CN108130281A - 土曲霉ddt98801及其筛选方法和在降解滴滴涕中的应用 - Google Patents

土曲霉ddt98801及其筛选方法和在降解滴滴涕中的应用 Download PDF

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Abstract

一种土曲霉菌株，命名为土曲霉(Aspergillus terreus)DDT98801，于2017年11月22日保藏于武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No：M 2017710。选育方法由富集、分离纯化、纯化菌株复筛步骤组成。土曲霉DDT98801可以高效降解土壤或水中污染的滴滴涕，在水中滴滴涕含量高达20mg/L时，该菌对其降解率在第11天时可达到79％，土壤中滴滴涕含量为10mg/kg时，在第60天，滴滴涕的降解率可达到72％。用于对南方酸性土壤和水中滴滴涕污染的处理，随着处理时间延长，最终可达到国家环境质量标准，不会造成对土壤和水质环境的二次污染，可用于对水和土壤中滴滴涕污染的降解。

Description

土曲霉DDT98801及其筛选方法和在降解滴滴涕中的应用
技术领域
本发明属于微生物应用技术领域，具体涉及一种可用于降解土壤和水中农药残留滴滴涕的土曲霉菌株。
背景技术
滴滴涕，化学名为双对氯苯基三氯乙烷[1,1,1-trichloro-2,2-bis(p-chlorophenyl)ethane]，是一种氯代衍生物，属于典型的有机氯农药，主要用作杀虫剂，杀虫谱广、残效长，尤其对棉铃虫、粗虫和红铃虫效果显著，广泛在棉花和果蔬上使用。但滴滴涕在自然条件下极不易分解，在土壤中的残留期限为4～30年，难溶于水，耐热耐酸，具有脂溶性、生物毒性和生物累积性等特点，因此滴滴涕在我国已经禁用多年，但滴滴涕在土壤和水系等环境中广泛存在，在空气、土壤、河流、地下水、植物和野生动物体内都能够检测到，且残留浓度仍然居高不下，远超过国家相应的污染标准。滴滴涕污染不仅对土壤和水系生态系统造成不良影响，而且已经通过污染土壤和水系进入到多种农产品中，从而严重影响着这些农产品的品质和人类的健康。在中国以及全球范围内，滴滴涕污染场地的污染处理已经受到广泛关注并已经尝试了多种治理方法和技术。
目前对滴滴涕污染土壤处理技术包括物理、化学和生物方法。其中物理、化学成本高，易造成二次污染，对土壤等有干扰和破坏效应。生物处理技术具有成本低、效率高、一般很少造成二次污染、生态恢复性好等优点，是目前最具潜力的土壤污染修复技术之一，受到越来越多人的重视。利用生物方法修复滴滴涕污染土壤及水体时，所接种的微生物菌株或菌剂是影响滴滴涕在污染土壤及水体环境中降解效率的主要因素。但是，能够在滴滴涕污染的酸性土壤及水体中快速生长并将环境中的滴滴涕农药作为自身生长的能源物质，最终转化为低毒的小分子物质或无害的无机物的微生物菌种筛选难度大，效率低，一般很难获得降解效率高、彻底降解DDD的优良菌株。
目前，国内外报道或专利提及了多株滴滴涕降解菌。如谢慧等人公开了一株滴滴涕和1,1-双(对氯苯基)-2,2-二氯乙烯降解菌DXZ9(申请公布号为CN103667146A)，该菌在pH为7、滴滴涕浓度为10μg/mL时，对滴滴涕的降解效率达到54.99％；孙丽娜等人公开了一种滴滴涕降解菌及其利用滴滴涕原位修复污染土壤方法(申请公布号为CN105802884A)，可以在短时间内将污染土壤中滴滴涕浓度降低。这些都为滴滴涕污染土壤修复提供了方法，但是这些菌株对滴滴涕降解率低，对污染环境适应性差，对酸性及高浓度滴滴涕污染场地不适用，而且降解不彻底，降解产物多含有比滴滴涕危害毒性大的1,1-双(对氯苯基)-2,2-二氯乙烯(DDE)和1,1-双(对氯苯基)-2,2-二氯乙烷(DDD)等产物，不能将滴滴涕完全降解。目前尚无适用于我国南方酸性土壤或水环境中滴滴涕污染的相关微生物降解菌株的报道和专利申请。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于克服上述现有技术治理滴滴涕污染的水和土壤方法的缺点，提供一种降解效率高、时间短的土曲霉DDT98801菌株。
