CN109414502A - 治疗炎症性肠病的方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了鉴定对维多珠单抗治疗没有充分响应的患者和使用维多珠单抗以个性化治疗方法来治疗这些患者的方法。

Description

治疗炎症性肠病的方法

相关申请

本申请要求2016年6月12日提交的美国临时申请第62/349,026号的权益。上述申请的全部内容以引用的方式并入文中。

发明背景

炎症性肠病(IBD)，例如溃疡性结肠炎和克罗恩病，可以是一种涉及胃肠道炎症的使人衰弱和进行性疾病。IBD治疗包括抗炎药物(如皮质类固醇和柳氮磺胺吡啶)、免疫抑制药物(如6-巯基嘌呤、环孢菌素和硫唑嘌呤)和手术(如结肠切除术)。Podolsky,NewEngl.J.Med.,325:928-937(1991)和Podolsky,New Engl.J.Med.,325:1008-1016(1991)。随着疾病的进展，治疗进展到使患者暴露于进行性副作用风险和生活质量下降的方案。

整联蛋白受体对于调节淋巴细胞再循环和募集到炎症部位是非常重要的(Carlos,T.M.和Harlan,J.M.,Blood,84:2068-2101(1994))。人α4β7整联蛋白具有几种配体，其中一种是粘膜血管地址素MAdCAM-1(Berlin,C.,等人.,Cell 74:185-195(1993)；Erle,D.J.,等人.,J.Immunol.153:517-528(1994))，其表达在肠系膜淋巴结和派伊尔斑中的高内皮微静脉上(Streeter,P.R.,等人.,Nature 331:41-46(1998))。因此，α4β7整联蛋白作为归巢受体，其介导淋巴细胞向肠粘膜淋巴组织的迁移(Schweighoffer,T.,等人.,J.Immunol.151:717-729(1993))。

针对人α4β7整联蛋白的抗体，例如鼠单克隆抗体Act-1(mAb Act-1)，干扰α4β7整联蛋白与粘膜淋巴结中高内皮小静脉上存在的粘膜地址素细胞粘附分子-1(MAdCAM-1)的结合。Act-1最初由Lazarovits,A.I.,等人.,J.Immunol.133:1857-1862(1984)从用人破伤风类毒素特异性T淋巴细胞免疫的小鼠中分离出并报道为小鼠IgG1/κ抗体。Schweighoffer,T.,等人.,J.Immunol.151:717-729(1993)对抗体的后续分析证明其可以结合选择性表达α4β7整联蛋白的人记忆CD4+T淋巴细胞的子集。Entyvio^TM vedolizumab，一种具有源自Act-1的结构特征的抗α₄β₇整联蛋白单克隆抗体(mAb)，适用于治疗溃疡性结肠炎(UC)和克罗恩病(CD)。报告指出维多珠单抗治疗这些疾病的活性(Feagen等人.NEJM369:699-710(2013)和Sandborn等人.NEJM 369:711-721(2013))的研究显示出不同程度的成功，这取决于先前疗法的病症和性质。由于这些是长期研究并且患者可以获得越来越多的治疗选择，因此需要鉴定在治疗早期可以从改良的维多珠单抗治疗中获益的患者。有利和准确的治疗决策可以有效地控制疾病。

发明内容

本发明涉及最初对包括例如维多珠单抗的抗α4β7抗体的治疗没有充分响应的患者的鉴定和治疗。在治疗早期，例如在一剂或两剂维多珠单抗后，从患者或患者的生物样品中测量的因子表明患者是否应该接受个性化治疗方法。

在一个方面中，药代动力学或药效学因子可以指示患者是否应该接受抗α4β7抗体如维多珠单抗的改良治疗。由于较高的治疗性mAb谷浓度与较高的功效相关，因此理解mAb清除的决定因素可以优化给药方案。申请人已经鉴定了炎症性肠病患者的一个子集，他们对例如维多珠单抗的抗α4β7抗体的常规治疗没有充分的响应，并且在识别出抗α4β7抗体的在临床上相关的决定因素如抗体浓度、体重和白蛋白水平后，鉴定了待施用的改良的给药方案。

在一些实施方案中，药代动力学因子是抗α4β7抗体的血清浓度。在一些实施方案中，药代动力学因子是平均血清谷浓度。在其他实施方案中，药代动力学因子是治疗性抗体清除率。基于第5周血清维多珠单抗浓度阈值(<50μg/mL)，预计更高剂量产生更高的暴露水平并且可以导致具有高维多珠单抗清除率的受试者的功效。另外，如果后续的C_谷水平超过暴露限值90μg/mL，后续剂量可能为减少量。

在一些实施方案中，本文描述的方法包括测量白蛋白浓度，例如血清白蛋白浓度。白蛋白浓度低于3.2g/dL进一步鉴定患者为例如维多珠单抗的抗α4β7抗体的非响应者。白蛋白浓度可以小于3.0g/dL、小于2.0g/dL、或小于1.7g/dL、在0.0至3.1g/dL的范围内、在1.0至3.0g/dL的范围内、在0.5至3.2g/dL的范围内、或在2.0至3.1g/dL的范围内。

在一个方面中，本发明涉及一种用于鉴定患者作为个体化治疗的候选者的方法，该方法包括以下步骤：测量从患有炎症性肠病(IBD)并在过去四个月内至少服用两剂维多珠单抗的患者获得的生物样品中维多珠单抗的清除率；如果患者的清除率大于0.14L/天，则鉴定患者继续用维多珠单抗治疗。清除率可以大于0.20L/天或0.14至0.4L/天。

在另一方面中，本发明涉及一种鉴定患者作为个体化治疗的候选者的方法，该方法包括以下步骤：测量从患有炎症性肠病(IBD)并在过去两个月内至少服用一剂维多珠单抗的患者获得的生物样品中维多珠单抗的清除率；如果患者的清除率大于0.14L/天，则鉴定患者继续用维多珠单抗治疗。清除率可以大于0.20L/天或0.14至0.24L/天。在一些实施方案中，在过去一个月内给患者施用至少一剂维多珠单抗。在一些实施方案中，在过去一个月内给患者施用至少两剂维多珠单抗。

本发明进一步涉及用于测量本文所述因子以鉴定作为例如维多珠单抗的抗α4β7抗体的个性化治疗的候选者的患者的测定法。在一些实施方案中，该测定法是一种用于循环抗α4β7抗体的药代动力学测定法。在一个实施方案中，该测定法可以测量患者的血清样品中的低或持续正水平的抗α4β7抗体，例如小于13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1μg/ml，例如用于预测响应或维持折磨患者的IBD的响应或缓解的能力。在一个实施方案中，抗α4β7抗体的血清浓度可以通过夹心ELISA测定来测量。在一个实施方案中，抗α4β7抗体的血清浓度可以在抗体桥接测定中测量。

在一个方面中，一种治疗患有炎症性肠病(IBD)的人类患者的方法，该方法包括：选择患有IBD且在第二剂的维多珠单抗后三或四周的一个时间点处具有小于13μg/ml的维多珠单抗的血清浓度的人类患者，其中在第二剂的维多珠单抗前两周向受试者施用第一剂维多珠单抗；并且向患有IBD的人类患者施用维多珠单抗，从而治疗患有IBD的人类患者。在一个实施方案中，第一剂和第二剂的维多珠单抗包含300mg。在一个实施方案中，第三剂的维多珠单抗包含600mg，并且所有后续剂量包含300mg。在一个实施方案中，第三剂和后续剂量的维多珠单抗包含600mg。在一个实施方案中，患者静脉内接受第一和第二剂量。在一些实施方案中，第三剂和后续剂量的维多珠单抗间隔4周。在一些实施方案中，患者对TNF阻断剂的响应不充分，失去响应，或对其不耐受。

文中提供的一个实施方案是一种用于鉴定炎症性肠病(IBD)用维多珠单抗治疗的维多珠单抗非响应者的体外方法，该方法包括通过使血液样品与抗维多珠单抗抗体接触来测量来自患者的血液样品中维多珠单抗的浓度，其中所述样品在施用第二剂维多珠单抗后约三或四周获得，其中在第二剂维多珠单抗前两周向受试者施用第一剂维多珠单抗，并且其中血液样品中小于13μg/ml的维多珠单抗浓度表明患者对维多珠单抗治疗无响应。在一个实施方案中，该方法还包括向患者施用维多珠单抗。在一个实施方案中，第一剂和第二剂维多珠单抗包含300mg。在一个实施方案中，第三剂维多珠单抗包含600mg。在一个实施方案中，患者静脉内接受第一和第二剂量。在一些实施方案中，患者对TNF阻断剂的响应不充分，失去响应，或对其不耐受。

附图说明

图1显示了研究设计的示意图。在第1天和第2周(导入期)，所有符合条件的受试者将静脉内接受维多珠单抗300mg。^(a)在第6周(通过部分Mayo评分)做出响应的受试者将不会被随机化，并且将根据医生的判断接受适当的治疗。在最后一剂研究药物后，受试者将进行18周的随访安全性访问和6个月的长期随访(LTFU)电话呼叫。^(b)在第6周时没有响应并且具有正常至低维多珠单抗清除率(≤0.14L/天)的受试者将不会被随机化，并且将根据医生的判断接受适当的治疗。在最后一剂研究药物后，受试者将进行18周的随访安全性访问和6个月的LTFU电话呼叫。^(c)

具体实施方式

本发明涉及用抗α4β7抗体(例如，维多珠单抗)治疗患有炎症性肠病(IBD)的患者的方法，用于鉴定用抗体如维多珠单抗进行改良治疗的患者的方法，以及用于维持患者IBD的缓解的方法。

并非所有接受过抗α4β7抗体如维多珠单抗治疗的炎症性肠病患者都对治疗作出响应，有些对治疗没有充分响应。由于这些疾病的发病率，因此需要快速鉴定那些对抗α4β7抗体治疗没有作出充分响应的患者并调整其剂量方案以改善疗效。本申请涉及惊人的发现，即抗α4β7抗体的较高诱导暴露与炎症性肠病患者(例如，溃疡性结肠炎患者)的改善的功效结果相关。

维多珠单抗，一种与α₄β₇整联蛋白特异性结合的人源化单克隆抗体，其用于治疗患有中度至重度活动性溃疡性结肠炎(UC)和克罗恩病(CD)的患者。维多珠单抗具有新颖的肠道选择性作用机制，其不同于其他目前市售的用于治疗炎症性肠病(IBD)的生物制剂，包括那他珠单抗和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)拮抗剂。通过结合细胞表面表达的α₄β₇，维多珠单抗阻断一部分记忆肠道归巢T淋巴细胞与内皮细胞上表达的粘膜地址素细胞粘附分子-1(MAdCAM-1)的相互作用。因此，抑制了这些细胞向发炎的肠组织的迁移。

先前已经报道了用于治疗UC和CD的其他治疗性单克隆抗体的药代动力学。几种因素与这些抗体的加速清除有关，包括抗药物抗体的存在、性别、身体尺寸、伴随的免疫抑制剂使用、疾病类型、白蛋白浓度和全身炎症程度。此外，对于这些药剂中的大多数，已经观察到功效和暴露之间的一致关系，区别于药物剂量，使得较高的谷药物浓度与较高的功效相关。药物清除的差异可能是对这一观察的重要解释。因此，对治疗性抗体清除的决定因素的更好的理解可以导致药物方案的优化。

