来自加压容器或分配器(含有合适的推进剂例如气体比如二氧化碳)或喷雾器的气溶胶喷雾剂形式递送。

全身给予也可通过经粘膜或经皮手段。对于经粘膜或经皮给予，在制剂中使用适合于渗透屏障的渗透剂。这种渗透剂通常为本领域已知的，并且包括例如(对于经粘膜给予)洗涤剂、胆汁盐和夫西地酸衍生物。经粘膜给予可通过使用鼻喷雾剂或栓剂来完成。对于经皮给予，将活性化合物配制成如本领域通常已知的软膏剂、药膏、凝胶剂或霜剂。

化合物还可以栓剂(例如用常规栓剂基质，比如可可脂和其他甘油酯)或保留灌肠剂的形式制备以用于直肠递送。

在一个实施方案中，活性化合物用保护化合物免于自机体快速清除的载体制备，比如控释制剂，包括植入物和微囊化递送系统。可使用可生物降解的生物相容性聚合物，比如乙烯醋酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。用于制备这种制剂的方法对本领域技术人员为显然的。材料还可市售得自Alza Corporation和NovaPharmaceuticals, Inc。也可使用脂质体混悬液(包括含有病毒抗原的单克隆抗体的靶向感染细胞的脂质体)作为药学上可接受的载体。这些可根据本领域技术人员已知的方法制备，例如在美国专利第4522811号中描述的那样。

尤其有利的是以剂量单位形式配制经口或肠胃外组合物以易于给予和剂量均匀。本文使用的剂量单位形式指的是适合作为用于待治疗的受试者的单位剂量的物理离散单位，每个单位含有与需要的药用载体联合的经计算产生期望的治疗作用的预定量的活性化合物。本发明的剂量单位形式的规格受制于和直接取决于活性化合物的独特特征和待实现的特定治疗作用，以及配混这种用于个体治疗的活性化合物的领域中固有的限制。

本发明将在以下实施例中进一步描述，这些实施例不限制权利要求中描述的本发明范围。

实施例

实施例1. 用抗TLR4抗体处理的类风湿性关节炎滑液样品中的细胞因子产生

本文呈现的研究被设计评估用本公开的抗TLR4抗体(NI-0101)处理对自类风湿性关节炎(RA)患者分离的类风湿性关节炎滑液(RASF)样品中细胞因子产生的作用。

如在图1A-1D中显示的那样，用抗TLR4抗体(NI-0101)处理阻断分离自RA患者的合并的RASF-刺激的单核细胞产生IL-6(图1A)、TNFα(图1B)、IL-1β(图1C)和IL-8(图1D)。TLR4信号传导用抗人TLR4单克隆抗体(NI-0101)阻断。

实施例2. 抗TLR4抗体处理的应答者和无应答者的鉴定

本文呈现的研究被设计评估RASF样品刺激细胞因子产生和应答于TLR4阻断的能力。如果NI-0101能够阻断(部分或完全) RASF诱导的IL6自RA单核细胞的产生，则来自患者(“Pat”)的RASF样品被分类为NI-0101应答者(“R”)。其他被分类为NI-0101无应答者(NR)。在所测试的36个RASF样品中，18个被归类为NI-0101应答者(50%)和18个被归类为NI-0101应答者(50%)。

图2A和2B呈现无应答者RASF和应答者RASF患者的代表性实例。如在图2A-2B中显示的那样，在滑液样品之间观察到异质性。

实施例3. 滑液样品中ACPA和TLR4配体的表达水平

本文呈现的研究被设计评估非类风湿性关节炎患者和RA患者的滑液样品中ACPA和TLR4配体(HMGB1和S100A8/A9)的表达水平及其与NI-0101应答的相关性。

如在图3A-3C中显示的那样，TLR4配体抗瓜氨酸化蛋白抗体(ACPA)、HMGB1和S100A8/A9在RASF样品中以升高的水平存在，但在非RA患者滑液样品中则不是。如在图3D-3F中显示的那样，ACPA、HMGB1和S100A8/A9的水平与NI-0101应答者状态相关。具体地讲，发现ACPA表达水平在NI-0101应答者组中富含(图3D)，并且在NI-0101应答者与无应答者中检测到HMGB1表达水平存在差异(图5E)。

实施例4. RA患者的滑液样品中针对瓜氨酸化肽的抗体表达

本文呈现的研究被设计评估个体中的ACPA表达谱作为NI-0101应答的预测因子。为了更好地表征相关性，评估了对源自纤维蛋白原-α(cFbα 556-575)、纤维蛋白原-β(cFbβ563-583)和组蛋白-2A(cH2A 1-20)的以下瓜氨酸化肽的反应性。

表1. 用于评价ACPA特异性的瓜氨酸化肽的氨基酸(AA)序列。AA名称以其字母代码给出。Cit=瓜氨酸

肽	蛋白	氨基酸序列
			cFbα 556-575	纤维蛋白原	NTKESSSHHPGIAEFPS-Cit-GK(SEQ ID NO: 1)
citFbβ 563-583	纤维蛋白原	HHPGIAEFPS-Cit-GKSSSYSKQF(SEQ ID NO: 2)
			citH2A 1-20	组蛋白2A	MSG-Cit-GKQGGKA-Cit-AKAKS-Cit-SS(SEQ ID NO: 3)

如在图4A-4F中显示的那样，在来自RA患者的滑液中通过ELISA测定针对瓜氨酸化肽的抗体反应性，并与对NI-0101的应答相关联。对ACPA⁺患者中瓜氨酸化肽的反应性水平显示在图4A-4C中，而图4D-4F显示所有患者(即ACPA⁺和ACPA^-患者两者)的活性水平。与无应答者相比，应答者富含活性。

实施例5. 来自RA患者的血清样品和滑液样品中针对瓜氨酸化肽的抗体表达

本文呈现的研究被设计评估RA患者的成对血清样品中ACPA的精细特异性及其与RASF对NI-0101的应答的相关性。

评估成对RA血清和滑液中ACPA水平之间的相关性(n=22)，并且结果显示在图5A中。评估根据RASF对NI-0101的应答分类的成对RA血清中的ACPA水平(NI-0101无应答者(NR)或NI-0101应答者(R))，并且结果显示在图5B中。在来自RA患者的成对血清中通过ELISA测定针对源自纤维蛋白原-α(cFbα 556-575)、纤维蛋白原-β(cFbβ 563-583)和组蛋白-2A(cH2A 1-20)的瓜氨酸化肽的抗体反应性，并与对NI-0101的应答相关联。这些标志物的灵敏度和特异性显示于图5C-5H和以下表2中。灵敏度在该上下文中定义为在测定中被鉴定为阳性的NI-0101应答者百分数，和特异性定义为在测定中被鉴定为阴性的NI-0101无应答者百分数。