本发明所要解决的另一个技术问题在于为土曲霉DDT98801提供一种筛选方法。
本发明所要解决的还有一个技术问题在于为土曲霉DDT98801提供一种新用途。
解决上述技术问题所采用的技术方案是：土曲霉菌株，命名为土曲霉(Aspergillus terreus)DDT98801，已于2017年11月22日保藏于武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No：M2017710，其ITS-5.8S rDNA序列如下：
上述土曲霉DDT98801的选育方法由下述步骤组成：
(1)富集
称取中国浙江省嘉兴市华斌农业基地有机氯农药污染的酸性土壤加入到富集液体培养基中，有机氯农药污染的酸性土壤与富集液体培养基的质量体积比为1:10，在160r/min、28℃恒温摇床中振荡120小时培养，得到培养液；
上述富集液体培养基是在每升无机盐液体培养基中添加15mg滴滴涕，其中无机盐液体培养基是每升蒸馏水中含NH4NO3 1.0g/L、KH2PO4 1.0g/L、K2HPO4 1.0g/L、CaCl20.01g/L、FeSO4 0.1g/L、MgSO4 0.5g/L，pH值7.0。
(2)分离纯化
将步骤(1)得到的培养液用无菌水进行梯度稀释，依次得到稀释101、102、103、104、105、106倍的菌悬液，用移液枪吸取100μL不同稀释度的菌悬液用涂布棒分别涂布于富集固体培养基上，富集固体培养基中含20g/L琼脂，每个稀释度的菌悬液进行三个重复，放于恒温培养箱中28℃培养，用接种环挑取生长快速的真菌菌落于新鲜的PDA培养基平板上进行划线分离，重复操作，反复分离培养，直至得到纯化的菌株，根据纯化菌株的菌落形态、生长速度、显微形态将相同的菌株合并。
(3)纯化菌株复筛
用接种环挑取所分离纯化出的真菌划线于含20mg/L滴滴涕的无机盐固体培养基上，无机盐固体培养基中含有20g/L琼脂，于28℃的恒温培养箱中培养5～7天，挑选在含滴滴涕的无机盐固体培养基生长良好的真菌保存。
(4)真菌的形态学鉴定
挑选上述复筛菌株中生长良好的多株真菌用插片法分别进行培养，并在不同的时间段取样制片，在显微镜下观察并记录各真菌菌丝及孢子的形态。
按照土曲霉菌的典型形态学特征进行初选。典型土曲霉菌的菌落呈土黄色，边缘白色，中央部分绒毛状且稍凸起，表面呈细密放射状沟纹，背面暗黄色。而且随着培养时间的延长，绒毛状凸起逐渐变平，可形成粉末状孢子；分生孢子梗较短，无色，产孢结构双层，生于半球形顶囊上半部，分生孢子头开始为球形，继而呈紧密的柱形，分生孢子球形，直径为2～2.5μm。分别收集具有典型土曲霉菌形态学特征的真菌菌株进行分子生物学鉴定。
(5)真菌的分子生物学鉴定
将(4)中的真菌分别进行基因组提取，并对其ITS-5.8S rDNA序列扩增，对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳分析后，切取目的片段凝胶进行产物分别纯化回收，将回收的扩增产物送生工生物工程(上海)股份有限公司测序，并对测序结果进行同源性比较与遗传进化分析，对所获得的真菌分别进行种属鉴定。
其中一种真菌菌株经分子生物学和形态学联合鉴定：土曲霉菌株，命名为土曲霉(Aspergillus terreus)DDT98801，于2017年11月22日保藏于武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No：M 2017710。
本发明土曲霉DDT98801在含滴滴涕污水处理中的用途。
