CN108077072A - 风铃椒组织培养用培养基及快速繁殖方法 - Google Patents

风铃椒组织培养用培养基及快速繁殖方法 Download PDF

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程帅
曾俊
曹亚琼
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Abstract

本发明公开了一种风铃椒组织培养用培养基及其快速繁殖方法，该培养基包括种子萌发培养基、不定芽诱导培养基和生根培养基，三者采用特定的组培培养基配方，以及本发明优化的快速繁殖方法，使种子萌发率达到85％，增殖系数达到10，生根率达到95％，移栽成活率达到100％，从而建立起风铃椒组培快繁体系，形成了一种系统有效的风铃椒组培快繁方法。

Description

风铃椒组织培养用培养基及快速繁殖方法
技术领域
本发明涉及风铃椒组织培养用培养基及快速繁殖方法，属于植物组织培养繁殖技术领域。
背景技术
风铃椒即灯笼椒，为一年生茄科植物，原产加拿大，又名乳椒、加拿大椒，可观赏也可食用，是辣椒的一种观赏品种。目前，国内外对辣椒组织培养的报道和研究都比较多，但对风铃椒组织培养的研究较少，尚未形成一种系统的风铃椒的组培快繁体系。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种风铃椒组织培养用的培养基及其快速繁殖方法，从而建立起系统的风铃椒组培快繁体系，形成了一种系统有效的风铃椒组培快繁方法。
为解决以上技术问题，本发明的技术方案首先提供了一种风铃椒组织培养用培养基，它包括种子萌发培养基、不定芽诱导培养基和生根培养基；
所述种子萌发培养基的成分包括MS+10g/L蔗糖+6g/L琼脂；
所述不定芽诱导培养基的成分包括MS+2.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA+1.0mg/LAgNO3+30g/L蔗糖+6g/L琼脂；
所述生根培养基的成分包括1/2MS+0.2mg/L NAA+20g/L蔗糖+6g/L琼脂。
同时，本发明还提供一种风铃椒组织培养快速繁殖方法，它包括以下步骤：
(1)培养外植体：收集风铃椒籽用清水洗净后用洗涤剂清洗10min，再于流水下冲洗10min，然后在超净工作台上将风铃椒籽转入酒精溶液中振荡10s取出，无菌水清洗1次，再转入质量浓度3％的次氯酸钠溶液中振荡10min取出，无菌水清洗6次，置于无菌滤纸上晾干后接种到上述种子萌发培养基上培养，培养条件为温度25±2℃，光照2000Lx，光周期14/10h，风铃椒籽萌发得到无菌苗，取无菌苗的叶片作为组织培养的外植体材料；
(2)不定芽诱导培养：将步骤(1)得到的外植体接种到上述不定芽诱导培养基上进行培养得到不定芽，培养条件为温度25±2℃，光照2000Lx，光周期14/10h；
(3)生根培养：将步骤(2)得到的不定芽剪下接种到上述生根培养基上进行生根培养得到组培苗，培养条件为温度25±2℃，光照2000Lx，光周期14/10h；
(4)移栽：将组培苗栽入苗床基质中；所述苗床基质包括珍珠岩和蛭石，其体积比为1︰1；在苗移栽前，苗床基质用百菌清进行灭菌；移栽完成后，用多菌灵1000倍溶液喷雾浇水，然后用塑料薄膜覆盖保湿，用遮阳网进行遮荫，控制温度为25℃，相对湿度为95％；待移栽的组培苗生出新根，去掉塑料薄膜和遮阳网，控制相对湿度为75％。
进一步的，所述步骤(1)中的洗涤剂为质量浓度0.3-0.5％的肥皂水。
进一步的，所述步骤(1)中酒精溶液的体积浓度为75％。
进一步的，所述步骤(1)中将无菌苗的叶片切成0.5cm×0.5cm的叶块作为组织培养的外植体材料。
进一步的，所述步骤(3)与步骤(4)中间还包括炼苗步骤，将步骤(3)得到的组培苗移到组培室外，进行常温闭瓶炼苗2天后再进行步骤(4)。
与现有技术相比，本发明提供了一种风铃椒的组织培养用培养基及组织培养快速繁殖方法，该培养基包括种子萌发培养基、不定芽诱导培养基和生根培养基，三者采用特定的培养基配方，使种子萌发率达到85％，增殖系数达到10，生根率达到95％，移栽成活率达到100％，从而建立起系统的风铃椒组培快繁体系，形成了一种系统有效的风铃椒组培快繁方法。
具体实施方式
为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合具体实施方式对本发明作进一步的详细说明。