在以前的研究中，在健康志愿者(静脉内[IV]输注)(未发表的数据)中，在0.2至10mg/kg的剂量范围内研究了维多珠单抗的单剂量药代动力学、药效学(α₄β₇受体饱和度)、安全性和耐受性。在达到峰值浓度后，维多珠单抗血清浓度以通常双指数方式下降，直至浓度达到约1至10ng/mL。此后，浓度似乎以非线性方式下降。在患有CD的患者中静脉内输注0.5和2mg/kg以及在患有UC的患者中静脉内输注2、6和10mg/kg后，研究了维多珠单抗的多剂量药代动力学和药效学。在UC患者中，在2至10mg/kg的剂量范围内的静脉内输注后，维多珠单抗药代动力学通常是线性的。多剂量施用后，快速且接近完全α₄β₇受体饱和在第一剂维多珠单抗后实现。

在GEMINI 1试验(ClinicalTrials.gov编号，NCT00783718)中的UC患者以及GEMINI 2(ClinicalTrials.gov编号，NCT00783692)和GEMINI 3(ClinicalTrials.gov编号，NCT01224171)试验中的CD患者中证实了维多珠单抗诱导和维持治疗的有效性和安全性。在用于诱导和维持治疗的UC和CD患者中，维多珠单抗的暴露-响应(功效)关系已在其他地方提出。例如，在未能作出响应的受试者的GEMINI 1试验中，89％具有<40μg/mL的维多珠单抗C_谷水平。维多珠单抗清除率>0.14L/天的个体与疗效结果降低相关。鉴于该清除切点和批准的维多珠单抗静脉内给药方案，以下维多珠单抗暴露目标是用于该方法的实例：第6周C_谷>37.1μg/mL，第14周C_谷>18.4μg/mL，稳态C_谷>12.7μg/mL。通过施用更高剂量(例如诱导剂量)可以看到改善的结果，导致更高的血清浓度。

定义

如本文所用，抗体的“谷”血清浓度是指恰好在下一剂量之前的浓度。

如本文所用，关于溃疡性结肠炎受试者的“临床缓解”或“缓解”是指小于或等于2个点的完整Mayo评分且没有大于1个点的单个子评分。克罗恩病“临床缓解”是指克罗恩病活动指数(CDAI)评分为150个点或更低。“Harvey-Bradshaw指数”(HBI)是用于数据收集目的的更简单的CDAI版本。其仅由临床参数组成，包括全身健康状况、腹痛、每天液体粪便量、腹部肿块、血细胞比容、体重、控制腹泻的药物和并发症的存在，并且仅需要单独一天的日记条目。磁共振肠造影(MREn)正被评估为测量缓解的方法。

如本文所用，“内窥镜缓解”是指具有低内窥镜评分的病症。评估溃疡性结肠炎的内窥镜评分的方法的一个实例是柔性乙状结肠镜检查。溃疡性结肠炎的内窥镜评分可以是Mayo子评分。评估克罗恩病的内窥镜评分的方法的一个实例是回肠结肠镜检查。克罗恩病的内窥镜评分可以是克罗恩病的简单内窥镜评分(SES-CD)。SES-CD可以包括诸如溃疡的大小、溃疡表面的量、受影响的表面的量以及消化道是否以及在何种程度上变窄的测量。

本文所用的关于溃疡性结肠炎受试者的“临床响应”是指完全Mayo评分从基线降低3个或更多点并降低30％(或部分Mayo评分从基线降低2个或更多点和25％，如果在访问时没有进行完全Mayo评分)，并且伴随出现直肠出血子评分的1个或更多个点(≥1)或绝对直肠出血评分的1个或更少个点(≤1)的下降。如本文关于克罗恩病受试者所用的“临床响应”是指CDAI评分从基线(第0周)降低70个点或更多个点。术语“临床响应”和“响应”例如单独使用没有任何形容词，则在本文中可互换使用。

“完全Mayo评分”是指4个疾病活动变量的综合指数(大便频率、直肠出血、乙状结肠镜检查结果和医生的全面评估)，每个评分从0到3(更高的评分表示更大的疾病活动)。

“部分Mayo评分”是指3个疾病活动变量(大便频率、直肠出血和医生的全面评估)的综合指数，每个评分从0到3(更高的评分表示更大的疾病活动)。部分Mayo评分的计算类似于完全Mayo评分，但不包括乙状结肠镜检查子评分。

如本文所用，“内窥镜响应”是指内窥镜评分从基线(例如，在筛选时或刚好在初始剂量之前)的百分比降低。在克罗恩病中，内窥镜响应可以通过克罗恩病的简单内窥镜评分(SES-CD)来评估。

如本文所用的“基线”描述了在初始治疗剂量之前测量的参数值。其可以指在初始治疗当天，前一天，前一周内获得的样品的测量值，即，在第一剂量之前的时间段，此时预计在第一剂量前几乎没有变化，并且可以将第一剂量后获得的测量值与该基线值进行比较，以表示由该剂量引起的变化。

如本文所用，关于溃疡性结肠炎受试者的“粘膜愈合”是指Mayo内窥镜子评分小于或等于1。关于克罗恩病，“瘘管愈合”导致瘘管的闭合或消除。在对克罗恩病的另一个提及中，粘膜愈合是指粘膜(例如消化道)中伤口的量或严重程度的改善。例如，粘膜愈合可以指消化道中一个或多于一个溃疡的量、大小或严重程度的减少。在另一个实例中，粘膜愈合是指选自由壁厚、增强的肠壁对比、壁水肿、溃疡和肠周围血管分布组成的群组的一个或多个参数的减少。这种粘膜愈合可以表示为SES-CD评分或磁共振活动指数(MaRIA)评分。克罗恩病的完全粘膜愈合包括没有溃疡。

“MaRIA评分”是每个结肠段和回肠末端(例如，回肠、升结肠、横结肠、降结肠、乙状结肠和直肠)的各种粘膜愈合参数的评分的总和，例如，通过磁共振肠造影所测量的。

如本文所用，“无皮质类固醇(CS)缓解”是指在基线时使用口服皮质类固醇的患者，其已停止使用皮质类固醇并且在第52周处于临床缓解状态。

如本文所用，“欧洲5维生命质量量表(EQ-5D)视觉模拟量表(VAS)”是指一种问卷，其是一种用以度量患者的总体健康状况相关的生活质量(HRQOL)的经过验证的工具(ahrq.gov/rice/eq5dproj.htm,“U.S.Valuation of the EuroQol EQ-5D^TM HealthStates”,2012年8月8日访问,Bastida等人.BMC Gastroenterology 10:26-(2010),Konig等人.European Journal of Gastroenterology&Hepatology 14:1205-1215(2002))，包括五个领域-活动性、自我护理、常见活动、疼痛/不适和焦虑/抑郁。患者选择他们目前对每个项目的健康问题水平为“无”、“中等”或“极端”，并分别评分为1、2或3。可以从单个评分计算综合EQ-5D评分以评估总体HRQOL。EQ-5D视觉模拟量表(VAS)评分是使用20cm视觉垂直标度的总体健康状况的自我分配的评级，评分0为最差，100为非常健康。EQ-5D和EQ-5D VAS已在许多研究中显示为是用于测量GI疾病患者的HRQOL的有效且可靠的工具。EQ-5D评分中降低≥0.3个点代表患者HRQOL的临床上有意义的改善。EQ-5D VAS评分中增加大于或等于7个点代表患者HRQOL的临床上有意义的改善。

“炎症性肠病问卷”((IBDQ)问卷“(Irvine Journal of PediatricGastroenterology&Nutrition 28:S23-27(1999))用于评估患有炎症性肠病、溃疡性结肠炎或克罗恩病的成年患者的生活质量，并包括HRQOL四个方面的32个问题：肠系统(10个问题)、情绪功能(12个问题)、社会功能(5个问题)和全身功能(5个问题)。要求患者回忆过去2周内的症状和生活质量，并按照7点Likert标度对每个项目进行评分(评分越高，等同于生活质量越高)。通过对每个领域的评分求和来计算总IBDQ评分；总IBDQ评分为32至224。IBDQ总评分大于170是缓解患者的健康相关生活质量(HRQoL)的特征。

如本文所用，“诱导疗法”是治疗的初始阶段，其中向患者施用相对强化的治疗剂给药方案。将治疗剂(例如抗体)以快速提供适合某些目的的有效量的药剂的方式施用，例如诱导对药剂的免疫耐受或用于诱导临床响应和改善疾病症状(参见WO 2012/151247和WO2012/151248，其通过引用并入本文)。

如本文所用，“维持治疗”是在诱导治疗之后，并且以通过稳定水平的治疗剂(例如抗体)继续诱导治疗实现的响应的方式施用。维持方案可以防止症状的复发或疾病的复发，例如IBD(参见WO 2012/151247和WO 2012/151248，其通过引用并入本文)。维持方案可向患者提供便利，例如作为简单给药方案或无需频繁治疗就诊。

细胞表面分子，“α4β7整联蛋白，”或“α4β7，”是一种α₄链(CD49D、ITGA4)和β₇链(ITGB7)的异二聚体。每条链可形成具有替代整联蛋白链的异二聚体，以形成α₄β₁或α_Eβ₇。人α₄和β₇基因(GenBank(National Center for Biotechnology Information，Bethesda，MD)RefSeq登录号分别为NM_000885和NM_000889)由B和T淋巴细胞表达，特别是记忆CD4+淋巴细胞。对于许多整联蛋白是典型的，α4β7可以以静止或激活状态存在。α4β7的配体包括血管细胞粘附分子(VCAM)、纤连蛋白和粘膜地址素(MAdCAM(例如，MAdCAM-1))。α4β7整联蛋白通过与粘膜地址素细胞粘附分子-1(MAdCAM-1)的粘附相互作用介导淋巴细胞运输至GI粘膜和肠相关淋巴组织(GALT)，该粘膜地址素细胞粘附分子-1(MAdCAM-1)在肠系膜淋巴结和GI粘膜的内皮上表达。

本文中的术语“抗体”以最广泛意义使用且明确涵盖全长单克隆抗体、免疫球蛋白、多克隆抗体、由至少两种例如各自针对不同抗原或表位的全长抗体形成的多特异性抗体(例如双特异性抗体)以及个别抗原结合片段(包括dAb、scFv、Fab、F(ab)'₂、Fab')，包括人、人源化和来自非人物种及重组抗原结合形式的抗体，如微型单功能抗体(monobody)和微型双功能抗体。

本文所用的术语“单克隆抗体”是指由实质上均质抗体的群体获得的抗体，即除可在产生单克隆抗体期间出现的可能变体(所述变体一般以少量存在)之外，构成所述群体的个别抗体相同和/或结合相同表位。与通常包括针对不同决定子(表位)的不同抗体的多克隆抗体制剂不同，各单克隆抗体针对抗原上的单一决定子。修饰语“单克隆”指示抗体是从实质上均质的抗体群体获得的特性，且不应解释为需要通过任何特定方法来产生所述抗体。例如，根据本发明使用的单克隆抗体可通过最初由Kohler等，Nature,256:495(1975)描述的杂交瘤方法制备，或可通过重组DNA方法(参见例如美国专利号4,816,567)制备。“单克隆抗体”也可使用例如Clackson等，Nature,352:624-628(1991)和Marks等，J.Mol.Biol.,222:581-597(1991)中描述的技术从噬菌体抗体库分离。

抗体的“抗原结合片段”至少包含抗α4β7抗体的重链和/或轻链的可变区。例如，维多珠单抗的抗原结合片段包含人源化轻链序列SEQ ID NO:2的氨基酸残基20至131。此类抗原结合片段的实例包括本领域已知的人源化抗体的Fab片段、Fab'片段、scFv和F(ab')₂片段。本发明的人源化抗体的抗原结合片段可以通过酶促裂解或通过重组技术产生。例如，木瓜蛋白酶或胃蛋白酶裂解可用于分别产生Fab或F(ab')₂片段。抗体也可使用其中一个或多个终止密码子已被引入天然终止位点上游的抗体基因以多种截短形式产生。例如，编码F(ab')₂片段的重链的重组构建体可以经设计以包括编码重链的CH_I结构域和铰链区的DNA序列。在一个方面中，抗原结合片段抑制α4β7整联蛋白结合到其一个或多个配体(例如粘膜地址素MAdCAM(例如MAdCAM-1)、纤维结合蛋白)。