其使用方法为：将土曲霉DDT98801制备成含菌量为0.8～2亿个菌/g的菌剂，在含滴滴涕污水中接入土曲霉DDT98801菌剂，接种量为0.5wt％～5wt％，搅拌，调pH为4.5～6.5，25～30℃处理20～30天，至达到国家环境质量标准GB/3838-2002≤0.001mg/L。
在含滴滴涕污水处理中用途的使用方法中，将土曲霉DDT98801制备成含菌量为0.8～2亿个菌/g的菌剂，在含滴滴涕污水中接入土曲霉DDT98801菌剂，接种量最佳为2.5wt％，搅拌，调pH为4.5～6.5，25～30℃，按照场地滴滴涕污染的不同程度，处理20～30天，至水中滴滴涕含量达到GB/3838-2002≤0.001mg/L国家环境质量标准。
本发明土曲霉DDT98801在含滴滴涕污染土壤处理中的用途。
其使用方法为：将土曲霉DDT98801制备成含菌量为0.8～2亿个菌/g的菌剂，在含滴滴涕土壤中接入土曲霉DDT98801菌剂，污染土壤中滴滴涕含量为10mg/kg～20mg/kg时，土曲霉DDT98801接种量为100～180g/kg土壤，污染土壤中加入表面活性剂鼠李糖脂，加入量为120～180mg/kg土壤；污染土壤中滴滴涕含量为10mg/kg以下时，土曲霉DDT98801接种量为50～100g/kg土壤，混匀，再加入尿素、K2HPO4、有机肥料，使得土壤中C：N：P元素的质量比达到100：10：1，加水至土壤的含水率达15％～30％，混匀，调pH为4.5～6.5，将处理土壤用塑料薄膜覆盖，通气，间隔补水以维持土壤的含水率，25～28℃处理50～90天，至土壤中的滴滴涕含量达到GB 15618-2009滴滴涕≦0.1mg/kg的国家环境质量标准。
在含滴滴涕污染土壤中用途的使用方法中，将土曲霉DDT98801按实验室或生产常规方法制备获得的曲霉菌DDT98801菌剂，含菌量为0.8～2亿菌/g，在含滴滴涕土壤中接入土曲霉DDT98801菌剂，污染土壤中滴滴涕含量为10mg/kg～20mg/kg时，土曲霉DDT98801接种量为120g/kg土壤，污染土壤中加入表面活性剂鼠李糖脂，加入量为150mg/kg土壤；污染土壤中滴滴涕含量为10mg/kg以下时，土曲霉DDT98801接种量最佳为75g/kg土壤，混匀，再加入尿素、K2HPO4、有机肥料，使得土壤中C：N：P元素的质量比达到100：10：1，加水至土壤的含水率达15％～30％，混匀，调pH为4.5～6.5，将处理土壤用塑料薄膜覆盖，通气，间隔补水以维持土壤的含水率，25～28℃处理50～90天，至土壤中的滴滴涕含量达到GB 15618-2009滴滴涕≦0.1mg/kg的国家环境质量标准。
本发明的有益效果如下：
土曲霉DDT98801在含滴滴涕污水处理中的用途，土曲霉DDT98801可以高效降解土壤或水中污染的滴滴涕，在水中滴滴涕含量高达20mg/L时，该菌对其降解率在第11天时可达到79％，土壤中滴滴涕含量为10mg/kg时，在第60天，滴滴涕的降解率可达到72％。用于对南方酸性土壤和水中滴滴涕污染的处理，随着处理时间延长，最终可达到国家环境质量标准，不会造成对土壤和水质环境的二次污染，可用于对水和土壤中滴滴涕污染的降解。
附图说明
图1是土曲霉DDT98801在查氏培养基平板上25℃培养7天的菌落形态图。
图2是土曲霉DDT98801在显微镜下放大400倍的菌丝及分生孢子图。
图3是土曲霉DDT98801基于ITS-5.8S rDNA序列的邻接法系统发育树图。
图4是土曲霉DDT98801随时间增长对水中滴滴涕的降解图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明进一步详细说明，但是本发明的保护范围不仅限于这些实施例。
实施例1
土曲霉菌株，命名为土曲霉(Aspergillus terreus)DDT98801，于2017年11月22日保藏于武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No：M 2017710，其ITS-5.8SrDNA序列如下：
