JPH04346729A - トウガラシのプロトプラストから茎頂様組織を誘導する方法 - Google Patents
トウガラシのプロトプラストから茎頂様組織を誘導する方法Info
- Publication number
- JPH04346729A JPH04346729A JP3116159A JP11615991A JPH04346729A JP H04346729 A JPH04346729 A JP H04346729A JP 3116159 A JP3116159 A JP 3116159A JP 11615991 A JP11615991 A JP 11615991A JP H04346729 A JPH04346729 A JP H04346729A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- protoplasts
- tissue
- culturing
- capsicum
- cultured
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 title claims abstract description 51
- 235000002568 Capsicum frutescens Nutrition 0.000 title claims abstract description 32
- 240000008574 Capsicum frutescens Species 0.000 title claims abstract description 29
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 18
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 title claims description 9
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims abstract description 28
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims abstract description 17
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims abstract description 13
- 239000004062 cytokinin Substances 0.000 claims abstract description 12
- UQHKFADEQIVWID-UHFFFAOYSA-N cytokinin Natural products C1=NC=2C(NCC=C(CO)C)=NC=NC=2N1C1CC(O)C(CO)O1 UQHKFADEQIVWID-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 12
- FAIXYKHYOGVFKA-UHFFFAOYSA-N Kinetin Natural products N=1C=NC=2N=CNC=2C=1N(C)C1=CC=CO1 FAIXYKHYOGVFKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- QANMHLXAZMSUEX-UHFFFAOYSA-N kinetin Chemical compound N=1C=NC=2N=CNC=2C=1NCC1=CC=CO1 QANMHLXAZMSUEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 229960001669 kinetin Drugs 0.000 claims abstract description 9
- NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N N-benzyladenine Chemical compound N=1C=NC=2NC=NC=2C=1NCC1=CC=CC=C1 NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 claims description 19
- 235000008534 Capsicum annuum var annuum Nutrition 0.000 claims description 17
- 241001247145 Sebastes goodei Species 0.000 claims description 17
- 229930191978 Gibberellin Natural products 0.000 claims description 13
- 239000003448 gibberellin Substances 0.000 claims description 13
- 239000001728 capsicum frutescens Substances 0.000 claims description 6
- IXORZMNAPKEEDV-OBDJNFEBSA-N gibberellin A3 Chemical class C([C@@]1(O)C(=C)C[C@@]2(C1)[C@H]1C(O)=O)C[C@H]2[C@]2(C=C[C@@H]3O)[C@H]1[C@]3(C)C(=O)O2 IXORZMNAPKEEDV-OBDJNFEBSA-N 0.000 claims description 4
- 235000002566 Capsicum Nutrition 0.000 abstract description 14
- 239000001390 capsicum minimum Substances 0.000 abstract description 14
- IXORZMNAPKEEDV-UHFFFAOYSA-N gibberellic acid GA3 Natural products OC(=O)C1C2(C3)CC(=C)C3(O)CCC2C2(C=CC3O)C1C3(C)C(=O)O2 IXORZMNAPKEEDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 10
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 abstract description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 34
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 17
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 17
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 13
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 10
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 9
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 9
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 9
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 9
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 9