术语“Fc受体”或“FcR”用于描述结合到抗体Fc区的受体。在一个方面中，FcR是天然序列人FcR。在另一方面中，FcR为结合IgG抗体的受体(γ受体)且包括FcγRI、FcγRII及FcγRIII子类的受体，包括这些受体的对偶基因变体和可变剪接形式。FcγRII受体包括FcγRIIA(“活化受体”)和FcγRIIB(“抑制受体”)，所述受体具有主要在其细胞质结构域方面不同的类似氨基酸序列。活化受体FcγRIIA在其细胞质结构域中含有基于免疫受体酪氨酸的活化基序(ITAM)。抑制受体FcγRIIB在其细胞质结构域中含有基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(ITIM)。(参见M.Daeron,Annu.Rev.Immunol.15:203-234(1997)中评论)。FcR在Ravetch和Kinet,Annu.Rev.Immunol 9:457-92(1991)；Capel等,Immunomethods 4:25-34(1994)；和de Haas等,J.Lab.Clin.Med.126:33-41(1995)中进行了评论。本文中的术语“FcR”涵盖其他FcR，包括将来待识别的那些FcR。所述术语也包括新生儿受体FcRn，其负责将母体IgG转移至胎儿(Guyer等,J.Immunol.117:587(1976)和Kim等,J.Immunol.24:249(1994))并调节免疫球蛋白G(IgG)和白蛋白在血清中的持久性(Rath等,J.Clin.Immunol.33Suppl 1:S9-17(2013)所评论)。

当在本文中使用时，术语“高变区”是指抗体的氨基酸残基，其负责抗原结合并且存在于每条链的“可变结构域”中。高变区通常包含来自“互补决定区”或“CDR”的氨基酸残基(例如，轻链可变结构域中的残基24-34(L1)、50-56(L2)和89-97(L3)和重链可变结构域中的残基31-35(H1)、50-65(H2)和95-102(H3)；Kabat等,Sequences of Proteins ofImmunological Interest,第5版Public Health Service,National Institutes ofHealth,Bethesda,Md.(1991))和/或来自“高变环”的那些残基(例如轻链可变结构域中的残基26-32(L1)、50-52(L2)和91-96(L3)和重链可变结构域中的26-32(H1)、53-55(H2)和96-101(H3)；Chothia和Lesk J.Mol.Biol.196:901-917(1987))。“框架区”或“FR”残基是除如本文定义的高变区残基外的那些可变域残基。可将高变区或其CDR从一个抗体链转移至另一抗体链或至另一蛋白质以赋予所得(复合)抗体或结合蛋白以抗原结合特异性。

“分离的”抗体是已经从其天然环境的组分中鉴别和分离和/或回收的抗体。在某些实施方案中，抗体将：(1)被纯化至如通过劳立法(Lowry method)所测定的大于95重量％蛋白质且或者大于99重量％；(2)被纯化至足以通过使用旋杯式测序仪获得N端或内部氨基酸序列的至少15个残基的程度；或(3)通过使用考马斯蓝(Coomassie blue)或银染色法，在还原或非还原条件下进行SDS-PAGE被纯化至均质。分离的抗体包括重组细胞内的原位抗体，因为抗体的天然环境的至少一种组分将不存在。然而，通常将通过至少一个纯化步骤来制备分离的抗体。

“治疗”是指治疗性治疗与防治性或预防性措施两者。需要治疗者包括已患有疾病者以及待预防疾病或其复发者。因此，本文中待治疗的患者可已诊断为患有疾病或可能易患或易感疾病。术语“患者”和“受试者”在本文中可互换使用。

用抗α4β7抗体治疗维多珠单抗非响应者

在一个方面中，本发明涉及在维多珠单抗非响应者中治疗IBD(例如，溃疡性结肠炎)的方法，其包括例如在人类中以有效治疗IBD的量向维多珠单抗非响应者施用本文所述的抗α4β7抗体。人类患者或受试者可以是成人(例如，18岁或更大)、青少年或儿童。包含抗α4β7抗体的药物组合物可以如本文所述用于治疗患有其的受试者中的IBD。在一些实施方案中，治疗导致IBD(例如UC或CD)的粘膜愈合。在一些实施方案中，治疗导致IBD(例如UC或CD)的临床响应和/或临床缓解。在一些实施方案中，对于开始治疗同时也用皮质类固醇治疗的患者的治疗结果是临床缓解和中断皮质类固醇治疗。在一些实施方案中，治疗结果发生在治疗14周、18周、22周、26周、30周或34周时。在一些实施方案中，治疗结果(例如，响应)是持久的，例如，随时间持续的临床响应，例如，患者在治疗开始后第14周和第30周表现出临床响应。

如本文所用，“非-响应者”，“非响应者”或“维多珠单抗非-响应者”是患有IBD(例如，溃疡性结肠炎)的患者的选择子集，其已经接受第一和第二诱导剂量的抗α4β7整联蛋白抗体(例如，维多珠单抗)并且在治疗(例如，维多珠单抗治疗)初期(例如，在第二诱导剂量后约三或四周)显示出无响应的迹象。无响应的迹象可包括临床响应措施和/或本文所述的措施。

在一些实施方案中，可以使用包括因子的算法来鉴定无响应的治疗，所述因子包括但不限于抗体浓度和/或抗体清除率。可以在从患者获得的血清中测量抗体浓度。在进一步的实施方案中，用于鉴定无响应治疗的算法中的因子包括体重和/或白蛋白水平。

抗α4β7抗体可结合于α4链(例如人源化MAb 21.6(Bendig等，美国专利号5,840,299))、β7链(例如FIB504或人源化衍生物(例如Fong等，美国专利号7,528,236))上的表位，或结合于由α4链与β7链的缔合所形成的组合表位。在一个方面中，抗体结合α4β7复合物上的组合表位，但不结合α4链或β7链上的表位，除非所述链彼此缔合。α4整联蛋白与β7整联蛋白的缔合可例如通过将存在于两个链上的一起构成表位的残基靠近或通过构象暴露一个链(例如α4整联蛋白链或β7整联蛋白链)上的表位结合位点来产生组合表位，所述表位结合位点在不存在适当整联蛋白搭配物或不存在整联蛋白活化下不可达成抗体结合。在另一方面中，抗α4β7抗体结合α4整联蛋白链和β7整联蛋白，因此，对α4β7整联蛋白复合物具有特异性。组合表位抗α4β7抗体可以结合α4β7但不结合α4β1，和/或不结合例如α_Eβ7。在另一方面中，抗α4β7抗体与Act-1抗体结合相同或基本相同的表位(Lazarovits,A.I.等,J.Immunol.,133(4):1857-1862(1984),Schweighoffer等,J.Immunol.,151(2):717-729,1993；Bednarczyk等,J.Biol.Chem.,269(11):8348-8354,1994)。产生鼠类Act-1单克隆抗体的鼠类ACT-1杂交瘤细胞系是于2001年8月22日根据布达佩斯条约(Budapest Treaty)的规定，以Millennium Pharmaceuticals,Inc.,40Landsdowne Street,Cambridge,Mass.02139,U.S.A.名义以寄存编号PTA-3663存放于美国菌种保藏中心(American TypeCulture Collection),10801University Boulevard,Manassas,Va.20110-2209,U.S.A.。在另一方面中，抗α4β7抗体是使用美国专利申请公布号2010/0254975中提供的CDR的人抗体或α4β7结合蛋白。

在一个方面中，抗α4β7抗体抑制α4β7与其一个或多个配体(例如粘膜地址素，例如MAdCAM(例如MAdCAM-1)、纤维结合蛋白和/或血管地址素(VCAM))结合。灵长类动物MAdCAM描述于PCT公布WO 96/24673中，所述公布的全部教义以引用的方式并入本文。在另一方面中，抗α4β7抗体抑制α4β7与MAdCAM(例如MAdCAM-1)和/或纤维结合蛋白的结合而不抑制VCAM的结合。

在一个方面中，用于治疗的抗α4β7抗体是小鼠Act-1抗体的人源化形式。制备人源化抗体的合适方法是本领域熟知的。通常，人源化抗α4β7抗体将含有重链，其含有小鼠Act-1抗体的3个重链互补决定区(CDR、CDR1、SEQ ID NO：4、CDR2、SEQ ID NO：5和CDR3、SEQ IDNO：6)和合适的人重链框架区；并且还含有轻链，其含有小鼠Act-1抗体的3个轻链CDR(CDR1、SEQ ID NO：7、CDR2、SEQ ID NO：8和CDR3、SEQ ID NO：9)和合适的人轻链框架区。人源化Act-1抗体可含有具有或不具有氨基酸取代的任何适合人框架区，包括共有框架区。举例而言，一个或多个框架氨基酸可经另一氨基酸(如小鼠Act-1抗体中相应位置处的氨基酸)置换。若存在，则人恒定区或其部分可源于人抗体(包括对偶基因变体)的κ或λ轻链和/或γ(例如γ1、γ2、γ3、γ4)、μ、α(例如α1、α2)、δ或ε重链。可选择特定恒定区(例如IgG1)、其变体或部分以调整效应子功能。例如，可将突变恒定区(变体)并入融合蛋白中以使与Fc受体的结合和/或固定补体的能力减至最小(参见例如Winter等.,GB 2,209,757B；Morrison等.,WO 89/07142；Morgan等.,WO 94/29351,1994年12月22日)。人源化形式的Act-1抗体描述于PCT公布号WO98/06248和WO07/61679中，其各自的全部教导通过引用并入本文。

在一个方面中，抗α4β7抗体是维多珠单抗。维多珠单抗(也称为MLN0002、ENTYVIO^TM或KYNTELES^TM)是针对人淋巴细胞整联蛋白α4β7的人源化免疫球蛋白(Ig)G1mAb。维多珠单抗结合α4β7整联蛋白，拮抗其对MAdCAM-1的粘附，因此，损害肠道归巢白细胞向GI粘膜的迁移。维多珠单抗是一种整联蛋白受体拮抗剂，其适用于患有中度至重度活动性UC或CD的成年患者，其对肿瘤坏死因子(TNF)阻断剂或免疫调节剂响应不足，失去响应或不耐受，或对皮质类固醇响应不足，不耐受或表现出依赖性。对于UC，维多珠单抗用于诱导和维持临床响应，诱导和维持临床缓解，改善粘膜的内窥镜外观，和/或实现无皮质类固醇缓解。对于CD，维多珠单抗用于实现临床响应，实现临床缓解和/或实现无皮质类固醇缓解。在一些实施方案中，在用维多珠单抗持续治疗期间通过逐渐减量的方案实现无皮质类固醇缓解。

在另一方面中，用于治疗的人源化抗α4β7抗体包含含有SEQ ID NO：1的氨基酸20至140的重链可变区，和含有SEQ ID NO：2的氨基酸20至131或SEQ ID NO：3的氨基酸21至132的轻链可变区。若需要，则可存在适合人恒定区。例如，人源化抗α4β7抗体可包含含有SEQ ID NO:1的氨基酸20至470的重链和含有SEQ ID NO:3的氨基酸21至239的轻链。在另一实施例中，人源化抗α4β7抗体可包含含有SEQ ID NO:1的氨基酸20至470的重链和含有SEQID NO:2的氨基酸20至238的轻链。两个小鼠残基转换为人残基的维多珠单抗(例如，Chemical Abstract Service(CAS，American Chemical Society)登记号943609-66-3)的人源化轻链比LDP-02(另一种人源化抗α4β7抗体)的轻链更类人。此外，LDP-02具有轻微疏水性、可挠性丙氨酸114和亲水性位点(天冬氨酸115)，其在维多珠单抗中置换为轻微亲水性的含羟基苏氨酸114和疏水性的可能面向内部的缬氨酸115残基。