上述土曲霉DDT98801的选育方法如下：
(1)富集
称取5g中国浙江省嘉兴市华斌农业基地有机氯农药污染的酸性土壤加入到45mL富集液体培养基中，在160r/min、28℃恒温摇床中振荡120小时培养，得到培养液。
上述富集液体培养基是在每升无机盐液体培养基中添加15mg滴滴涕，其中无机盐液体培养基是每升蒸馏水中含NH4NO3 1.0g、KH2PO4 1.0g、K2HPO4 1.0g、CaCl2 0.01g、FeSO40.1g、MgSO4 0.5g，pH值7.0。
(2)分离纯化
将步骤(1)得到的培养液用无菌水进行梯度稀释，依次得到稀释101、102、103、104、105、106倍的菌悬液，用移液枪吸取100μL不同稀释度的菌悬液用涂布棒分别涂布于富集固体培养基上，富集固体培养基中含20g/L琼脂，每个稀释度的菌悬液进行三个重复，放于恒温培养箱中28℃培养，用接种环挑取生长快速的真菌菌落于新鲜的PDA培养基平板上进行划线分离，重复操作，反复分离培养，直至得到纯化的菌株，根据纯化菌株的菌落形态、生长速度、显微形态将相同的菌株合并。
(3)纯化菌株复筛
用接种环挑取所分离纯化出的真菌划线于含20mg/L滴滴涕的无机盐固体培养基上，无机盐固体培养基中含有20g/L琼脂，于28℃的恒温培养箱中培养5～7天，挑选在含滴滴涕的无机盐固体培养基生长良好的真菌保存。
挑选上述复筛菌株中生长良好的多株真菌按照土曲霉菌的典型形态学特征进行初选，并分别收集具有典型土曲霉菌形态学特征的真菌菌株进行分子生物学鉴定。
其中一种真菌菌株经分子生物学和形态学联合鉴定，命名为土曲霉(Aspergillusterreus)DDT98801。
对本实施例筛选的土曲霉DDT98801进行的形态学鉴定以及分子生物学分类鉴定，各种试验情况如下：
1、形态学鉴定
(1)菌落形态
按照常规操作方法，接种复筛得到的DDT98801菌株于查氏培养基平板上，25℃培养7天，结果见图1。由图1所示，该菌的菌落呈土黄色，边缘白色，中央部分绒毛状且稍凸起，表面呈细密放射状沟纹，背面暗黄色。随着培养时间的延长，绒毛状凸起逐渐变平，形成粉末状孢子。
(2)显微形态特征
用插片法培养土曲霉DDT98801，在不同的时间段取样制片，在显微镜下观察并记录菌丝及孢子形态，实验结果见图2。如附图2所示，该菌的分生孢子梗较短，无色，产孢结构双层，生于半球形顶囊上半部，分生孢子头开始为球形，继而呈紧密的柱形，分生孢子球形，直径为2～2.5μm。
2、分子生物学鉴定
用ITS-5.8S rDNA序列进行分类鉴定：使用Ezup柱式真菌基因组DNA抽提试剂盒提取基因组DNA，并对其ITS-5.8S rDNA序列进行PCR扩增(扩增反应条件为：94℃3min；94℃30s；56℃30s；72℃90s；共35次循环；72℃延伸10min)，扩增产物用0.8％的琼脂糖凝胶检测，使用Easy Pure Quik Gel ExtractionKit试剂盒对目的片段进行纯化，纯化产物送生工生物工程(上海)股份有限公司测序，并对测序结果进行同源性比较与遗传进化分析。序列拼接结果见序列表(570bp)。
用同源性比对工具Basic BLAST将该菌的ITS序列和NCBI中已登录的ITSrDNA序列进行同源性比较，对比结果发现土曲霉DDT98801与土曲霉(Aspergillus terreus)的ITS核苷酸序列的同源性在99％以上。用MEGA5.0软件构建的邻位相连法系统发育树见图3。
结合形态学鉴定和同源性比对结果以及系统发育树，可认定土曲霉DDT98801菌株为土曲霉菌(Aspergillus terreus)。
将土曲霉DDT98801于2017年11月22日保藏于中国武汉武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No：M 2017710，
实施例2
实施例1的土曲霉DDT98801在含滴滴涕污水处理中的用途，使用方法如下：