表2. RA血清中抗体对单个瓜氨酸肽及其组合的反应性预测NI-0101应答的灵敏度和特异性(基于来自图5的数据)。N/A：不适用。

如在图5A中显示的那样，血清和滑液中的ACPA表达水平彼此相关。如在图5B中显示的那样，ACPA⁺血清中的ACPA表达水平在应答者组中富含。如在图5C-5E中显示的那样，ACPA⁺血清中的ACPA表达水平在应答者组中富含。如在图5F-5H中显示的那样，所有血清样品(即ACPA⁺血清和ACPA^-血清)中的ACPA表达水平在应答者组中富含。

表2概述针对ACPA⁺血清中以及ACPA⁺和ACPA^-血清中的特定瓜氨酸化肽的抗体预测NI-0101应答的灵敏度和特异性。如在表2中显示的那样，citFbβ 563-583和citH2A 1-20的组合在来自RA患者的血清样品中为高度灵敏和高度特异性的。

其他实施方案

尽管本发明已连同其详述一起进行了描述，但是前述描述旨在说明而不是限制本发明的范围，本发明的范围由附加权利要求的范围定义。其他方面、优点和改良处于以下权利要求的范围内。

<110> NOVIMMUNE SA

Monnet, Emmanuel

Shang, Limin

<120> 用于鉴定用于诊断和治疗TLR4依赖性障碍的患者群体的方法和组合物

<130> NOVI-041001WO

<150> US 62/201,918

<151> 2015-08-06

<160> 141

<170> PatentIn 3.5版

<210> 1

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<220>

<221> 其他特征

<222> (18)..(18)

<223> X为瓜氨酸

<400> 1

Asn Thr Lys Glu Ser Ser Ser His His Pro Gly Ile Ala Glu Phe Pro

1 5 10 15

Ser Xaa Gly Lys

20

<210> 2

<211> 21

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<220>

<221> 其他特征

<222> (11)..(11)

<223> X为瓜氨酸

<400> 2

His His Pro Gly Ile Ala Glu Phe Pro Ser Xaa Gly Lys Ser Ser Ser

1 5 10 15

Tyr Ser Lys Gln Phe

20

<210> 3

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<220>

<221> 其他特征

<222> (4)..(4)

<223> X为瓜氨酸

<220>

<221> 其他特征

<222> (12)..(12)

<223> X为瓜氨酸

<220>

<221> 其他特征

<222> (18)..(18)

<223> X为瓜氨酸

<400> 3

Met Ser Gly Xaa Gly Lys Gln Gly Gly Lys Ala Xaa Ala Lys Ala Lys

1 5 10 15

Ser Xaa Ser Ser

20

<210> 4

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 4

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp His Leu His

1 5 10

<210> 5

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 5

Tyr Ala Ser His Ala Ile Ser

1 5

<210> 6

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 6

Gln Gln Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 7

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 7

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Gly Gly

20 25 30

Tyr Ser Trp His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile His Tyr Ser Gly Tyr Thr Asp Phe Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Thr Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Asp Pro Ser Asp Ala Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 8

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 8

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp His

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser His Ala Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 9

<211> 467

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 9

Met Gly Trp Ser Trp Ile Phe Leu Phe Leu Leu Ser Gly Thr Ala Gly

1 5 10 15

Val His Cys Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys

20 25 30

Pro Ser Asp Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile

35 40 45

Thr Gly Gly Tyr Ser Trp His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly

50 55 60

Leu Glu Trp Met Gly Tyr Ile His Tyr Ser Gly Tyr Thr Asp Phe Asn

65 70 75 80

Pro Ser Leu Lys Thr Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn

85 90 95

Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val

100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Arg Lys Asp Pro Ser Asp Ala Phe Pro Tyr Trp Gly

115 120 125

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser

130 135 140

Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala

145 150 155 160

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val

165 170 175

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala

180 185 190

Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val

195 200 205

Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His

210 215 220

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys

225 230 235 240

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly

245 250 255

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

260 265 270

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His

275 280 285

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

290 295 300

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr

305 310 315 320

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

325 330 335

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Ser Lys Ala Phe Pro Ala Pro Ile

340 345 350

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

355 360 365

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser

370 375 380

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

385 390 395 400

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

405 410 415

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val

420 425 430

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

435 440 445

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

450 455 460

Pro Gly Lys

465

<210> 10

<211> 233

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 10

Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Phe Leu Ser Val Thr Thr Gly

1 5 10 15

Val His Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val

20 25 30

Thr Pro Lys Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile

35 40 45

Ser Asp His Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys

50 55 60

Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser His Ala Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg

65 70 75 80

Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser

85 90 95

Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly His Ser

100 105 110

Phe Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr

115 120 125

Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu

130 135 140

Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro

145 150 155 160

Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly

165 170 175

Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr

180 185 190

Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His

195 200 205

Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val

210 215 220

Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

225 230

<210> 11

<211> 1404

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 11

atgggatgga gctggatctt tctcttcctc ctgtcaggaa ctgcaggtgt acattgccag 60

gtgcagcttc aggagtccgg cccaggactg gtgaagcctt cggacaccct gtccctcacc 120

tgcgctgtct ctggttactc catcaccggt ggttatagct ggcactggat acggcagccc 180

ccagggaagg gactggagtg gatggggtat atccactaca gtggttacac tgacttcaac 240

ccctccctca agactcgaat caccatatca cgtgacacgt ccaagaacca gttctccctg 300

aagctgagct ctgtgaccgc tgtggacact gcagtgtatt actgtgcgag aaaagatccg 360

tccgacgcct ttccttactg gggccaaggg actctggtca ctgtctcttc cgcctccacc 420

aagggcccat cggtcttccc cctggcaccc tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg 480

gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 540

ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac 600

tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacccagac ctacatctgc 660

aacgtgaatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga gagttgagcc caaatcttgt 720

gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaac tcctgggggg accgtcagtc 780

ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 840

tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 900

ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 960

cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaaa 1020

tgcaaggtct ccagtaaagc tttccctgcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1080

gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 1140

aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 1200

tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1260

gacggctcct tcttcctcta tagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1320

aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1380

ctctccctgt ctccgggtaa atag 1404

<210> 12

<211> 702

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 12

atggaatgga gctgggtctt tctcttcttc ctgtcagtaa ctacaggtgt ccactccgaa 60

attgtgttga cgcagtctcc agactttcag tctgtgactc caaaggaaaa agtcaccatc 120

acctgcaggg ccagtcagag tatcagcgac cacttacact ggtaccaaca gaaacctgat 180

cagtctccca agctcctcat caaatatgct tcccatgcca tttctggggt cccatcgagg 240

ttcagtggca gtgggtctgg gacagacttc actctcacca tcaatagcct agaggctgaa 300

gatgctgcaa cgtattactg tcagcagggt cacagttttc cgctcacttt cggcggaggg 360

accaaggtgg agatcaaacg tacggtggct gcaccatctg tcttcatctt cccgccatct 420

gatgagcagt tgaaatctgg aactgcctct gttgtgtgcc tgctgaataa cttctatccc 480

agagaggcca aagtacagtg gaaggtggat aacgccctcc aatcgggtaa ctcccaggag 540

agtgtcacag agcaggacag caaggacagc acctacagcc tcagcagcac cctgacgctg 600

agcaaagcag actacgagaa acacaaagtc tacgcctgcg aagtcaccca tcagggcctg 660

agctcgcccg tcacaaagag cttcaacagg ggagagtgtt ag 702

<210> 13

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 13

Ser Lys Ala Phe

1

<210> 14

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<220>

<221> 其他特征

<222> (2)..(2)

