SK41593A3 - Using of inhibitors of plasminogene activators for the production of medicament for a therapy of ignitions and wounds - Google Patents
Using of inhibitors of plasminogene activators for the production of medicament for a therapy of ignitions and wounds Download PDFInfo
- Publication number
- SK41593A3 SK41593A3 SK415-93A SK41593A SK41593A3 SK 41593 A3 SK41593 A3 SK 41593A3 SK 41593 A SK41593 A SK 41593A SK 41593 A3 SK41593 A3 SK 41593A3
- Authority
- SK
- Slovakia
- Prior art keywords
- treatment
- plasminogen activator
- corneal
- activator inhibitors
- pai
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/46—Hydrolases (3)
- A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- A61K38/49—Urokinase; Tissue plasminogen activator
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/55—Protease inhibitors
- A61K38/57—Protease inhibitors from animals; from humans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/55—Protease inhibitors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
- A61K9/0021—Intradermal administration, e.g. through microneedle arrays, needleless injectors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0048—Eye, e.g. artificial tears
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/08—Solutions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P41/00—Drugs used in surgical methods, e.g. surgery adjuvants for preventing adhesion or for vitreum substitution
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Ophthalmology & Optometry (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Surgery (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Description
Oblasť technikyTechnical field
Vynález sa týka použitia inhibítorov plazminogénových aktivátorov na výrobu liekov pre terapiu alebo/a profylaxiu zápalovýchochorení.The invention relates to the use of plasminogen activator inhibitors for the manufacture of medicaments for the therapy and / or prophylaxis of inflammatory diseases.
Doterajší stav technikyBACKGROUND OF THE INVENTION
Pri rôznych ochoreniach je narušená regulácia plazm í novej aktivity. Plazmíny sa tvoria z p 1azminogénov pomocou plazminogénových aktivátorov (PA), ako je napríklad močový p 1azminogénový aktivátor (uPA) alebo tkanivový p 1 azminogénový aktivátor (tPA). Plazminogénové aktivátory (PA) sa inhibujú inhibitormi plazminových aktivátorov (PAI).In various diseases, regulation of plasma activity is impaired. Plasmins are generated from β-azminogen by plasminogen activators (PA), such as urinary β-azminogen activator (uPA) or tissue β-azminogen activator (tPA). Plasminogen activators (PAs) are inhibited by plasmin activator inhibitors (PAIs).
V súčasnej dobe sú známe dva rôzne fyziologicky relevantné typy PAI: Inhibítor plazminogénového aktivátora typu 1 (PAI-1) a inhibítor plazminogénového aktivátora typu 2 (P AI-2). Oba PAI sú i n h i b í t o r y šerp í nového typu.Two different physiologically relevant types of PAI are currently known: Plasminogen Activator Inhibitor Type 1 (PAI-1) and Plasminogen Activator Inhibitor Type 2 (P AI-2). Both PAIs are a new type of pump.
Pri zápale očí, uší alebo kože, napr. pri poškodení rohovky, dochádza všeobecne ku zvýšeniu plazmínovej aktivity v slznej tekutine. Plazmi n zodpovedá za rozklad fibronektínu v mimobunkovej matrici,za stimuláciu anginogenézy a za aktiváciu prokolagenázy na aktívnejšiu kolagenázu, čo má za následok odbúravanie molekúl kolagénu (Barlati a spol., Exp.Eye Res.51,In case of inflammation of eyes, ears or skin, eg. in case of corneal damage, plasmin activity in the tear fluid is generally increased. Plasma n is responsible for the breakdown of fibronectin in the extracellular matrix, for stimulating anginogenesis, and for activating procollagenase to more active collagenase, resulting in the degradation of collagen molecules (Barlati et al., Exp.Eye Res.51,
1-9 (1990)). Na liečenie rôznych patologických stavov, pri ktorých dochádza k zvýšeniu plazmínovej aktivity, sa už skôr použili nízkomolekulárne látky ako a 1 fa-aminokaprónová kyselina,alebo trans-4-aminoetycyk 1ohexankarboxy 1ová kyselina (tranexamová kyselina). Tak sa napríklad preukázalo, že tranexamová kyselina je vhodná na liečenie osteoartri t ídv . Pomocou tranexamovej kyseliny sa mohla znížiť nadmerná f i br i no 1 y t ická aktivita pri vrede na rohovke a podobných ochoreniach. Nevýhodou vyššie menovaných nízkomolekulárnych plazminových inhibítorov sú však ich vedľajšie toxické účinky.1-9 (1990)). Previously, low molecular weight substances such as α1α-aminocaproic acid, or trans-4-aminoethylcyclohexanecarboxylic acid (tranexamic acid) have been used to treat various pathological conditions in which plasmin activity is increased. Thus, for example, tranexamic acid has been shown to be useful in the treatment of osteoarthritis. By using tranexamic acid, excessive fibrin activity in corneal ulcer and similar diseases could be reduced. However, a disadvantage of the aforementioned low molecular weight plasmin inhibitors is their toxic side effects.
οο
Ďalším možným plazmi novým aprotinín, podmienečne vhodný (corneal u 1 c e r).Another possible reptile is new aprotinin, conditionally suitable (corneal at 1 c e r).
ihibítorom sa ukázal byť na liečenie vredu rohovkyThe inhibitor has been shown to treat corneal ulcer
Podstata vynálezuSUMMARY OF THE INVENTION
Prekvapivým nálezom bolo, že zápaly, hlavne očí, uší a kože, ale tiež napr.osteoartri t i s, alebo colitis ulcerosa,sa môžu úspešne liečiť inhibítormi aktivátorov p 1 azminogénov.A surprising finding was that inflammations, especially eyes, ears and skin, but also e.g. osteoarthritis, or colitis ulcerosa, can be successfully treated with inhibitors of β 1 azminogen activators.
Predmetom vynálezu je preto použitie inhibítorov p 1 azminogénových aktivátorov na výrobu liečiva pre terapiu a/alebo pre profylaxiu zápalu očí, uší, kože, pre osteoarthritis a/alebo colitis u 1 c e r o s a.Accordingly, it is an object of the invention to use β 1 azminogen activator inhibitors for the manufacture of a medicament for the therapy and / or prophylaxis of inflammation of the eyes, ears, skin, osteoarthritis and / or colitis in cerebrospinal fluid.
Inhibovala sa hlavne urokináza (uPA) a/alebo tPA, predovšetkým uPA a/alebo tPA. Vhodnými inhibítormi sú hlavne PAI-1 a/alebo PAI-2 a ich mutanty alebo var ianty,predovšetkým PAI-2, hlavne fragmenty PAI-2, napríklad delecia na N-konci predovšetkým N-terminá1nych aminokyselín 1-82, prípadne 1-84 pri PAI-2. Inhibitory sa môžu použiť buď samostatne alebo v kombinácii s inými liečivami, napríklad s anti b ioti kam i , pri čom sa môžu použiť ako lokálne tak i na systematickú liečbu. Pri osteoartri t i s sa účinné látky aplikovali predovšetkým intraarti ku 1 ár ne alebo intraoperatívne (často artroskopicky ) . Účinná dávka leží všeobecne pre topické použitie medzi 1-300 000 urokinázu inhibujúcimi jednotkami, s výhodou medzi 500 - 50 000 urokinázu inhibujúcimi jednotkami, pre i.v. aplikáciu, alebo pre i.m. aplikáciu za použitia rozpúšťadla medzi 50 - 750 000 urokinázu inhibujúcimi jednotkami na kg telesnej hmotnosť i .In particular, urokinase (uPA) and / or tPA, in particular uPA and / or tPA, was inhibited. Suitable inhibitors are, in particular, PAI-1 and / or PAI-2 and mutants or variants thereof, in particular PAI-2, in particular fragments of PAI-2, for example deletion at the N-terminus of particularly N-terminal amino acids 1-82 and 1-84, respectively. at PAI-2. Inhibitors can be used either alone or in combination with other drugs, for example anti-biotic agents, where they can be used both locally and for systemic treatment. In osteoarthritis, the active compounds were administered primarily intra-articularly or intraoperatively (often arthroscopically). Generally, an effective dose for topical use lies between 1-300,000 urokinase inhibiting units, preferably between 500-50,000 urokinase inhibiting units, for i.v. application, or for i.m. application using a solvent between 50-750,000 urokinase inhibiting units per kg body weight i.
Inhibitory, predovšetkým PAI-2, sa môžu stabilizovať pomocou prídavku fyziologicky prijateľných stabilizátorov ako je albumín, polygelín, hydrolyzát želatíny, glycín, cyste í n, glukóza, laktóza, maltóza a /alebo sacharóza.Inhibitors, in particular PAI-2, can be stabilized by the addition of physiologically acceptable stabilizers such as albumin, polygelin, gelatin hydrolyzate, glycine, cysteine, glucose, lactose, maltose and / or sucrose.