人源化抗α4β7抗体序列的进一步取代可以是，例如，重链和轻链框架区的突变，例如SEQ ID NO：10的残基2上的异亮氨酸突变为缬氨酸；SEQ ID NO：10的残基4上的甲硫氨酸突变为缬氨酸；SEQ ID NO：11的残基24上的丙氨酸突变为甘氨酸；SEQ ID NO：11的残基38处的精氨酸突变为赖氨酸；SEQ ID NO：11的残基40处的丙氨酸突变为精氨酸；SEQ ID NO：11的残基48上的甲硫氨酸突变为异亮氨酸；SEQ ID NO：11的残基69上的异亮氨酸突变为亮氨酸；SEQ ID NO：11的残基71上的精氨酸突变为缬氨酸；SEQ ID NO：11的残基73上的苏氨酸突变为异亮氨酸；或其任何组合；用小鼠Act-1抗体的CDR(CDR1，SEQ ID NO：4、CDR2，SEQID NO：5和CDR3，SEQ ID NO：6)替换重链CDR；以及用小鼠Act-1抗体的轻链CDR(CDR1，SEQID NO：7、CDR2，SEQ ID NO：8和CDR3，SEQ ID NO：9)替换轻链CDR。

在第一方面中，本发明提供了一种用抗α4β7抗体(例如维多珠单抗)治疗患有炎症性肠病(IBD)的无响应患者的方法。在该方面中，该方法包括使用算法来评估多种因子，包括但不限于白蛋白水平、体重和α4β7抗体浓度。在一些实施方案中，该方法包括选择具有低水平抗体的患者用于高剂量治疗。在一些实施方案中，该方法包括选择具有高抗体清除率的患者用于高剂量治疗。该方法包括在接受至少一次前一剂量的抗体后例如至少一周、两周、三周、四周、五周、六周、七周、八周或九周的某一时间，测量来自患者的生物样品例如血液、血清、血浆、粪便、肠液、唾液、炎性渗出物中抗α4β7抗体的浓度。在一些实施方案中，抗α4β7抗体的血清浓度的测量可以是清除率的指示。清除率可能受到其他参数的影响或进一步说明，例如药效因子、临床因子、炎症或免疫响应因子，其测量可与抗α4β7抗体的测量结合使用。单独或与一个或多个其他参数的测量结合的清除率的指示可用于预测对抗α4β7抗体治疗的响应，鉴定对抗α4β7抗体治疗无响应的患者，选择患者用于进一步用抗α4β7抗体治疗，为患者选择剂量或给药方案，或在治疗期间监测抗α4β7抗体的有效性。例如，在取样时，患者中的少量抗α4β7抗体表明，较高的第三次和任选高的随后给药抗α4β7抗体将在IBD的治疗中提供益处。具有低浓度的抗α4β7抗体的非响应者可以表征为a)抗体(例如维多珠单抗)的清除率，其大于约0.10L/天、大于0.14L/天、0.14-0.24L/天、大于0.15L/天或大于0.2L/天；和/或b)抗体(例如维多珠单抗)的血清浓度，例如稳态谷浓度，其小于15μg/ml、小于14μg/ml、小于13μg/ml、小于12μg/ml、小于10μg/ml、小于9μg/ml、小于8μg/ml、小于7μg/ml、小于6μg/ml、或小于4μg/ml或具有范围1-15μg/ml、2-14μg/ml、3-13μg/ml、1-12μg/ml、4-12μg/ml、1-11μg/ml、1-9μg/ml、或5-10μg/ml。

在第二方面中，本发明提供了用抗α4β7抗体例如维多珠单抗治疗患有炎症性肠病(IBD)的非响应患者的方法。在这方面中，该方法包括用两剂300mg抗α4β7抗体治疗患者，第二剂比第一剂晚两周，在第一剂量后五周测量抗α4β7抗体浓度并在第一剂抗α4β7抗体后6周获得临床响应测量(例如部分Mayo评分)。在一些实施方案中，非响应者被鉴定为具有5周抗α4β7抗体血清浓度<50μg/mL并且不符合6周临床响应标准，例如，通过部分Mayo评分。在一些实施方案中，该方法包括选择患者用于高剂量治疗，该患者在五周测量时具有低水平的抗体，并且在六周评估时不满足临床响应的标准，例如通过部分Mayo评分。在一些实施方案中，较高剂量的维多珠单抗为450mg或600mg，例如，如果静脉内施用，并且还可以在每四周一次的频率下。在其他实施方案中，高剂量的维多珠单抗是160mg、216mg、320mg的皮下剂量，并且还可以在每周或每两周一次的频率下。

在一个实施方案中，用抗α4β7抗体(例如维多珠单抗)治疗维多珠单抗非响应者中的IBD的方法包括以下步骤：从具有或患有IBD的两个或更多个患者的组中选择患有IBD的人类患者，所述患者在接受第二剂维多珠单抗后三或四周的一个时间点具有不超过约15、约14、约13、约12、约11、约10、约9、约8、约7或约6μg/ml的血清浓度，其中在第二剂量前两周向受试者施用第一剂维多珠单抗。具体地，患者的血清浓度可以是约1-15、约2-14、约3-13、约4-12、约1-11、约1-9或约5-10μg/ml。患者的血清浓度(例如，谷血清浓度)可小于12.7μg/ml、小于12μg/ml或小于11μg/ml。在一些实施方案中，患者在取样用于血清维多珠单抗测量前约2周、约3周、约4周、约5周、约6周、约7周、约8周或约9周接受前一剂量的维多珠单抗。一旦从患者组中选出这样的患者，就向他或她施用维多珠单抗来治疗IBD。

另一方面，本发明提供了一种治疗维多珠单抗非响应者的IBD的方法，其利用比诱导剂量(例如，300mg)更高剂量(例如，600mg)的抗α4β7抗体，例如维多珠单抗。在一些实施方案中，使用维多珠单抗的方法包括以下步骤：向患有IBD的患者施用三剂或更多剂维多珠单抗，其中第二剂在将第一剂施用给患者后约两周施用；等待至少两周、至少三周、约四周或五周的一段时间；测量患者的抗α4β7抗体(例如维多珠单抗)血清浓度；如果患者的抗α4β7抗体血清浓度小于约15、约14、约13、约12、约11、约10、约9、约8、约7或约6μg/ml，则向患者施用一剂或多剂更高剂量(例如，600mg)的维多珠单抗。患者的血清浓度可以是约1-15、约2-14、约3-13、约4-12、约1-11、约1-9或约5-10μg/ml。患者的血清浓度，例如抗α4β7抗体的谷血清浓度可小于12.7μg/ml、小于12μg/ml或小于11μg/ml。

该方法可以进一步包括在第三剂或第四剂后，例如，第一诱导剂量后约11周、约12周、约13周或约14周，第二次测量抗α4β7抗体(例如维多珠单抗)的血清浓度，如果患者的血清浓度低于约15、约14、约13、约12、约11、约10、约9、约8、约7或约6μg/ml，则以更高剂量(例如600mg)继续治疗。患者的血清浓度可以是约1-15、约2-14、约3-13、约4-12、约1-11、约1-9或约5-10μg/ml。患者的血清浓度(例如，谷血清浓度)可小于12.7μg/ml、小于12μg/ml或小于11μg/ml。

在一些实施方案中，维多珠单抗非响应者在取样用于血清维多珠单抗测量之前约三或四周接受最后的上一剂，例如第二剂维多珠单抗。在其他实施方案中，维多珠单抗非响应者在取样用于血清维多珠单抗测量之前三至八周接受最后的上一剂量。

或者，本发明提供鉴定用高剂量抗α4β7抗体(例如维多珠单抗)治疗的非响应者的方法，其包括以下步骤：测量从患有IBD的患者获得的血清样品中维多珠单抗浓度，该患者在过去一个或两个月内接受至少一剂维多珠单抗，以及如果样品中的血清浓度小于约15、约14、约13、约12、约11、约10、约9、约7、约6或约5μg/ml，则鉴定患者继续用高剂量维多珠单抗进行治疗。患者的血清浓度可以是约1-15、约2-14、约3-13、约4-12、约1-11、约1-9或约5-10μg/ml。患者的血清浓度(例如，谷血清浓度)可小于12.7μg/ml、小于12μg/ml或小于11μg/ml。在一些实施方案中，维多珠单抗非响应者在取样用于血清维多珠单抗测量之前约两周、约三周、约四周、约五周或约六周接受上一剂维多珠单抗。

或者，可以将至少一剂抗α4β7抗体(例如维多珠单抗)施用于维多珠单抗非响应者，等待至少约两周，或任选地，2至5周的一段时间，然后测量患者的维多珠单抗血清浓度，以及如果患者的血清浓度小于约15、约14、约13、约12、约11、约10、约9、约8、约7或约6μg/ml，则向患者施用一剂或更多剂更高剂量(例如，600mg)的维多珠单抗。患者的血清浓度可以是约1-15、约2-14、约3-13、约4-12或约5-10μg/ml。患者的血清浓度(例如，谷血清浓度)可小于12.7μg/ml、小于12μg/ml或小于11μg/ml。

或者，可以将至少一剂或两剂(例如，300mg)的抗α4β7抗体(例如维多珠单抗)施用于维多珠单抗非响应者，在第一剂抗α4β7抗体后等待至少约五周，或任选地，2至5周的一段时间，然后测量患者的维多珠单抗血清浓度，并且如果患者的抗α4β7抗体血清浓度小于约50、约45、约40、约35、约30、约35、约20或约15μg/ml，则向患者施用一剂或更多剂更高剂量(例如，600mg)的维多珠单抗。患者的抗α4β7抗体血清浓度可以为约0-50、约5-50、约15-50、约20-50、约30-50、约40-50或约45-50μg/ml。患者的抗α4β7抗体血清浓度可小于50μg/ml、小于45μg/ml或小于40μg/ml。患者的抗α4β7抗体血清浓度可低于30μg/ml。此外，在该实施方案中，可以在第6周通过不满足临床响应标准(例如，部分Mayo评分)来确定患者是非响应者。

在一些实施方案中，如果在第三或第四剂(例如，在第一诱导剂量后约11周、约12周、约13周、或约14周)并以更高剂量(例如，600mg)一次或多次施用抗体后，对抗α4β7抗体(例如维多珠单抗)的血清浓度的进一步测量发现，患者的血清浓度超过约12、约13、约14、约15、约16、约17或约18μg/ml，则患者的剂量可以恢复到诱导剂量，例如300mg。患者的血清浓度可以是约12-25、约15-17、约17-25、约12-40、约13-60、约13-90或约15-50μg/ml。患者的血清浓度，例如谷血清浓度，可以大于12.7μg/ml、大于13μg/ml或大于14μg/ml。

维多珠单抗可以通过任何合适的方法施用，例如通过静脉内注射、皮下注射或输注中的一种或多种。在一些实施方案中，维多珠单抗以50mg、100mg、180mg、300mg或600mg的剂量施用。在一些实施方案中，维多珠单抗例如以0.5mg/kg、1.0mg/kg、1.5mg/kg、2.0mg/kg、2.5mg/kg、3.0mg/kg、4.0mg/kg或5.0mg/kg的剂量，108mg、216mg、160mg、165mg、320mg或480mg的剂量皮下施用。