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 9
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 9
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 8
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 8
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 7
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 7
- 235000019633 pungent taste Nutrition 0.000 description 7
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 7
- PRPINYUDVPFIRX-UHFFFAOYSA-N 1-naphthaleneacetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)O)=CC=CC2=C1 PRPINYUDVPFIRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 4
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000005708 Sodium hypochlorite Substances 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 3
- UZKQTCBAMSWPJD-UQCOIBPSSA-N cis-zeatin Chemical compound OCC(/C)=C\CNC1=NC=NC2=C1N=CN2 UZKQTCBAMSWPJD-UQCOIBPSSA-N 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 3
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 3
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 3
- SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N sodium hypochlorite Chemical compound [Na+].Cl[O-] SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010059820 Polygalacturonase Proteins 0.000 description 2
- JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N Thiamine Natural products CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 2
- 229940106157 cellulase Drugs 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 108010093305 exopolygalacturonase Proteins 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 229940059442 hemicellulase Drugs 0.000 description 2
- 108010002430 hemicellulase Proteins 0.000 description 2
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 2
- 229910001410 inorganic ion Inorganic materials 0.000 description 2
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 2
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 2
- 235000021073 macronutrients Nutrition 0.000 description 2
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 2
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 230000008635 plant growth Effects 0.000 description 2
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 2
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000011721 thiamine Substances 0.000 description 2
- 235000019157 thiamine Nutrition 0.000 description 2
- KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N thiamine Chemical compound CC1=C(CCO)SCN1CC1=CN=C(C)N=C1N KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960003495 thiamine Drugs 0.000 description 2
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 2
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 2
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 2
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 2
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WZYOSMAXXLCTGP-UHFFFAOYSA-N 1-phenyl-3-pyridin-4-ylurea Chemical compound C=1C=NC=CC=1NC(=O)NC1=CC=CC=C1 WZYOSMAXXLCTGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GOSWTRUMMSCNCW-HNNGNKQASA-N 9-ribosyl-trans-zeatin Chemical compound C1=NC=2C(NC\C=C(CO)/C)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O GOSWTRUMMSCNCW-HNNGNKQASA-N 0.000 description 1
- 244000217177 Anacolosa luzoniensis Species 0.000 description 1
- ZKQDCIXGCQPQNV-UHFFFAOYSA-N Calcium hypochlorite Chemical compound [Ca+2].Cl[O-].Cl[O-] ZKQDCIXGCQPQNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000002567 Capsicum annuum Nutrition 0.000 description 1