<223> X为F或Y

<220>

<221> 其他特征

<222> (5)..(5)

<223> X为R或G或W

<220>

<221> 其他特征

<222> (6)..(6)

<223> X为Y或F或G

<400> 14

Gly Xaa Pro Ile Xaa Xaa Gly Tyr Ser

1 5

<210> 15

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 15

Gly Tyr Ser Ile Thr Gly Gly Tyr Ser

1 5

<210> 16

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 16

Gly Phe Pro Ile Arg Tyr Gly Tyr Ser

1 5

<210> 17

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 17

Gly Tyr Pro Ile Arg Phe Gly Tyr Ser

1 5

<210> 18

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 18

Gly Tyr Pro Ile Arg His Gly Tyr Ser

1 5

<210> 19

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 19

Gly Phe Pro Ile Gly Gln Gly Tyr Ser

1 5

<210> 20

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 20

Gly Tyr Pro Ile Trp Gly Gly Tyr Ser

1 5

<210> 21

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 21

Gly Tyr Pro Ile Gly Gly Gly Tyr Ser

1 5

<210> 22

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 22

Ile His Tyr Ser Gly Tyr Thr

1 5

<210> 23

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<220>

<221> 其他特征

<222> (7)..(7)

<223> X为N或Q或D或E

<220>

<221> 其他特征

<222> (8)..(9)

<223> X为任何疏水性氨基酸

<400> 23

Ala Arg Lys Asp Ser Gly Xaa Xaa Xaa Pro Tyr

1 5 10

<210> 24

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 24

Ala Arg Lys Asp Ser Gly Asn Tyr Phe Pro Tyr

1 5 10

<210> 25

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 25

Ala Arg Lys Asp Ser Gly Arg Leu Leu Pro Tyr

1 5 10

<210> 26

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 26

Ala Arg Lys Asp Ser Gly Lys Trp Leu Pro Tyr

1 5 10

<210> 27

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 27

Ala Arg Lys Asp Ser Gly His Leu Met Pro Tyr

1 5 10

<210> 28

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 28

Ala Arg Lys Asp Ser Gly His Asn Tyr Pro Tyr

1 5 10

<210> 29

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 29

Ala Arg Lys Asp Ser Gly Lys Asn Phe Pro Tyr

1 5 10

<210> 30

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 30

Ala Arg Lys Asp Ser Gly Gln Leu Phe Pro Tyr

1 5 10

<210> 31

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 31

Ala Arg Lys Asp Ser Gly His Asn Leu Pro Tyr

1 5 10

<210> 32

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 32

Ala Arg Lys Asp Ser Gly Asp Tyr Phe Pro Tyr

1 5 10

<210> 33

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 33

Ala Arg Lys Asp Ser Gly Arg Tyr Trp Pro Tyr

1 5 10

<210> 34

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 34

Gln Ser Ile Ser Asp His

1 5

<210> 35

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 35

Tyr Ala Ser

1

<210> 36

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<220>

<221> 其他特征

<222> (4)..(4)

<223> X为Y或N

<220>

<221> 其他特征

<222> (5)..(5)

<223> X为D或E

<220>

<221> 其他特征

<222> (6)..(6)

<223> X为F或Y

<220>

<221> 其他特征

<222> (8)..(8)

<223> Xaa可为任何天然存在的氨基酸

<400> 36

Gln Gln Gly Xaa Xaa Xaa Pro Xaa Thr

1 5

<210> 37

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 37

Gln Gln Gly Asn Asp Phe Pro Val Thr

1 5

<210> 38

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 38

Gln Gln Gly Tyr Asp Glu Pro Phe Thr

1 5

<210> 39

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 39

Gln Gln Gly Tyr Asp Phe Pro Phe Thr

1 5

<210> 40

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 40

Gln Gln Gly Tyr Asp Tyr Pro Phe Thr

1 5

<210> 41

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 41

Gln Gln Gly Tyr Glu Phe Pro Phe Thr

1 5

<210> 42

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<220>

<221> 其他特征

<222> (30)..(30)

<223> X为T或S

<220>

<221> 其他特征

<222> (49)..(49)

<223> X为I或M

<220>

<221> 其他特征

<222> (68)..(68)

<223> X为V或I

<220>

<221> 其他特征

<222> (70)..(70)

<223> X为M或I

<400> 42

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Xaa Gly Gly

20 25 30

Tyr Ser Trp His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Xaa Gly Tyr Ile His Tyr Ser Gly Tyr Thr Asp Phe Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Thr Arg Xaa Thr Xaa Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Asp Pro Ser Asp Gly Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 43

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<220>

<221> 其他特征

<222> (24)..(24)

<223> X为A或V

<220>

<221> 其他特征

<222> (49)..(49)

<223> X为V或M

<220>

<221> 其他特征

<222> (79)..(79)

<223> X为L或F

<400> 43

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Xaa Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Gly Gly

20 25 30

Tyr Ser Trp His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Xaa Ser Tyr Ile His Tyr Ser Gly Tyr Thr Asp Phe Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Thr Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Xaa Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Asp Pro Ser Asp Gly Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 44

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<220>

<221> 其他特征

<222> (49)..(49)

<223> X为K或Y

<400> 44

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp His

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Xaa Tyr Ala Ser His Ala Ile Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 45

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 45

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp His

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser His Ala Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 46

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<220>

<221> 其他特征

<222> (48)..(48)

<223> X为M或I

<220>

<221> 其他特征

<222> (74)..(74)

<223> X为K或T

<220>

<221> 其他特征

<222> (81)..(81)

<223> X为M或L

<400> 46

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Ser

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Xaa

35 40 45

Gly Trp Thr Asp Pro Glu Asn Val Asn Ser Ile Tyr Asp Pro Arg Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Xaa Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Xaa Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Tyr Asn Gly Val Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 47

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 47

Asp Ser Tyr Ile His

1 5

<210> 48

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 48

Trp Thr Asp Pro Glu Asn Val Asn Ser Ile Tyr Asp Pro Arg Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 49

