CN1080873A - 纤维蛋白溶酶原激活剂的抑制剂治疗炎症和创伤的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及纤维蛋白溶酶原激活剂如尿激酶、 uPA或tPA的抑制剂，用于术中与术后治疗，治疗损 伤，以及治疗和预防炎性疾病。适宜的抑制剂尤其 为PAI—1和PAI—2。

Description

各种疾患是由于纤维蛋白溶酶活性的调节作用受到损伤。纤维蛋白溶酶是由纤维蛋白溶酶原经纤维蛋白溶酶原激活剂（PA）如UPA（尿PA）或组织纤维蛋白溶酶原激活剂（tPA）作用而生成的。纤维蛋白溶酶原激活剂的抑制剂（PAI）可抑制各种PA。生理相关的PAI现在已知有两种不同的类型：纤维蛋白溶酶原激活剂的抑制剂Ⅰ型（PAI-1）和纤维蛋白溶酶原激活剂的抑制剂Ⅱ型（PAI02），这两种PAI都是蛇根平型的抑制剂。

眼睛、耳或皮肤发生炎症，例如角膜损伤时，通常泪液中纤维蛋白溶酶的活性会增高。纤维蛋白溶酶又会使细胞间质的纤维mectin降解、促进血管生成并使胶原酶原激活成有活性的胶原酶，后者可使胶原分子降解（Barlati等εxp.Eye    Res.51，1-9（1990），为了治疗由于增高的纤维蛋白溶酶活性而引起作用的各种病理状态，已使用低分子量物质如2-氨基己酸或止血环酸（反式-4-氨乙基-环已羧酸）。例如止血环酸/明适于治疗骨关节炎。用止血环酸也可降低溃疡性结肠炎及相关疾病的纤维蛋白溶解活性的过剩增高。然而上面提及的低分子量纤维蛋白溶酶抑制剂因有毒副作用是有缺点的。

另一种纤维蛋白溶酶抑制剂可用抑胰肽酶，在有些情况下用它可以治疗角膜溃疡。

现在令人意外地发现一些炎症，特别是眼、耳或（或）皮肤炎证，但也可例如在骨关节炎或溃疡性结肠炎可以方便地用纤维蛋白溶酶原激活剂的抑制剂加以治疗。

因此，本发明内容是应用纤维蛋白溶酶原激活剂的抑制剂，作为制备治疗和（或）眼、耳、皮肤、骨关节炎和（或）溃疡性结肠炎的药物。

尿激酶（uPA）和（或）tPA，尤其是uPA和（或）tPA被抑制。适宜的抑制剂尤其是PAI-1和（或）PAI-2及其突变体或变异体，特别是PAI-2，尤其是PAI-2片断，成熟的PAI-2的N端氨基酸1-82或1-84。该抑制剂可单独应用或与其它药物合用，如抗生素，既可局部用药也可全身用药。用于骨关节炎时，有效物质最好是关节内或手术中期给药（开放型或关节镜检查）。局部用药的有效剂量一般是1-300000尿激酶抑制单位，优选为500-50000尿激酶抑制单位，静脉注射或加溶的肌肉注射用药剂量为每Kg体重50-750000尿激酶抑制单位。

抑制剂特别是PAI-2可加入生理可溶性稳定剂以使稳定化，例如加入白蛋白，聚纤维物质，明胶水解液，甘氨酸，半胱氨酸，葡萄糖，乳糖，麦芽糖和（或）蔗糖。

这些抑制剂的适应症一般是眼睛炎症疾患的局部治疗和（或）预防作用，例如角膜溃汤，眼色素层炎，结膜炎，术中和术后治疗，眼结构。特别是炎症过程的保护，或者是炎性耳病，如中耳炎，鼓膜炎，炎症过程的鼓膜破坏，但也可用于具有炎性症候群的皮肤疾患，如红斑，尤其是当炎证细胞浸润到组织时，这此症细胞例如有巨噬细胞，单核细胞和粒细胞，皮肤棘层松解，水疱形成，例如天疱疮，湿疹，接触性皮炎和特应性皮炎，炎症过程的烧灼感，脉管炎，促进伤面愈合，开放性创伤和皮肤溃疡的治疗等。其它的适应症是治疗表皮损伤，骨关节炎，溃疡性结肠炎，节段性回肠炎，IBD（炎性肠疾患），胰腺炎，痤疮，治疗上皮损伤，角膜损伤，眼损伤相关的瘢痕，巩膜炎，非治愈性角膜糜烂，干燥病和角化病。这些抑制剂还可以单独应用或与其它有效物质合用，优选以冲洗液用于术中和术后处理和（或）治疗这些炎症的开放性创伤。另一个有利的应用方式是在配带接触式透镜之前单用本抑制剂或与其它药物合用的溶液治疗，以抑制新的血管形成，并且用于治疗接触式透镜配带者的眼损伤，眼炎症和（或）角膜浸润以及眼角膜炎症。

下面详细说明纤维蛋白溶酶原激活剂的抑制剂如PAI-2的一些优选的用途。

1.用于治疗激光角膜切除术造成的眼角膜损伤，但也可用于角膜切开术的治疗。这种激光角膜切除方法可用于校正近视和远视的折光率，校正散光，校正角膜缺损，去除瘢痕，用于角膜成形术，角膜出现干燥时使其平滑，角膜的新近损伤，眼睛的感染，例如病毒（如疱疹）、细菌、真菌或寄生虫，上皮层下的钙沉积（衰老象征），结膜与角膜的粘连（翼状胬肉）。

2.用于眼睛发炎和眼睛混浊，例如激光治疗后，正常眼科手术（例如玻璃体切开术，白内障手术，晶状体手术，晶状体置换，晶状体移植，角膜成形术，角膜移植），结膜炎，角膜结膜炎，角膜结膜炎干燥症，虹膜炎，虹膜睫状体炎，角膜炎，格雷夫斯眼病，莫伦溃疡，脉管炎，眼色素层炎，眼睛过敏性症候，感染，代谢紊乱，炎性疾病和自家免疫性疾病（例如全身性红斑狼疮，维格奈肉芽肿病，风湿性关节炎，肉样瘤病，多关节炎，类天疱疮，天疱疮，多形性红斑，斯耶格伦综合症，炎性肠病，多发性硬化病，重症肌无力，角化病，巩膜炎。

3.用于预防眼外科手术或损伤后的瘢痕。

4.用于提高创伤愈合和最佳再生的速度（例如使老的基质和新生成的上皮之间的界面平滑），使手术或损伤后上皮组织与基质的代谢功能正常化和稳定化。

5.用于抑制由于视网膜病特别是糖尿病引起的新血管形成;视网膜脱离，视网膜血管损伤，视网膜和眼色素层炎症，角膜移植。

6.用于眼球移植，特别是（角膜移植，这是由于PAI-2降低了PMN的吸附作用，可以降低敏感性和阻止新血管形成，而对创伤愈合不会同时有不良作用，这就减少了排斥作用的危险。

7.用于眼部水肿，例如斑-水肿，斑下-水肿，光照性凝固后的水肿，角膜水肿，结膜水肿，视网膜水肿，眼部周围的水肿。

8.用于眼部区域的浸润，特别是角膜附近，眼房区域，结膜和巩膜区域。

9.用于治疗角膜溃疡。

PIA-2例如可按如下方法制备：如EP0238275所述，分出PAI-2        CDNA，克隆，连接到载体上，用本领域熟知的方法将其转移或转染到适宜的宿主细胞上。按已知的方法使细胞繁殖，破坏，为了纯化由例如大肠杆菌溶菌液得到的rPAI-2，适于且各种组合的层析方法（例如经Q-琼脂糖凝胶进行离子交换层析，经苯基-琼脂糖凝胶的疏水层析，于Sephacryl或Fractogel上凝胶过滤）。由酵母溶菌液纯化rPAI02的适宜方法包括有基本纯化（去除细胞，用球磨破碎细胞，支叉流动过滤，交叉流动浓缩）和最后高纯化（层析法，如WO91/02057中所述或用离子交换层析和免疫亲和层析）。比活性按对人尿激酶抑制作用计，一般为150000单位/ml或更高。

PAI-1可按类似的方法制备，如WO90/13648所述。

纤维蛋白溶酶原激活剂的抑制剂的优点特别表现在对同时具有抑制新血管形成的这些炎症的单一治疗中，一般是无毒的，没有副作用。由于对纤维蛋白溶酶原激活剂的抑制作用允许用药的浓度明显低于纤维蛋白溶酶抑制剂的浓度，所以同时用其它类有效物质或与之合用，例如抗生素特别有优点。此外，纤维蛋白溶酶原激活剂抑制剂的用量明显低于纤维蛋白溶酶抑制剂的用量，而且，通常减低了过敏反应的危险，也观察到它与纤维蛋白溶酶抑制剂相比，有优越的长效作用。

实施例1：

PAI-2用于治疗角膜溃疡

在Cejkova等1975年（Histo        Chemistry45：71-75）所述的角膜溃疡的家兔模型，将PAI-2以不同的浓度（5-100μg/ml）局部用于眼睛上（25μg/ml，每日三次;100μg/ml每日两次）。对照组用等体积（1ml）的溶剂（生理盐水，pH7.2），每日两次。参比物是抑胰肽酶（前两周用5000IU/ml，每日两次;后两周剂量降为2500IU/ml）。

用0.75M氢氧化钠处理后，借助内径为11mm的塑料管流出大量炎症细胞：这些分泌蛋白水解活性，同时诱发角化细胞在角膜上皮组织合成其它一系列的蛋白多糖。这引起角膜的次序结构发生紊乱，从而不导致失去透明度。

测定下面的参数，角膜的穿孔，溃疡的形成，新血管形成，泪液中纤维蛋白溶酶的活性，炎症特征，如炎证细胞的流入，眼睛透明性，虹膜的可见性（表1）。与安慰剂组比较，PAI-2组有如下优点：可将纤维蛋白溶酶活性降到最低程度。用抑胰肽酶降低纤维蛋白溶酶活性，为了达到同样的程度，须经常频繁地用药。用PAI-2可完成阻止穿孔和溃疡的形成。用抑胰肽酶也可得到同样的效果。令人意外的是，用PAI-2对由于实验性刺激所流入的炎症细胞数目剧烈地经久地降低，甚至降到健康组织的正常水平。

下面阳性的作用又令人意外地得到了：PAI-2发生的对完全治愈所绝对必要的抑制新血管形成，以致可以恢复眼睛的透明度，并且虹膜又可以看见了。用抑胰肽酶治疗虽然可阻断角膜溃疡和穿孔，但仍然失去了透明度。甚至用比较低剂量的PAI-2所得到的阳性效果，用较高剂量的抑胰肽酶也不能达到。

用PAI-2对纤给蛋白溶酶原激活剂的抑制作用与用例如抑胰肽酶对纤维蛋白溶酶的抑制作用相比甚至还有另外的优点：用纤维蛋白溶酶原激活剂抑制剂单独治疗，其结果与常规法治疗相比有优点。所用的有效成分的极其强的作用可以用非常低的抑制剂浓度，以致也可以很好地与例如抗生素如氯霉素联合治疗。

另一个试验是在例如用碱作用后不马上治疗角膜溃疡，而是在10天后才开始。在这后来的时刻泪液中纤维蛋白溶每活性已经升高达2-2.5μg/ml。

在相同的时间（诱导后的10天）开始用抑胰肽酶治疗（5000国际单位/ml，局部应用，每日2次），使泪液中可检测出的活性纤维蛋白溶酶的浓度回复到正常值。但这种作用只维持大约2小时，而后纤维蛋白溶酶的水平又升高。

在同样的时间开始用PAI-2治疗（例如100μg/ml，局部应用），活性的纤维蛋白溶酶的浓度回复到正常值（0.4-0.6μg/ml），一次应用PAI-2的效果意外地保持非常长的时间。因此，例如PAI-2一次给药后，泪液中纤维蛋白溶酶的浓度48小时后仍然是1μg/ml。在这种情况下，受试的PAI-2的所有三种浓度（5，25，100μg/ml）都适于降低溃疡过程。用PAI-2        25μg/ml浓度可获得最佳治疗结果。

这种意外长时间的持续作用只能在用PAI-2抑制纤维蛋白溶酯原激活剂才观察到，而用抑胰肽酶不能抑制纤维蛋白溶酶。

当局部应用甾体如地塞米松-磷酸纳治疗眼睛时，会产生副作用，如玻璃体肿胀的变化和眼内压的变化，而且PAI-2治疗正常眼睛时，不会有副作用。因此，组织学上例如动脉基质的层状结构样式和生化指标，例如角膜的氢化作用、酶活性（乳酸脱氢酶，酸性磷酸酶，酸性糖苷酶，碱性磷酸酶，琥珀酸脱氢酶）都没有变化。此外，还可指出，除了对炎症有成功的抑制作用外，不会对上皮再生作用产生抑制。

泪液中纤维蛋白溶酶活性的测定

小纸盘（Whatman滤纸，直径5mm）用D-Val-Leu-Lys-三氟甲胺基香豆素（FCA，酶系统产物出品，Li        Vermore，加州，美国）的底物溶液浸润并干燥，底物溶液制备如下：1mg底物溶解于4滴N，N-二甲基甲酰胺中，加入1ml0.1M        tris-Hcl（pH7.2）。纤维蛋白溶酶0.2-0.5μg/ml溶液的制备是将纤维蛋白溶酶（Sigma）溶解于0.1M        tris-Hcl的pH7.2缓冲溶液。各种浓度的溶液20μl放到预先用底物溶液处理的纸盘中，然后与用泪液浸润的纸盘一起在潮湿房室中37℃恒温中保温。为了测定泪液中纤维蛋白溶酶的浓度，将纸盘放在角膜上，泪液被吸收5秒钟。于37℃纸盘保温时，每隔2h于紫外光下测定。泪液样80在紫外光下发射的黄色萤光的强度与已知浓度的纤维蛋白溶酶样品样比较（已知纤维蛋白溶酶浓度的纸盘的校正图），从而可以确定样品中的纤维蛋白溶酶的活性。

表1

碱诱导的角膜溃疡的治疗

试验组

第1组：安慰剂组（生理盐水;一日两次）

第2组：抑胰肽酶组（5000国际单位/ml，一日两次）

第3组：rPAI-2（100μg/ml;一日两次）

第4组：rPAI-2（25μg/ml;一日两次）

实施例2

PAI-2用于角膜上皮组织的再生

用家兔模型研究了PAI-2对角膜上皮组织的再生作用。

模型说明

用体重为2.5～3.0kg成年灰兔进行研究。动物静脉注射硫贲妥（25mg/ml/kg体重）使麻醉。然后将眼睛固定，机械造成角膜损伤：用格雷费刀仔细将上皮组织两次去除（间隔一周），将不同浓度（5-50μg/ml）PAI-2（于PBS缓冲液，pH7.2）局部点在眼上，每日三次。对照组织动物用同体积（0.5ml）PBS缓冲液（pH7.2）或抑胰肽酶（60μg/ml）或氟比洛芬（0.1%溶液）的PBS缓冲溶液（pH7.2）。产生损伤后的动物在不同时间（1，4，7，14，21，28天后）被处死，用组织学和组织化学方法检查角膜结构。测定泪液中纤维蛋白溶酶活性并与组织学数据作相关性处理。照相记录眼睛的光学形象，每周两次。纤维蛋白溶酶活性按实施例1所述方法进行。处死动物后立刻摘除眼球，切除角膜或眼睛的整个前部。

一些角膜用麦克格温银浸渗法处理（1955）。剥离上皮组织后，将样品置于明胶中。所有其它的方法用于整个眼睛的前部。一部分用被丙酮-干冰冷却的石油醚使其停止。在冷冻状态下，平行于或垂直于眼表面切片（12μm厚）。将切片转移到未预冷的载片或半透膜上，进行葡萄糖胺聚糖，氨基肽酶M（APM），二肽肽酶Ⅳ（DPPⅣ），r-谷氨酰转肽酶（GGT），碱性磷酸酶（AlP），Na⁺/K⁺一依顿的三磷酸腺苷酶（ATPase）和脱氢酶（琥珀酸脱氢酶SDH，乳酸脱氢酶LDH）测定。在测定APM，DPPⅣ、GGT和AlP之前，将切片用氯仿和丙酮（1∶1）的冷混合物固定2分钟。AlP用萘酚-AS-MX-磷酸盐（Cal-biochem，La Jolla;加州，美国）和快蓝B盐（Michrome，Gurr，Poole，英国）的偶氨偶联方法测定;APM用丙氨酰-4-甲氧基-β-萘胺-丙氨酰-MNA（Bachem，Bubendorf，瑞士）和快蓝B盐（Michrome，Gurr，英国）测定;DppⅣ用Gly-Pro-MNA（Bachem，瑞士）和快蓝B盐（Michorme，Gurr，英国）测定;GGT用r-Glr-MNA（Bachem，瑞士），Gly（Lachema，Brmo，捷克）和快蓝B按Lojda等（1979）的方法测定。半透膜上的切片用来测定酸性磷酸酶（AcP）-用偶氮偶联反应测定，即同萘酚-AS-BI-磷酸盐（Calbiochem）和P-品红六偶氮盐反应，后一试剂是由无吖啶的品红（Merck，Darmstadt，德国）制备的;半透膜上的切片还测定β-葡糖苷酸酶（β-glu）和N-乙酰-β-D-氨基葡糖苷酶（Ac-Glu）底物是：萘酚-AS-BI-β-葡糖苷酸和萘酚-AS-BI-N-乙酰-β-D-氨基葡糖苷（二者为Calbiochem出品），二者的偶联反应都用P-品红六偶氮盐。酸性β-半乳糖苷酶（β-Gal）用Lojda的靛蓝生成方法（Cejkova和Lojda，1975;Lojda等，1979）用4-氯-5-溴-3-吲哚基-β-D-半乳糖苷（Cyclo Chemicals，洛杉矶，加州，美国）测定。ATP酶用ATP-Tris和Ba²⁺盐按Cejkova和Lojda（1978）方法测定。脱氢酶用Lojda等（1979）方法在未固定的冷冻切片上用硝基BT（Lachema，Brno，捷克）作为电子受体加以测定。为了测定氨基葡萄糖聚糖，将切片固定在冷乙醇中5分钟，用1%浓度的含有不同浓度NgCl₂的Alcian蓝溶液染色（Cejkova等，1973），但也可用1%浓度的Alcian蓝在3%乙酸的溶液（pH2.5）染色，眼球前部的其余部分用4%多聚甲醛于0.1M磷酸缓冲液（pH7.2）固定，然后冷冻切片。将12μm厚的切片转移到用白蛋白覆盖的载片上，解冻干燥。被固定的切片用来测定DPPⅣ（用Gly-Arg-MNA，Bachem，瑞士，和硝基水杨醛，NSA，Merck）和DPPⅡ（用Lys-pro-MNA和快蓝B）（Lojda法1985和Cejkova和Lojda，1986）。一些被固定的角膜用于作组织学变化的检查（用苏木素-曙红染色）。

缓冲液对照

未处理眼睛的纤维蛋白溶酶活性在损伤后2h内由0.2-0.4μg/ml增加，1日后达到1.0-2.0μg/ml，到第7日仍维持此水平，到第14日降至0.2～0.4μg/ml，21日后低于0.2μg/mg（见表2）。

上皮组织从角膜边缘开始再生，含有各种不同的酶活性（DPPⅣ，酸性糖苷酶和溶酶体蛋白酶（见表3））。去上皮后4天内，炎症细胞（特别是多形核嗜中性粒细胞，DMN）向角膜基质大量渗入。在外周发生角膜新血管形成作用。一些角化细胞坏死，这些被邻近的角化细胞取代。在14-21日后，上皮细胞再生成完全。应当提及的负性结果是血管形成作用和失掉透明度（透明度未能完全恢复）。发生的角膜浑浊是不可逆的。

用氟比咯芬治疗：泪液中纤维蛋白溶酶活性的增加与缓冲液对照组相同（见表2）。但与缓冲液对照组相反，炎症细胞流入角膜基质较少，新血管形成作用受阻但未完全阻断。某些眼睛未发生上皮再生成作用，一些甚至被抑制了。角膜上皮组织只有很低的ATPase和GGT活性。这些数据列于表3。

用抑胰肽酶或PAI-2治疗：整个实验过程中纤维蛋白溶酶活性显著降低。抑胰肽酶治疗组的最大浓度为1.0μg/ml，而PAI-2治疗组只有0.4μg/ml（见表2）。这两个治疗组的DPPⅣ，酸性糖苷酶和溶酶体水解酶的活性比较弱，而ATPase和GGT的活性是正常的。用抑胰肽酶治疗时，只有较少的炎症细胞流到角膜基质中，在PAI-2组中，几乎未检测到炎症细胞的流入。两个治疗组都恢复了透明度。抑胰肽酶组至14日后创伤愈合尚未完全，而PAI-2组在去上皮后第10天创伤愈合就已完全。用抑胰肽酶治疗时不能避免角膜的新血管形成作用，而PAI-2治疗时则完全阻断了血管形成（各种浓度均阻断）。

因此，用PAI-2或纤维蛋白溶酶原激活剂抑制剂治疗的优点是增加了上皮再生成的速率，完全阻止了新血管形成，完全而迅速恢复透明度（比用抑胰肽酶或其它物质要迅速得多）。PAI-2非常好地抑制了角膜和基质的炎症。因此，由于不会在炎症区域检测出任何PWN。用PAI-2治疗过程中，角膜上皮组织的酶活性会非常迅速地回复正常。另一个优点是所用的PAI-2浓度比用抑胰肽酶浓度低得多。PAI-2浓度甚至为10ag/ml时仍完全有活性。PAI-2是另一优点因此可同时与其它有效物质合用。

表3家兔眼角膜的反复去上皮组织化

实施例3：

PAI-2用于治疗眼损伤和术中和术后治疗

本实验按实施例2所述方法进行和评价。然而此处不剥离上皮组织，而是用手术刀切口使角膜损伤，切的深度是角膜基质厚度的60-80%，并包括了角膜的所有表面（由边缘到5mm）。角膜切口后，泪液中纤维蛋白溶酶活性较迅速地增高（2小时内），数日内维持高水平（见表4）。仅在1日后炎症细胞就移入到创伤2区域。这就有可能测定创伤附近的溶酶体水解酶和糖苷酶增加的活性。从第1到第7日上皮细胞就移入到切口伤处。10日后切口伤处被上皮细胞充满。不过，移入到基质底层的细胞的附着力非常差，因而真正的伤封口来得缓慢迟滞。伤愈合时胶原-原纤维的排布是无规则的。在创伤部位检测不到氨基葡萄糖聚糖。而在该部位的糖苷酶特别是β-半乳糖苷酶的活性增加了。肉眼观察表明切口伤处在一些情况下暂时失去了透明度，在创伤愈合的第4到第7日失去透明度达最大程度。角膜被非透明性的疤痕组织愈合。角膜透明度变化是非可逆的，数据列于表5。

用PAI-2治疗：在治疗的全过程中，用PAI-2治疗的动物泪液中只检出最低量的纤维蛋白溶酶的活性。最大活性为0.4μg/ml。与缓冲液对照组相反，用PAI-2治疗的动物完全停止了炎症。例如用PAI-2治疗的第1天在紧靠眼基质创伤处就检测不到炎症细胞。角化细胞的激活发生得较早。移入的上皮细胞只有比较低的溶酶体水解酶的活性，而GGT、ATPase和SDH的活性则很快回复正常。只4日后切口伤处完全被上皮细胞充满。这些细胞非常好地附着在基质底层。在第10日原来形成的裂开的切口伤处又完全长平。基质的较深层被邻近的角化细胞的参与（代谢和细胞分裂活性）而愈合。14日后创伤完全愈合。新形成的角化细胞呈现正常的代谢活性（例如有关GGT活性），而没有炎证的证据。总之，用PAI-2治疗可以使创伤以相当快的速度愈合并且愈合的质量大大改善了。角膜创伤的愈合生成完全透明的组织，完全不会出现瘢痕。本发明的重要指标是PAI-2在两种浓度（10μg/ml和20μg/ml）下就能达到治疗效果。