- 240000004160 Capsicum annuum Species 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- IXORZMNAPKEEDV-SNTJWBGVSA-N LSM-6641 Chemical compound C([C@@]1(O)C(=C)C[C@@]2(C1)[C@H]1C(O)=O)C[C@H]2[C@]2(C=C[C@@H]3O)[C@H]1[C@@]3(C)C(=O)O2 IXORZMNAPKEEDV-SNTJWBGVSA-N 0.000 description 1
- -1 MS agar medium Natural products 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000009172 bursting Effects 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- RCTYPNKXASFOBE-UHFFFAOYSA-M chloromercury Chemical compound [Hg]Cl RCTYPNKXASFOBE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000020415 coconut juice Nutrition 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 1
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001630 malic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 description 1
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000001814 pectin Substances 0.000 description 1
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 description 1
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000000243 photosynthetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000019640 taste Nutrition 0.000 description 1
- UZKQTCBAMSWPJD-FARCUNLSSA-N trans-zeatin Chemical compound OCC(/C)=C/CNC1=NC=NC2=C1N=CN2 UZKQTCBAMSWPJD-FARCUNLSSA-N 0.000 description 1
- GOSWTRUMMSCNCW-UHFFFAOYSA-N trans-zeatin riboside Natural products C1=NC=2C(NCC=C(CO)C)=NC=NC=2N1C1OC(CO)C(O)C1O GOSWTRUMMSCNCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Landscapes
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【0001】
【産業上の利用分野】本発明は、カプシクム・フルテッ
センス(Capsicum frutescens L
.) に属するトウガラシのプロトプラストから茎頂様
組織を誘導する方法に関し、更に詳しくは、植物体再生
の中間体である茎頂様組織を誘導することができるプロ
トプラストから茎頂様組織を誘導する方法に関する。
センス(Capsicum frutescens L
.) に属するトウガラシのプロトプラストから茎頂様
組織を誘導する方法に関し、更に詳しくは、植物体再生
の中間体である茎頂様組織を誘導することができるプロ
トプラストから茎頂様組織を誘導する方法に関する。
【0002】
【従来の技術】植物の細胞壁を取り除いた裸の細胞であ
るプロトプラストは、最外層が細胞膜に取り囲まれてい
るため、遺伝子等の高分子物質の導入や、プロトプラス
ト同志の融合が可能である。そのため、このようなプロ
トプラストから植物体を再生することが可能になれば、
今まで存在しなかった新しい有用形質を持つ植物を育成
できる可能性がある。
るプロトプラストは、最外層が細胞膜に取り囲まれてい
るため、遺伝子等の高分子物質の導入や、プロトプラス
ト同志の融合が可能である。そのため、このようなプロ
トプラストから植物体を再生することが可能になれば、
今まで存在しなかった新しい有用形質を持つ植物を育成
できる可能性がある。
【0003】従って、トウガラシ属(Capsicum
)の辛みを有する植物のプロトプラストから植物体を再
生する技術が確立すれば、細胞融合等の技術を用いて他
の植物と交配することにより、新しい辛みを有した植物
を育成できる可能性がある。従来、トウガラシ属(Ca
psicum)の植物のプロトプラストから植物体を再
生する技術は、カプシクム・アニウム(Capsicu
m annuum L.) に属する栽培品種のCal
ifornia Wonder(Saxena, P.
K. et al., Protoplasma, 1
80,357−360,1981),Dulce lt
aliano(Diaz, l.et al., Pl
ant Cell Reports 7,210−21
2,1988)を用いた2例が報告されているだけであ
る。しかし、これらの栽培品種は、いずれもトウガラシ
属(Capsicum)の植物のなかでも辛みを有しな
い品種であることから、他の植物と交配できたとしても
新しい辛みを有した植物を育成することはできない。そ
こで、ここに記載された方法を用いて、辛みを有するト
ウガラシ(Capsicum frutescens
L.cv.Tabasco、及び Capsicum
annuum L.cv.Tochigisantak
a) について、プロトプラストからカルスを経て茎頂
様組織を誘導しようと試みたが、辛みを有するトウガラ
シでは辛みを有しないトウガラシと異なり茎頂様組織が
得られないことがわかった。
)の辛みを有する植物のプロトプラストから植物体を再
生する技術が確立すれば、細胞融合等の技術を用いて他
の植物と交配することにより、新しい辛みを有した植物
を育成できる可能性がある。従来、トウガラシ属(Ca
psicum)の植物のプロトプラストから植物体を再
生する技術は、カプシクム・アニウム(Capsicu
m annuum L.) に属する栽培品種のCal
ifornia Wonder(Saxena, P.
K. et al., Protoplasma, 1
80,357−360,1981),Dulce lt
aliano(Diaz, l.et al., Pl
ant Cell Reports 7,210−21
2,1988)を用いた2例が報告されているだけであ
る。しかし、これらの栽培品種は、いずれもトウガラシ
属(Capsicum)の植物のなかでも辛みを有しな
い品種であることから、他の植物と交配できたとしても
新しい辛みを有した植物を育成することはできない。そ
こで、ここに記載された方法を用いて、辛みを有するト
ウガラシ(Capsicum frutescens
L.cv.Tabasco、及び Capsicum
annuum L.cv.Tochigisantak
a) について、プロトプラストからカルスを経て茎頂
様組織を誘導しようと試みたが、辛みを有するトウガラ
シでは辛みを有しないトウガラシと異なり茎頂様組織が