将土曲霉DDT98801制备成含菌量为0.8～2亿个菌/g的菌剂，在含滴滴涕污水中接入土曲霉DDT98801菌剂，接种量为2.5wt％，搅拌，调pH为4.5～6.5，25～30℃处理20～30天，至达到国家环境质量标准GB/3838-2002≤0.001mg/L。
用气相色谱方法测定滴滴涕浓度，并用气相色谱-质谱联用仪对滴滴涕的代谢产物进行分析，结果见图4。由附图4可见，土曲霉DDT98801对滴滴涕的降解率在第11天达到79％，而王继华等人申请的公开号为CN102424806A、发明名称为“一株降解DDT的假单胞菌”中国专利对DDT(滴滴涕)的降解率为51.6％，远远高于一株降解DDT的假单胞菌对滴滴涕的降解率。
实施例3
土曲霉DDT98801在含滴滴涕污水处理中的用途，使用方法如下：
将土曲霉DDT98801制备成含菌量为0.8～2亿个菌/g的菌剂，在含滴滴涕污水中接入土曲霉DDT98801菌剂，接种量为0.5wt％，搅拌，调pH为4.5～6.5，25～30℃处理20～30天，至达到国家环境质量标准GB/3838-2002≤0.001mg/L。
实施例4
土曲霉DDT98801在含滴滴涕污水处理中的用途，使用方法如下：
将土曲霉DDT98801制备成含菌量为0.8～2亿个菌/g的菌剂，在含滴滴涕污水中接入土曲霉DDT98801菌剂，接种量为5.0wt％，搅拌，调pH为4.5～6.5，25～30℃处理20～30天，至达到国家环境质量标准GB/3838-2002≤0.001mg/L。
实施例5
土曲霉DDT98801在含滴滴涕土壤处理中的用途，使用方法如下：
将土曲霉DDT98801制备成含菌量为0.8～2亿个菌/g的菌剂，在含滴滴涕土壤中接入土曲霉DDT98801菌剂，污染土壤中滴滴涕含量为10mg/kg～20mg/kg时，土曲霉DDT98801接种量为120g/kg土壤，污染土壤中加入表面活性剂鼠李糖脂，加入量为150mg/kg土壤；污染土壤中滴滴涕含量为10mg/kg以下时，土曲霉DDT98801接种量为75g/kg土壤，混匀，再加入尿素、K2HPO4、有机肥料，使得土壤中C：N：P元素的质量比为100：10：1，加水至土壤的含水率达15％～30％，混匀，调pH为4.5～6.5，将处理土壤用塑料薄膜覆盖，通气，间隔补水以维持土壤的含水率，25～28℃处理50～90天，至土壤中的滴滴涕含量达到GB 15618-2009滴滴涕≦0.1mg/kg的国家环境质量标准。
用气相色谱方法测定滴滴涕浓度，并用气相色谱-质谱联用仪对滴滴涕的降解产物进行分析，土壤中的滴滴涕含量达到GB 15618-2009滴滴涕≦0.1mg/kg的国家环境质量标准，没有产生二次污染。
实施例6
土曲霉DDT98801在含滴滴涕土壤处理中的用途，使用方法如下：
将土曲霉DDT98801制备成含菌量为0.8～2亿个菌/g的菌剂，在含滴滴涕土壤中接入土曲霉DDT98801菌剂，污染土壤中滴滴涕含量为10mg/kg～20mg/kg时，土曲霉DDT98801接种量为100g/kg土壤，污染土壤中加入表面活性剂鼠李糖脂，加入量为120mg/kg土壤；污染土壤中滴滴涕含量为10mg/kg以下时，土曲霉DDT98801接种量为50g/kg土壤，混匀，再加入尿素、K2HPO4、有机肥料，使得土壤中C：N：P元素的质量比为100：10：1，加水至土壤的含水率达15％～30％，混匀，调pH为4.5～6.5，将处理土壤用塑料薄膜覆盖，通气，间隔补水以维持土壤的含水率，25～28℃处理50～90天，至土壤中的滴滴涕含量达到GB 15618-2009滴滴涕≦0.1mg/kg的国家环境质量标准。
实施例7
土曲霉DDT98801在含滴滴涕土壤处理中的用途，使用方法如下：