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 49

Gly Tyr Asn Gly Val Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr

1 5 10

<210> 50

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<220>

<221> 其他特征

<222> (70)..(70)

<223> X为F或Y

<400> 50

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ile Tyr Met

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr

35 40 45

Arg Thr Tyr Asn Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Asp Xaa Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu

65 70 75 80

Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Trp Ser Ser Phe Pro Tyr Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 51

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 51

Ser Ala Ser Ser Ser Val Ile Tyr Met His

1 5 10

<210> 52

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 52

Arg Thr Tyr Asn Leu Ala Ser

1 5

<210> 53

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 53

His Gln Trp Ser Ser Phe Pro Tyr Thr

1 5

<210> 54

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<220>

<221> 其他特征

<222> (30)..(30)

<223> X为S或T

<220>

<221> 其他特征

<222> (71)..(71)

<223> X为I或F

<220>

<221> 其他特征

<222> (98)..(98)

<223> X为I或A

<400> 54

Gln Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln

1 5 10 15

Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Xaa Thr Tyr

20 25 30

Asn Ile Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu

35 40 45

Trp Leu Ala His Ile Trp Trp Asn Asp Asn Ile Tyr Tyr Asn Thr Val

50 55 60

Leu Lys Ser Arg Leu Thr Xaa Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val

65 70 75 80

Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr

85 90 95

Cys Xaa Arg Met Ala Glu Gly Arg Tyr Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 55

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 55

Thr Tyr Asn Ile Gly Val Gly

1 5

<210> 56

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 56

His Ile Trp Trp Asn Asp Asn Ile Tyr Tyr Asn Thr Val Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 57

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 57

Met Ala Glu Gly Arg Tyr Asp Ala Met Asp Tyr

1 5 10

<210> 58

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<220>

<221> 其他特征

<222> (24)..(24)

<223> X为F或A

<220>

<221> 其他特征

<222> (50)..(50)

<223> X为V或L

<220>

<221> 其他特征

<222> (71)..(71)

<223> X为I或F

<220>

<221> 其他特征

<222> (73)..(73)

<223> X为K或R

<220>

<221> 其他特征

<222> (80)..(80)

<223> X为L或V

<220>

<221> 其他特征

<222> (98)..(98)

<223> X为I或A

<400> 58

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Xaa Ser Gly Phe Ser Leu Thr Thr Tyr

20 25 30

Asn Ile Gly Val Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu

35 40 45

Trp Xaa Ser His Ile Trp Trp Asn Asp Asn Ile Tyr Tyr Asn Thr Val

50 55 60

Leu Lys Ser Arg Leu Thr Xaa Ser Xaa Asp Asn Ser Lys Asn Thr Xaa

65 70 75 80

Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

85 90 95

Cys Xaa Arg Met Ala Glu Gly Arg Tyr Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 59

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 59

Thr Tyr Asn Ile Gly Val Gly

1 5

<210> 60

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 60

His Ile Trp Trp Asn Asp Asn Ile Tyr Tyr Asn Thr Val Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 61

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 61

Met Ala Glu Gly Arg Tyr Asp Ala Met Asp Tyr

1 5 10

<210> 62

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<220>

<221> 其他特征

<222> (71)..(71)

<223> X为F或Y

<220>

<221> 其他特征

<222> (87)..(87)

<223> X为Y或F

<400> 62

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Thr Asn Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Tyr Thr Ser Lys Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Xaa Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Xaa Cys Gln Gln Gly Asn Thr Phe Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 63

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 63

Arg Ala Ser Gln Asp Ile Thr Asn Tyr Leu Asn

1 5 10

<210> 64

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 64

Tyr Thr Ser Lys Leu His Ser

1 5

<210> 65

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 65

Gln Gln Gly Asn Thr Phe Pro Trp Thr

1 5

<210> 66

<211> 354

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 66

caggtgcagc ttcaggagtc cggcccagga ctggtgaagc cttcggacac cctgtccctc 60

acctgcgctg tctctggtta ctccatcacc ggtggttata gctggcactg gatacggcag 120

cccccaggga agggactgga gtggatgggg tatatccact acagtggtta cactgacttc 180

aacccctccc tcaagactcg aatcaccata tcacgtgaca cgtccaagaa ccagttctcc 240

ctgaagctga gctctgtgac cgctgtggac actgcagtgt attactgtgc gagaaaagat 300

ccgtccgacg cctttcctta ctggggccaa gggactctgg tcactgtctc ttcc 354

<210> 67

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 67

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Gly Gly

20 25 30

Tyr Ser Trp His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile His Tyr Ser Gly Tyr Thr Asp Phe Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Thr Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Asp Pro Ser Glu Gly Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 68

<211> 354

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 68

caggtgcagc ttcaggagtc cggcccagga ctggtgaagc cttcggacac cctgtccctc 60

acctgcgctg tctctggtta ctccatcacc ggtggttata gctggcactg gatacggcag 120

cccccaggga agggactgga gtggatgggg tatatccact acagtggtta cactgacttc 180

aacccctccc tcaagactcg aatcaccata tcacgtgaca cgtccaagaa ccagttctcc 240

ctgaagctga gctctgtgac cgctgtggac actgcagtgt attactgtgc gagaaaagat 300

ccgtccgagg gatttcctta ctggggccaa gggactctgg tcactgtctc ttcc 354

<210> 69

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 69

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp His

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser His Ala Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Ser His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 70

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 70

gaaattgtgt tgacgcagtc tccagacttt cagtctgtga ctccaaagga aaaagtcacc 60

atcacctgca gggccagtca gagtatcagc gaccacttac actggtacca acagaaacct 120

gatcagtctc ccaagctcct catcaaatat gcttcccatg ccatttctgg ggtcccatcg 180

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcaatag cctagaggct 240

gaagatgctg caacgtatta ctgtcagaat agtcacagtt ttccgctcac tttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa a 321

<210> 71

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 71

gaaattgtgt tgacgcagtc tccagacttt cagtctgtga ctccaaagga aaaagtcacc 60

atcacctgca gggccagtca gagtatcagc gaccacttac actggtacca acagaaacct 120

gatcagtctc ccaagctcct catcaaatat gcttcccatg ccatttctgg ggtcccatcg 180

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcaatag cctagaggct 240

gaagatgctg caacgtatta ctgtcagcag ggtcacagtt ttccgctcac tttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa a 321

<210> 72

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 72

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp His

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser His Ala Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Ser Ser Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 73

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 73

gaaattgtgt tgacgcagtc tccagacttt cagtctgtga ctccaaagga aaaagtcacc 60

atcacctgca gggccagtca gagtatcagc gaccacttac actggtacca acagaaacct 120

gatcagtctc ccaagctcct catcaaatat gcttcccatg ccatttctgg ggtcccatcg 180

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcaatag cctagaggct 240

gaagatgctg caacgtatta ctgtcagaat agtagtagtt ttccgctcac tttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa a 321