得られないことがわかった。
【0004】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、辛みを有す
るトウガラシ属(Capsicum)の植物、特にカプ
シクムフルテッセンス(Capsicum frute
scens L.) に属するトウガラシのプロトプラ
スト由来のカルスから、植物体再生の中間体である茎頂
様組織を誘導するプロトプラストからの茎頂様組織の誘
導方法の提供を目的とする。
るトウガラシ属(Capsicum)の植物、特にカプ
シクムフルテッセンス(Capsicum frute
scens L.) に属するトウガラシのプロトプラ
スト由来のカルスから、植物体再生の中間体である茎頂
様組織を誘導するプロトプラストからの茎頂様組織の誘
導方法の提供を目的とする。
【0005】
【課題を解決するための手段】本発明は、Capsic
um frutescens L.に属するトウガラシ
を特定の期間培養して得られた植物体の葉、根、茎等の
器官から調製したプロトプラストを、ジベレリンとサイ
トカイニン類を含む培地を用いて培養することにより、
上記目的を達成することができるとの知見に基づいてな
されたのである。すなわち、本発明は、カプシクム・フ
ルテッセンス(Capsicum frutescen
s L.) に属するトウガラシの発芽幼苗を7〜21
日間培養して得られた植物体の器官から調製したプロト
プラストを生育させ、得られたカルスを、ジベレリンと
サイトカイニン類を含む培地で培養することを特徴とす
るプロトプラストから茎頂様組織を誘導する方法である
。
um frutescens L.に属するトウガラシ
を特定の期間培養して得られた植物体の葉、根、茎等の
器官から調製したプロトプラストを、ジベレリンとサイ
トカイニン類を含む培地を用いて培養することにより、
上記目的を達成することができるとの知見に基づいてな
されたのである。すなわち、本発明は、カプシクム・フ
ルテッセンス(Capsicum frutescen
s L.) に属するトウガラシの発芽幼苗を7〜21
日間培養して得られた植物体の器官から調製したプロト
プラストを生育させ、得られたカルスを、ジベレリンと
サイトカイニン類を含む培地で培養することを特徴とす
るプロトプラストから茎頂様組織を誘導する方法である
。
【0006】本発明で用いるCapsicum fru
tescens L.に属するトウガラシの栽培品種と
しては、Tabasco が例示できる。本発明は、ま
ず、上記Capsicum frutescens L
.に属するトウガラシからプロトプラストを調製するが
、このプロトプラストは、幼苗を7〜21日間、好まし
くは12〜18日間培養して得られた植物体の器官、例
えば、葉、根、茎等から調製したものを使用する。つま
り、この期間に得られた器官から調製したプロトプラス
トを用いることにより、はじめて、カルスを生育させる
ことができ、更には、そのカルスに、植物体を再生する
中間体である茎頂様組織を誘導させることができるので
ある。この期間以外に得られた器官を用いた場合には、
プロトプラストの収量は極めて少なく、このプロトプラ
ストを生育させたとしても、分裂は起きず、カルスを得
ることは困難である。
tescens L.に属するトウガラシの栽培品種と
しては、Tabasco が例示できる。本発明は、ま
ず、上記Capsicum frutescens L
.に属するトウガラシからプロトプラストを調製するが
、このプロトプラストは、幼苗を7〜21日間、好まし
くは12〜18日間培養して得られた植物体の器官、例
えば、葉、根、茎等から調製したものを使用する。つま
り、この期間に得られた器官から調製したプロトプラス
トを用いることにより、はじめて、カルスを生育させる
ことができ、更には、そのカルスに、植物体を再生する
中間体である茎頂様組織を誘導させることができるので
ある。この期間以外に得られた器官を用いた場合には、
プロトプラストの収量は極めて少なく、このプロトプラ
ストを生育させたとしても、分裂は起きず、カルスを得
ることは困難である。
【0007】次に、本発明におけるプロトプラストの調
製方法の好適態様を例示するが、本発明はこの方法に限
定されるものではない。本発明の処理は、全て無菌下で
行わなければならないため、まず、植物体の器官に、例
えば、エタノール、HgCl、次亜塩素酸ナトリウム、
次亜塩素酸カルシウム等を用いて殺菌処理を施す。この
場合、器官を死滅させないように、或るいは器官の生物
活性が損われないように注意しなければならない。殺菌
後は、無菌蒸留水等を用いて洗浄する。例えば、トウガ
ラシの種子からプロトプラストを調製する場合、該種子
を濃度1%〜2%程度の次亜塩素酸ナトリウム溶液に約
20〜30分間浸漬し、次いでこれを無菌蒸留水で洗浄
する。
製方法の好適態様を例示するが、本発明はこの方法に限
定されるものではない。本発明の処理は、全て無菌下で
行わなければならないため、まず、植物体の器官に、例
えば、エタノール、HgCl、次亜塩素酸ナトリウム、
次亜塩素酸カルシウム等を用いて殺菌処理を施す。この
場合、器官を死滅させないように、或るいは器官の生物
活性が損われないように注意しなければならない。殺菌
後は、無菌蒸留水等を用いて洗浄する。例えば、トウガ
ラシの種子からプロトプラストを調製する場合、該種子
を濃度1%〜2%程度の次亜塩素酸ナトリウム溶液に約
20〜30分間浸漬し、次いでこれを無菌蒸留水で洗浄
する。
【0008】次に、この種子が発芽するまで、培養する
。ここで、使用する培地は、種子が発芽するように水分
を含むものであれば如何なるものでもよく、水寒天培地
、Knop寒天培地、MS寒天培地等が例示できる。培
養するに当たってその温度条件は、15℃〜40℃、好
ましくは、20℃〜30℃の温度雰囲気であることが望
ましい。又、光の条件としては、常に暗い状態、明るい
状態、明/暗を交互にする状態の如何なる条件でもよい
。 例えば、約25℃、16時間日長(蛍光灯照射4000
lux )/8時間暗黒の条件で培養することにより、
約10〜14日後には種子が発芽し、発芽幼苗(双葉)
を展開させることができる。
。ここで、使用する培地は、種子が発芽するように水分
を含むものであれば如何なるものでもよく、水寒天培地
、Knop寒天培地、MS寒天培地等が例示できる。培
養するに当たってその温度条件は、15℃〜40℃、好
ましくは、20℃〜30℃の温度雰囲気であることが望
ましい。又、光の条件としては、常に暗い状態、明るい
状態、明/暗を交互にする状態の如何なる条件でもよい
。 例えば、約25℃、16時間日長(蛍光灯照射4000
lux )/8時間暗黒の条件で培養することにより、
約10〜14日後には種子が発芽し、発芽幼苗(双葉)
を展開させることができる。
【0009】次に、発芽した幼苗(双葉)を、植物体生
育培地に移植し、培養する。ここで、使用する植物体生
育培地としては、約10〜数百mg/l の濃度範囲の
無機イオン群(いわゆる多量要素、例えば、硝酸塩、り
ん酸塩、硫酸塩、カリウム、マグネシウム、鉄)最大限
で数mg/l の別の無機イオン群(いわゆる微量要素
、例えばコバルト、亜鉛、銅、マグネシウム)、ビタミ
ン(例えばイノシトール、ニコチン酸、チアミン)、シ
ュークロースまたはグルコースのような炭素源を含むも
のであればよく、TM−2寒天培地、MS寒天培地、L
S寒天培地等が例示できる。
育培地に移植し、培養する。ここで、使用する植物体生
育培地としては、約10〜数百mg/l の濃度範囲の
無機イオン群(いわゆる多量要素、例えば、硝酸塩、り
ん酸塩、硫酸塩、カリウム、マグネシウム、鉄)最大限
で数mg/l の別の無機イオン群(いわゆる微量要素
、例えばコバルト、亜鉛、銅、マグネシウム)、ビタミ
ン(例えばイノシトール、ニコチン酸、チアミン)、シ
ュークロースまたはグルコースのような炭素源を含むも