维多珠单抗可以每天、每周、每月或每年施用一次。维多珠单抗给药方案可具有初始或诱导期和维持期。诱导期可以是一剂或多于一剂，例如两剂、三剂或四剂的高剂量或不存在长时间，例如每剂之间仅一周、两周、三周或四周。例如，诱导方案可以具有两剂，一剂在第零天(周)，一剂在第二周(第14天)。维持期，例如，维持IBD的缓解，可以具有比诱导期更低的剂量或进一步分开的剂量。在一些实施方案中，维多珠单抗在0周、2周和6周(诱导)施用，然后每4周或之后每8周施用一次(维持)。在开始维持治疗之前，对其他治疗难以治疗的IBD患者可能需要更长的诱导期，例如8、10或12周。在一个实施方案中，维多珠单抗在0周、2周和6周时静脉内施用，然后之后每8周施用一次。在一些实施方案中，施用维多珠单抗一次或多次，然后至少一个月、至少六个月、或至少一年后，再次施用维多珠单抗一次或多次。在一些实施方案中，300mg维多珠单抗可以在0和2周时通过静脉内输注施用，然后之后以6周、和4周间隔或8周间隔，可以静脉内施用600mg维多珠单抗。在一些实施方案中，300mg维多珠单抗可以在0和2周时通过静脉内输注施用，然后在6周时可以通过静脉内输注施用600mg维多珠单抗，然后之后以4周间隔或8周间隔，可以静脉内施用300mg维多珠单抗。在该实施方案中，患者在第5周测量时可具有多于或等于30μg/mL(≥30μg/ml)，但小于50μg/ml(<50μg/ml)维多珠单抗。在一些实施方案中，300mg维多珠单抗可以在0和2周时通过静脉内输注施用，然后在6周时并且之后以4周或8周间隔施用600mg，直到血清浓度测量值超过12.7μg/ml、超过13μg/ml、超过14μg/ml，或第13周血清浓度超过90μg/mL维多珠单抗，此时之后以4周间隔或8周间隔可通过静脉内输注施用300mg。在该实施方案中，患者在第5周测量时可具有小于30μg/ml(<30μg/ml)维多珠单抗。在一些实施方案中，每四周施用一次300mg维多珠单抗的患者具有超过90μg/mL维多珠单抗的下一剂前一周测量值，下一剂和后续剂量可以间隔八周施用。在一些实施方案中，300mg维多珠单抗可以在0和2周时通过静脉内输注施用，600mg维多珠单抗可以在6周时通过静脉内输注施用，然后以2周、3周或4周间隔，可以皮下施用108mg维多珠单抗。在一些实施方案中，300mg维多珠单抗可以在0和2周时通过静脉内输注施用，然后在6周时并且之后以4周或8周间隔施用600mg，直至发现血清浓度测量值超过12.7μg/ml、超过13μg/ml或超过14μg/ml维多珠单抗，此时以两周、三周或四周间隔，可以皮下施用108mg剂量。使用抗α4β7整联蛋白抗体的治疗方法描述于公布号U.S.2005/0095238、WO2012151248和WO 2012/151247中。

本发明还涉及一种用抗α4β7抗体(例如维多珠单抗)治疗非响应者的方法，其包括以下步骤：计算从患有IBD的患者获得的生物样品中维多珠单抗的清除率，该患者在过去四个月内(例如，在过去三个月内，在过去两个月内)被施用至少两剂维多珠单抗，以及如果患者的清除率大于0.12L/天、大于0.14L/天、大于0.16L/天、大于0.18L/天、大于0.2L/天或0.14至0.24L/天，则鉴定患者用于维多珠单抗治疗。生物样品可以是任何生物样品，例如血清、血浆、唾液、尿液或粪便。该方法可以包括测量抗α4β7抗体，例如谷浓度，例如第6周谷浓度、第14周谷浓度或稳态谷浓度。任选地，该方法可以包括测量抗α4β7抗体的暴露水平。

在用抗α4β7抗体治疗患者的方法的一些实施方案中，患者在一剂或两剂后没有足够的血清谷浓度，例如在诱导后，例如，在第一剂后的两个月内(例如，到第5周或第6周)具有低血清浓度，例如低于15μg/ml、低于13μg/ml、低于10μg/ml、低于8μg/ml或低于6μg/ml和/或具有高清除率，例如>0.12L/天、>0.14L/天、>0.16L/天，或>0.20L/天，可以修改标准治疗方案。在一个实施方案中，需要改良方案的患者具有低于13μg/ml的抗α4β7抗体血清浓度和/或>0.14L/天的抗α4β7抗体清除率和/或小于3.2g/dL的白蛋白浓度。在另一个实施方案中，需要改良方案的患者在开始用抗α4β7抗体治疗后第5周具有<50μg/mL的抗α4β7抗体血清浓度。进一步对于该实施方案，在开始用抗α4β7抗体治疗后第6周，需要改良方案的患者不满足临床响应标准，例如通过部分Mayo评分。例如，可以中断抗α4β7抗体治疗，剂量给药可以更频繁，例如，每4周一次或每2周一次而不是每8周一次，剂量可以增加，例如，从300mg到600mg。在一些实施方案中，在这些患者中频率和剂量均增加(例如，增加剂量(例如，至600mg)和频率(例如，每4周治疗一次)。

治疗作为抗α4β7抗体(例如维多珠单抗)非响应者的患者的方法可进一步包括测量白蛋白浓度。在治疗性抗体治疗中，这可以反映清除活动，例如结合新生儿FcR的能力。或者，这可以反映患者所经历的炎症量。例如，血浆蛋白质可能通过从IBD炎症负荷泄漏的血管离开血流。可以在用抗α4β7抗体(例如维多珠单抗)治疗之前测量白蛋白浓度，即基线测量。在其他实施方案中，可以在用抗α4β7抗体(例如维多珠单抗)治疗后测量白蛋白浓度。在低血清白蛋白水平的情况下，抗α4β7抗体可具有高清除率。因此，具有低血清白蛋白水平的患者可能对300mg剂量没有响应，或者可能需要更长的时间才对抗α4β7抗体治疗作出响应。小于约3.5g/dL、约3.2g/dL、约3.0g/dL、约2.7g/dL、或约2.0g/dL、或在2.0-3.1g/dL的范围内、在1.5-3.1g/dL的范围内、在0.8-3.1g/dL的范围内或在0.1-3.1g/dL的范围内的白蛋白浓度可进一步鉴定患者继续用抗α4β7抗体(例如，维多珠单抗)治疗，例如，采用高于诱导剂量的剂量，例如600mg而不是300mg。

该方法还可以包括测量患者体重。体重可在抗α4β7抗体(例如，维多珠单抗)治疗前测定，即在基线时，或者可以在治疗期间的其他时间测量，例如，当监测患者响应时。该方法可包括测量基线白蛋白浓度和患者体重。具有低白蛋白水平(例如，小于3.2g/dL、小于3.0g/dL、小于2.5g/dL或小于1.2g/dL)的高体重患者(例如，大于90kg、大于100kg、大于110kg、或大于120kg)可能具有高抗α4β7抗体清除率，因此可能对抗α4β7抗体治疗没有响应或可能需要更高或更频繁剂量的抗α4β7抗体用以继续治疗。

清除率例如线性清除率，例如每单位时间清除药物的血液体积，可以通过本领域技术人员已知的任何适当方法计算/估计/得出。例如，可以通过群体方法估计清除率，例如PCT/US15/00476中描述的模型。清除率的计算可以使用以下等式中描述的模型：

其中E₀是基线MAdCAM-1结合百分比，Emax是最大效应，Conc是维多珠单抗血清浓度，EC₅₀是半最大效应的维多珠单抗血清浓度，γ是Hill系数或斜率因子。计算参数可包括12.1％的基线MAdCAM-1抑制(E0)，0.093μg/mL的半最大效应浓度(EC50)，0.959的最大效应(Emax)，0.801的Hill系数或斜率因子(γ)和0.613的指数残余误差方差(σ2exp)(％CV＝78.3)。

将抗α4β7抗体暴露度量，例如谷血清浓度，例如，在施用新剂量之前例如1天、2天、3天、4天或直至一周之前的抗α4β7抗体血清浓度、峰值血清浓度、在一次以上的取样时测量的平均血清浓度或在浓度时间曲线下的面积输入到模型中以测定清除率。

用于鉴定患者以继续维多珠单抗治疗的方法可以对在过去一个或两个月内被施用至少一剂维多珠单抗的患者进行，该方法包括以下步骤：测量从患有IBD的患者获得的生物样品中维多珠单抗的清除率，以及如果患者的清除率大于0.25L/天、大于0.14L/天、0.14至0.24L/天、大于0.14L/天或大于0.2L/天，则鉴定该患者继续使用较高剂量的维多珠单抗进行治疗。生物样品可以是任何生物样品，例如血清、血浆、唾液、尿液或粪便。

一种治疗作为抗α4β7抗体(例如维多珠单抗)非响应者的患者的方法可包括使用测量组合鉴定剂量。测量的组合可以使用计算，例如贝叶斯计算方法，例如完整贝叶斯方法，例如马尔可夫链蒙特卡罗(MCMC)方法或最大后验(MAP)方法。一种使用线性清除率(例如使用群体药代动力学模型在计算中从抗体血清浓度所估计的)为非响应者(例如，在两剂抗α4β7(例如维多珠单抗)后缺乏响应的患者)设计剂量的方法在实施例中有所描述。在一些实施方案中，计算(例如贝叶斯方法)包括测量的组合，例如选自由血清白蛋白水平、体重和抗α4β7抗体(例如维多珠单抗)清除率组成的群组的一种、两种或所有测量。在一些实施方案中，血清白蛋白水平和体重在基线时测量，例如在用抗体治疗之前。在一些实施方案中，抗体清除率是在用抗体诱导治疗后从抗体的血清浓度计算的。在其他实施方案中，抗体清除率是在至少一剂高剂量(例如600mg)的抗体治疗后从抗体的血清浓度计算的。

在一个方面中，本发明提供了一种用比诱导剂量(例如，300mg)更高剂量(例如，600mg)的抗α4β7抗体(例如维多珠单抗)治疗抗α4β7抗体(例如，维多珠单抗)非响应者的IBD(例如溃疡性结肠炎)的方法。在一些实施方案中，使用维多珠单抗的方法包括以下步骤：测量患者的血清白蛋白和体重，向患有IBD的患者施用两剂或更多剂的维多珠单抗，其中第二剂在第一剂后约两周施用给患者；等待至少两周、至少三周、约四周或五周的一段时间；测量患者的抗α4β7抗体(例如维多珠单抗)血清浓度；将白蛋白水平、体重和抗体清除率的测量结果组合，并且如果测量组合表明非响应者将受益于更高剂量，则向患者施用一剂或多剂更高剂量(例如，600mg)的维多珠单抗。在一些实施方案中，例如，如果输入到该方法中的较高剂量导致目标血清浓度>12.7μg/ml，例如，在稳态下，患者将受益于较高剂量。在一些实施方案中，如果输入到该方法中的较高剂量导致目标血清浓度>37.1μg/ml，例如，在开始用抗体治疗后第6周时，则患者将受益于较高剂量。在一些实施方案中，较高剂量以4周间隔施用。在一些实施方案中，较高剂量以8周间隔施用。

该方法可以进一步包括在第三或第四剂后(例如，在第一诱导剂量后约11周、约12周、约13周或约14周)，第二次测量抗α4β7抗体(例如维多珠单抗)的血清浓度，在例如，如果输入到该方法中的较高剂量导致目标血清浓度>12.7μg/ml，例如在稳态下，患者将受益于较高剂量的情况下，则继续高剂量治疗(例如，600mg)。在一些实施方案中，如果输入到方法中的较高剂量导致目标血清浓度>18.4μg/ml，例如，在开始用抗体治疗后第14周，例如在第三或第四剂后，则患者将受益于较高剂量。在一些实施方案中，较高剂量以4周间隔施用。在一些实施方案中，较高剂量以8周间隔施用。