<210> 74

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 74

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp His

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser His Ala Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 75

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 75

gaaattgtgt tgacgcagtc tccagacttt cagtctgtga ctccaaagga aaaagtcacc 60

atcacctgca gggccagtca gagtatcagc gaccacttac actggtacca acagaaacct 120

gatcagtctc ccaagctcct catcaaatat gcttcccatg ccatttctgg ggtcccatcg 180

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gggaccaagg tggagatcaa a 321

<210> 76

<211> 839

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 76

Met Met Ser Ala Ser Arg Leu Ala Gly Thr Leu Ile Pro Ala Met Ala

1 5 10 15

Phe Leu Ser Cys Val Arg Pro Glu Ser Trp Glu Pro Cys Val Glu Val

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35 40 45

Pro Asp Asn Leu Pro Phe Ser Thr Lys Asn Leu Asp Leu Ser Phe Asn

50 55 60

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65 70 75 80

Gln Val Leu Asp Leu Ser Arg Cys Glu Ile Gln Thr Ile Glu Asp Gly

85 90 95

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100 105 110

Pro Ile Gln Ser Leu Ala Leu Gly Ala Phe Ser Gly Leu Ser Ser Leu

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420 425 430

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835

<210> 77

<211> 826

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 77

Met Thr Ser Ala Leu Arg Leu Ala Gly Thr Leu Ile Pro Ala Met Ala

1 5 10 15

Phe Leu Ser Cys Val Arg Pro Glu Ser Trp Glu Pro Cys Val Glu Val

20 25 30

Val Pro Asn Ile Thr Tyr Gln Cys Met Glu Leu Lys Phe Tyr Lys Ile

35 40 45

Pro Asp Asn Ile Pro Phe Ser Thr Lys Asn Leu Asp Leu Ser Phe Asn

50 55 60

Pro Leu Arg His Leu Gly Ser Tyr Ser Phe Leu Arg Phe Pro Glu Leu

65 70 75 80

Gln Val Leu Asp Leu Ser Arg Cys Glu Ile Gln Thr Ile Glu Asp Gly

85 90 95

Ala Tyr Gln Ser Leu Ser His Leu Ser Thr Leu Ile Leu Thr Gly Asn

100 105 110

Pro Ile Gln Ser Leu Ala Leu Gly Ala Phe Ser Gly Leu Ser Ser Leu

115 120 125

Gln Lys Leu Val Ala Val Glu Thr Asn Leu Ala Ser Leu Glu Asn Phe

130 135 140

Pro Ile Gly His Leu Lys Thr Leu Lys Glu Leu Asn Val Ala His Asn

145 150 155 160

Leu Ile Gln Ser Phe Lys Leu Pro Glu Tyr Phe Ser Asn Leu Thr Asn

165 170 175

Leu Glu His Leu Asp Leu Ser Ser Asn Lys Ile Gln Asn Ile Tyr Cys

180 185 190

Lys Asp Leu Gln Val Leu His Gln Met Pro Leu Ser Asn Leu Ser Leu

195 200 205

Asp Leu Ser Leu Asn Pro Ile Asn Phe Ile Gln Pro Gly Ala Phe Lys

210 215 220

Glu Ile Arg Leu His Lys Leu Thr Leu Arg Ser Asn Phe Asp Asp Leu

225 230 235 240

Asn Val Met Lys Thr Cys Ile Gln Gly Leu Ala Gly Leu Glu Val His

245 250 255

Arg Leu Val Leu Gly Glu Phe Arg Asn Glu Arg Asn Leu Glu Glu Phe

260 265 270

Asp Lys Ser Ser Leu Glu Gly Leu Cys Asn Leu Thr Ile Glu Glu Phe

275 280 285

Arg Leu Thr Tyr Leu Asp Cys Tyr Leu Asp Asn Ile Ile Asp Leu Phe

290 295 300

Asn Cys Leu Ala Asn Val Ser Ser Phe Ser Leu Val Ser Val Asn Ile

305 310 315 320

Lys Arg Val Glu Asp Phe Ser Tyr Asn Phe Arg Trp Gln His Leu Glu

325 330 335

Leu Val Asn Cys Lys Phe Glu Gln Phe Pro Thr Leu Glu Leu Lys Ser

340 345 350

Leu Lys Arg Leu Thr Phe Thr Ala Asn Lys Gly Gly Asn Ala Phe Ser

355 360 365

Glu Val Asp Leu Pro Ser Leu Glu Phe Leu Asp Leu Ser Arg Asn Gly

370 375 380

Leu Ser Phe Lys Gly Cys Cys Ser Gln Ser Asp Phe Gly Thr Thr Ser

385 390 395 400

Leu Lys Tyr Leu Asp Leu Ser Phe Asn Asp Val Ile Thr Met Ser Ser

405 410 415

Asn Phe Leu Gly Leu Glu Gln Leu Glu His Leu Asp Phe Gln His Ser

420 425 430

Asn Leu Lys Gln Met Ser Gln Phe Ser Val Phe Leu Ser Leu Arg Asn

435 440 445

Leu Ile Tyr Leu Asp Ile Ser His Thr His Thr Arg Val Ala Phe Asn

450 455 460

Gly Ile Phe Asp Gly Leu Leu Ser Leu Lys Val Leu Lys Met Ala Gly

465 470 475 480

Asn Ser Phe Gln Glu Asn Phe Leu Pro Asp Ile Phe Thr Asp Leu Lys

485 490 495

Asn Leu Thr Phe Leu Asp Leu Ser Gln Cys Gln Leu Glu Gln Leu Ser

500 505 510

Pro Thr Ala Phe Asp Thr Leu Asn Lys Leu Gln Val Leu Asn Met Ser

515 520 525

His Asn Asn Phe Phe Ser Leu Asp Thr Phe Pro Tyr Lys Cys Leu Pro

530 535 540

Ser Leu Gln Val Leu Asp Tyr Ser Leu Asn His Ile Met Thr Ser Asn

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Asn Gln Glu Leu Gln His Phe Pro Ser Ser Leu Ala Phe Leu Asn Leu

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580 585 590

Trp Ile Lys Asp Gln Arg Gln Leu Leu Val Glu Ala Glu Arg Met Glu

595 600 605

Cys Ala Thr Pro Ser Asp Lys Gln Gly Met Pro Val Leu Ser Leu Asn

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Ile Thr Cys Gln Met Asn Lys Thr Ile Ile Gly Val Ser Val Phe Ser

625 630 635 640

Val Leu Val Val Ser Val Val Ala Val Leu Val Tyr Lys Phe Tyr Phe

645 650 655

His Leu Met Leu Leu Ala Gly Cys Ile Lys Tyr Gly Arg Gly Glu Asn

660 665 670

Ile Tyr Asp Ala Phe Val Ile Tyr Ser Ser Gln Asp Glu Asp Trp Val

675 680 685

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Leu Cys Leu His Tyr Arg Asp Phe Ile Pro Gly Val Ala Ile Ala Ala