のであればよく、TM−2寒天培地、MS寒天培地、L
S寒天培地等が例示できる。
【0010】培養するに当たってその温度条件は、15
℃〜40℃、好ましくは、20℃〜30℃の温度雰囲気
であることが望ましい。又、光の条件としては、常に明
るい状態、或るいは明/暗を交互にする状態の如何なる
条件でもよい。例えば、約25℃、16時間日長(蛍光
灯照射4000lux )/8時間暗黒の条件で培養す
るのが好ましい。尚、常時暗い状態の場合は、植物体が
正常に生育し難く好ましくない。
℃〜40℃、好ましくは、20℃〜30℃の温度雰囲気
であることが望ましい。又、光の条件としては、常に明
るい状態、或るいは明/暗を交互にする状態の如何なる
条件でもよい。例えば、約25℃、16時間日長(蛍光
灯照射4000lux )/8時間暗黒の条件で培養す
るのが好ましい。尚、常時暗い状態の場合は、植物体が
正常に生育し難く好ましくない。
【0011】次に、生育した植物体の器官からプロトプ
ラストを調製するが、前記したように7〜21日間、好
ましくは12〜18日間培養して得られた植物体の器官
を使用する。例えば、葉を使用する場合、まず、この葉
を約5mm程度の幅の短冊状に細断する。次に、短冊状
に細断した葉を、ペクチナーゼ等のペクチン分解酵素、
ヘミセルラーゼ、セルラーゼ等のセルロース分解酵素を
含む液体培地に浸漬し、暗所に約14〜16時間時間静
置し、プロトプラストを遊離させる。上記液体培地とし
ては、マンニトール、ソルビトール等の成分を含有させ
、シュークロース等の炭素源等は含有させないものであ
れば如何なるものでもよく、上記成分以外は、MS培地
、LS培地等、通常組織培養に使用される培地を利用す
ればよい。ここで、マンニトール等の成分を含有させる
のは、酵素を含む液体培地の浸透圧を保持させることに
より、プロトプラストの破裂死を防止するためであり、
その添加量は、所期の目的が達成できる量であればよく
、具体的には、マンニトールの場合は、0.5〜0.7
M程度が望ましい。一方、シュークロース等の炭素源等
を含有させないのは、この成分が含まれている場合には
、プロトプラストが死滅したり、或るいはプロトプラス
トの生物活性が著しく損なわれてしまうからである。
ラストを調製するが、前記したように7〜21日間、好
ましくは12〜18日間培養して得られた植物体の器官
を使用する。例えば、葉を使用する場合、まず、この葉
を約5mm程度の幅の短冊状に細断する。次に、短冊状
に細断した葉を、ペクチナーゼ等のペクチン分解酵素、
ヘミセルラーゼ、セルラーゼ等のセルロース分解酵素を
含む液体培地に浸漬し、暗所に約14〜16時間時間静
置し、プロトプラストを遊離させる。上記液体培地とし
ては、マンニトール、ソルビトール等の成分を含有させ
、シュークロース等の炭素源等は含有させないものであ
れば如何なるものでもよく、上記成分以外は、MS培地
、LS培地等、通常組織培養に使用される培地を利用す
ればよい。ここで、マンニトール等の成分を含有させる
のは、酵素を含む液体培地の浸透圧を保持させることに
より、プロトプラストの破裂死を防止するためであり、
その添加量は、所期の目的が達成できる量であればよく
、具体的には、マンニトールの場合は、0.5〜0.7
M程度が望ましい。一方、シュークロース等の炭素源等
を含有させないのは、この成分が含まれている場合には
、プロトプラストが死滅したり、或るいはプロトプラス
トの生物活性が著しく損なわれてしまうからである。
【0012】又、液体培地に、ペクチン分解酵素及びセ
ルロース分解酵素を添加するのは、細胞間に存在するペ
クチン質、及び細胞壁の主成分であるセルロースを溶解
させるためである。又、暗所に静置するのは、細胞の光
合成作用を抑制し、細胞の生物活性の低下を防止し、更
には、振とう等による物理的衝撃によって、遊離したプ
ロトプラストが破壊され死滅してしまうことを防止する
ためである。
ルロース分解酵素を添加するのは、細胞間に存在するペ
クチン質、及び細胞壁の主成分であるセルロースを溶解
させるためである。又、暗所に静置するのは、細胞の光
合成作用を抑制し、細胞の生物活性の低下を防止し、更
には、振とう等による物理的衝撃によって、遊離したプ
ロトプラストが破壊され死滅してしまうことを防止する
ためである。
【0013】次に、葉の断片、その他夾雑物等を除去す
ることにより、プロトプラストのみを採取する。採取す
る方法としては、まず、メッシュサイズ100〜300
メッシュ程度の篩を用いてろ過することにより葉の断片
を除去する。次に、ろ液に、0.5〜0.7M程度のマ
ンニトールを添加し、遠心分離処理を施し、酵素液、ご
み等を除去する。この場合、遠心分離処理は、100×
g、3分間の条件で数回施すのが好ましい。更に、残存
する夾雑物等を除去するために、浸透圧が保持でき、か
つ比重がマンニトールよりも重い液体、例えば0.45
〜0.6M程度のシュークロースの液上に、上記遠心分
離処理を施した液を、混合しないように層状に載せ、こ
れに100×g、5分間の条件で遠心分離処理を施す。 これにより、シュークロースと、マンニトールとの界面
に、健全なプロトプラストが分布し、小さな夾雑物はマ
ンニトールの上層部に、大きな夾雑物はシュークロース
の下層部に分布するため、上記健全なプロトプラストの
みを採取することができる。
ることにより、プロトプラストのみを採取する。採取す
る方法としては、まず、メッシュサイズ100〜300
メッシュ程度の篩を用いてろ過することにより葉の断片
を除去する。次に、ろ液に、0.5〜0.7M程度のマ
ンニトールを添加し、遠心分離処理を施し、酵素液、ご
み等を除去する。この場合、遠心分離処理は、100×
g、3分間の条件で数回施すのが好ましい。更に、残存
する夾雑物等を除去するために、浸透圧が保持でき、か
つ比重がマンニトールよりも重い液体、例えば0.45
〜0.6M程度のシュークロースの液上に、上記遠心分
離処理を施した液を、混合しないように層状に載せ、こ
れに100×g、5分間の条件で遠心分離処理を施す。 これにより、シュークロースと、マンニトールとの界面
に、健全なプロトプラストが分布し、小さな夾雑物はマ
ンニトールの上層部に、大きな夾雑物はシュークロース
の下層部に分布するため、上記健全なプロトプラストの
みを採取することができる。
【0014】次に、本発明は、上記したように調製した
プロトプラストを培養生育させ、カルスを生成させる。 ここで、プロトプラストを生育させるに当たり、該プロ
トプラストを、多量要素、微量要素、イノシトール、チ
アミン等のビタミン、ホルモン、カザミノ酸、ココナツ
ウオーター等の有機物、フルクトース、マンノース等の
糖、クエン酸、リンゴ酸等の有機酸、グルコース等の浸
透圧調整剤等の成分を含む液体培地、例えば8p液体培
地で培養する。特に、上記したホルモンとしては、2.
4−ジクロロフェノキシ酢酸(2.4−D)とt−Ze
atin、ベンジルアミノプリン等のサイトカイニン類
を用い、必要に応じてこれらにナフタレン酢酸(NAA
)等を加えて用いてもよい。
プロトプラストを培養生育させ、カルスを生成させる。 ここで、プロトプラストを生育させるに当たり、該プロ
トプラストを、多量要素、微量要素、イノシトール、チ
アミン等のビタミン、ホルモン、カザミノ酸、ココナツ
ウオーター等の有機物、フルクトース、マンノース等の
糖、クエン酸、リンゴ酸等の有機酸、グルコース等の浸
透圧調整剤等の成分を含む液体培地、例えば8p液体培
地で培養する。特に、上記したホルモンとしては、2.
4−ジクロロフェノキシ酢酸(2.4−D)とt−Ze
atin、ベンジルアミノプリン等のサイトカイニン類
を用い、必要に応じてこれらにナフタレン酢酸(NAA
)等を加えて用いてもよい。
【0015】上記培養に当たり、プロトプラストは、1
04 個〜5×105 個/ml の濃度範囲になるよ
う培地中に懸濁するのが好ましい。培養するに当たって