该方法还可以包括测量内窥镜子评分。在内窥镜子评分小于约3、小于约2.5、小于约2、约0-2或小于或等于1下，可以继续抗α4β7抗体(例如维多珠单抗)治疗。

钙卫蛋白(一种中性粒细胞胞质蛋白)的粪便水平与溃疡性结肠炎的内窥镜活动相关。通常，未患病的受试者将具有小于50μg/g的粪便钙卫蛋白水平。粪便钙卫蛋白水平大于50但小于150μg/g可能是可能的粘膜炎症的征兆，而粪便钙卫蛋白水平大于150μg/g通常是活动性炎症的征兆。本文描述的方法可以进一步包括测量粪便钙卫蛋白浓度。较高水平的粪便钙卫蛋白与较高的复发风险相关。在粪便钙卫蛋白浓度小于1500μg/g、小于1250μg/g、小于1000μg/g、小于750μg/g、小于500μg/g、小于400μg/g、小于300μg/g、小于250μg/g、200-1200μg/g、350-800μg/g、300-1000μg/g、<50μg/g、<100μg/g、<150μg/g、<200μg/g、≤250-499μg/g、或500-900μg/g下，可以继续维多珠单抗治疗。或者，粪便钙卫蛋白可降低至小于基线或治疗前浓度的约50％、45％、40％、35％、30％、25％、20％、10-55％、10-30％、15-35％、15-45％或20-40％。粪便样品中的粪便钙卫蛋白可以使用PHICAL试剂盒(Calpro，Lysaker Norway)测量。

该疗法可进一步包括皮质类固醇逐渐减少的方案，例如在开始用抗α4β7抗体(例如维多珠单抗)治疗后约1至3周或约2周，但不超过10周开始。在一些实施方案中，非响应者IBD患者在诊断时或在基线时可能正在接受皮质类固醇的先前治疗，例如泼尼松，例如10至20mg/天、20至40mg/天、25至35mg/天或约30mg/天，或布地奈德，例如，2至12mg/天、3至10mg/天或约9mg/天。对于泼尼松，剂量可以以5mg/周的速率降低，直至达到10mg/天；对于小于或等于10mg/天的剂量，泼尼松的剂量以2.5mg/周的速率降低直至停药。对于布地奈德，剂量以每2周3mg的速率降低，直至停药。

药代动力学及药效动力学测定

抗α4β7抗体(例如维多珠单抗)浓度可通过本领域技术人员已知的任何适当方法测量。可以在下一剂之前一周或在上一剂之后三周测量抗α4β7抗体(例如维多珠单抗)的血清浓度。在一些实施方案中，在第一剂抗体后5周测量。在一些实施方案中，在第一剂抗体后13周测量。在一些实施方案中，在第一剂抗体后5周和13周测量。在一些实施方案中，基于血清浓度测量的结果调节抗体的剂量。可以增加剂量，例如，对于血清浓度小于50μg/ml(<50μg/ml)或小于30μg/ml(<30μg/ml)，例如增加剂量的量从例如300mg到600mg，和/或对于静脉内给药，缩短剂量之间的间隔，例如，从8周到4周。可以降低剂量，例如，对于血清浓度大于或等于90μg/ml(≥90μg/ml)，例如将剂量从600mg减少到300mg，和/或通过延长剂量之间的间隔，例如，从剂量之间的4周到8周。剂量调整可以结合血清浓度测量后一周的临床响应(例如，部分Mayo)评估进行。例如，可以向不满足临床响应(例如，部分Mayo)标准的患者施用增加的剂量，并向治疗后满足临床响应(例如，部分Mayo)标准的患者施用降低的剂量。

在一个方面中，维多珠单抗浓度通过夹心酶联免疫吸附测定(ELISA)测定法来测量。在另一方面中，使用药效动力学测定法，MAdCAM-1-Fc与表达α₄β₇的外周血细胞的结合受到抗α4β7抗体(例如维多珠单抗)的抑制被用作通过抗α4β7抗体(例如维多珠单抗)实现的α₄β₇饱和程度的量度。

在一个实施方案中，例如在血清中的抗α4β7抗体量可以在药代动力学测定中测量。固定相(例如微量滴定板、容器或珠子)用特异性结合抗α4β7抗体的试剂包被。使固定化试剂与患者样品(例如血清)接触，所述患者样品可以包含或不包含抗α4β7抗体。在温育和洗涤后，使与包被试剂复合的抗α4β7抗体与结合所捕获的抗体的试剂接触，并且可以例如使用诸如辣根过氧化物酶(HRP)的标记进行检测。结合试剂可以是抗人抗体，例如多克隆抗体或单克隆抗体，其结合抗α4β7抗体的Fc部分。加入HRP底物，例如3,3’,5,5’-四甲基联苯胺(TMB)，可以允许信号累积，例如显色，其可以例如以分光照相方式测量。

在一些实施方案中，包被试剂是抗独特型抗体，其特异性结合抗α4β7抗体，例如其可变区或其部分包含一个或多个CDR，例如重链CDR3，SEQ ID NO：6。用于测定的抗独特型抗α4β7抗体可以对抗α4β7抗体的α4β7整联蛋白结合部分具特异性并因此结合，但是对抗α4β7抗体的Fc部分不具有特异性，因此不结合抗α4β7抗体的Fc部分。用于测定的抗独特型抗α4β7抗体可以对抗α4β7抗体的重链和/或轻链的可变区具特异性并因此结合，例如选自由SEQID NO：1中的氨基酸20至140、SEQ ID NO：2的氨基酸20至131和SEQ ID NO：3的氨基酸21至132组成的群组。用于测定的抗独特型抗α4β7抗体可以对抗α4β7抗体的抗原结合片段具特异性并因此结合。抗独特型抗体可以使用抗α4β7抗体或其α4β7整联蛋白结合部分(例如包含一个或多个CDR的抗体片段)从免疫方法中分离，并且如通过重组方法分离或产生般使用。在一些实施方案中，针对包含重链CDR3，SEQ ID NO：6的免疫原产生抗独特型抗α4β7抗体。在其他实施方案中，针对包含抗α4β7抗体的重链和/或轻链的可变区的免疫原产生抗独特型抗α4β7抗体，例如选自由SEQ ID NO：1中的氨基酸20至140、SEQ ID NO：2的氨基酸20至131和SEQ ID NO：3的氨基酸21至132组成的群组。在一些实施方案中，抗独特型抗体为单克隆抗体。在一些实施方案中，将抗独特型抗体的scFv片段用于测定。在其他实施方案中，将完整的抗独特型抗体用于测定。

抗独特型抗α4β7抗体的产生可以按以下一般方法进行。用蛋白质(例如，抗α4β7抗体或者其α4β7整联蛋白结合部分或包含该部分的融合蛋白)将合适的动物(例如，小鼠、大鼠、兔或绵羊)免疫可以用制备成注射的免疫原进行，以例如用佐剂(例如完全弗氏佐剂)诱导响应。其他合适的佐剂包括TITERMAX佐剂(CYTRX Corporation，Los Angeles，CA)和明矾。小肽免疫原，例如包含CDR(例如重链的CDR3)的片段，可以与更大的分子(例如匙孔血蓝蛋白)连接。小鼠可以以多种方式注射，例如皮下、静脉内或肌内注射在多个部位，例如腹膜(i.p.)、尾巴根部或足垫，或多个部位的组合，例如i.p.和尾巴根部。加强注射可以包括相同或不同的免疫原，并且可以另外包括佐剂，例如不完全弗氏佐剂。通常，在需要单克隆抗体的情况下，通过将来自永生细胞系(例如，骨髓瘤细胞系，例如SP2/0、P3X63Ag8.653或异源骨髓瘤)的合适细胞与抗体产生细胞融合来产生杂交瘤。产生抗体的细胞可以从用目的抗原免疫的动物的外周血或优选脾或淋巴结获得。产生抗体的细胞可以使用合适的方法产生，例如，产生人抗体的细胞和异源骨髓瘤或三源杂交瘤的融合，或通过用Epstein Barr病毒感染使活化的人B细胞永生化。(参见，例如，美国专利号6,197,582(Trakht)；Niedbala等,Hybridoma,17:299-304(1998)；Zanella等,J Immunol Methods,156:205-215(1992)；Gustafsson等,Hum Antibodies Hybridomas,2:26-32(1991)。)可以使用选择性培养条件分离融合或永生化的抗体产生细胞(杂交瘤)，并通过有限稀释克隆。可以使用合适的测定法鉴定产生具有所需特异性的抗体的细胞(例如，ELISA(例如，利用固定在微量滴定孔上的免疫原)。

抗α4β7抗体或抗独特型抗α4β7抗体可以通过在活细胞(例如培养中的细胞)中表达编码每条链的核酸序列来产生。可利用多种宿主-表达载体系统来表达本发明的抗体分子。所述宿主-表达系统表示藉此相关编码序列可产生且随后纯化的载体，但也表示当用适当核苷酸编码序列转化或转染时可原位表达抗α4β7抗体的细胞。这些系统包括但不限于微生物，如用含有抗体编码序列的重组噬菌体DNA、质粒DNA或粘质粒DNA表达载体转化的细菌(例如大肠杆菌(E.coli)、枯草杆菌(B.subtilis))；用含有抗体编码序列的重组酵母表达载体转化的酵母(例如酵母(Saccharomyces)、毕赤酵母(Pichia))；用含有抗体编码序列的重组病毒表达载体(例如杆状病毒)感染的昆虫细胞系统；用重组病毒表达载体(例如花椰菜嵌纹病毒CaMV、烟草嵌纹病毒TMV)感染或用含有抗体编码序列的重组质粒表达载体(例如Ti质粒)转化的植物细胞系统；或具有含有源自哺乳动物细胞的基因组(例如金属硫蛋白启动子)或哺乳动物病毒(例如腺病毒晚期启动子、痘疮病毒7.5K启动子)的启动子的重组表达构建体的哺乳动物细胞系统(例如COS、CHO、BHK、293、3T3、NS0细胞)。例如，与载体(如来自人巨大细胞病毒的主要中早期基因启动子元件)联合的哺乳动物细胞(如中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell，CHO))是抗体的有效表达系统(Foecking等.,Gene45:101(1986)；Cockett等.,Bio/Technology8:2(1990))。

在细菌系统中，许多表达载体宜视所表达的抗体分子的预期用途来选择。例如，当待产生大量所述蛋白质以产生抗体分子的医药组合物时，指导表达高含量的易于纯化的融合蛋白产物的载体可为合乎需要的。所述载体包括但不限于大肠杆菌表达载体pUR278(Ruther等.,EMBO J.2:1791(1983))，其中抗体编码序列可个别地与lac Z编码区同框连接至载体中以便产生融合蛋白；pIN载体(Inouye&Inouye,Nucleic Acids Res.13:3101-3109(1985)；Van Heeke&Schuster,J.Biol.Chem.24:5503-5509(1989))等。pGEX载体也可以用于将外来多肽表达为与谷胱甘肽S-转移酶(GST)的融合蛋白。一般来讲，此类融合蛋白是可溶性的，且可易于通过吸附及结合于基质谷胱甘肽-琼脂糖珠粒，随后在游离谷胱甘肽存在下洗脱而从溶解细胞纯化。pGEX载体经设计以包括凝血酶或因子Xa蛋白酶裂解位点，以使得可以从GST部分释放克隆的目标基因产物。在昆虫系统中，使用加洲苜蓿夜蛾核多角体病毒(Autographa californica nuclear polyhedrosis virus，AcNPV)作为表达外来基因的载体。病毒生长于草地粘虫(Spodoptera frugiperda)细胞中。可将抗体编码序列个别地克隆至病毒的非必需区域(例如多角体蛋白基因)中且置于AcNPV启动子(例如多角体蛋白启动子)的控制下。