705 710 715 720

Asn Ile Ile His Glu Gly Phe His Lys Ser Arg Lys Val Ile Val Val

725 730 735

Val Ser Gln His Phe Ile Gln Ser Arg Trp Cys Ile Phe Glu Tyr Glu

740 745 750

Ile Ala Gln Thr Trp Gln Phe Leu Ser Ser Arg Ala Gly Ile Ile Phe

755 760 765

Ile Val Leu Gln Lys Val Glu Lys Thr Leu Leu Arg Gln Gln Val Glu

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Leu Tyr Arg Leu Leu Ser Arg Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Glu Asp Ser

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Val Leu Gly Gln His Ile Phe Trp Arg Arg Leu Arg Lys Ala Leu Leu

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Asp Gly Lys Ser Trp Asn Pro Glu Glu Gln

820 825

<210> 78

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 78

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp

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Lys Thr Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

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100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 79

<211> 354

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 79

caggtgcagc ttcaggagtc cggcccagga ctggtgaagc cttcggacac cctgtccctc 60

acctgcgctg tctctggtta ctccatcacc ggtggttata gctggcactg gatacggcag 120

cccccaggga agggactgga gtggatgggg tatatccact acagtggtta cactgacttc 180

aacccctccc tcaagactcg aatcaccata tcacgtgaca cgtccaagaa ccagttctcc 240

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tcgggcaact acttccctta ctggggccaa gggactctgg tcactgtctc ttcc 354

<210> 80

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 80

gaaattgtgt tgacgcagtc tccagacttt cagtctgtga ctccaaagga aaaagtcacc 60

atcacctgca gggccagtca gagtatcagc gaccacttac actggtacca acagaaacct 120

gatcagtctc ccaagctcct catcaaatat gcttcccatg ccatttctgg ggtcccatcg 180

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcaatag cctagaggct 240

gaagatgctg caacgtatta ctgtcagcag ggtcacagtt ttccgctcac tttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa a 321

<210> 81

<211> 354

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 81

caggtgcagc ttcaggagtc cggcccagga ctggtgaagc cttcggacac cctgtccctc 60

acctgcgctg tctctggtta ctccatcacc ggtggttata gctggcactg gatacggcag 120

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<210> 82

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 82

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Gly Gly

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Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

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100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 83

<211> 354

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 83

caggtgcagc ttcaggagtc cggcccagga ctggtgaagc cttcggacac cctgtccctc 60

acctgcgctg tctctggtta ctccatcacc ggtggttata gctggcactg gatacggcag 120

cccccaggga agggactgga gtggatgggg tatatccact acagtggtta cactgacttc 180

aacccctccc tcaagactcg aatcaccata tcacgtgaca cgtccaagaa ccagttctcc 240

ctgaagctga gctctgtgac cgctgtggac actgcagtgt attactgtgc gagaaaagat 300

agcggcaagt ggttgcctta ctggggccaa gggactctgg tcactgtctc ttcc 354

<210> 84

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 84

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Gly Gly

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50 55 60

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65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Asp Ser Gly Lys Trp Leu Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 85

<211> 354

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 85

caggtgcagc ttcaggagtc cggcccagga ctggtgaagc cttcggacac cctgtccctc 60

acctgcgctg tctctggtta ctccatcacc ggtggttata gctggcactg gatacggcag 120

cccccaggga agggactgga gtggatgggg tatatccact acagtggtta cactgacttc 180

aacccctccc tcaagactcg aatcaccata tcacgtgaca cgtccaagaa ccagttctcc 240

ctgaagctga gctctgtgac cgctgtggac actgcagtgt attactgtgc gagaaaagat 300

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<210> 86

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 86

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Gly Gly

20 25 30

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65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Asp Ser Gly His Leu Met Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 87

<211> 354

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 87

caggtgcagc ttcaggagtc cggcccagga ctggtgaagc cttcggacac cctgtccctc 60

acctgcgctg tctctggtta ctccatcacc ggtggttata gctggcactg gatacggcag 120

cccccaggga agggactgga gtggatgggg tatatccact acagtggtta cactgacttc 180

aacccctccc tcaagactcg aatcaccata tcacgtgaca cgtccaagaa ccagttctcc 240

ctgaagctga gctctgtgac cgctgtggac actgcagtgt attactgtgc gagaaaagat 300

tccgggcaca actaccctta ctggggccaa gggactctgg tcactgtctc ttcc 354

<210> 88

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 88

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Gly Gly

20 25 30

Tyr Ser Trp His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile His Tyr Ser Gly Tyr Thr Asp Phe Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Thr Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Asp Ser Gly His Asn Tyr Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 89

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<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 89

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 90

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100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

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<211> 354

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 91

caggtgcagc ttcaggagtc cggcccagga ctggtgaagc cttcggacac cctgtccctc 60

acctgcgctg tctctggtta ctccatcacc ggtggttata gctggcactg gatacggcag 120

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aacccctccc tcaagactcg aatcaccata tcacgtgaca cgtccaagaa ccagttctcc 240

ctgaagctga gctctgtgac cgctgtggac actgcagtgt attactgtgc gagaaaagat 300

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 92

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp

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115

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<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 93

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 94

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115

<210> 95

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<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 95

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<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 96

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100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 97

<211> 354

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 97

caggtgcagc ttcaggagtc cggcccagga ctggtgaagc cttcggacac cctgtccctc 60

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<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 98

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp

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115

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<211> 354

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 99

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cccccaggga agggactgga gtggatgggg tatatccact acagtggtta cactgacttc 180

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 100

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85 90 95

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100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 101

<211> 354

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 101

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 103

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<220>

<223> 化学合成

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<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

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115

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<211> 354

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

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cccccaggga agggactgga gtggatgggg tatatccact acagtggtta cactgacttc 180

aacccctccc tcaagactcg aatcaccata tcacgtgaca cgtccaagaa ccagttctcc 240

ctgaagctga gctctgtgac cgctgtggac actgcagtgt attactgtgc gagaaaagat 300

tcgggcaact acttccctta ctggggccaa gggactctgg tcactgtctc ttcc 354

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<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 106

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Leu Val Thr Val Ser Ser

115

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<223> 化学合成

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acc 363

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<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

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Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 109

<211> 354

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 109

caggtgcagc ttcaggagtc cggcccagga ctggtgaagc cttcggacac cctgtccctc 60

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ctgaagctga gctctgtgac cgctgtggac actgcagtgt attactgtgc gagaaaagat 300

tcgggcaact acttccctta ctggggccaa gggactctgg tcactgtctc ttcc 354

<210> 110

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 110

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp

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Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 111

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 111

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<210> 112

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 112

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp His

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser His Ala Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asn Asp Phe Pro Val