将土曲霉DDT98801制备成含菌量为0.8～2亿个菌/g的菌剂，在含滴滴涕土壤中接入土曲霉DDT98801菌剂，污染土壤中滴滴涕含量为10mg/kg～20mg/kg时，土曲霉DDT98801接种量为180g/kg土壤，污染土壤中加入表面活性剂鼠李糖脂，加入量为180mg/kg土壤；污染土壤中滴滴涕含量为10mg/kg以下时，土曲霉DDT98801接种量为100g/kg土壤，混匀，再加入尿素、K2HPO4、有机肥料，使得土壤中C：N：P元素的质量比为100：10：1，加水至土壤的含水率达15％～30％，混匀，调pH为4.5～6.5，将处理土壤用塑料薄膜覆盖，通气，间隔补水以维持土壤的含水率，25～28℃处理50～90天，至土壤中的滴滴涕含量达到GB 15618-2009滴滴涕≦0.1mg/kg的国家环境质量标准。
序列表
<110> 陕西师范大学
<120> 土曲霉DDT98801及其筛选方法和在降解滴滴涕中的应用
<141> 2018-01-30
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 570
<212> DNA
<213> 土曲霉（Aspergillus terreus）
<220>
<221> misc_feature
<223> 土曲霉DDT98801 ITS-5.8S rDNA
<400> 1
gtggcatcga gtcggtctcg tggccacctc ccacccgtga ctattgtacc ttgttgcttc 60
ggcgggcccg ccagcttgct ggccgccggg gggcgtctcg cccccgggcc cgtgcccgcc 120
ggagacccca acatgaaccc tgttctgaaa gcttgcagtc tgagttgtga ttctttgcaa 180
tcagttaaaa ctttcaacaa tggatctctt ggttccggca tcgatgaaga acgcagcgaa 240
atgcgataac taatgtgaat tgcagaattc agtgaatcat cgagtctttg aacgcacatt 300
gcgccccctg gtattccggg gggcatgcct gtccgagcgt cattgctgcc ctcaagcccg 360
gcttgtgtgt tgggtcctcg tcccccggct cccgggggac gggcccgaaa ggcagcggcg 420
gcaccgcgtc cggtcctcga gcgtatgggg ctttgtcttc cgctctgtag gcccggccgg 480
cgcccgccga cgcatttttt tgcaacttgt ttttttccag gttgacctcg gatcaggtag 540
ggatacccgc tgaacttaag catatcaaaa 570

Claims (8)

1.一种土曲霉菌株，命名为土曲霉(Aspergillus terreus)DDT98801，于2017年11月22日保藏于武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No：M 2017710，其ITS-5.8S rDNA序列如下：
2.一种权利要求1的土曲霉DDT98801的选育方法，其特征在于由下述步骤组成：
(1)富集
称取中国浙江省嘉兴市华斌农业基地有机氯农药污染的酸性土壤加入到富集液体培养基中，有机氯农药污染的酸性土壤与富集液体培养基的质量体积比为1:10，在160r/min、28℃恒温摇床中振荡120小时培养，得到培养液；
上述富集液体培养基是在每升无机盐液体培养基中添加15mg滴滴涕，其中无机盐液体培养基是每升蒸馏水中含NH4NO3 1.0g/L、KH2PO4 1.0g/L、K2HPO4 1.0g/L、CaCl2 0.01g/L、FeSO4 0.1g/L、MgSO4 0.5g/L，pH值7.0；
(2)分离纯化