一、本发明方法步骤简介
本发明提供的风铃椒的组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：
1、培养外植体
收集风铃椒籽用清水洗净后用质量浓度0.3-0.5％的肥皂水清洗10min，再于流水下冲洗10min，然后在超净工作台上将风铃椒籽转入体积浓度75％的酒精溶液中振荡10s取出，无菌水清洗1次，再转入质量浓度3％的次氯酸钠溶液中振荡10min取出，无菌水清洗6次，置于无菌滤纸上晾干后接种到种子萌发培养基上培养，所述种子萌发培养基的成分包括MS+10g/L蔗糖+6g/L琼脂，灭菌前其pH值用1M的NaOH溶液调至6.0，培养条件为温度25±2℃，光照2000Lx，光周期14/10h，风铃椒籽培养4天后，开始萌发，培养2周后，种子萌发率可达到85％，取风铃椒籽萌发得到的无菌苗叶片切成0.5cm×0.5cm的叶块作为组织培养的外植体材料。
2、不定芽诱导培养
将步骤1得到的外植体接种到不定芽诱导培养基上进行不定芽培养，所述不定芽诱导培养基的成分包括MS+2.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA+1.0mg/L AgNO3+30g/L蔗糖+6g/L琼脂；培养条件为温度25±2℃，光照2000Lx，光周期14/10h；培养2周后，愈伤组织出现，培养5周后，愈伤组织开始分化，培养8周后，愈伤组织分化的不定芽可长至2cm以上。愈伤诱导率可达100％，愈伤分化率可达90％，每块愈伤平均分化10个芽。
3、生根培养
将步骤2培养8周的不定芽剪下接种到生根培养基上进行生根培养得到组培苗，所述生根培养基的成分包括1/2MS+0.2mg/L NAA+20g/L蔗糖+6g/L琼脂，培养条件为温度25±2℃，光照2000Lx，光周期14/10h；7天左右开始生根，20天左右生根率可达95％，平均生根5根。
4、闭瓶炼苗
为了提高移栽苗的成活率，将步骤3得到的组培苗移到组培室外，进行常温闭瓶炼苗2天。
5、移栽
炼苗完成后，将组培苗分成单株栽入苗床基质中；所述苗床基质包括珍珠岩和蛭石，其体积比为1︰1；在苗移栽前，苗床基质用百菌清进行灭菌；移栽完成后，用多菌灵1000倍溶液喷雾浇水，然后用塑料薄膜覆盖保湿，用遮阳网进行遮荫，控制温度为25℃，相对湿度为95％；待移栽的组培苗生出新根，去掉塑料薄膜和遮阳网，控制相对湿度为75％；其移栽成活率达100％。
二、培养基最优试验
(1)种子萌发培养基最优试验
将风铃椒籽按照上述步骤1的方法处理后分别接种到不同蔗糖浓度(5g/L、10g/L、20g/L)的种子萌发培养基中按照步骤1的培养条件培养2周，观察其种子萌发情况，发现种子发芽率相差不大，最后从成本和后续的外植体生长速度考虑选择蔗糖浓度为10g/L。
(2)不定芽诱导培养基最优试验
将上述步骤1得到外植体分别接种到下述不同成分的培养基上按照步骤2的培养条件进行培养8周后观察其不定芽生长和增殖情况，具体见下表1。
表1. AgNO3对风铃椒不定芽诱导培养的影响
(3)生根培养基最优化试验
将上述步骤2培养8周的不定芽剪下分别接种到下表中不同成分的生根培养基上，按照步骤3的培养条件进行生根培养20天，观察其生长情况，计算其生根率，具体见下表2。
表2.不同培养基组成对风铃椒不定芽生根培养的影响
综上，本发明建立起了系统的风铃椒组培快繁体系，形成了一种系统有效的风铃椒组培快繁方法，以适应大规模生产的需要。
前述MS均指现有植物组培领域中常规使用的培养基MS组分，1/2MS即指常规使用的培养基MS组分中大量元素减半、其余成分保持不变。
WPM指现有植物组培领域中常规使用的培养基WPM组分。
NAA为市售萘乙酸，是一种促进植物根系生长的植物生长调节剂，具有促进细胞分裂与扩大，诱导形成不定根，增加坐果，防止落果，改变雌、雄花比率等作用。
6-BA为市售6-苄氨基腺嘌呤，是一种常用于组织培养的细胞分裂素类植物生长调节剂，主要作用是促进芽的形成，诱导愈伤组织发生。
AgNO3为市售固体硝酸银。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为对本发明的限制，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的精神和范围内，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (6)