在其他实施方案中，包被试剂是抗体的配体，例如MAdCAM或其α4β7整联蛋白结合片段或包含与非MAdCAM蛋白融合的MAdCAM的α4β7-整联蛋白结合片段的融合蛋白，所述非MAdCAM蛋白例如免疫球蛋白G恒定结构域。MAdCAM试剂和融合蛋白的实例描述于PCT公开WO9624673和美国专利号7,803,904中，其全部教导通过引用并入本文。

HAHA测定

人抗抗α4β7抗体活性(HAHA)可以通过检测和/或测量对抗α4β7抗体具特异性的抗药物抗体(ADA)或抗体(抗维多珠单抗抗体)来测定。存在许多选择，例如，使用筛选和滴定测定、确认测定和中和测定。可以在稀释下首先在筛选样品中测量血清样品，例如1：5和1:50。可以确认阳性样品的特异性，滴定并检查中和抗α4β7抗体的能力，例如维多珠单抗活性。

筛选测定可以使用桥接ELISA，其中将板用抗α4β7抗体包被。固定化的抗α4β7抗体捕获测试样品中的ADA，ADA与缀合生物素的抗α4β7抗体结合，生物素用辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉抗生物素蛋白标记，然后用酶底物如TMB检测。阳性显色，例如在酶标仪(例如Spectramax)中用分析软件(例如SOFTMAX Pro3.1.2)测量，表明样品中存在ADA。例如，在基于生物素-抗生物素蛋白-HRP的桥接测定中，可以通过使用正常人血清样品作为阴性对照来确定测定切点。10个阴性对照血清的平均吸光度值可以加上阴性对照的标准偏差的1.65倍以确定切点。因此，切点可以允许约5％的假阳性率。在1μg/mL维多珠单抗的存在下，低滴度响应受到干扰，使得它们可能变得不可检测，但是在维多珠单抗浓度大于1μg/mL时可检测到高水平的免疫原性。例如，虽然标准测定灵敏度可以是0.44ng/ml，但在0.5μg/ml维多珠单抗存在下，该测定的灵敏度可为180ng/ml。出于这些原因，血清样品可以在最终剂量的抗α4β7抗体后大于4周、大于8周、大于12周或大于16周取得。在前一剂量和取样之间的时间段较长的情况下，血清药物水平通常可低于干扰水平。

另一种测定方法使用链霉抗生物素蛋白包被的板、用于桥的固定侧的锚定于链霉抗生物素蛋白包被的容器、珠子或微量滴定板的生物素标记的抗α4β7抗体和用于桥的另一侧的重金属，例如钌、锇或铼标记的(例如，通过磺基标记)抗α4β7抗体。桥接复合物可以通过在溶液之间或溶液中逐步添加和洗涤而在板上构建，桥的两侧接触稀释的血清样品，然后转移到板上。使用该方法的测定的实例具有3.90ng/ml抗-抗α4β7抗体的灵敏度。通过电化学发光(ECL)，例如在Meso Scale Discovery Sector Imager 6000(Rockville，MD)中检测重金属标记的桥复合物(例如钌标记的复合物)可能比HRP方法更灵敏和/或对血清中抗α4β7抗体的量具有更高的耐受性。因此，在血清药物水平降低后，不需要等待延迟的样品。在一些实施方案中，用酸(例如乙酸或低pH甘氨酸)预处理血清样品以在与桥接的抗α4β7抗体接触之前从患者衍生的抗-抗α4β7抗体释放抗α4β7抗体，可以减少血清中药物的干扰。例如，虽然标准测定灵敏度可以是3.90ng/ml，但在血清中存在5μg/ml维多利珠单抗下，该测定的灵敏度可为10ng/ml。

在一个实施方案中，检测来自患者的血清样品中的抗维多珠单抗抗体的测定包括通过标准稀释因子稀释血清，例如1：5、1：25、1：50和/或1：125；用乙酸处理；将酸处理的稀释样品与包含高pH试剂的测定组合物(例如用于中和酸的高浓度TRIS缓冲液，生物素标记的维多珠单抗和钌标记的维多珠单抗)合并一段时间，足以在维多珠单抗的两个标记形式之间形成具有血清衍生的抗维多珠单抗抗体的桥；将复合物转移到链霉抗生物素蛋白包被的板上；洗涤板使得仅存在与抗体桥复合的钌。结合的钌标记的复合物的检测并在酶标仪中通过电化学发光测量样品可以通过添加诸如三丙胺的读取溶液并施加电压以刺激钌标记经由抗体桥复合到板上来实现。

在初始筛选测定后，可以在使用过量未标记的抗α4β7抗体的证实测定中进一步测试样品以证明特异性。可以进一步评估证实的阳性样品的HAHA中和抗α4β7抗体(例如维多珠单抗)与细胞结合的能力。基于竞争性流式细胞仪的测定被设计用于测定免疫血清抑制标记的维多珠单抗与α₄β₇整联蛋白表达细胞系RPMI8866结合的能力，并通过流式细胞术检测。

结果可以表明免疫原性状态的类别：阴性：没有阳性HAHA样品；阳性：至少1个阳性HAHA样品；瞬时阳性：至少1个阳性HAHA样品并没有连续阳性HAHA样品；持续阳性：至少2个或更多个连续阳性HAHA样品。阴性患者可能对抗α4β7抗体作出响应并且可以继续用抗体治疗。持续阳性患者可能具有高抗α4β7抗体清除率，并且可能对抗α4β7抗体治疗没有响应。阳性患者可能具有高抗α4β7抗体清除率，并且可能对抗α4β7抗体没有响应。在另一剂抗α4β7抗体后2、3、4、5或6周，阳性患者可以具有另外的血清样品，以确定他们是持续阳性还是瞬时阳性。瞬时阳性患者可能对抗α4β7抗体治疗作出响应，并且可继续治疗这些患者。

还可以测定免疫原性水平的滴度。滴度类别包括≥5(低)、≥50、≥125、≥625和≥3125(高)。阳性样品中滴度高的患者可能具有高抗α4β7抗体清除率，并且可能对抗α4β7抗体治疗没有响应。阳性样品中滴度低的患者可能对抗α4β7抗体治疗作出响应。

通过参照以下实施例，将获得对本发明的更全面理解。然而，它们不应解释为限制本发明的范围。所有文献和专利引用都以引用的方式并入本文。

实施例

实施例1.

来自3期维多珠单抗临床试验(GEMINII)的数据包括第6周结果，部分Mayo评分(PMS)，临床响应(CR)和临床缓解(RM)，个体特异性协变量和基于先前群体药代动力学(PK)分析的个体预测的血浆维多珠单抗浓度和清除率(Rosario等2015AlimentaryPharmacology&Therapeutics 42(2):188-202)。本研究中有限的剂量范围信息产生了关于暴露-响应(E-R)关系的混淆因果推断的可能性，因此，进行了基于倾向评分的病例匹配分析。

对于每个清除率四分位数，使用所有测量的协变量作为预测因子，将逻辑倾向评分模型拟合至治疗受试者和所有对照的集合。然后基于拟合的倾向评分获得对倾向评分分布的标准偏差的稳健估计。

对于清除率四分位数中的每个受试者，在上一步骤中获得的标准偏差的稳健估计值的0.2倍的厚度内从对照组中的受试者中随机选择(替换)匹配。如果对于特定治疗的受试者，在厚度内没有对照，则治疗的受试者保持不匹配并且从结果分析中排除。

然后将前一步骤重复1,000次，并且对于每个候选匹配，计算所有协变量主效应和双向相互作用的绝对标准化均值差异(ASDM)。然后将匹配对照的最佳子集识别为在所有主效应中满足ASDM<0.2的交互效应中具有最低最大ASDM的候选匹配。鉴于病例匹配结果，将清除率四分位数和预测的第6周和稳态谷维多珠单抗浓度与不匹配和病例匹配数据的结果进行比较。

结果：所有暴露度量和每个结果的关系在原始数据的四分位数分析中都很明显，尽管第6周PMS和CR终点的关系比RM更稳健。在针对潜在混淆进行病例匹配调整后，PMS和CR终点仍然存在明显的关系。维多珠单抗清除率>0.14L/天的个体与疗效结果降低相关(PMS降低<2单位，临床响应优势率<4)。鉴于此清除率切点为0.14L/天以及批准的维多珠单抗静脉内给药方案，计算得出目标稳态维多珠单抗谷浓度>12.7μg/mL。使用公布的群体PK模型进行模拟以评估策略来1)鉴定高清除率个体，和2)推荐实现稳态靶标所需的剂量调整，两者均基于本研究中的第5周血浆维多珠单抗浓度。

估计的E-R关系将为评估剂量个体化对具有高清除率的UC患者的临床结果的影响的未来研究的设计提供信息。

实施例2：在剂量计算器算法中实现的方法

病例匹配暴露和清除率-响应分析提供了目标清除率值以鉴定高清除率个体，以及目标维多珠单抗谷浓度以实现未来给药方案(第14周和稳态)。

给出患者基线协变量(体重、白蛋白)、维多珠单抗给药史和第5周和第13周观察到的血浆维多珠单抗浓度的输入，剂量计算器算法被设计为针对个体患者选择最佳方案。该算法基于先前定义的群体药代动力学模型(Rosario等2015,Alimentary Pharmacology&Therapeutics 42(2):188–202。)。

该方法基于MAP(最大后验)贝叶斯估计方法(“Bayesian Analysis-MITOpenCourseWare,”Probabilistic Modeling and Bayesian Analysis,Latham,B.和Rudin,C.,MIT课程15.097注释,2012)，目标是在给出上述输入和先前的群体药代动力学模型的情况下估计个体患者清除率。然后，该算法应用个体患者信息和清除率估计来模拟每个候选给药方案的预期结果。最佳方案是达到至少等于目标维多珠单抗浓度的谷浓度，同时最大化给药间隔的方案。

实施例3：改良的维多珠单抗剂量对中度至严重活动性溃疡性结肠炎的非响应者的治疗结果的影响

使用4期，开放标签，多中心研究来研究在30周的治疗期内，与维多珠单抗的静脉内标准给药相比，维多珠单抗的静脉内改良给药的效力和安全性。该研究将招募患有中度至严重活动性溃疡性结肠炎(UC)的成年受试者。将招募约200名受试者以使多达100名具有高维多珠单抗药物清除率的非响应受试者随机化。

该研究包括28天的筛查期，6周的引入期和24周的随机治疗期，随后进行为期18周的随访安全性访视和在最后一剂研究药物后6个月通过电话进行长期随访(LTFU)安全性调查。

所有符合条件的受试者将在第1天和第2周(引入期)静脉内接受维多珠单抗300mg的诱导治疗。在第5周被评估为具有高维多珠单抗清除率(>0.14L/天，或基于预定义的第5周血清维多珠单抗浓度阈值(<50μg/mL))并在第6周作为非响应者(基于部分Mayo评分)的受试者将被随机静脉内接受标准或改良剂量的维多珠单抗。基于第6周的部分Mayo评分作为非响应者且在第5周被评估为具有高维多珠单抗清除率(>0.14L/天，或满足<50μg/mL血清维多珠单抗浓度阈值)的受试者将继续进行在第6周以1：1的比例随机化，以静脉内接受剂量改良或标准维多珠单抗治疗。对于随机化为改良剂量组的受试者，可以使用剂量计算器算法来选择方案。

维多珠单抗静脉内标准治疗是每8周施用300mg(第6、14和22周)。维多珠单抗静脉内改良治疗在第6周，根据受试者的第5周血清维多珠单抗浓度，将随机到剂量优化组的所有受试者分配至方案A或方案B(下文)。血清维多珠单抗浓度<50μg/mL和≥30μg/mL的受试者将被分配给方案A，血清维多珠单抗浓度<30μg/mL的受试者将被分配给方案B：