Oblasťami použitia inhibítorov sú všeobecne lokálne terapie a/alebo profylaxie zápalových očných chorôb ako je corneal ulcer, uveitis, k o n j u k t i v i t i s, pri operačnom alebo postoperačnom ošetrení, na ochranu očných štruktúr, iFields of application of inhibitors are generally topical therapies and / or prophylaxis of inflammatory ocular diseases such as corneal ulcer, uveitis, for surgical or post-operative treatment, for the protection of ocular structures;
predovšetkým v prípade zápalových priebehov, pri zápalových ušných chorobách, ako napr. zápale stredného ucha, zápale ušného bubienka, pretrhnutí ušného bubienka so zápalovým priebehom, ale tiež pri kožných chorobách srevádzaných zápalmi ako je ruža, hlavne pri infiltrácii tkaniva zápalovými bunkami ako sú makrofágy, monocyty a granulocyty, acantolýza, pľuzgierovitých ochoreniach ako je napr. pemfigus, ekzémy a kontaktné ä atopické zápaly kože, spáleniny so zápalovým priebehom, vaskulitídy, na podporu liečenia rán, terapie otvorených rán a kožných vredov. Ďalšími oblasťami použitia sú ošetrenia epitelárnych poškodení, osteoartri t ídy, colitis ulcerosa, Cronovej choroby,IBD (zápalové črevné choroby), pankreati t i s, akné, ošetrenie poškodenia epitelu, poškodenie rohov k y,tvorba jaziev pri poranení očí, skleritis, neliečiace sa vredové erózie, xerózie a keratózie. Ďalej sú inhibítory vhodné buď samotné alebo v kombinácii s ďalšími účinnými látkami, predovšetkým ako vymývacie roztoky pri intra a postoperačnom ošetrení a/alebo pri ošetrení uvedeného zapálenia otvorených rán. Ďalším výhodným použitím je ošetrenie kontaktých šošoviek pred používaním roztokom menovaného inhibítoru, buď samotného, alebo v kombinácii s ďalšími účinnými látkami na inhibíciu neovasku 1 ari žacie, na terapiu poranenia a zápalu očí a /alebo na ošetrenie infiltrátu očnej rohovky či zápalu rohovky vyvolaného nosením kontaktých šošoviek.especially in the case of inflammatory courses, in inflammatory ear diseases such as e.g. middle ear inflammation, eardrum inflammation, rupture of the eardrum with an inflammatory course, but also in skin diseases accompanied by inflammations such as rose, especially in tissue infiltration by inflammatory cells such as macrophages, monocytes and granulocytes, acantholysis, such as blisters. pemphigus, eczema and contact atopic skin inflammations, inflammatory burns, vasculitis, to promote wound healing, open wound therapy and skin ulcers. Other areas of application are treatment of epithelial lesions, osteoarthritis, colitis ulcerosa, Cron's disease, IBD (inflammatory bowel disease), pancreatitis, acne, treatment of epithelial damage, corneal damage, scar formation in eye injuries, scleritis, non-treatment ulcer erosions , xerosis and keratosis. Furthermore, the inhibitors are suitable either alone or in combination with other active ingredients, in particular as wash solutions for intra and post-operative treatment and / or for the treatment of said open wound inflammation. Another preferred use is the treatment of contact lenses prior to use with a solution of said inhibitor, either alone or in combination with other active agents for inhibiting neovascular disease, for the treatment of eye injury and inflammation and / or for treating corneal infiltrate or corneal inflammation induced by contact wear. lenses.
Nasleduje popis niekoľkých výhodných použití inhibítorov plazminogénových aktivátorov, ako je napríklad P AI- 2:The following is a description of several preferred uses of plasminogen activator inhibitors such as P AI-2:
Použitie pri ošetrení po poranení očnej rohovky pomocou 1aserkeratek tómi e, ale tiež pomocou keratotómie. Tieto postupy 1 aserkeratektómi e sa môžu použiť pri korektúrach indexu lomu pri krátkozrakosti a ďalekozrakosti, pri korektúrach ast igmati zrnu, pri korektúrach chýb rohovky, pri odstraňovaní jaziev, pri keratop 1 asti i, na vyhladenie rohovky pri vysychávaní,pri čerstvom poranení rohov k y,pri infekciách oka, napríklad vírusmi (ako napr. vírusom herpes), baktériami, hubami alebo parazitmi, pri vápenných usadeninách pod vrstvou epitelu (jav spojený soUse in treatment after corneal injury with 1 aserkeratek tome, but also with keratotomy. These aserkeratectomy methods 1 can be used in refractive index correction for nearsightedness and farsightedness, for correction of astigmatic grain, for correction of corneal defects, for scar removal, for keratope 1, for corneal smoothing during drying, for fresh corneal injury, in eye infections such as viruses (such as herpes virus), bacteria, fungi or parasites, lime deposits under the epithelium (a phenomenon associated with
I starnutím), pri zrastoch spojovky s rohovkou (pterýgia).Aging), with the corneal conjunctiva (pituitary).
Použitie pri zápale očí a zákale očí, napríklad po operácii laserom, normálnej očnej chirurgii (napríklad vitrektómii, kataraktchi rurgi i, extrakapsulárnej kataraktextrakcii, operáciách šošovky, výmene šošovky, implantácii šošovky, keratop 1 asti i , transplantáciách rohovky) pri konjukti v i t i s , keratokonjukti v i t i s , keratokonjukti v i t i s sicca, i r i t i s , i r idocyc 1 i t i s, keratitis, šedom zákale, Moorenovom vrede, vaskulitis uveitis, pri očných alergiách, pri infekciách, pri poruchách látkovej výmeny, zápalových ochoreniach a ochoreniach auto imunity (napríklad systemický Lupus erythematodes, Wegenerov syndróm, reumatický artritis, sarcoidóza, po 1yarthri t i s, pemphigus, pemphigoid, erythema multiforme, Sjoegrenov syndróm, črevné zápalové ochorenia, skleróza mu 11 i p 1 ex, Myasthenia gravis, keratitis, skleritis.Use in eye inflammation and eye opacity, for example after laser surgery, normal eye surgery (e.g. vitrectomy, cataractchi rurgi i, extracapsular cataractextraction, lens surgery, lens replacement, lens implantation, keratop 1 asti i, corneal transplantation) in conjunctivitis vitju , keratoconjugate vitis sicca, iritis, ir idocyclitis, keratitis, cataract, Mooren ulcer, vasculitis uveitis, eye allergies, infections, metabolic disorders, inflammatory diseases, and auto-immune diseases (e.g. systemic Lupus erythovirus, Worm, rheumatoid arthritis, sarcoidosis, after 1yarthri tis, pemphigus, pemphigoid, erythema multiforme, Sjoegren's syndrome, intestinal inflammatory diseases, sclerosis mu 11 ip 1 ex, Myasthenia gravis, keratitis, scleritis.
Použitie na zamedzenie tvorby jaziev v očiach po chirurgickom zásahu, prípadne po zranení.Use to prevent scar formation in the eyes after surgery or injury.
Použitie na urýchlené hojenie rán a optimálnu regeneráciu (napríklad hladké styčné plochy medzi starým tkanivom a novo tvoreným epitelom), na normalizáciu a stabilizáciu funkcie epitelu pri látkovej výmene a tkaniva po poranení, alebo po chirurgickom zákroku.Use for accelerated wound healing and optimal regeneration (for example, smooth contact areas between old tissue and newly formed epithelium), to normalize and stabilize epithelial function in metabolism and tissue after injury or after surgery.
Použitie na inhibíciu neovasku1arizáci e pri retinopatii, hlavne u diabetikov, pri omývaní sietnice, porušení ciev sietnice, zápale sietnice a uvey, pri transplantáciách rohovky.Use for inhibiting neovascularization in retinopathy, particularly in diabetic patients, in retinal wash, retinal vessel breakdown, retinal inflammation and uvea, in corneal transplants.
Použitie pri transplantáciách v oku,hlavne pri transplantácii rohovky. PAI-2 tu môže znížením afinity PMN redukovať citlivosť, zabrániť neovasku 1 arizáci i, bez toho, aby došlo k súčasne negatívnemu ovplyvneniu hojenia rán. To znižuje odmietavé reakcie organizmu.Use in eye transplants, especially corneal transplants. Herein, PAI-2 can reduce sensitivity by reducing the affinity of PMN, preventing neovascularization without, at the same time, adversely affecting wound healing. This reduces the body's negative reactions.
Použitie pri opuchoch v oblasti oka, napríklad opuchu makula a submakula, opuchu po fotokoagu1áci i, opuchu rohovky, opuchu spojoviek, opuchu sietnice a opuchu okolia oka.Use in eye swelling such as macula and submacula swelling, photocoagulation swelling, corneal swelling, conjunctival swelling, retinal swelling, and swelling around the eye.
Použitie pri infiltrácii v oblasti oka, ako rohovky, očnej komory, spojovky a skléra.Use in eye infiltration such as cornea, eye chamber, conjunctiva and sclera.
Použitie pri terapii Corneal ulcer.Use in Corneal ulcer therapy.
PAI-2 sa môže napr. pripraviť nasledovným spôsobom: podľa spôsobu uvedenom v EP-O-238-275 sa PAI-2--cDNA izolovala bežne známym spôsobom, klonovala, preniesla do vektorov a transformovala vo vhodných hostiteľských bunkách. Bunky sa známym spôsobom ŕermentovali a dezintegrova1 i. Na čistenie rPAI-2 z lyzátov Escherichia coli sú napr. vhodné kombinácie rôznych chromatografi okých metód (napr.iontomeničová chromatografia na Q-Sepharóze, hyzdrofóbna chromatografi a na Phenylsepharóze, gelová filtrácia cez Sephacryl alebo Fractogel. Na čistenie rPAI-2 z kvasnicových lyzátov je vhodný postup skladajúci sa z hrubého čistenia (separácia buniek, dezintegácia buniek v guľovom mlyne, protiprúdová filtrácia a protiprúdová koncentrácia). Následné čistenie do vyššieho stupňa (chrómatografickými postupmi, ako je napríklad uvedené v WO-91/02057, alebo pomocou iontomeničovej chromatografie a imunoafinitnej chromatografi e). Špecifická aktivita je všeobecne 1 50 000 jednotiek/mg alebo viac, vztiahnutá na inhibiciu humánnej úrok i názy.PAI-2 can e.g. according to the method disclosed in EP-O-238-275, PAI-2 - cDNA was isolated in a conventional manner, cloned, transferred to vectors and transformed in suitable host cells. The cells were regenerated and disintegrated in a known manner. For purification of rPAI-2 from Escherichia coli lysates, e.g. suitable combinations of various chromatographic methods (eg ion exchange chromatography on Q-Sepharose, hydrophobic chromatography and on Phenylsepharose, gel filtration through Sephacryl or Fractogel. For purification of rPAI-2 from yeast lysates, a procedure consisting of a coarse purification (cell separation, desinte ball-mill cells, countercurrent filtration and countercurrent concentration) Subsequent purification to a higher degree (by chromatographic methods such as disclosed in WO-91/02057, or by ion exchange chromatography and immunoaffinity chromatography) Specific activity is generally 1 50 000 units / mg or more, related to the inhibition of human interest and name.
PAI-1 možno pripraviť analogickým spôsobom, napríklad podľa WO 90/13648.PAI-1 can be prepared in an analogous manner, for example according to WO 90/13648.