1.一种风铃椒组织培养用培养基，其特征在于：包括种子萌发培养基、不定芽诱导增殖培养基和生根培养基；
所述种子萌发培养基的成分包括MS+10g/L蔗糖+6g/L琼脂；
所述不定芽诱导培养基的成分包括MS+2.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA+1.0mg/L AgNO3+30g/L蔗糖+6g/L琼脂；
所述生根培养基的成分包括1/2MS+0.2mg/L NAA+20g/L蔗糖+6g/L琼脂。
2.一种风铃椒组织培养快速繁殖方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)培养外植体：收集风铃椒籽用清水洗净后,用洗涤剂清洗10min，再于流水下冲洗10min，然后在超净工作台上将风铃椒籽转入酒精溶液中振荡10s取出，无菌水清洗1次，再转入质量浓度3％的次氯酸钠溶液中振荡10min取出，无菌水清洗6次，置于无菌滤纸上吸去水分后,接种到权利要求1所述的种子萌发培养基上培养，培养条件为温度25±2℃，光照2000Lx，光周期14/10h，风铃椒籽萌发得到无菌苗，取无菌苗的叶片作为组织培养的外植体材料；
(2)不定芽诱导培养：将步骤(1)得到的外植体接种到权利要求1所述的不定芽诱导培养基上进行培养,得到不定芽，培养条件为温度25±2℃，光照2000Lx，光周期14/10h；
(3)生根培养：将步骤(2)得到的不定芽剪下接种到权利要求1所述的生根培养基上进行生根培养得到组培苗，培养条件为温度25±2℃，光照2000Lx，光周期14/10h；
(4)移栽：将组培苗分成栽入苗床基质中；所述苗床基质包括珍珠岩和蛭石，其体积比为1︰1；在苗移栽前，苗床基质用百菌清进行灭菌；移栽完成后，用多菌灵1000倍溶液喷雾浇水，然后用塑料薄膜覆盖保湿，用遮阳网进行遮荫，控制温度为25℃，相对湿度为95％；待移栽的组培苗生出新根，去掉塑料薄膜和遮阳网，控制相对湿度为75％。
3.根据权利要求2所述的一种风铃椒组织培养快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤(1)中的洗涤剂为质量浓度0.3-0.5％的肥皂水。
4.根据权利要求2所述的一种风铃椒组织培养快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤(1)中酒精溶液的体积浓度为75％。
5.根据权利要求2所述的一种风铃椒组织培养快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤(1)中将无菌苗的叶片切成0.5cm×0.5cm的叶块作为不定芽诱导培养的外植体材料。
6.根据权利要求2所述的一种风铃椒组织培养快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤(3)与步骤(4)中间还包括炼苗步骤，将步骤(3)得到的组培苗移到组培室外，进行常温闭瓶炼苗2天后再进行步骤(4)。
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