方案A：维多珠单抗静脉内600mg(第6周)和300mg每4周一次(第10、14、18、22和26周)，或

方案B：维多珠单抗静脉内600mg

(第6周)和600mg每4周一次(第10、14、18、22和26周)。

在第14周及以后，除非受试者之前最近的血清维多珠单抗浓度>90μg/mL(例如，第14周之前的第13周PK取样)，否则给药将如前所述继续进行。

或者，在第6周通过部分Mayo评分作为非响应者的患者可以被施用600mg抗体，然后可以使用剂量计算器算法来选择以最长间隔在第10周施用的剂量(例如，0、300、或600mg)，这将导致达到目标暴露的最高概率。在第14周及以后，给药将基于来自第13周血清维多珠单抗浓度，给药史和基线协变量信息的更新的维多珠单抗清除率估计，使用基于模型的算法以实现12.7μg/mL的稳态。对于改良剂量组中的受试者，该算法将基于在具有最长间隔的频率下达到或维持12.7μg/mL的稳态目标暴露的最高概率，选择以下4种方案中的1种：

维多珠单抗静脉内300mg每8周一次(第14周和第33周)

维多珠单抗静脉内300mg每4周一次(第14、18、22和26周)

维多珠单抗静脉内600mg每8周一次(第14周和第22周)

维多珠单抗静脉内600mg每4周一次(第14、18、22和26周)。

该研究的主要目的是在第6周作为非响应者的具有高维多珠单抗清除率的溃疡性结肠炎患者中，与第30周的标准维多珠单抗静脉内给药方案相比，确定维多珠单抗静脉内剂量改良对粘膜愈合的影响(Mayo内窥镜子评分在第30周时≤1点)。次要终点将包括：

·达到临床缓解的受试者比例，其中临床缓解被定义为在第30周时完全Mayo评分≤2点，并且没有个体子评分>1点。

·达到临床响应的受试者比例，其中临床响应定义为在第30周时完全Mayo评分下降≥3分，从基线(第1天)下降≥30％，同时直肠出血子评分下降≥1点或绝对直肠出血子评分下降≤1点。

·达到临床响应的受试者比例(基于部分Mayo评分)，其定义为在第14周时部分Mayo评分下降≥2点，从基线下降≥25％，同时直肠出血子评分下降≥1点或绝对直肠出血子评分下降≤1点。

·在第30周，在基线使用口服皮质类固醇并且已经停用皮质类固醇并且处于临床缓解的受试者的比例。

Claims (63)

1.一种治疗维多珠单抗非响应者的方法，所述方法包括向所述非响应者静脉内施用600mg剂量的维多珠单抗。

2.根据权利要求1所述的方法，其中维多珠单抗的下一剂量和后续剂量是300mg。

3.根据权利要求1所述的方法，其中施用两剂或更多剂的所述600mg剂量，并且所述剂量之间的间隔为2至8周。

4.根据权利要求2或3所述的方法，其中所述剂量以四周间隔施用。

5.根据权利要求3或4所述的方法，其中施用所述600mg剂量直至临床响应和/或缓解。

6.根据权利要求3或4所述的方法，其中施用所述600mg剂量直至粘膜愈合。

7.根据权利要求3或4所述的方法，其中施用所述600mg剂量直至维多珠单抗的谷血清浓度>12μg/ml。

8.根据权利要求3或4所述的方法，其中施用所述600mg剂量直至维多珠单抗的血清浓度>90μg/ml。

9.根据权利要求7或8所述的方法，还包括如果所述维多珠单抗的谷浓度>12μg/ml或所述维多珠单抗的血清浓度>90μg/ml，则将所述剂量减少至300mg。

10.根据权利要求4或9所述的方法，还包括如果所述维多珠单抗的谷浓度>12μg/ml或所述维多珠单抗的血清浓度>90μg/ml，则将所述给药减少至8周间隔。

11.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中所述维多珠单抗非响应者是患有炎症性肠病的人类患者。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述炎症性肠病为溃疡性结肠炎。

13.根据权利要求11或12所述的方法，其中所述治疗导致粘膜愈合。

14.根据权利要求11至13中任一项所述的方法，其中所述治疗导致临床响应和/或临床缓解。

15.根据权利要求11至14中任一项所述的方法，其中所述治疗导致皮质类固醇使用的中断。

16.根据权利要求11至15中任一项所述的方法，其中所述患者对免疫调节剂、皮质类固醇或TNFα拮抗剂中的至少一种响应不足、失去响应或不耐受。

17.一种治疗维多珠单抗非响应者的方法，所述方法包括以下步骤：

a)测量患者中维多珠单抗的浓度、体重和白蛋白水平，其中所述患者在至少两周前被施用维多珠单抗的诱导期给药方案，

b)选择在步骤a)中其测量表明高清除率的患者；以及

c)向所选患者施用600mg维多珠单抗，从而治疗IBD。

18.根据权利要求17所述的方法，其中所述维多珠单抗的浓度是血清浓度。

19.根据权利要求18所述的方法，其中所述血清浓度是谷血清浓度。

20.根据权利要求19所述的方法，其中如果所述血清浓度小于13μg/ml，则选择所述患者。

21.根据权利要求17所述的方法，其中所述浓度测量值用于计算清除率。

22.根据权利要求21所述的方法，其中如果所述清除率大于0.14L/天，则选择所述患者。

23.根据权利要求18所述的方法，其中如果所述血清浓度<50μg/mL，则选择所述患者。

24.根据权利要求17至23中任一项所述的方法，其中所述维多珠单抗非响应者是患有炎症性肠病的人类患者。

25.根据权利要求24所述的方法，其中所述炎症性肠病为溃疡性结肠炎。

26.根据权利要求17至25中任一项所述的方法，其中所述患者具有粘膜愈合。

27.一种治疗患有IBD的维多珠单抗非响应者的方法，所述方法包括以下步骤：

a)向患有IBD的维多珠单抗非响应者施用两剂维多珠单抗，其中所述第二剂在所述第一剂施用给所述维多珠单抗非相应者后约两周施用；

b)选择所述维多珠单抗非响应者，其中所述维多珠单抗非响应者具有在所述第二剂后至少两周测定的小于13μg/ml的血清浓度；以及

c)向所选患者施用600mg维多珠单抗，从而治疗患有IBD的患者。

28.根据权利要求27所述的方法，其中在所述第一剂维多珠单抗后六周施用600mg。

29.一种治疗患有IBD的维多珠单抗非响应者的方法，所述方法包括以下步骤：

a)向患有IBD的维多珠单抗非响应者施用两剂维多珠单抗，其中所述第二剂在所述第一剂施用给所述维多珠单抗非相应者后约两周施用；

b)等待约三至四周的一段时间；

c)测量所述患者的维多珠单抗血清浓度；以及

d)如果所述患者的血清浓度低于13μg/ml，则向所述患者施用一剂或多剂600mg剂量的维多珠单抗。

30.根据权利要求17或29所述的方法，其中所述患者的血清浓度为1至13μg/ml。

31.根据权利要求18、19、27或29中任一项所述的方法，其中所述维多珠单抗血清浓度通过夹心ELISA测定法测量。

32.一种鉴定维多珠单抗非响应者的方法，所述方法包括以下步骤：

a)测量从患有IBD并且在过去四个月内接受至少两剂维多珠单抗的患者获得的血清样品中的维多珠单抗浓度；以及

b)如果样品中的血清浓度低于13μg/ml，则将所述患者鉴定为维多珠单抗非响应者。

33.根据权利要求32所述的方法，其中所述患者在过去三个月内已接受至少两剂维多珠单抗。

34.根据权利要求32所述的方法，其中所述患者在过去两个月内已接受至少两剂维多珠单抗。

35.一种鉴定维多珠单抗非响应者用于以更高剂量继续维多珠单抗治疗的方法，所述方法包括以下步骤：

a)测量从患有IBD并在过去四个月内被施用至少两剂维多珠单抗的患者获得的生物样品中的维多珠单抗的清除率；以及

b)如果所述患者的清除率大于0.14L/天或如果所述血清浓度<50μg/mL，则鉴定所述患者用于以更高剂量继续维多珠单抗治疗。

36.根据权利要求35所述的方法，还包括在所述测量后一周获得部分Mayo评分，并且如果所述评分未指示临床响应，则鉴定所述患者用于以更高剂量继续维多珠单抗治疗。

37.根据权利要求35所述的方法，还包括测量抗维多珠单抗抗体。

38.根据权利要求35所述的方法，还包括测量白蛋白浓度。

39.根据权利要求38所述的方法，还包括测量体重。

40.根据权利要求39所述的方法，其中白蛋白浓度<3.2g/dL进一步鉴定所述患者用于以更高剂量继续维多珠单抗治疗。

41.一种治疗维多珠单抗非响应者的方法，所述方法包括以下步骤：

a)测量从患有IBD并在过去四个月内被施用至少两剂300mg剂量的维多珠单抗的患者获得的生物样品中的维多珠单抗的清除率；以及

b)如果所述患者的清除率大于0.14L/天，则以600mg剂量施用维多珠单抗。

42.根据权利要求41所述的方法，还包括测量抗维多珠单抗抗体。

43.根据权利要求41所述的方法，还包括测量白蛋白浓度。

44.根据权利要求43所述的方法，还包括测量体重。

45.根据权利要求44所述的方法，其中所述白蛋白浓度<3.2g/dL。

46.一种治疗维多珠单抗非响应者的方法，所述方法包括以下步骤：

a)测量从患有IBD并在过去五个月内被施用至少两剂300mg剂量的维多珠单抗的患者获得的血清样品中的维多珠单抗的浓度；以及

b)如果所述维多珠单抗的血清浓度<50μg/ml，则以600mg剂量施用维多珠单抗。

47.根据权利要求46所述的方法，还包括在所述测量后一周获得部分Mayo评分，其中所述部分Mayo评分不指示临床响应。

48.根据权利要求46或47所述的方法，其中600mg剂量是在所述第一剂维多珠单抗后6周。

49.根据权利要求46或47所述的方法，其中所述维多珠单抗的血清浓度≥30μg/ml且<50μg/ml。

50.根据权利要求49所述的方法，还包括在所述600mg剂量后4周的300mg维多珠单抗的后续剂量。

51.根据权利要求46至48中任一项所述的方法，还包括以四周间隔施用额外一剂或多剂600mg维多珠单抗。

52.根据权利要求50或51所述的方法，还包括以四周间隔施用额外一剂或多剂300mg维多珠单抗。

53.根据权利要求50至52中任一项所述的方法，还包括在上一剂后三周测量所述维多珠单抗的血清浓度。

54.根据权利要求53所述的方法，还包括如果所述浓度>90μg/ml则减少所述剂量，其中将所述600mg剂量减少至300mg或其中所述300mg剂量以8周间隔施用。

55.根据权利要求46至54中任一项所述的方法，还包括测量抗维多珠单抗抗体。

56.根据权利要求55所述的方法，还包括测量白蛋白浓度。

57.根据权利要求56所述的方法，还包括测量体重。

58.根据权利要求57所述的方法，其中白蛋白浓度<3.2g/dL进一步鉴定所述患者用于以更高剂量继续维多珠单抗治疗。

59.根据权利要求46至58中任一项所述的方法，其中所述炎症性肠病是溃疡性结肠炎。

60.根据权利要求46至59中任一项所述的方法，其中所述治疗导致粘膜愈合。

61.根据权利要求46至60中任一项所述的方法，其中所述治疗导致临床响应和/或临床缓解。

62.根据权利要求46至61中任一项所述的方法，其中所述治疗导致皮质类固醇使用的中断。

63.根据权利要求46至62中任一项所述的方法，其中所述患者对免疫调节剂、皮质类固醇或TNFα拮抗剂中的至少一种响应不足，失去响应或不耐受。