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Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 113

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 113

gaaattgtgt tgacgcagtc tccagacttt cagtctgtga ctccaaagga aaaagtcacc 60

atcacctgca gggccagtca gagtatcagc gaccacttac actggtacca acagaaacct 120

gatcagtctc ccaagctcct catcaaatat gcttcccatg ccatttctgg ggtcccatcg 180

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcaatag cctagaggct 240

gaagatgctg caacgtatta ctgtcagcag gggtacgacg agccgttcac tttcggcgga 300

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<210> 114

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 114

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp His

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Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

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Lys Tyr Ala Ser His Ala Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Asp Glu Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 115

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 115

gaaattgtgt tgacgcagtc tccagacttt cagtctgtga ctccaaagga aaaagtcacc 60

atcacctgca gggccagtca gagtatcagc gaccacttac actggtacca acagaaacct 120

gatcagtctc ccaagctcct catcaaatat gcttcccatg ccatttctgg ggtcccatcg 180

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcaatag cctagaggct 240

gaagatgctg caacgtatta ctgtcagcag ggctacgact tcccgttgac tttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa a 321

<210> 116

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 116

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp His

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Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

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Lys Tyr Ala Ser His Ala Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

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65 70 75 80

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Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 117

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 117

gaaattgtgt tgacgcagtc tccagacttt cagtctgtga ctccaaagga aaaagtcacc 60

atcacctgca gggccagtca gagtatcagc gaccacttac actggtacca acagaaacct 120

gatcagtctc ccaagctcct catcaaatat gcttcccatg ccatttctgg ggtcccatcg 180

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcaatag cctagaggct 240

gaagatgctg caacgtatta ctgtcagcag ggctacgact acccgctcac tttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa a 321

<210> 118

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 118

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp His

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser His Ala Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Asp Tyr Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 119

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 119

gaaattgtgt tgacgcagtc tccagacttt cagtctgtga ctccaaagga aaaagtcacc 60

atcacctgca gggccagtca gagtatcagc gaccacttac actggtacca acagaaacct 120

gatcagtctc ccaagctcct catcaaatat gcttcccatg ccatttctgg ggtcccatcg 180

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcaatag cctagaggct 240

gaagatgctg caacgtatta ctgtcagcag ggctacgagt tcccgttgac tttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa a 321

<210> 120

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 120

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp His

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser His Ala Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Glu Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 121

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 121

gaaattgtgt tgacgcagtc tccagacttt cagtctgtga ctccaaagga aaaagtcacc 60

atcacctgca gggccagtca gagtatcagc gaccacttac actggtacca acagaaacct 120

gatcagtctc ccaagctcct catcaaatat gcttcccatg ccatttctgg ggtcccatcg 180

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcaatag cctagaggct 240

gaagatgctg caacgtatta ctgtcagcag gggaacgact tcccggtgac tttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa a 321

<210> 122

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 122

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp His

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser His Ala Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asn Asp Phe Pro Val

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 123

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 123

gaaattgtgt tgacgcagtc tccagacttt cagtctgtga ctccaaagga aaaagtcacc 60

atcacctgca gggccagtca gagtatcagc gaccacttac actggtacca acagaaacct 120

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<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 124

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

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Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp His

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Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser His Ala Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

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Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Asp Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 125

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 125

gaaattgtgt tgacgcagtc tccagacttt cagtctgtga ctccaaagga aaaagtcacc 60

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<210> 126

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 126

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp His

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser His Ala Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Asp Tyr Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 127

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 127

gaaattgtgt tgacgcagtc tccagacttt cagtctgtga ctccaaagga aaaagtcacc 60

atcacctgca gggccagtca gagtatcagc gaccacttac actggtacca acagaaacct 120

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<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 128

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp His

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser His Ala Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Glu Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 129

<211> 1398

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 129

atggaatgga gctgggtctt tctcttcttc ctgtcagtaa ctacaggtgt ccaccaggtg 60

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<210> 130

<211> 447

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 130

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp

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Tyr Ser Trp His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

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Met Gly Tyr Ile His Tyr Ser Gly Tyr Thr Asp Phe Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Thr Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Asp Ser Gly Asn Tyr Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr

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Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

245 250 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

260 265 270

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275 280 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

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Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

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Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

325 330 335

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

340 345 350

Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

355 360 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

370 375 380

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Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

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Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

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<210> 131

<211> 705

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 131

atgagtgtgc ccactcaggt cctggggttg ctgctgctgt ggcttacaga tgccagatgt 60

gaaattgtgt tgacgcagtc tccagacttt cagtctgtga ctccaaagga aaaagtcacc 120

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gatcagtctc ccaagctcct catcaaatat gcttcccatg ccatttctgg ggtcccatcg 240

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gaagatgctg caacgtatta ctgtcagcag ggtcacagtt ttccgctcac tttcggcgga 360

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<210> 132

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 132

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

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Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

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Lys Tyr Ala Ser His Ala Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

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Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly His Ser Phe Pro Leu

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Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

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Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 133

<211> 1398

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 133

atggaatgga gctgggtctt tctcttcttc ctgtcagtaa ctacaggtgt ccaccaggtg 60

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tccctcaaga ctcgaatcac catatcacgt gacacgtcca agaaccagtt ctccctgaag 300

ctgagctctg tgaccgctgt ggacactgca gtgtattact gtgcgagaaa agattcgggc 360

aactacttcc cttactgggg ccaagggact ctggtcactg tctcttccgc ctccaccaag 420

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gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 600

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gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagagag ttgagcccaa atcttgtgac 720

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ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 840

gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 900

gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt 960

gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 1020

aaggtctcca acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1080

cagccccgag aaccacaggt gtataccctg cccccatctc gggaggagat gaccaagaac 1140

caggtcagcc tgacttgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1200

gagagcaacg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1260

ggctccttct tcctctatag caagctcacc gtggacaagt ccaggtggca gcaggggaac 1320

gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1380

tccctgtctc cgggttaa 1398

<210> 134

<211> 446

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 134

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Phe Pro Ile Arg Tyr Gly

20 25 30

Tyr Ser Trp His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile His Tyr Ser Gly Tyr Thr Asp Phe Asn Pro Leu Lys

50 55 60

Thr Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Lys Asp Ser Gly Asn Tyr Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu

115 120 125

Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys

130 135 140

Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser

145 150 155 160

Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser

165 170 175

Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser

180 185 190

Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn

195 200 205

Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His

210 215 220

Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val

225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu

260 265 270

Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

290 295 300

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

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Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile

325 330 335

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

340 345 350

Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

370 375 380

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

405 410 415

Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

435 440 445

<210> 135

<211> 705

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 135

atgagtgtgc ccactcaggt cctggggttg ctgctgctgt ggcttacaga tgccagatgt 60

gaaattgtgt tgacgcagtc tccagacttt cagtctgtga ctccaaagga aaaagtcacc 120

atcacctgca gggccagtca gagtatcagc gaccacttac actggtacca acagaaacct 180

gatcagtctc ccaagctcct catcaaatat gcttcccatg ccatttctgg ggtcccatcg 240

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcaatag cctagaggct 300

gaagatgctg caacgtatta ctgtcagcag ggtcacagtt ttccgctcac tttcggcgga 360

gggaccaagg tggagatcaa acgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 420

tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 480

cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 540

gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 600

ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 660

ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gttaa 705

<210> 136

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 136

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp His

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Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser His Ala Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 137

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 137

Lys Asp Pro Ser Asp Gly Phe Pro Tyr

1 5

<210> 138

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 138

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 139

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 139

Gly Gly Tyr Ser Trp His

1 5

<210> 140

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 140

Tyr Ile His Tyr Ser Gly Tyr Thr Asp Phe Asn Pro Ser Leu Lys Thr

1 5 10 15

<210> 141

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成

<400> 141

Lys Asp Pro Ser Asp Ala Phe Pro Tyr

1 5

Claims

1. 一种用于鉴定适合于用Toll样受体4(TLR4)拮抗剂的疗法的患者并缓解TLR4相关障碍的症状的方法，所述方法包括在来自受试者的至少第一生物样品中检测抗瓜氨酸化蛋白抗体(ACPA)和/或至少一种针对包含选自SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2和SEQ ID NO: 3的氨基酸序列的特定瓜氨酸化蛋白和/或肽的抗体的表达水平，比较检测到的ACPA和/或至少一种针对特定瓜氨酸化蛋白和/或肽的抗体水平与对照表达水平，并且当检测到的水平升高时，以足以缓解TLR4相关障碍的症状的量给予所述受试者抗TLR4拮抗剂。

2. 权利要求1的方法，其中所述方法包括检测ACPA的表达水平和/或针对SEQ ID NO:1的肽的抗体、针对SEQ ID NO: 2的肽的抗体、针对SEQ ID NO: 3的肽的抗体及其任何组合的表达水平。

3.权利要求1的方法，其中所述生物样品为或源自血液。

4.权利要求1的方法，其中所述生物样品为血清。

5.权利要求1的方法，其中所述生物样品为或源自滑液。

6. 权利要求1的方法，其中所述方法还包括在来自相同受试者的第二生物样品中检测ACPA和/或至少一种针对包含选自SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2和SEQ ID NO: 3的氨基酸序列的特定瓜氨酸化肽的抗体的表达水平。

7.权利要求6的方法，其中所述第一生物样品为或源自血液。

8.权利要求7的方法，其中所述第一生物样品为血清。

9.权利要求6的方法，其中所述第二生物样品为或源自滑液。

10.权利要求1的方法，其中所述抗TLR4拮抗剂为抗TLR4抗体或其免疫活性片段。

11. 权利要求10的方法，其中所述抗TLR4抗体或其免疫活性片段包含：含有GGYSWH(SEQ ID NO: 139)的氨基酸序列的可变重链互补决定区1(VH CDR1)、含有YIHYSGYTDFNPSLKT(SEQ ID NO: 140)的氨基酸序列的VH CDR2区、含有KDPSDAFPY(SEQ IDNO: 141)的氨基酸序列的VH CDR3区、含有RASQSISDHLH(SEQ ID NO: 4)的氨基酸序列的可变轻链互补决定区1(VL CDR1)区、含有YASHAIS(SEQ ID NO: 5)的氨基酸序列的VL CDR2区和含有QQGHSFPLT(SEQ ID NO: 6)的氨基酸序列的VL CDR3区。

12. 权利要求10的方法，其中所述抗TLR4抗体或其免疫活性片段包含重链可变氨基酸序列QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGYSITGGYSWHWIRQPPGKGLEWMGYIHYSGYTDFNPSLKTRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDPSDAFPYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO: 7)和氢链可变氨基酸序列EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSISDHLHWYQQKPDQSPKLLIKYASHAISGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQQGHSFPLTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO: 8)。

13. 权利要求10的方法，其中所述抗TLR4抗体或其免疫活性片段包含重链氨基酸序列MGWSWIFLFLLSGTAGVHCQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGYSITGGYSWHWIRQPPGKGLEWMGYIHYSGYTDFNPSLKTRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDPSDAFPYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSSKAFPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO: 9)和轻链氨基酸序列MEWSWVFLFFLSVTTGVHSEIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSISDHLHWYQQKPDQSPKLLIKYASHAISGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQQGHSFPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO: 10)。

14.权利要求1的方法，其中所述受试者为人。

15.权利要求1的方法，其中所述障碍为自身免疫性或炎性障碍。

16.权利要求1的方法，其中所述障碍与TLR4信号传导异常、TLR4配体表达或活性升高、促炎性细胞因子产生异常及其组合相关。

17.权利要求1的方法，其中所述障碍为类风湿性关节炎(RA)。

18. 一种用于在患者中诊断TLR4相关障碍的方法，所述方法包括在来自受试者的至少第一生物样品中检测抗瓜氨酸化蛋白抗体(ACPA)和/或至少一种针对包含选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO: 2和SEQ ID NO: 3的氨基酸序列的特定瓜氨酸化蛋白和/或肽的抗体的表达水平，比较检测到的ACPA和/或至少一种针对特定瓜氨酸化蛋白和/或肽的抗体水平与对照表达水平，并且当检测到的水平升高时，诊断所述受试者患有TLR4相关障碍。

19. 权利要求18的方法，其中所述方法包括检测ACPA的表达水平和/或针对SEQ IDNO: 1的肽的抗体、针对SEQ ID NO: 2的肽的抗体、针对SEQ ID NO: 3的肽的抗体及其任何组合的表达水平。

20.权利要求18的方法，其中所述生物样品为或源自血液。

21.权利要求18的方法，其中所述生物样品为血清。

22.权利要求18的方法，其中所述生物样品为或源自滑液。

23. 权利要求18的方法，其中所述方法还包括在来自相同受试者的第二生物样品中检测ACPA和/或至少一种针对包含选自SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2和SEQ ID NO: 3的氨基酸序列的特定瓜氨酸化肽的抗体的表达水平。

24.权利要求23的方法，其中所述第一生物样品为或源自血液。

25.权利要求24的方法，其中所述第一生物样品为血清。

26.权利要求23的方法，其中所述第二生物样品为或源自滑液。

27.权利要求18的方法，其中所述受试者为人。

28.权利要求18的方法，其中所述TLR4相关障碍为自身免疫性或炎性障碍。

29.权利要求18的方法，其中所述TLR4相关障碍与TLR4信号传导异常、TLR4配体表达或活性升高、促炎性细胞因子产生异常及其组合相关。

30.权利要求18的方法，其中所述TLR4相关障碍为类风湿性关节炎(RA)。