将步骤(1)得到的培养液用无菌水进行梯度稀释，依次得到稀释101、102、103、104、105、106倍的菌悬液，用移液枪吸取100μL不同稀释度的菌悬液用涂布棒分别涂布于富集固体培养基上，富集固体培养基中含20g/L琼脂，每个稀释度的菌悬液进行三个重复，放于恒温培养箱中28℃培养，用接种环挑取生长快速，颜色单一的单菌落于PDA培养基平板中进行划线分离，重复操作，反复分离培养，直至得到纯化的菌株，根据纯化菌株的菌落形态、生长速度、显微形态将相同的菌株合并；
(3)纯化菌株复筛
将步骤(2)纯化的菌株划线于含20mg/L滴滴涕的无机盐固体培养基上，无机盐固体培养基中含有20g/L琼脂，于28℃的恒温培养箱中培养5～7天，挑选生长良好的单菌落，鉴定命名为土曲霉(Aspergillus terreus)DDT98801。
3.权利要求1所述的土曲霉DDT98801在含滴滴涕污水处理中的用途。
4.根据权利要求3所述的土曲霉DDT98801在含滴滴涕污水处理中的用途，其特征在于其使用方法为：将土曲霉DDT98801制备成含菌量为0.8～2亿个菌/g的菌剂，在含滴滴涕污水中接入土曲霉DDT98801菌剂，接种量为0.5wt％～5wt％，搅拌，调pH为4.5～6.5，25～30℃处理20～30天，至水中滴滴涕含量达到GB/3838-2002≤0.001mg/L国家环境质量标准。
5.根据权利要求3所述的土曲霉DDT98801在含滴滴涕污水处理中的用途，其特征在于使用方法为：将土曲霉DDT98801制备成含菌量为0.8～2亿个菌/g的菌剂，在含滴滴涕污水中接入土曲霉DDT98801菌剂，接种量为2.5wt％，搅拌，调pH为4.5～6.5，在25～30℃下，按照场地滴滴涕污染的不同程度，处理20～30天，至水中滴滴涕含量达到GB/3838-2002≤0.001mg/L国家环境质量标准。
6.权利要求1所述的土曲霉DDT98801在含滴滴涕污染土壤处理中的用途。
7.根据权利要求6所述的土曲霉DDT98801在含滴滴涕污染土壤中的用途，其特征在于其使用方法为：将土曲霉DDT98801制备成含菌量为0.8～2亿个菌/g的菌剂，在含滴滴涕土壤中接入土曲霉DDT98801菌剂，污染土壤中滴滴涕含量为10mg/kg～20mg/kg时，土曲霉DDT98801接种量为100～180g/kg土壤，污染土壤中加入表面活性剂鼠李糖脂，加入量为120～180mg/kg土壤；污染土壤中滴滴涕含量为10mg/kg以下时，土曲霉DDT98801接种量为50～100g/kg土壤，混匀，再加入尿素、K2HPO4、有机肥料，使得土壤中C：N：P元素的质量比为100：10：1，加水至土壤的含水率达15％～30％，混匀，调pH为4.5～6.5，将处理土壤用塑料薄膜覆盖，通气，间隔补水以维持土壤的含水率，25～28℃处理50～90天，至土壤中的滴滴涕含量达到GB 15618-2009滴滴涕≦0.1mg/kg的国家环境质量标准。
8.根据权利要求6所述的土曲霉DDT98801在含滴滴涕污染土壤中的用途，其特征在于其使用方法为：将土曲霉DDT98801按实验室或生产常规方法制备获得的曲霉菌DDT98801菌剂，含菌量为0.8～2亿菌/g，在含滴滴涕土壤中接入土曲霉DDT98801菌剂，污染土壤中滴滴涕含量为10mg/kg～20mg/kg时，土曲霉DDT98801接种量为120g/kg土壤，污染土壤中加入表面活性剂鼠李糖脂，加入量为150mg/kg土壤；污染土壤中滴滴涕含量为10mg/kg以下时，土曲霉DDT98801接种量为75g/kg土壤，混匀，再加入尿素、K2HPO4、有机肥料，使得土壤中C：N：P元素的质量比为100：10：1，加水至土壤的含水率达15％～30％，混匀，调pH为4.5～6.5，将处理土壤用塑料薄膜覆盖，通气，间隔补水以维持土壤的含水率，25～28℃处理50～90天，至土壤中的滴滴涕含量达到GB 15618-2009滴滴涕≦0.1mg/kg的国家环境质量标准。
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