その温度条件は、15℃〜40℃、好ましくは、20℃
〜30℃の温度雰囲気であることが望ましい。又、光の
条件としては、常に暗い状態、明るい状態、明/暗を交
互にする状態の如何なる条件でもよい。尚、明るい状態
の場合には、プロトプラストの死滅を防止するために、
培養当初は約300lux 程度の弱い照射であること
が望ましく、2週間程度経過したならば、4000lu
x 程度の強い照射をしても特に問題はない。例えば、
約25℃、16時間日長(蛍光灯照射300lux )
/8時間暗黒の条件で培養することにより、約40〜5
0日で直径1〜2mmのミニカルスが生成される。尚、
栄養分をプロトプラストに補給するために、約7〜10
日おきに新しい培地を1/3〜2/3容量で添加するの
が望ましい。
04 個〜5×105 個/ml の濃度範囲になるよ
う培地中に懸濁するのが好ましい。培養するに当たって
その温度条件は、15℃〜40℃、好ましくは、20℃
〜30℃の温度雰囲気であることが望ましい。又、光の
条件としては、常に暗い状態、明るい状態、明/暗を交
互にする状態の如何なる条件でもよい。尚、明るい状態
の場合には、プロトプラストの死滅を防止するために、
培養当初は約300lux 程度の弱い照射であること
が望ましく、2週間程度経過したならば、4000lu
x 程度の強い照射をしても特に問題はない。例えば、
約25℃、16時間日長(蛍光灯照射300lux )
/8時間暗黒の条件で培養することにより、約40〜5
0日で直径1〜2mmのミニカルスが生成される。尚、
栄養分をプロトプラストに補給するために、約7〜10
日おきに新しい培地を1/3〜2/3容量で添加するの
が望ましい。
【0016】本発明は、上記のようにして得られたカル
スを、培養することにより茎頂様組織(meriste
matic regions)が誘導される。ここで、
使用する培地としては、ジベレリンとサイトカイニン類
を含む培地であればよく、これらの成分を含むMS寒天
培地、LS寒天培地等が例示できる。上記ジベレリンと
しては、ジベレリンGA3 を用いることが好ましく、
その使用量は、0.1〜10mg/l 、好ましくは0
.1〜5mg/l になるようにするのが好ましい。一
方、サイトカイニン類としては、カイネチン、ベンジル
アミノプリン、ゼアチンリボシド、シス−ゼアチン、2
−イソペンテニルアミノプリン(2ip) 、N−フェ
ニル−N′−(4−ピリジル)尿素(4PU)等が例示
できる。この中で、例えば、カイネチンを使用する場合
には、0.001〜1mg/l 、好ましくは0.00
1〜0.01mg/l 、ベンジルアミノプリンを使用
する場合には、0.0001〜0.1mg/l 、好ま
しくは0.0005〜0.01mg/l の範囲になる
ようにするのが好ましい。
スを、培養することにより茎頂様組織(meriste
matic regions)が誘導される。ここで、
使用する培地としては、ジベレリンとサイトカイニン類
を含む培地であればよく、これらの成分を含むMS寒天
培地、LS寒天培地等が例示できる。上記ジベレリンと
しては、ジベレリンGA3 を用いることが好ましく、
その使用量は、0.1〜10mg/l 、好ましくは0
.1〜5mg/l になるようにするのが好ましい。一
方、サイトカイニン類としては、カイネチン、ベンジル
アミノプリン、ゼアチンリボシド、シス−ゼアチン、2
−イソペンテニルアミノプリン(2ip) 、N−フェ
ニル−N′−(4−ピリジル)尿素(4PU)等が例示
できる。この中で、例えば、カイネチンを使用する場合
には、0.001〜1mg/l 、好ましくは0.00
1〜0.01mg/l 、ベンジルアミノプリンを使用
する場合には、0.0001〜0.1mg/l 、好ま
しくは0.0005〜0.01mg/l の範囲になる
ようにするのが好ましい。
【0017】培養するに当たってその温度条件は、15
℃〜40℃、好ましくは、20℃〜30℃の温度雰囲気
であることが望ましい。又、光の条件としては、常に暗
い状態、明るい状態、明/暗を交互にする状態の如何な
る条件でもよい。次に実施例により本発明を説明する。
℃〜40℃、好ましくは、20℃〜30℃の温度雰囲気
であることが望ましい。又、光の条件としては、常に暗
い状態、明るい状態、明/暗を交互にする状態の如何な
る条件でもよい。次に実施例により本発明を説明する。
【0018】
【実施例】実施例1
I.プロトプラストの調製
(1) 以下の方法でトウガラシ(Capsicum
frutescens L.cv. Tabasco)
の種子を殺菌した。
frutescens L.cv. Tabasco)
の種子を殺菌した。
【0019】■ 次亜塩素酸ナトリウム溶液(2%濃
度)に30分間浸漬する。■ 無菌蒸留水で3回洗浄
する。 (2) 殺菌したトウガラシの種子を以下の方法で発芽
培養した。■ Knop寒天培地を用いて、25℃、
16時間日長(蛍光灯照射4000lux)/8時間暗
黒の条件で、発芽して幼苗(双葉)が展開するまで、1
4日間培養した。 (3) 発芽幼苗(双葉)が本葉に発育するまで以下の
方法により培養した。
度)に30分間浸漬する。■ 無菌蒸留水で3回洗浄
する。 (2) 殺菌したトウガラシの種子を以下の方法で発芽
培養した。■ Knop寒天培地を用いて、25℃、
16時間日長(蛍光灯照射4000lux)/8時間暗
黒の条件で、発芽して幼苗(双葉)が展開するまで、1
4日間培養した。 (3) 発芽幼苗(双葉)が本葉に発育するまで以下の
方法により培養した。
【0020】■ 発芽幼苗(双葉)をTM−2寒天培
地に移植する。 ■ 培養条件 ・25℃、16時間日長(蛍光灯照射4000lux)
/8時間暗黒の条件で、本葉が6〜8枚程度展開するま
で、約15日間培養した。 (4) 以下の方法によりプロトプラストを調製した。
地に移植する。 ■ 培養条件 ・25℃、16時間日長(蛍光灯照射4000lux)
/8時間暗黒の条件で、本葉が6〜8枚程度展開するま
で、約15日間培養した。 (4) 以下の方法によりプロトプラストを調製した。
【0021】■ 本葉を幅が約5mm程度の短冊状に
細断する。■ 細断した本葉をペクチン分解酵素(ペ
クチナーゼ)、及びセルロース分解酵素(ヘミセルラー
ゼ、セルラーゼ)を含むTo 液体培地に浸漬、暗所に
約15時間静置する。■ ろ過(300メッシュ)に
より葉の断片を除去する。
細断する。■ 細断した本葉をペクチン分解酵素(ペ
クチナーゼ)、及びセルロース分解酵素(ヘミセルラー
ゼ、セルラーゼ)を含むTo 液体培地に浸漬、暗所に
約15時間静置する。■ ろ過(300メッシュ)に
より葉の断片を除去する。
【0022】■ ろ液に0.6Mのマンニトールを添
加して、100×g、3分間の条件で遠心分離処理を3
回施し、酵素液、ごみ等を除去する。■ 0.54M
のシュークロースの上に、得られたプロトプラストを含
む0.6Mのマンニトールを混合しないように層状に載
せ、これに100×g、5分間の条件で遠心分離処理を
施し、純粋なプロトプラストを得た。 II. カルスの生育 ■ プロトプラストを105 個/ml の細胞濃度
で、ホルモン(2.4−ジクロロフェノキシ酢酸(2.
4−D)…0.2mg/l、ナフタレン酢酸(NAA)
…1.6mg/l、t−Zeatin…0.5mg/l
)を含む8p液体培地に植え付け、46日間、下記の条
件で培養し、直径1〜2mmのミニカルスを生育した。
加して、100×g、3分間の条件で遠心分離処理を3
回施し、酵素液、ごみ等を除去する。■ 0.54M
のシュークロースの上に、得られたプロトプラストを含
む0.6Mのマンニトールを混合しないように層状に載
せ、これに100×g、5分間の条件で遠心分離処理を
施し、純粋なプロトプラストを得た。 II. カルスの生育 ■ プロトプラストを105 個/ml の細胞濃度
で、ホルモン(2.4−ジクロロフェノキシ酢酸(2.