Výhody predovšetkým zápalov bez inhibítorov aktivátorov p 1 azminogénov vo všeobecne netoxickej monoterapii vedľajších účinkov, pri súčasnej spočívajú uvedených i n h i b í c i i neovasku1arizáci e . Pretože používané koncentrácie ínhibítorov plazm í nových aktivátorov sú podstatne nižšie ako koncentrácie plazmi nových ínhibítorov, možná je súčasná aplikácia s inými účinnými látkami, z čoho kombinácia s antibiotikami je zvlášť výhodná. Ďalej, pretože je použiteľné množstvo ínhibítorov plazmi nových aktivátorov zreteľne nižšie ako u plazmi nových ínhibítorov, znižuje sa preto všeobecne nebezpečenstvo alergických reakcií. Výhodou je i d 1 hodobý úôinok v porovnaní s plazmi novými i n h i b i t o r m i.In particular, the benefits of inflammations without inhibitors of activators of β 1 azminogens in the generally non-toxic monotherapy of side effects, while at the same time relying on the above mentioned neovascularization. Since the plasma inhibitor concentrations of the novel activators used are substantially lower than the plasma concentrations of the novel inhibitors, co-administration with other active substances is possible, of which a combination with antibiotics is particularly advantageous. Furthermore, since the useful amount of plasma inhibitors of the novel activators is clearly lower than that of the plasma of the novel inhibitors, the risk of allergic reactions is generally reduced. The advantage is an i d 1 hour effect compared to new reptiles.
Príklad 1Example 1
Použitie PAI-2 na terapiu Corneal ulcerUse of PAI-2 for Corneal ulcer therapy
V králičom modele popísanom Cejkovou a spol. (H i stochemistry 45:71-75) pre Corneal ulcer sa PAI-2 aplikoval Ιοί 5 až 100 /ug/m 1) ká 1 ne do (25/Ug/ml oka rôznych koncentráciáchIn the rabbit model described by Cejkova et al. (H stochemistry 45: 71-75) for Corneal ulcer, PAI-2 was applied at 5-100 µg / ml) to (25 µg / ml eye of various concentrations)
3x denne, 100 /ug/ml dvakrát denne). Kontrolná skupina obdržala rovnaké objemy (1 ml) rozpúšťadla (fyziologický roztok chloridu sodného, pH 7,2), aplikované dvakrát denne. Referenčnou látkou bol aprotinín (5000 medzinárodných jednotiek/ml v prvých dvoch týždňoch, dvakrát denne; v nasledujúcich dvoch týždňoch sa dávka znížila na 2500 medzinárodných jednotiek/ml).3 times a day, 100 µg / ml twice a day). The control group received equal volumes (1 mL) of solvent (saline, pH 7.2) applied twice daily. The reference substance was aprotinin (5000 International Units / ml in the first two weeks, twice daily; in the next two weeks the dose was reduced to 2500 International Units / ml).
Pôsobením 0,75 M hydroxidu sodného pomocou plastovej trubičky s vnútorným priemerom 11 mm, sa vyvolal masívny nárast zápalových buniek. ľieto vykazovali proteo 1 ytickú aktivitu a súčasne indukovali keratinocyty syntetizujúce odlišné spektrum proteog1ykánov na epiteli rohovky. Následkom toho je porušenie riadnej štruktúry rohovky, čo ďalej vedie ku strate transparencie.Treatment with 0.75 M sodium hydroxide using a plastic tube with an internal diameter of 11 mm induced a massive increase in inflammatory cells. others exhibited proteolytic activity and at the same time induced keratinocytes synthesizing a different spectrum of proteoglycans on the corneal epithelium. As a result, the proper structure of the cornea is disrupted, further leading to a loss of transparency.
Merali sa nasledovné parametre: perforácia tvorba vredu, neovaskularizácia, plazmi nová aktivita tekutine, znaky zápalu ako transparencia očí, viditeľnosť s kontrolnou skupinou sa u PAI-2 skupiny pozorovali nasledovné výhody: plazmínová aktivita sa mohla zredukovať na minimum.The following parameters were measured: perforation ulcer formation, neovascularization, plasma new activity fluid, signs of inflammation such as eye transparency, visibility with the control group, the following advantages were observed in the PAI-2 group: plasmin activity could be reduced to a minimum.
prúd zápalových rohovky, v slznej buniek, dúhovky (Tab1). V porovnanícurrent of inflammatory cornea, in tear cells, iris (Tab1). Compared to
Pre rovnakú redukciu plazm í novej aktivity pomocou aprotinínu je potrebná častejšia aplikácia. Pri PAI-2 sa úplne zabránilo perforácii a tvorbe vredu. Tieto účinky možno dosiahnuť tiež aprotinínom. Pri PAI-2 došlo k prekvapivo vysokému a trvalému zníženiu výskytu zápalových buniek, ktoré vznikli po experimentálnom zásahu až na úroveň zdravého tkaniva.More frequent application is required to reduce plasma activity of the same by aprotinin equally. For PAI-2, perforation and ulceration were completely prevented. These effects can also be achieved by aprotinin. In PAI-2, there was a surprisingly high and sustained reduction in the incidence of inflammatory cells that occurred after experimental intervention to the level of healthy tissue.
Následné pozitívne účinky, prekvapivo vzniknuté pôsobením PAI-2, ktorý zabránil neovaskularizácii, viedli k uplnemu uzdraveniu. Tak sa mohla obnoviť transparencia oka a viditeľnosť dúhovky. Pri ošetrení aprotinínom síce nedochádza k ulcerácii a perforácii rohovky, nedochádza však ani k obnoveniu transparencie. Pozitívne výsledky dosiahnuté už pri relatívne nízkej dávke PAI-2 sa nedosiahli ani pri vyšších dávkach aprotinínu.The subsequent positive effects, surprisingly due to PAI-2, which prevented neovascularization, led to complete recovery. Thus, the transparency of the eye and the iris visibility could be restored. Although aprotinin treatment does not cause ulceration and perforation of the cornea, it does not restore transparency. Positive results already achieved with a relatively low dose of PAI-2 were not achieved even with higher aprotinin doses.
Inhibovanie plazminogénových aktivátorov pomocou PAI-2 má, na rozdiel od inhibície plazmínu, napr. aprotinínom, ešte ďalšie výhody. Výlučné ošetrenie inhibítormi plazminogénových aktivátorov stačia pre úspešnú liečbu, čo je výhoda oproti skôr používanej terapii. Extrémne vysoký účinok používanej účinnej látky dovoľuje aplikáciu inhibítoru vo veľmi nízkych koncentráciách, čo umožňuje ešte tiež kombinovanú terapiu, napríklad s antibiotikami, ako je ch 1oramfen iko1.Inhibition of plasminogen activators by PAI-2 has, unlike inhibition of plasmin, e.g. aprotinin, yet other advantages. Exclusive treatment with plasminogen activator inhibitors is sufficient for a successful treatment, which is an advantage over previously used therapy. The extremely high effect of the active ingredient used permits the application of the inhibitor at very low concentrations, which also allows for combination therapy, for example with antibiotics such as chloramphenicol.
V ďalšom pokuse sa ošetrenie vredu rohovky nevykonalo priamo po indukcii, napríklad účinkom lúhu, ale začalo až po 10 dňoch. V tomto neskoršom okamihu už plazmi nová aktivita v slznej kvapaline vzrástla na hodnotu 2 - 2,5 zum/ml. Pokiaľ sa v'tejto dobe (10 dní po indukcii) zaháji liečba aprotinínom (5000 medzinárodných jednotiek/ml, lokálna aplikácia dvakrát denne), klesá preukázateľná koncentrácia aktívneho plazminu na normálnu hodnotu. Tento účinok však vydrží asi len dve hodiny potom hodnota plazmínu opäť stúpa.In another experiment, treatment of the corneal ulcer was not performed directly after induction, for example with caustic, but started only after 10 days. At this later time, the reptile activity in the tear fluid has increased to 2 - 2.5 zum / ml. If aprotinin treatment (5000 International Units / ml, topical administration twice daily) is initiated at this time (10 days after induction), the detectable concentration of active plasmin decreases to normal. However, this effect lasts only about two hours after which the plasmin value rises again.
Pokiaľ sa v tomto časovom bode začne liečba pomocou PAI-2 (napríklad 100 zúg/ml, lokálna aplikácia), klesá koncentrácia aktívneho plazmínu na normálne hodnoty (0,4 - 0,6 zug/ml). Účinok jednorazovej aplikácie PAI-2 trvá prekvapivo veľmi dlho. Hodnota koncentrácie plazmínu v slznej kvapaline je napríklad po 48 hod. po jednorázovej aplikáciiWhen PAI-2 treatment is initiated at this point in time (e.g., 100 µg / ml, topical application), the active plasmin concentration decreases to normal values (0.4 - 0.6 zug / ml). Surprisingly, the effect of a single application of PAI-2 lasts for a very long time. The value of plasmin concentration in the tear fluid is, for example, after 48 hours. after a single application
PAI-2 ešte len 1 zug/ml. Pri všetkých troch testovaných koncentráciách PAI-2 (5,25,100 zug/ml) bolo možné potlačiť ulceratívny proces. Najlepšie terapeutické výsledky sa dosiahli pri použití koncentrácie PAI-2 25zug/ml.PAI-2 still only 1 zug / ml. At all three concentrations of PAI-2 (5.25,100 zug / ml) tested, the ulcerative process could be suppressed. The best therapeutic results were achieved using a PAI-2 concentration of 25 µg / ml.
Tento prekvapivo dlhodobý účinok sa pozoroval len pri i nhibítoroch aktivátorov plazmínogénu PAI-2, nie však pri i n h i bícii plazmi novaprotininom.This surprisingly long-lasting effect was only observed with inhibitors of plasminogen activators PAI-2, but not with healing by plasmas with novaprotinin.
.Zatiaľ čo lokálna aplikácia steroidov, napríklad dexametazonnátriumfosfátu, je spojená pri ošetrení oka s vedľajšími účinkami,ako napríklad so zmenou objemu očnej gule a očného tlaku, nemá ošetrenie oka PAI-2 pri normálnom oku žiadne vedľajšie účinky. Histológia, napr. vzorka lame I ár nej štruktúry anteriórneho tkaniva, ale i biochemické nálezy, ako napr. hydratácia rohovky , enzymatické aktivity (laktátdehydrogenáza, kyslá fosfatáza, kyslá glykozidáza, alkalická fosfatása, sukcinátdehydrogenáza) zostávajú nezmenené. Okrem toho sa dokázalo, že popri úspešnej i nh i b í c i i zápalu, sa nebrzdila reepite1 i z á c i a .While topical application of steroids, such as dexamethasone sodium phosphate, is associated with side effects in the treatment of the eye, such as changes in ocular sphere volume and ocular pressure, treatment of the eye with PAI-2 in the normal eye has no side effects. Histology, e.g. a sample of the lamellar structure of the anterior tissue, but also biochemical findings such as e.g. corneal hydration, enzymatic activities (lactate dehydrogenase, acid phosphatase, acid glycosidase, alkaline phosphatase, succinate dehydrogenase) remain unchanged. In addition, it has been shown that, in addition to successful inflammation, it did not inhibit repercussion.