PAI-2数据列于表5。

用抑胰肽酶的治疗：与缓冲液对照组相比，泪液中纤维蛋白溶酶的浓度降低了（见表3）。切口伤处以正常速率愈合（低于PAI-2）。移入的上皮细胞中溶酶体水解酶和糖苷酶活性与PAI-2的效果相比较降低了。新生成的上皮细胞与基质的附着力不像用PAI-2治疗动物的那样强。切口伤处的愈合较慢，但仍生成透明组织。创伤部位的组织化学与用PAI-2治疗动物的非常相似。

缓冲液对照组：缓冲液对照组动物的泪液中纤维蛋白溶酶活性在较长时间内增高了（见表4）。同时，可观察到炎症细胞（主要是PMN）移入到角膜内很明显。上皮细胞增高了水解能力，这主要是由例如溶酶体水解酶构成，而GGT和ATP酶活性降低了。创伤本身封口很慢（大约10天），新生成的上皮细胞对基质底层的附着力非常差，生成白色的瘢痕，透明度部分地丧失，且不可逆转。

用PAI-2或纤维蛋白溶酶/纤维蛋白溶酶激活剂抑制剂系统进行治疗的优点在于：只用这个方法就达到迅速且完全满意的角膜恢复-完全透明，无瘢痕，良好附着性，无新血管形成，角膜的正常代谢活性-根据组织学检查也是如此。

表4泪液中纤维蛋白溶酶活性角膜深度切开创伤

表5家兔角膜深度切开创伤

实施例4：

激光手术后用PAI-2治疗

用Lohmann等1991年叙述的方法（193nm激态原子激光）给家兔实行光屈折激光角膜切除术，然后以20μg/ml浓度的PAI-2局部点眼（每日2-3次）。对照组用同体积的溶剂（20mM甘氨酸，pH7.2;150mM        NaCl，0.3%明胶水解液）。参比组用抑胰肽酶（5000国际单位/ml;每日2次，2周）或0.1%强的松龙乙酸酯（1日2次，1周;1日1次11周），或0.1%氟比咯芬（用法同强的松龙乙酸酯）。测定的参数是浑浊的生成，泪液中纤维蛋白溶酶的浓度和组织学指标。

对照组的纤维蛋白溶酶浓度在短时间内由大约1μg/ml升到50μg/ml，但1周后恢复正常。在新生的上皮组织与原来的基质之间的封口部位不平滑。此外可检测到新生成的基质物质，例如胶原。在基质中可观察到一些空泡。若不作治疗，就有退化成近视的趋势。由于形成错误的结构和新合成，会观察到眼睛的浑浊。用强的松龙乙酸酯治疗，结果原则上相同，只是胶原的新合成略有减少，而用氟比洛芬治疗时除了浑浊外，可观察到显著的胶原新合成。用抑胰肽酶治疗时，在旧基质和新生成的上皮组织之间的交界处是平滑的。然而与光屈折有关的角膜浑浊还是可见的。未见空泡，基底细胞大小正常，但合成了新的胶原。用PAI-2治疗会得到绝对清亮透明的眼睛（见表6）。即使3个月之后也不会有浑浊-通常浑浊的出现不会迟于3-5周后。上皮细胞再生得非常好;旧基质与新生的上皮细胞之间的交界处是平滑的，无沉积物，无空泡，无胶原的新合成，无上皮细胞增生。不会退还成近视。即使将所有参比物联合应用，治疗结果也不会比PAI-2治疗效果好。与PAI-2治疗相比，这种联合治疗或用参比物治疗的缺点是：

-局部应用甾体3个月或更长时间会有生成不希望有的继发性青光眼的高度危险（取决于切除的程度）。

-抑胰肽酶证明不能与强的松龙合用。

-已知对抑胰肽酶有超敏感性。

-BSE问题，纯度，外源性蛋白质性质等都不宜于抑胰蛋白的应用。

表6激光角膜切开术后的治疗

¹）但有一种新合成的尚属未知的物质

Claims (22)

1、纤维蛋白酶原激活剂的抑制剂在制备用于治疗和(或)预防眼、耳、皮肤、骨、关节、肠或其它内脏、手术中和(或)手术后治疗以及(或)开放性创伤治疗药物制剂中的用途。

2、按照权利要求1的用途，其特征是，这些纤维蛋白溶酶原激活剂是尿激酶和（或）tPA。

3、按照权利要求1的用途，其特征是，该抑制剂是PAI-1和（或）PAI-2，优选为PAI-2片段。

4、按照权利要求1用于治疗角膜溃疡，眼色素层炎，结膜炎，中耳炎，鼓膜炎，炎症过程的鼓膜破裂，皮肤红斑，皮肤棘层松解，天疱疮，湿疹，接触性皮炎，特应性皮炎，炎症过程的灼烧感，脉管炎，皮肤溃汤，骨关节炎，IBD（炎性肠病），胰腺炎，座疮，治疗上皮损伤，角膜损伤，治疗眼损伤的瘢痕形成，巩膜炎的治疗，非愈合性角膜糜烂，干燥病和（或）角化病。

5、按照权利要求1用于术中的（或）术后治疗和（或）治疗开放性创伤或上述炎症。

6、按照权利要求1用于抑制新血管形成，治疗眼角膜浸润或配带接触性透镜者的角膜炎症。

7、按照权利要求1的用途，其特征是，该手术治疗是激光角膜切除术和（或）开放性创伤和炎症是激光角膜切除术的后果。

8、按照权利要求1治疗眼睛炎症和眼浑浊的用途，例如激光治疗后，正常的眼外科（如玻璃体切开术，白内障手术，囊外白内障摘除，晶状体手术，晶状体置换，晶状体移植，角膜成形术，角膜移植）以及如下疾病的后果，结膜炎，角膜结膜炎，角膜结膜炎干燥症，虹膜炎，虹膜睫状体炎，角膜炎，格雷夫斯眼病，莫伦溃疡，脉管炎，眼色素层炎，眼睛过敏性症候，感染，代谢紊乱，炎性疾病和自家免疫性疾病（例如全身性红斑狼疮，维格奈肉芽肿病，风湿性关节炎，肉样瘤病，多关节炎，天疱疮，类天疱疮，多形性红斑，斯耶格伦综合症，炎性肠病，多发性硬化病，重症肌无力，角化病，巩膜炎。

9、按照权利要求1用于阻止眼睛手术后或损伤后瘢痕的产生。

10、按照权利要求1用于阻止视网膜病的新血管形成，特别是糖尿病患者，视网膜脱离，视网膜血管损伤，或视网膜和眼色素层炎症或角膜移植。

11、按照权利要求1用于眼睛移植特别是角膜移植的用途。

12、按照权利要求1用于治疗眼部水肿，例如斑-水肿，斑下-水肿，光照凝固后水肿，角膜水肿，结膜水肿，视网膜水肿，眼部周围的水肿。

13、按照权利要求1用于治疗眼部的浸润，特别是角膜，眼房，结膜和巩膜的浸润。

14、按照权利要求1用于加速创伤愈合，特别是眼科领域。

15、按照权利要求1用于局部注射，例如注射到结膜下，玻璃体，眼房或巩膜。

16、按照权利要求1用于微量注射的用途。

17、按照权利要求1用于冲洗溶液。

18、按照权利要求1的抑制剂与生理可溶性载体联合的应用。

19、按照权利要求1的抑制剂与生理可溶性载体的联合应用，例如与纤维素衍生物，聚合物基质或接触性透镜。

20、按照权利要求1抑制剂与稳定剂联合的应用。

21、按照权利要求1抑制与其它有效物质的联合应用。

22、按照权利要求1抑制剂的用途，其特征是，其它的有效物质是一个或多个抗生素。