4−D)…0.2mg/l、ナフタレン酢酸(NAA)
…1.6mg/l、t−Zeatin…0.5mg/l
)を含む8p液体培地に植え付け、46日間、下記の条
件で培養し、直径1〜2mmのミニカルスを生育した。
【0023】■ 培養条件
・25℃、16時間日長(蛍光灯照射300lux)/
8時間暗黒 ・7日おきに新しい培地を1/3〜2/3容量で添加す
る。 III.茎頂様組織の誘導方法 ■ カルスを、ホルモン(ジベレリン…1mg/l、
カイネチン…0.01mg/l)を含むMS寒天培地で
培養した。 実施例2 茎頂様組織の誘導に当たり、ホルモン(ジベレリン、カ
イネチン)を含むMS寒天培地に換えて、ホルモン(ジ
ベレリン…3mg/l、ベンジルアミノプリン…0.0
1mg/l)を含むMS寒天培地を用いる以外は、実施
例1と同様の方法によりカルスを培養した。 比較例1 トウガラシ(Capsicum frutescens
L. cv. Tabasco) の種子に換えて、
カプシクム・アニウムに属するトウガラシ(Capsi
cum annuum L. cv. Tochigi
santaka)の種子を用いる以外は、実施例1と同
様の方法によりカルスを培養した。 比較例2 茎頂様組織の誘導に当たり、ホルモン(ジベレリン、カ
イネチン)を含むMS寒天培地に換えて、カイネチン0
.01mg/lを含み、ジベレリンは含まないMS寒天
培地を用いる以外は、実施例1と同様の方法によりカル
スを培養した。 比較例3 茎頂様組織の誘導に当たり、ホルモン(ジベレリン、カ
イネチン)を含むMS寒天培地に換えて、ベンジルアミ
ノプリン0.01mg/lを含み、ジベレリンは含まな
いMS寒天培地を用いる以外は、実施例1と同様の方法
によりカルスを培養した。 評 価 実施例1〜比較例1において、カルスを培養した結果を
以下に示す。
8時間暗黒 ・7日おきに新しい培地を1/3〜2/3容量で添加す
る。 III.茎頂様組織の誘導方法 ■ カルスを、ホルモン(ジベレリン…1mg/l、
カイネチン…0.01mg/l)を含むMS寒天培地で
培養した。 実施例2 茎頂様組織の誘導に当たり、ホルモン(ジベレリン、カ
イネチン)を含むMS寒天培地に換えて、ホルモン(ジ
ベレリン…3mg/l、ベンジルアミノプリン…0.0
1mg/l)を含むMS寒天培地を用いる以外は、実施
例1と同様の方法によりカルスを培養した。 比較例1 トウガラシ(Capsicum frutescens
L. cv. Tabasco) の種子に換えて、
カプシクム・アニウムに属するトウガラシ(Capsi
cum annuum L. cv. Tochigi
santaka)の種子を用いる以外は、実施例1と同
様の方法によりカルスを培養した。 比較例2 茎頂様組織の誘導に当たり、ホルモン(ジベレリン、カ
イネチン)を含むMS寒天培地に換えて、カイネチン0
.01mg/lを含み、ジベレリンは含まないMS寒天
培地を用いる以外は、実施例1と同様の方法によりカル
スを培養した。 比較例3 茎頂様組織の誘導に当たり、ホルモン(ジベレリン、カ
イネチン)を含むMS寒天培地に換えて、ベンジルアミ
ノプリン0.01mg/lを含み、ジベレリンは含まな
いMS寒天培地を用いる以外は、実施例1と同様の方法
によりカルスを培養した。 評 価 実施例1〜比較例1において、カルスを培養した結果を
以下に示す。
【0024】
実施例1……約30日後に茎頂様組織が誘導され、その
誘導率は、83.3%であった。 実施例2……約50日後に茎頂様組織が誘導され、その
誘導率は、83.3%であった。 比較例1……茎頂様組織は誘導されなかった。
誘導率は、83.3%であった。 実施例2……約50日後に茎頂様組織が誘導され、その
誘導率は、83.3%であった。 比較例1……茎頂様組織は誘導されなかった。
【0025】
比較例2……茎頂様組織は誘導されなかった。
比較例3……茎頂様組織は誘導されなかった。
比較例1から明らかなように、トウガラシ属(Caps
icum)の辛みを有するトウガラシのなかでも、カプ
シクム・アニウムに属するトウガラシでは、ジベレリン
とサイトカイニン類を組み合わせた培地でカルスを培養
しても、茎頂様組織を誘導することはできなかった。
icum)の辛みを有するトウガラシのなかでも、カプ
シクム・アニウムに属するトウガラシでは、ジベレリン
とサイトカイニン類を組み合わせた培地でカルスを培養
しても、茎頂様組織を誘導することはできなかった。
【0026】比較例2及び3から明らかなようにサイト
カイニン類のみでは、Capsicum frutes
cens L.に属する辛味を有するトウガラシのカル
スから茎頂様組織を誘導することはできなかった。
カイニン類のみでは、Capsicum frutes
cens L.に属する辛味を有するトウガラシのカル
スから茎頂様組織を誘導することはできなかった。
【0027】
【発明の効果】本発明によれば、プロトプラストからの
植物体再生が困難であったから味を有するトウガラシ、
特にCapsicum frutescens L.に
属するトウガラシの、プロトプラスト由来のカルスから
、植物体再生の中間体である茎頂様組織を誘導すること
ができ、その誘導率も極めて高いものであった。 比較例2 サイトカイニンのみではfrutescensのカルス
は生成しないことを示す。
植物体再生が困難であったから味を有するトウガラシ、
特にCapsicum frutescens L.に
属するトウガラシの、プロトプラスト由来のカルスから
、植物体再生の中間体である茎頂様組織を誘導すること
ができ、その誘導率も極めて高いものであった。 比較例2 サイトカイニンのみではfrutescensのカルス
は生成しないことを示す。
Claims (2)
- 【請求項1】 カプシクム・フルテッセンス(Cap
sicum frutescens L.) に属する
トウガラシの発芽幼苗を7〜21日間培養して得られた
植物体の器官から調製したプロトプラストを生育させ、
得られたカルスを、ジベレリンとサイトカイニン類を含
む培地で培養することを特徴とするプロトプラストから
茎頂様組織を誘導する方法。 - 【請求項2】 サイトカイニン類が、カイネチン又は
ベンジルアミノプリンである請求項1記載のプロトプラ
ストから茎頂様組織を誘導する方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP3116159A JP2663217B2 (ja) | 1991-05-21 | 1991-05-21 | トウガラシのプロトプラストから茎頂様組織を誘導する方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP3116159A JP2663217B2 (ja) | 1991-05-21 | 1991-05-21 | トウガラシのプロトプラストから茎頂様組織を誘導する方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH04346729A true JPH04346729A (ja) | 1992-12-02 |
JP2663217B2 JP2663217B2 (ja) | 1997-10-15 |
Family
ID=14680239
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP3116159A Expired - Fee Related JP2663217B2 (ja) | 1991-05-21 | 1991-05-21 | トウガラシのプロトプラストから茎頂様組織を誘導する方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP2663217B2 (ja) |
Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1999012412A1 (fr) * | 1997-09-08 | 1999-03-18 | Japan Tobacco Inc. | Procede de production de semis de piments rouges depourvus de virus |
KR100270574B1 (en) * | 1997-10-13 | 2000-11-01 | Yong Pyo Lim | A method of mass-producing regenerated pepper plants by plant tissue culture and regenerated pepper plants thereby |
KR100736150B1 (ko) * | 2006-08-31 | 2007-07-06 | 목원대학교 산학협력단 | 소포자 배양 기술을 이용한 고추의 정상 배 생산 방법 |