Meranie aktivity plazmínu v slznej kvapaline:Measurement of plasmin activity in tear fluid:
Malé kolieska filtračného papiera (filtračný papier W h a t man s priemerom 5 mm) sa namočili do substrátového roztoku D-va 1 - 1 eu-1 y s-1 r i f 1 uor'omety 1 am i nok umar í nu (FCA, Enzýme System Products, Livermore, CA, USA) a usušili sa. Roztok substrátu sa pripravil nasledovným spôsobom: 1 mg substrátu sa rozpustil v 4 kvapkách Ν,Ν-dimetylformamidu a pridal sa 1, ml 0, 1M ľris -HCI pH 7,2. Roztoky plazmínu s koncentráciou 0,2 0,5zug/ml sa pripravili rozpustením plazmínu (Sigma) v 0,1M ľris-HCl pufrového roztoku s pH 7,2. 20 zu 1 každej koncentrácie sa nakvapkalo na papierové kolieska, ktoré sa vopred impregnovali roztokom substrátu a. potom inkubovali vo vlhkej komôrke pri 37’C (v termostate), spoločne s kolieskami papiera napustenými slznou kvapalinou. Na určenie koncentrácie plazmínu v slznej kvapaline sa papierové koliesko položilo na rohovku a slzná kvapalina vsakovala 5 sekúnd. Počas inkubácie papierových koliesok pri 37’C sa papierové kolieska prehliadali v 2 hodino9 vých intervaloch v UV svetle. Intenzita žltej fluorescencie slznej kvapaliny vyvolaná UV žiarením sa porovnávala s fluorescenciou známej koncentrácie plazmínu (kalibračná krivka získaná z papierových koliesok v známej koncentrácii plazmínu) a tak sa určila plazmínová aktivita vzoriek.The small wheels of filter paper (W hat man filter paper with a diameter of 5 mm) were soaked in the substrate solution D-va 1 - 1 eu-1-s-1 rifluoromethylamine amine (FCA, Enzyme System Products, Livermore, CA, USA) and dried. The substrate solution was prepared as follows: 1 mg of the substrate was dissolved in 4 drops of Ν, Ν-dimethylformamide and 1 ml of 0.1 M β-HCl pH 7.2 was added. Plasmin solutions at a concentration of 0.2 0.5 µg / ml were prepared by dissolving plasmin (Sigma) in 0.1 M 1 mM HCl-buffer pH 7.2. 20 of each concentration of 1 was dropped on a paper circles that were pre-impregnated with a solution of a substrate. they were then incubated in a humid chamber at 37 ° C (in a thermostate), together with paper wheels impregnated with tear liquid. To determine the concentration of plasmin in the lacrimal fluid, the paper wheel was placed on the cornea and the lacrimal fluid was soaked for 5 seconds. During the incubation of the paper wheels at 37 ° C, the paper wheels were inspected at 2 hour intervals in UV light. The intensity of the yellow tear fluid fluorescence induced by UV irradiation was compared with the fluorescence of a known plasmin concentration (a calibration curve obtained from paper wheels at a known concentration of plasmin) to determine the plasmin activity of the samples.
Tabuľka 1Table 1
Ošetrenie corneal ulcer vyvolané pôsobením lúhuCaustic-induced corneal ulcer treatment
Testované skupinyTested groups
Skupina 1Group 1
Skupina 2Group 2
Skupina 3Group 3
Skupina 4Group 4
Parameter kontrolná skupina (fyziologický roztok chloridu sodného; aplikovaný dvakrát denne) skupina aprotininu (5000 medzinárodných jednotiek/ml; aplikácia dvakrát denne) rPAI-2 (100 zug/ml, aplikácia dvakrát denne) rPAI-2 (25 zug/ml, aplikácia trikrát denne)Parameter Control group (saline; twice daily) aprotinin group (5000 International Units / ml; twice daily) rPAI-2 (100 zug / ml, twice daily) rPAI-2 (25 zug / ml, three times) daily)
Výsledok ošetrenia 4 testovaných skupín po 4 týždňochTreatment result of 4 test groups after 4 weeks
3 43 4
Perforáciaperforation
11
Príklad 2Example 2
Použitie PAI-2 na regeneráciu epitelu rohovkyUse of PAI-2 to regenerate corneal epithelium
Účinok PAI-2 na regeneráciu epitelu rohovky sa sledoval na králičom modeleThe effect of PAI-2 on corneal epithelial regeneration was studied in a rabbit model
Popis móde 1 uMode description 1 u
Pokusy sa vykonávali na dospelých králikoch činčila (2,5— 3,0 kg telesnej hmotnosti. Anestézia sa uskutočňovala i.v. aplikáciou tiopentalu (25 mg/kg telesnej hmotnosti). Oči sa potom fixovali a rohovka sa mechanicky poškodila: celá rohovka sa opatrne dvakrát deepite1 izova1 a (v rozmedzí jedného týždňa) pomocou Graefovho noža. Potom sa PAI-2 (v PBS pufrového roztoku, pH 7,2) trikrát denne v rôznych koncentráciách (5-50 zug/ml) lokálne aplikoval do oka. Kontrolná skupina dostala rovnaký objem (0,5 m 1) P B S pufrového roztoku (pH 7,2) alebo aprotinínu (60 /ug/ml) alebo flurbiprofénu (0,1% roztok) v PBS pufrového roztoku, pH 7,2.Experiments were carried out on chinchilla adult rabbits (2.5-3.0 kg body weight. Anesthesia was also administered with thiopental (25 mg / kg body weight). The eyes were then fixed and the cornea mechanically damaged: the whole cornea was cautiously twice deepite1 izova1a (within one week) using a Graef knife, then PAI-2 (in PBS buffer, pH 7.2) was applied topically to the eye three times daily at various concentrations (5-50 zug / ml). volume (0.5 mL) of PBS buffer solution (pH 7.2) or aprotinin (60 µg / ml) or flurbiprofen (0.1% solution) in PBS buffer solution, pH 7.2.
Zvieratá boli v rôznom čase od poranenia (po 1, 4, 7, 14, 21, 28 dňoch) zabité. Štruktúra rohovky sa skúmala histologickyabiochemicky.Animals were killed at various times after injury (1, 4, 7, 14, 21, 28 days). The structure of the cornea was examined histologically and biochemically.
V slznej kvapaline sa určila aktivita plazmínu a korelovala sa s histologickými údajmi. Dvakrát týždenne sa fotograficky dokumentoval optický obraz stavu očí.Plasmin activity was determined in the tear fluid and correlated with histological data. An optical image of the condition of the eyes was photographed twice a week.
Aktivita plazmínu sa stanovovala spôsobom popísaným v príklade 1. Po usmrtení zvierat sa oči ihneď vybrali a vyrezala sa rohovka alebo celý predný očný Segment.Plasmin activity was determined as described in Example 1. After the animals were sacrificed, the eyes were immediately removed and the cornea or whole anterior eye segment was excised.
Niekoľko rohoviek sa podrobilo impregnácii striebrom podľa McGovérna (1955). Po stiahnutí epitelu sa preparáty vložili do želatíny. Všetky ostatné metódy sa uskutočňovali s celými prednýmiočnými segmentmi. Časť sa ponorila do ľahkého benzínu, ktorý sa vychladil zmesou acetónu a pevného oxidu uhličitého. Rezy (12 zum silné) sa vykonali v kryostate rovnobežne, alebo kolmo na povrch oka. Rezy sa potom preniesli na vopredSeveral corneas were subjected to silver impregnation according to McGovern (1955). After contraction of the epithelium, the preparations were placed in gelatin. All other methods were performed with whole anterior segments. A portion was immersed in light gasoline, which was cooled with a mixture of acetone and solid carbon dioxide. Sections (12 µm thick) were made in the cryostate parallel or perpendicular to the eye surface. The sections were then transferred in advance
2 neochladený nosič preparátu alebo na semipermeabilnú membránu a uskutočnila sa skúška na g 1 ukozaming1 ykán, am inopeptidázu M(APM), d ipeptidy1peptidázu IV (DPP IV), gama-g1utamy1transferázu (GGT), alkalickú fosfatázu (A1P), adenositri fosfatázu závislú na Na*-K *' (ATPáza) a dehydrogenázy (sukcinátdehydrogenáza SDH, 1 aktátdehydrogenáza LDH).2 uncooled preparation carrier or semipermeable membrane, and assayed for g 1 ukosamycin, am inopeptidase M (APM), dipeptide 1 peptidase IV (DPP IV), gamma -glutamyltransferase (GGT), alkaline phosphatase (A1P), aden, Na * -K * '(ATPase) and dehydrogenase (succinate dehydrogenase SDH, 1 actate dehydrogenase LDH).
Pred dôkazom APM, DPP IV, GGT a A1P sa rezy fixovali dve 'minúty v chladnej zmesi chloroformu a acetónu (1:1). Dôkaz AlP sa vykonal azokopu1ačnou metódou použitím naftol-AS-MX-fosfátu (Calbiochem, La Jolla: Ca, USA) a soli Fast Blue-B (Michrome, Gurr, Polle, UK). AMP sa dokázal pomocou A1a-4-metoxy-betanafty 1-amin-a1a-MNA (Bachem, Bubendorf, CH) a soli Fast Blue-B (FBB, Michrome Gurr, UK), DPP IV pomocou gly-pro-MNA (Bachem, CH) a soli Fast Blue-B (Michrome Gurr, UK), GGT pomocou gama-glu-MNA (Bachem, CH), gly (Lachema , Brno, ČSFR) a Fast Blue-B, podľa Lojdu a spol. (1979). Rezy na sem ipermeabi 1ných membránach sa použili na dôkaz kyslej fosfatázy (AcP) pomocou azokopu lačne j reakcie s naftol-AS-BI -fosfátom (Calbiochem) a hexazonium p-rosani 1 ínom, ktorý sa pripravil z rosalínu čistého akridínu. (Merck, Darmstadt, SRN) a z beta-g 1 ukuronidázy (beta-glu) a z N-acety1-beta-D-g1ukozaminidázy (Ac-Glu), Substráty: Naftol-AS-BI-beta-glucuronid a nafto 1-AS-BI-acety Γ-beta-D-g1 ukoz am i n i d (oba od Ca1 b iochem ) .Na oba substráty sa využili kopulačné reakcie s hexzonium-p-rosanilínom. Kyslá beta-galaktozidáza sa dokázala pomocou Lojdovej indigometódy (Čejková, Lojda, 1 9 75, Lojda a spol., 1 9 79 ) za použit'ia 4-C 1 -5-Br-3-i ndo 1 y 1 beta-D-ga 1 aktoz i du (Cyc 1oChemica 1 , LosAngeles, C A, U S A).Prior to APM, DPP IV, GGT, and A1P detection, sections were fixed for two minutes in cold chloroform / acetone (1: 1). AlP detection was performed by the azocopy method using naphthol-AS-MX-phosphate (Calbiochem, La Jolla: Ca, USA) and Fast Blue-B salt (Michrome, Gurr, Polle, UK). AMP was detected with A1a-4-methoxy-beta-naphtha-1-amino-a1a-MNA (Bachem, Bubendorf, CH) and Fast Blue-B salt (FBB, Michrome Gurr, UK), DPP IV with gly-pro-MNA (Bachem , CH) and Fast Blue-B salts (Michrome Gurr, UK), GGT using gamma-glu-MNA (Bachem, CH), gly (Lachema, Brno, CSFR) and Fast Blue-B, according to Lojda et al. (1979). Sections on semipermeable membranes were used to detect acid phosphatase (AcP) by an azocope of fasting with naphthol-AS-BI-phosphate (Calbiochem) and hexazonium p-rosin, prepared from rosaline pure acridine. (Merck, Darmstadt, Germany) and from beta-g 1 ukuronidase (beta-glu) and from N-acetyl-beta-D-glucosaminidase (Ac-Glu), Substrates: Naphthol-AS-BI-beta-glucuronide and naphtho 1-AS -BI-acetyl-beta-D-glycosamine (both from Ca1 biochem). Both substrates were subjected to a coupling reaction with hexzonium-β-rosaniline. Acid beta-galactosidase was detected using the Lojda indigomethod (Cejkova, Lojda, 1975, Lojda et al., 1979) using 4-C1-5-Br-3-indolyl beta-D. -ga 1 activity (Cyc 10 Chemica 1, Los Angeles, CA, USA).
ATPáza sa dokázala podľa Čejkovej a Lojdu (1978) použitím ATP-Tris a bárnatej soli.ATPase was detected according to Cejkova and Lojda (1978) using ATP-Tris and barium salt.
Dehydrogenázy sa detekovali pomocou nitro BT (Lachema, Brno, ČSFR) ako akceptora elektrónov v nefixovaných kryostatových rezoch podľa Lojdu a spol. (1979).Dehydrogenases were detected using nitro BT (Lachema, Brno, ČSFR) as electron acceptor in non-fixed cryostat sections according to Lojda et al. (1979).
Na dôkaz g 1 ukozaminog1ykánov sa rezy fixovali 5 min. v chladnom etanole a zafarbili sa 1% roztokom alciánovej modrej, obsahujúcom rôzne koncentrácie chloridu horečnatého (Čejková a spol.., 1 973 ), ale tiež s 1% roztokom alciánovej modrejFor evidence of g 1 ukosaminoglycans, sections were fixed for 5 min. in cold ethanol and stained with 1% alcian blue solution containing different concentrations of magnesium chloride (Cejkova et al., 1,973), but also with 1% alcian blue solution
3 v 3% kyseline octovej, pH 2,5.3 in 3% acetic acid, pH 2.5.
Zostávajúca časť anteri orných očných segmentov sa fixovala v 4% paraforma1dehyde v 0,1M fosfátovom pufrovom roztoku pHThe remaining portion of the anterior eye segments was fixed in 4% paraformaldehyde in 0.1M phosphate buffered pH
7,2 a potom sa narezala v kryostate. 12/um silné rezy sa preniesli na nosič pokrytý anbumínom, rozmrazili sa a vysušili. Fixované rezy sa použili na dôkaz DPP IV (s Gly-arg-MNA, Bachem, CH, a s aldehydom kyseliny n itrosa 1 icy 1 ovej , NSA, Merčk) a DPP II (s lys-pro-MNA a Fast Blue-B (Lojda, 1985, Čejková a Lojda, 1986). Pri niektorých fixovaných rohovkách sa vyšetrovali morfologické zmeny farbením hematoxa1 ineozínom.7.2 and then cut in a cryostate. 12 µm thick sections were transferred to a carrier coated with anbumin, thawed and dried. Fixed sections were used to detect DPP IV (with Gly-arg-MNA, Bachem, CH, and nitrosylic acid aldehyde, NSA, Merck) and DPP II (with lys-pro-MNA and Fast Blue-B ( Lojda, 1985, Cejkova and Lojda, 1986) Morphologic changes were examined for ingestion of hematoxa1 by inesosin in some fixed corneas.
Kontrolný pokus - pufrový roztokControl - buffer solution
V neošetrovanom oku stúpa aktivita plazmínu na 0,2 - 0,4 zug/ml počas dvoch hodín po zranení. Po jednom dni dosahuje plazmínová aktivita hodnoty 1,0 - 2,0 zug/ml a zostáva na tejto hodnote až do siedmeho dňa a potom klesá do 14. dňa na 0,2 - 0,4 xug/ml a po 21 dňoch dosahuje hodnoty menšie ako 0,2 zug/m 1 (Tab . 2).In the untreated eye, plasmin activity rises to 0.2-0.4 zug / ml within two hours after injury. After one day, the plasmin activity reaches 1.0 - 2.0 zug / ml and remains at that value until day 7, and then decreases to day 0.2 to 0.4 xug / ml by day 14, reaching 21 less than 0.2 zug / m 1 (Table 2).
Epitel sa regeneruje a obahuje rôzne enzýmové aktivity (DPP IV, kyslé glykozidázy a lysozomálne proteázy (tabuľka 3). Počas 4 dní po deepitelizácii dochádza k masívnemu nárastu zápalových buniek (predovšetkým polymorfných neutrofí 1nych granu1ocytov, PMN), ktoré sa pozorovali v podpornom väzivovom tkanive. Na okraji prebieha neovaskularizácia rohovky. Niektoré keratinocyty nekrotizujú a bývajú nahradené keratinocytrni z okolia. Po 14 až 21 dňoch sa reepi ta 1 izáci a skončí. K negatívnym dôsledkom patrí angiogenéza a strata transparenci e (transparenci a sa znovu úplne neobnoví).Epithelium regenerates and contains various enzymatic activities (DPP IV, acid glycosidases and lysosomal proteases (Table 3). Massive growth of inflammatory cells (especially polymorphic neutrophil granulocytes, PMN) observed in supporting connective tissue occurs within 4 days after deepitelization. Some keratinocytes do not necrotize and are replaced by local keratinocytes After 14 to 21 days, the relapse is complete and the negative consequences include angiogenesis and loss of transparency (transparency and not completely recovering again).
Vzniknutý zákal rohovky bol i rreverz i b i 1 ný.The resulting corneal opacity was also reverse.
Ošetrenie flurbiprofénom:Flurbiprofen treatment:
Plazmínová aktivita v s 1 znej kvapa1 i ne vzrastá podobne ako pri kontrolnej skupine pufrového roztoku (tabuľka 2).Plasmin activity in a single liquid is increasing similar to that of the buffer solution control group (Table 2).
Na rozdiel od kontroly s pufrovým roztokom do podporného väzivového tkaniva prúdilo menej zápalových buniek, neovaskularizácia sa zoslabila, avšak nezastavila sa. V niekoľkých prípadoch nedošlo k reepite 1 izáci i , často sa dokonca inhibovala. Epitel rohovky vykazoval len veľmi nízku aktivitu APľázy a GGT. Výsledky sú uvedené v tabuľke 3.Unlike the buffer solution control, fewer inflammatory cells flowed into the supporting connective tissue, neovascularization attenuated but did not stop. In a few cases, relapse 1 did not occur, often even inhibiting. Corneal epithelium showed only very low activity of APlase and GGT. The results are shown in Table 3.
Ošetrenie aprotinínom alebo P AI-2 :Aprotinin or P AI-2 treatment:
Počas celého priebehu pokusu sa aktivity p lazminu výrazne znižovali. Maximálne hodnoty v aproti n í nove j skupine dosahujú hodnoty ľ,0 zug/ml, v skupine PAI-2 len 0,4 /ug/ml (tabuľka 2). Aktivity DPP IV, kyslých glykozidáz a 1 yzozomá1nych hydroláz sú u oboch sledovaných skupinách relatívne nízke a aktivity ATPázy a GGT sú normálne.Throughout the course of the experiment, the activity of plasmin decreased significantly. The maximum values in the versus new group reached ľ0.0 µg / ml, in the PAI-2 group only 0.4 µg / ml (Table 2). The activities of DPP IV, acid glycosidases and 1-isosomal hydrolase are relatively low in both groups and ATPase and GGT activities are normal.
Pri ošetrení aprotinínom sa dostáva do podporného väzivového tkaniva len relatívne malé množstvo zápalových buniek, v skupine PAI-2 sa nenašli takmer žiadne.When treated with aprotinin, only a relatively small amount of inflammatory cells enter the supporting connective tissue, almost none were found in the PAI-2 group.
V oboch skupinách sa transparencia opäť obnovila.In both groups, transparency was restored again.
V aprotinínove j skupine sa rana uzdravila len po 14 dňoch, zatiaľ čo v skupine PAI-2 bola už 10. deň po d e e p i t e 1 i zácii opäť uzatvorená. Pri použití aprotinínu sa nemôže zabrániť neovaskularizácii rohovky, zatiaľ čo pri použití PAI-2 (vo všetkých použitých koncentráciách) sa an'giogenéza úplne blokovala.In the aprotinin group, the wound recovered only after 14 days, while in the PAI-2 group, the wound was re-occluded as early as 10 days after treatment. The use of aprotinin cannot prevent neovascularization of the cornea, while the use of PAI-2 (at all concentrations used) completely blocked the diagnosis.
Výhody liečenia PAI-2 pripadne inhibítormi aktivátorov p 1azmľnogénov spočívajú teda v urýchlení reepitelializácie, v úplnom zastavení neovaskularizácie, v úplnej a rýchlej (rýchlejšej než pri aprotiníne alebo iných látkach) obnove transparencie. PAI-2 veľmi dobre potláča zápal rohovky a podporného väzivového tkaniva. V oblasti zápalu sa napríklad nenašli takmer žiadne PMN.Enzymatické aktivity epitelu rohovky sa pri použití PAI-2 veľmi rýchle normalizovali. Ako ďalšiu výhodu je možné oceniť i to, že použité koncentrácie PAI-2 sú omnoho menšie než u aprotinínu.Thus, the advantages of treatment with PAI-2, optionally with inhibitors of β-amino-activator activators, are the acceleration of re-epithelialization, complete cessation of neovascularization, complete and rapid (faster than aprotinin or other agents) restoration of transparency. PAI-2 suppresses corneal inflammation and supporting connective tissue very well. For example, almost no PMNs were found in the inflammation region. Corneal epithelial enzymatic activities normalized very rapidly using PAI-2. As a further advantage, it is appreciated that the concentrations of PAI-2 used are much less than that of aprotinin.
PAI-2 je ešte úplne aktívny dokonca i v koncentráci i 10/ug/ml. S tým je spojená výhoda PAI, spočívajúca v tom, žePAI-2 is still fully active even at a concentration of even 10 µg / ml. This is associated with the advantage of PAI that:
5 sa môže aplikovať ešte súčasne s ďalšími účinnými látkami.5 can be applied concurrently with other active substances.
Tabuľka 2Table 2
Aktivita plazmínu v slznej kvapaline (zug/ml)Plasmin activity in tear fluid (zug / ml)
Opakovaná deepitelizáciaRepeated deepitelization
66
Tabuľka 3Table 3
Opakovaná deepite1 izáci a králičích očíRepeated deepite1 and rabbit eyes
Testované skupinyTested groups
Parameterparameter
Pufrový roztokBuffer solution
F 1 urb i profénF 1 urb i profen
A p r o t i n í n rPAI-2A rtin t rinPI-2
77
Tabuľka 3, pokračovanieTable 3, continued
Príklad 3Example 3
Použitie PAI-2 na ošetrenie poranenia oka a na pooperačné ošetrenieUse of PAI-2 to treat eye injury and post-operative treatment
Experimenty sa uskutočnili a vyhodnotili podobne ako je popísané v príklade 2. Tu sa však epitel nevybral, ale rohovka sa porušila rezom s k 1 a p e 1 u do podporného väzivového tkaniva do hĺbky 60-80% hrúbky podporného väzivového tkaniva a zasahujúceho celú hornú plochu rohovky (5 mm od okraja). Po porezaní rohovky stúpa v slznej tekutine plazmínová aktivita (počas 2 hod) a zostáva niekoľko dní na relatívne vysokých hodnotách (tabuľka 4).The experiments were performed and evaluated similar to those described in Example 2. However, here the epithelium was not selected, but the cornea was disrupted by incision at 1 and 1 u into the supporting connective tissue to a depth of 60-80% of the thickness of the supporting connective tissue. 5 mm from the edge). After corneal incision, plasmin activity in the tear fluid increases (over 2 hours) and remains at relatively high levels for several days (Table 4).
Zápalové bunky migrujú do miesta zranenia už po 1 dni. V bezprostrednej blízkosti je možné tiež preukázať zvýšenú aktivitu 1 yzozomá1nych proteáz a glykozidáz.Inflammatory cells migrate to the site of injury as early as 1 day. Increased activity of 1-isosomal proteases and glycosidases can also be demonstrated in the immediate vicinity.
Od prvého do siedmeho dňa migrujú bunky epitelu do reznej rany. Po 10 dňoch sa rezná rana opäť naplní epi telovými bunkami. Priľnavosť pribúdajúcich buniek k pod nimi ležiacemu podpornému väzivovému tkanivu je však veľmi zlá. Tým sa rana hojí pomaly a namáhavo. Usporiadanie ko 1 agénových fibrýl je pri tomto hojení nepravidelné.From day one to day seven, epithelial cells migrate into the incision wound. After 10 days, the incision is refilled with epithelial cells. However, the adhesion of the growing cells to the underlying connective tissue is very poor. This heals the wound slowly and laboriously. The arrangement of co-agene fibrils is irregular in this healing.
G 1 y kozám inog1 yko1 y sa v mieste zranenia nedokázali. Aktivity glykozidáz, predovšetkým beta-ga1aktozidáz, boli v rovná18 kej oblasti zvýšené.G 1 y goats inog1 yko1 y were not found at the wound site. The activities of glycosidases, in particular beta-galactosidases, were increased in the same region.
Z makroskopického pohľadu sa transparencia rohovky v oblasti reznej rany dočasne stráca; maximálna strata je medzi 4, a 7. dňom fázy hojenia.From a macroscopic perspective, the corneal transparency in the area of the incision is temporarily lost; the maximum loss is between 4 and 7 days of the healing phase.
Rohovka sa vyliečila za vzniku netransparentného jazvového tkaniva. Zmeny transparencie rohovky boli irreverzibilné. Údaje sú zhrnuté v tabuľke 5.The cornea was cured to form a non-transparent scar tissue. Changes in corneal transparency were irreversible. The data are summarized in Table 5.
Ošetrenie pomocou PAI-2;Treatment with PAI-2;
Počas celej doby ošetrenia sa u zvierat ošetrených PAI-2 dokázala v slznej kvapaline len minimálna plazmínová aktivita. Maximálna dosiahnutá aktivita sa pohybovala okolo 0,4 /ug/ml.During the entire treatment period, minimal plasmin activity was detected in the tear fluid in PAI-2 treated animals. The maximum activity achieved was about 0.4 µg / ml.
V protiklade ku kontrolnej skupine (s pufrovým roztokom) sa zápal u zvierat ošetrených PAI-2 úplne zastavil. Tak sa napríklad prvý deň nepreukázali žiadne zápalové bunky u očí ošetrených pomocou PAI-2 v bezprostrednej blízkosti zranenia podporného väzivového tkaniva.In contrast to the control group (buffered solution), inflammation in PAI-2-treated animals stopped completely. Thus, for example, no inflammatory cells in PAI-2-treated eyes in the immediate vicinity of the supporting connective tissue injury were detected on the first day.
Keratinocyty sa relatívne rýchle aktivovali. Bunky epitelu, ktoré doputovali migráciou mali len relatívne nízke aktivity 1 yzozomá1nych hydroláz, kým aktivity GGT, ATPázy a SDH sa opäť rýchle normalizovali.Keratinocytes activated relatively quickly. The epithelial cells that migrated migrated had only relatively low activities of 1 isosomal hydrolases, whereas GGT, ATPase and SDH activities again normalized rapidly.
U ž po 4 dňoch sa rezná rana úplne vyplnila bunkami epitelu. Tieto bunky veľmi dobre p r i T n u 1 i k podpornému väzivovému taknivu, ležiacom pod nimi. Už po 10 dňoch bola pôvodne sa rozostupujúca rana celkom plochá. Na vyliečenie hlbšie ležiacich vrstiev podporného väzivového tkaniva sa podieľali (aktivita látkovej výmeny a aktivita bunkového delenia) susedné keratinocyty. Po 14 dňoch Sa hojenie rany skončilo. Novo: vzniknuté keratinocyty vykazovali normálnu aktivitu látkovej výmeny (napríklad aktivitu GGT). V žiadnom prípade nedošlo tiež k zápalu.After only 4 days, the incision was completely filled with epithelial cells. These cells very well at Tn 1 as well as the underlying fibrous ligament underlying them. Already after 10 days the originally wounding wound was quite flat. Adjacent keratinocytes (metabolic activity and cell division activity) were involved in the cure of the underlying layers of supporting connective tissue. After 14 days, wound healing was complete. Novo formed keratinocytes displayed normal metabolic activities (e.g., the activity of GGT). There was also no inflammation in any case.
Ošetrenie pomocou PAI-2 umožňuje súhrnne povedané podstatné zrýchlenie hojenia rany a podstatné zlepšenie jej kvality. Pri hojení rany na rohovke vzniká úplne transparentné tkanivo a nedochádza k tvorbe jazvy. Tieto pre pácientov dôležitéTreatment with PAI-2 allows, in summary, a substantial acceleration of wound healing and a substantial improvement in its quality. When the wound is healing on the cornea, a completely transparent tissue is formed and no scarring occurs. These are important for patients
9 účinky možno dosiahnuť pri oboch koncentráciách (10/ug/ml a 20 /ug/ml). Výsledky dosiahnuté pomocou PAI-2 sú zhrnuté v tabuľke 5.Effects can be obtained at both concentrations (10 µg / ml and 20 µg / ml). The results obtained with PAI-2 are summarized in Table 5.
Ošetrenieaprotinínom:Ošetrenieaprotinínom:
V porovnaní s kontrolnou skupinou (s pufrovým roztokom) sa v slznej kvapaline koncentrácia plazmínu znížila (porovnaj tabuľku 3).Compared to the control group (buffer solution), the concentration of plasmin in the tear fluid decreased (cf. Table 3).
Rezná rana sa hojí normálnou rýchlosťou (pomalšie ako v prípade P AI-2).The wound heals at a normal rate (slower than P AI-2).
V porovnaní s účinkom PAI-2 sa u doputovavší ch epitelových bunkách aktivita 1 yzozomá1nych hydroláz znížila.Compared to the effect of PAI-2, the activity of 1-isosomal hydrolase decreased in the doped epithelial cells.
Adhézia novo utvoreného epitelu na podporné väzivové tkanivo nebola taká silná ako u zvierat ošetrených PAI-2. Rezné rany sa hojili pomalšie, vzniklo však transparentné tkanivo. Histochemicky bolo miesto poranenia veľmi podobné ako pri ošetrení zvierat PAI-2.The adhesion of the newly formed epithelium to the supporting connective tissue was not as strong as in animals treated with PAI-2. Cutting wounds heal more slowly, but transparent tissue has formed. Histochemically, the site of injury was very similar to that of PAI-2 animals.
Kontrolná skupina (s pufrovým roztokom):Control group (with buffer solution):
Plazmínová aktivita v slznej kvapaline sa u zvierat kont·- rolnej skupiny (s pufrovým roztokom) zvýšila na dlhší čas (tabuľka 4). Súčasne sa pozoroval v rohovke silný výskyt zápalových buniek (prevažne PMN).Plasma activity in the lacrimal fluid was increased for a longer period in the control group (buffered) animals (Table 4). At the same time, a strong incidence of inflammatory cells (predominantly PMN) was observed in the cornea.
Lytický potenciál epitelu pozostávajúci z napríklad lysozomálnych hydroláz, sa zvýšil, zatiaľ čo aktivita GGT a ATPázy sa redukovali. Samotné uzatvorenie rany bolo veľmi pomalé (približne 10 dní) a adhézia novo vytvoreného epitelu na podporené väzivové tkanivo, ležiace pod ním, bola veľmi zlá. Vytvorila sa biela jazva a transparenci a sa čiastočne- stratila a to irreverzibilne.The lytic potential of the epithelium consisting of, for example, lysosomal hydrolase, increased, while the activity of GGT and ATPase was reduced. The wound closure itself was very slow (approximately 10 days) and the adhesion of the newly formed epithelium to the underlying fibrous tissue below was very poor. A white scar and transparency was formed and was partially- irreversibly lost.
Výhody ošetrenia PAI-2, prípadne inhibítormi systému p 1 azm í n/ak t i vátor plazminogénu spočívajú v tom, že touto ces-tou dochádza k rýchlejšej a uspokojivejšej obnove rohovky ú p 1 i ne transparentnej, bez jaziev, s dobrou adhéziou, bez neovaskularizácie a s normálnou aktivitou látkovej výmeny na rohovke, a to i na histologickom základe.The advantages of treatment with PAI-2 and / or inhibitors of the system of plasminogen include the fact that this route results in a faster and more satisfactory restoration of the cornea in a transparent manner, without scars, with good adhesion, without neovascularization and with normal corneal metabolic activity, even on a histological basis.
Tabuľka 4Table 4
Aktivita plazminu v slznej kvapaline (/ug/ml)Plasmin activity in tear fluid (/ µg / ml)
Hlboká rezná rana v rohovkeDeep cut in cornea
Tabuľka 5Table 5
Hlboká rezná rana do králičieho okaDeep cut in the rabbit eye
Tabuľka 5. pokračovanie rencia | čiastočne jaziev do | irreves. tkaniva | stratená transparentná transpar e n t a n áTable 5. continued rencia | Partial scars to irreves. tissue lost transparent transpar e n t a n
Príklad 4Example 4
Použitie PAI-2 na liečenie po chirurgickom zákroku laseromUse of PAI-2 for treatment after laser surgery
Fotoreaktívna laserová keratektómia (193 nm excimer laser) sa vykonala na králikoch, ktorú popísal Lohman a spol. (1991). Potom sa lokálne do očí aplikoval (2- krát až 3-krát denne) PAI-2 v koncentrácii 20/Ug/ml. Kontrolná skupina obdržala rovnaký objem rozpúšťadla (20 mM glycínu pH 7,2, 150 mM N a C 1 , 0,3% hydrolyzátu želatíny). Referenčná skupina obsahovala buď aprotinín (5000 medzinárodných jednotiek/ml, 2-krát denne, 2 týždne), alebo 0,1% pred n i so 1onacetátu (2-krát denne 1 týždeň; 1-krát denne, 11 týždňov), alebo 0,1% flurbiprofén (predni so 1 onacetát) .Photoreactive laser keratectomy (193 nm excimer laser) was performed on rabbits as described by Lohman et al. (1991). PAI-2 was then applied topically to the eyes (2 to 3 times daily) at a concentration of 20 µg / ml. The control group received an equal volume of solvent (20 mM glycine pH 7.2, 150 mM N and Cl, 0.3% gelatin hydrolyzate). The reference group contained either aprotinin (5000 International Units / ml, 2 times a day, 2 weeks), or 0.1% before it with 1-acetate (2 times a day, 1 week; once a day, 11 weeks), or 0, 1% flurbiprofen (preferably 1 onacetate).
Ako merné parametre slúžili tvorba zákalu, koncentrácia plazmínu v slznej kvapaline a histologický nález.Turbidity formation, plasmin concentration in the lacrimal fluid and histological findings were used as measurement parameters.
V kontrolnej skupine stúpla koncentrácia plazmínu v krátkom čase z cca 1/ug/ml na hodnoty až 50 zug/ml. Po týždni sa však normalizovala. Novo utvorená plocha medzi epitelom a pozostalým podporným väzivovým tkanivom nebola hladká. Okrem toho sa dal dokázať novo vytvorený materiál matrice, napríklad ko 1 agén.In the control group, plasmin concentration increased from about 1 µg / ml in a short time to values up to 50 µg / ml. However, after a week it normalized. The newly formed area between the epithelium and the surviving connective tissue was not smooth. In addition, it was possible to prove a newly formed matrix material, for example co-agen.
V podpornom väzivovom tkanive sa pozorovali ojedinele vakuoly. Bez ošetrenia vzniká tendencia k regresii ku krátkozrakosti .Occasionally, vacuoles were observed in the supporting connective tissue. Untreated, there is a tendency to regression to myopia.
Očný zákal sa pozoroval ako dôsledok tvorby chybných štruktúr a neosyntéz. Pri ošetrení prední solonacetátom sa v princípe pozoroval rovnaký výsledok, len nová syntéza kola23 génu bola trochu redukovaná, zatiaľ čo pri ošetrení flurbiprofénom sa pozoruje popri zákale významná nová syntéza kolagénu.Eye opacity was observed as a result of the formation of defective structures and neosynthesis. In principle, the same result was observed with anterior solonacetate treatment, but only a new synthesis of the wheel 23 gene was somewhat reduced, while in flurbiprofen treatment a new collagen synthesis was observed alongside the haze.
Pri ošetrení aprotinínom je hraničná plocha medzi starým podporným väzivovým tkanivom a novo vytvoreným epitelom hladká. Jednako sa len pozorovalo zakalenie rohovky spôsobené reflexiou svetla. Žiadne vakuoly sa nepozorovali a tiež veľkosť podkladových buniek bola normálna. Syntetizoval sa však nový ko 1ágén.In aprotinin treatment, the boundary area between the old supporting connective tissue and the newly formed epithelium is smooth. However, corneal opacification due to light reflection was observed. No vacuoles were observed and also the size of the underlying cells was normal. However, a new collagen was synthesized.
Výsledkom ošetrenia pomocou PAI-2 bolo absolútne čisté, transparentné oko (viď tabuľka 6). Ani po troch mesiacoch sa nepozoroval žiadny zákal, hoci pri normálnom priebehu sa vyvíja po troch až p iati ch týždňoch. Epitel sa perfektne regeneroval:Treatment with PAI-2 resulted in an absolutely clean, transparent eye (see Table 6). No turbidity was observed even after three months, although it develops normally after three to five weeks. Epithelium perfectly regenerated:
Hraničná plocha medzi starým podporným väzivovým tkanivom a novo vytvoreným epitelom je hladká. Nepozorovalo sa žiadne zjazvení e, žiadne vakuoly, žiadna nová syntéza kolagénu a žiadna hyperplázia epitelu.The boundary area between the old supporting connective tissue and the newly formed epithelium is smooth. No scarring, no vacuoles, no new collagen synthesis and no epithelial hyperplasia were observed.
Žiadna regresia ku krátkozrakosti sa nepozorovala.No regression to myopia was observed.
I v prípade spoločnej aplikácie kombinácie všetkých referenčných látok, nie sú výsledky ošetrenia lepšie než. výsledky ošetrení skupiny liečenej PAI-2.Even when the combination of all reference substances is applied together, the treatment results are no better than. treatment results of the PAI-2 treated group.
Nevýhody tejto kombinovanej terapie, prípadne terapie referenčnými látkami oproti ošetreniu pomocou PAI-2 sú nasledovné:The disadvantages of this combination therapy or reference therapy compared to PAI-2 treatment are as follows:
- trojmesačná a dlhšia povrchová aplikácia steroidov prináša nežiaduce a vysoké riziko (závislé na stupni poškodenia) tvorby sekundárneho glaukómu- three months and longer topical application of steroids presents an undesirable and high risk (depending on the degree of damage) of secondary glaucoma formation
- aprotinín nemožno kombinovať s prednisolonom- aprotinin cannot be combined with prednisolone
- sú známe alergické reakcie na aprotinín- allergic reactions to aprotinin are known
- proti použitiu aprotinínu hovorí i problematika BSE, stupeň čistotya charakter cudzorodého proteínu.- BSE, the degree of purity and the nature of the foreign protein also oppose the use of aprotinin.
44
Tabuľka 6Table 6
Terapia po keratektómii laseromLaser keratectomy therapy
) Syntéza novej ešte neznámej látky) Synthesis of a new yet unknown substance
Claims (22)
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE4214215A DE4214215A1 (en) | 1992-04-30 | 1992-04-30 | USE OF INHIBITORS OF PLASMINOGEN ACTIVATORS FOR TREATING INFLAMMATION |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SK41593A3 true SK41593A3 (en) | 1993-11-10 |
Family
ID=6457814
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SK415-93A SK41593A3 (en) | 1992-04-30 | 1993-04-28 | Using of inhibitors of plasminogene activators for the production of medicament for a therapy of ignitions and wounds |
Country Status (16)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP0567816A1 (en) |
JP (1) | JPH069425A (en) |
KR (1) | KR930021179A (en) |
CN (1) | CN1080873A (en) |
AU (1) | AU3822993A (en) |
CA (1) | CA2095207A1 (en) |
CZ (1) | CZ76893A3 (en) |
DE (1) | DE4214215A1 (en) |
HU (1) | HUT65755A (en) |
IL (1) | IL105521A0 (en) |
MX (1) | MX9302519A (en) |
NO (1) | NO931561L (en) |
PL (1) | PL298748A1 (en) |
SK (1) | SK41593A3 (en) |
UY (1) | UY23572A1 (en) |
ZA (1) | ZA933023B (en) |
Families Citing this family (34)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5811447A (en) | 1993-01-28 | 1998-09-22 | Neorx Corporation | Therapeutic inhibitor of vascular smooth muscle cells |
US6515009B1 (en) | 1991-09-27 | 2003-02-04 | Neorx Corporation | Therapeutic inhibitor of vascular smooth muscle cells |
US5468505A (en) * | 1992-02-28 | 1995-11-21 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Local delivery of fibrinolysis enhancing agents |
GB2271507A (en) * | 1992-09-04 | 1994-04-20 | Summit Technology Ireland Bv | Compositions containing plasmin activity inhibitors |
ATE339975T1 (en) * | 1993-07-19 | 2006-10-15 | Angiotech Pharm Inc | ANTI-ANGIOGENIC STENT AND METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF |
US5716981A (en) * | 1993-07-19 | 1998-02-10 | Angiogenesis Technologies, Inc. | Anti-angiogenic compositions and methods of use |
US6558798B2 (en) | 1995-02-22 | 2003-05-06 | Scimed Life Systems, Inc. | Hydrophilic coating and substrates coated therewith having enhanced durability and lubricity |
US5939525A (en) * | 1995-03-27 | 1999-08-17 | Viron Therapeutics, Inc. | Methods of treating inflammation and compositions therefor |
US6515016B2 (en) | 1996-12-02 | 2003-02-04 | Angiotech Pharmaceuticals, Inc. | Composition and methods of paclitaxel for treating psoriasis |
US6495579B1 (en) | 1996-12-02 | 2002-12-17 | Angiotech Pharmaceuticals, Inc. | Method for treating multiple sclerosis |
US6241762B1 (en) | 1998-03-30 | 2001-06-05 | Conor Medsystems, Inc. | Expandable medical device with ductile hinges |
US20040254635A1 (en) | 1998-03-30 | 2004-12-16 | Shanley John F. | Expandable medical device for delivery of beneficial agent |
US7208010B2 (en) | 2000-10-16 | 2007-04-24 | Conor Medsystems, Inc. | Expandable medical device for delivery of beneficial agent |
KR20010042402A (en) * | 1998-04-01 | 2001-05-25 | 로잘란드 앤 칼도르 | Use of protease inhibitors for treating skin wounds |
US6293967B1 (en) | 1998-10-29 | 2001-09-25 | Conor Medsystems, Inc. | Expandable medical device with ductile hinges |
US6120847A (en) * | 1999-01-08 | 2000-09-19 | Scimed Life Systems, Inc. | Surface treatment method for stent coating |
US6419692B1 (en) | 1999-02-03 | 2002-07-16 | Scimed Life Systems, Inc. | Surface protection method for stents and balloon catheters for drug delivery |
MXPA01011025A (en) | 1999-04-29 | 2002-11-07 | Ista Pharmaceuticals Inc | Biochemical methods that eliminate corneal scars, opacification and haze. |
US6156373A (en) | 1999-05-03 | 2000-12-05 | Scimed Life Systems, Inc. | Medical device coating methods and devices |
US6258121B1 (en) | 1999-07-02 | 2001-07-10 | Scimed Life Systems, Inc. | Stent coating |
JP3690720B2 (en) | 1999-09-14 | 2005-08-31 | インターナショナル・ビジネス・マシーンズ・コーポレーション | Client server system, object pooling method, and storage medium |
ATE297217T1 (en) | 1999-10-27 | 2005-06-15 | Alexandra Lucas | COMPOSITION FOR PREVENTING AND TREATING TRANSPLANT REJECTION |
JP2001247458A (en) * | 2000-03-08 | 2001-09-11 | Hamari Chemicals Ltd | Therapeutic agent for diabetes comprising zinc tranexmate compound |
AU2001291579B2 (en) | 2000-09-29 | 2006-08-31 | Viron Therapeutics Inc. | Use of serp- 1 in combination with an immunosuppressant for influencing inflammatory and immune reactions |
US6764507B2 (en) | 2000-10-16 | 2004-07-20 | Conor Medsystems, Inc. | Expandable medical device with improved spatial distribution |
EP1582180B1 (en) | 2000-10-16 | 2008-02-27 | Conor Medsystems, Inc. | Expandable medical device for delivery of beneficial agent |
US20040073294A1 (en) | 2002-09-20 | 2004-04-15 | Conor Medsystems, Inc. | Method and apparatus for loading a beneficial agent into an expandable medical device |
AT500019B1 (en) * | 2001-06-27 | 2007-06-15 | Inst Gefaessbiologie Und Throm | USE IN VITRO OF THE TRANSCRIPTION FACTOR NAK-1 OR NAK-1 REGULATED GENES FOR THE DIAGNOSIS OF INFLAMMATORY AND MALIGNIC DISEASES |
GB0126389D0 (en) * | 2001-11-02 | 2002-01-02 | Pfizer Ltd | Wafer |
US7785653B2 (en) | 2003-09-22 | 2010-08-31 | Innovational Holdings Llc | Method and apparatus for loading a beneficial agent into an expandable medical device |
US7285530B2 (en) | 2004-10-21 | 2007-10-23 | Viron Therapeutics, Inc. | Use of SERP-1 as an antiplatelet agent |
US20090202524A1 (en) * | 2007-10-31 | 2009-08-13 | Alcon Research, Ltd. | Pai-1 expression and activity inhibitors for the treatment of ocular disorders |
WO2009093119A2 (en) * | 2008-01-21 | 2009-07-30 | Med Discovery S.A. | Use of serine protease inhibitors in the treatment of skin diseases |
TWI763960B (en) * | 2017-12-15 | 2022-05-11 | 大陸商深圳瑞健生命科學研究院有限公司 | Method and medicine for preventing or treating osteoarthritis |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE3829523A1 (en) * | 1988-08-31 | 1990-03-01 | Behringwerke Ag | USE OF PLASMINOGEN ACTIVATOR INHIBITOR (PAI-2) FOR IMMUNE SUPPRESSION |
US5444153A (en) * | 1989-12-20 | 1995-08-22 | Biotech Australia Pty Limited | Variants of PAI-2 |
EP0451130A3 (en) * | 1990-04-05 | 1992-08-05 | Baltimore Biotech, Inc. | Use of amiloride and other pyrazine derivatives for preventing or treating ocular neovascularization |
-
1992
- 1992-04-30 DE DE4214215A patent/DE4214215A1/en not_active Withdrawn
-
1993
- 1993-04-08 EP EP19930105801 patent/EP0567816A1/en not_active Withdrawn
- 1993-04-27 UY UY23572A patent/UY23572A1/en unknown
- 1993-04-27 IL IL105521A patent/IL105521A0/en unknown
- 1993-04-28 JP JP5101636A patent/JPH069425A/en active Pending
- 1993-04-28 CZ CZ93768A patent/CZ76893A3/en unknown
- 1993-04-28 SK SK415-93A patent/SK41593A3/en unknown
- 1993-04-28 KR KR1019930007154A patent/KR930021179A/en not_active Application Discontinuation
- 1993-04-29 PL PL29874893A patent/PL298748A1/en unknown
- 1993-04-29 NO NO93931561A patent/NO931561L/en unknown
- 1993-04-29 MX MX9302519A patent/MX9302519A/en unknown
- 1993-04-29 ZA ZA933023A patent/ZA933023B/en unknown
- 1993-04-29 AU AU38229/93A patent/AU3822993A/en not_active Abandoned
- 1993-04-29 CN CN93105253A patent/CN1080873A/en active Pending
- 1993-04-29 CA CA002095207A patent/CA2095207A1/en not_active Abandoned
- 1993-04-30 HU HU9301272A patent/HUT65755A/en unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
UY23572A1 (en) | 1993-05-04 |
CN1080873A (en) | 1994-01-19 |
DE4214215A1 (en) | 1993-11-04 |
ZA933023B (en) | 1994-10-31 |
EP0567816A1 (en) | 1993-11-03 |
AU3822993A (en) | 1993-11-04 |
MX9302519A (en) | 1993-10-01 |
JPH069425A (en) | 1994-01-18 |
HU9301272D0 (en) | 1993-07-28 |
NO931561L (en) | 1993-11-01 |
HUT65755A (en) | 1994-07-28 |
PL298748A1 (en) | 1993-12-27 |
CZ76893A3 (en) | 1994-01-19 |
NO931561D0 (en) | 1993-04-29 |
CA2095207A1 (en) | 1993-10-31 |
IL105521A0 (en) | 1993-08-18 |
KR930021179A (en) | 1993-11-22 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
SK41593A3 (en) | Using of inhibitors of plasminogene activators for the production of medicament for a therapy of ignitions and wounds | |
EP1904108B1 (en) | Ophthalmological formulation comprising methylsulfonylmethane and ciprofloxacin | |
AU2003297511B2 (en) | Ophthalmic formulation for the prevention and treatment of ocular conditions | |
US7348306B2 (en) | Composition for promoting lacrimal secretion | |
CN100558360C (en) | The purposes of azanol compositions in the medicine of preparation alleviation degeneration of macula and other ophthalmic diseasess | |
US20060172972A1 (en) | Formulation and method for administration of ophthalmologically active agents | |
WO2007011875A2 (en) | Treatment of conditions associated with the presence of macromolecular aggregates, particularly ophthalmic disorders | |
US6610686B1 (en) | Use of pirenoxine for the protection of corneal tissues in photokeractomy | |
Almond et al. | 5-fluorouracil and mitomycin-C: adjuncts to pterygium surgery | |
KR20010040457A (en) | Ophthalmic Composition | |
Kondo et al. | Iontophoresis of 5-fluorouracil into the conjunctiva and sclera. | |
KR20010041337A (en) | Remedies for corneal epithelium disturbance | |
RU2284181C2 (en) | Pharmaceutical composition for prophylaxis of ophthalmological infections | |
US8283323B2 (en) | Withanolide compounds as inhibitors of fibrosis and identification of molecular targets for anti-fibrotic drug development | |
RU2423127C2 (en) | Therapeutic medication against corneal-conjunctival disturbance | |
JPH0625005A (en) | For use of therapeutics method for use of x-arg-gly-asp-y for manufacturing drug being useful for curing of glaucoma | |
Gayre | Medical management of thyroid eye disease | |
de ROETTH | Ophthalmic Pharmacology and Toxicology | |
CZ20002770A3 (en) | Eye preparations |