KR100952103B1 (ko) * | 2007-12-27 | 2010-04-13 | 목원대학교 산학협력단 | 고추의 소포자배양에 의해 얻어진 배로부터 식물체를생산하는 방법 |
CN108077072A (zh) * | 2016-11-21 | 2018-05-29 | 巴中精致现代农业开发有限公司 | 风铃椒组织培养用培养基及快速繁殖方法 |
CN108496804A (zh) * | 2018-07-05 | 2018-09-07 | 重庆文理学院 | 无刺花椒组织培养初代诱导的方法 |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR101715783B1 (ko) * | 2014-10-20 | 2017-03-14 | 공주대학교 산학협력단 | 국화 약 배양을 위한 캘러스 유도용 배지, 신초 유도용 분화 배지 및 이를 이용하는 약 배양에 의한 국화 반수체 식물의 제조방법 |
-
1991
- 1991-05-21 JP JP3116159A patent/JP2663217B2/ja not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
I.DIAZ,R.MORENO,AND. J.B.POWER, PLANT CELL REPORTS,=1988 * |
Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1999012412A1 (fr) * | 1997-09-08 | 1999-03-18 | Japan Tobacco Inc. | Procede de production de semis de piments rouges depourvus de virus |
KR100270574B1 (en) * | 1997-10-13 | 2000-11-01 | Yong Pyo Lim | A method of mass-producing regenerated pepper plants by plant tissue culture and regenerated pepper plants thereby |
KR100736150B1 (ko) * | 2006-08-31 | 2007-07-06 | 목원대학교 산학협력단 | 소포자 배양 기술을 이용한 고추의 정상 배 생산 방법 |
KR100952103B1 (ko) * | 2007-12-27 | 2010-04-13 | 목원대학교 산학협력단 | 고추의 소포자배양에 의해 얻어진 배로부터 식물체를생산하는 방법 |
CN108077072A (zh) * | 2016-11-21 | 2018-05-29 | 巴中精致现代农业开发有限公司 | 风铃椒组织培养用培养基及快速繁殖方法 |
CN108496804A (zh) * | 2018-07-05 | 2018-09-07 | 重庆文理学院 | 无刺花椒组织培养初代诱导的方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2663217B2 (ja) | 1997-10-15 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Nandagopal et al. | Adenine sulphate induced high frequency shoot organogenesis in callus and in vitro flowering of Cichorium intybus L. cv. Focus-a potent medicinal plant | |
Taji et al. | Plant tissue culture practice | |
Carra et al. | Potential use of new diphenylurea derivatives in micropropagation of Capparis spinosa L. | |
Ramakrishnan Nair et al. | Somatic embryogenesis and plant regeneration in black pepper (Piper nigrum L.): I. Direct somatic embryogenesis from tissues of germinating seeds and ontogeny of somatic embryos | |
JP2663217B2 (ja) | トウガラシのプロトプラストから茎頂様組織を誘導する方法 | |
Le Bris et al. | Basipetal gradient of axillary bud inhibition along a rose (Rosa hybrida L.) stem: growth potential of primary buds and their two most basal secondary buds as affected by position and age | |
Burrows et al. | In vitro propagation of Araucaria cunninghamii and other species of the Araucariaceae via axillary meristems | |
Pereira | Conservation of Vaccinium cylindraceum Smith (Ericaceae) by micropropagation using seedling nodal explants | |
US4361984A (en) | Micropropagation of plant material | |
Pierik et al. | Vegetative propagation | |
CN107047317A (zh) | 一种诸葛菜胚状体和植株的培养方法 | |
Vcelar et al. | Elimination of ornithogalum mosaic virus in the Ornithogalum cv. Rogel through meristem tip culture and chemotherapy | |
Fawusi | Germination of Talinum triangulare L. seeds as affected by various chemical and physical treatments | |
KR100302206B1 (ko) | 민두릅나무의 기내 대량생산방법 및 포지 이식방법 | |
JPH03277219A (ja) | バラの組織培養法 | |
JP2773062B2 (ja) | ミカン科植物の大量急速増殖法 | |
AU8337787A (en) | An effective process for the in vitro-in vivo production of potato minitubers | |
JPH0642809B2 (ja) | 苗条原基集塊の作出方法 | |
JPH05227857A (ja) | キク科植物の培養方法 | |
Jamir et al. | Plantlet regeneration of naga king chilli (Capsicum Chinense JACQ.) from nodal segments through in vitro technique | |
Jenderek et al. | Hibiscus syriacus plant regeneration from callus | |
JP3079243B2 (ja) | ミカン科植物の合成周縁キメラ作出方法 | |
Nguyen Thi Thuy Linh et al. | A practical and efficient method for the micropropagation of Japanese cherry (Prunus sp.). | |
Hristoforoglu et al. | DISTINCT AND VISIBLE DIFFERENCES IN MICROPROPAGATION OF VACCINIUM MYRTILLUS ESTABLISHED FROM MATURE AND JUVENILE TISSUE | |
JPH0731309A (ja) | フトモモ科植物の増殖及び発根苗化方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |