CN108072727A - 一种同时测定三七中23种有机氯类农药残留量的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种同时测定三七中23种有机氯类农药残留量的方法，该方法采用QuEChERS‑气相色谱‑三重四极杆串联质谱法，建立三七中23种常见的有机氯类农药残留量的检测方法。试样用乙腈提取，经吸附剂C18、PSA吸附净化后，以气相色谱‑三重四极杆串联质谱多反应监测(MRM)模式，进行基质匹配标准曲线内标法定量测定。对23种农药进行3个水平的加标回收试验(0.01、0.05、0.10mg/kg)，其回收率范围为71.3％～121.9％，RSD(n＝9)在2.6％～13.6％之间；在0.001～0.100mg/L范围内线性关系良好，相关系数(r2)均大于0.99；方法的定量限(LOQ)范围为0.001～0.010mg/kg。

Description

一种同时测定三七中23种有机氯类农药残留量的方法

技术领域：

本发明涉及一种中药中农药残留物质的检测方法，特别涉及一种同时测定三七中23种有机氯类农药残留量的方法，该方法采用QuEChERS-气相色谱-三重四极杆串联质谱法，建立三七中23种常见的有机氯类农药残留量的检测方法。

背景技术：

农药的使用给人类生活带来了巨大贡献，同时农药的滥用，也给人类机体造成一定的伤害。目前随着中药材规范化种植的不断深入开展，药材的农药残留问题越来越引起世界各国学者的重视。有机氯农药曾广泛用于中药栽培，但由于其半衰期长、降解缓慢、化学性质稳定的特点，我国于20世纪80年代已禁止使用，但至今仍能从水、土壤及植物体内检测到残留成分。植物在生长过程中若富集了环境中残留的有机氯农药，并通过食物链关系转移至人体中，由于其脂溶性大，毒性易积蓄，这将严重影响人的用药安全。

三七是我国特有的传统名贵中药材，生熟两用，生三七具有止血活血、散瘀止痛、强心定痛的作用；熟三七具有补血益气，强身健脑、安神等功效。80年代以来，三七化学成分和药理作用的不断被深入研究，开发了诸多以三七为原料的药物和保健品。三七为根类药材，易被蓄积在土壤中的有机氯类农药污染，故三七中有机氯类农药的检测对其药材的安全性评价十分重要。

现在农药残留检测手段主要包括气相色谱、气相色谱-三重四极杆串联质谱、液相质谱-串联质谱。中药材前处理方法有磺化法、固相萃取法等。周家明等采用不同三七饮片中六六六、滴滴涕农药残留量的分析，采用样品丙酮超声提取、分液漏斗萃取，石油醚洗涤，硫酸钠脱水，取石油醚层毛浓缩后硫酸溶解后用毛细管气相色谱法测定六六六、滴滴涕含量。(周家明等，不同三七饮片中六六六、滴滴涕农药残留量的分析，现在中药研究与实践2007,21(1)，10-13)。张曙明等对黄芪、三七和西洋参中15种有机氯农药残留量测定分析，样品采用水浸泡、丙酮、氯化钠和二氯甲烷(或石油醚)混合溶剂超声提取，无水硫酸钠脱水，Florisil硅土柱层析净化后，石油醚溶解即得，采用毛细管气相色谱法-电子捕获检测器分析测定。(张曙明等，黄芪、三七和西洋参中多种有机氯弄呀残留量分析，中国中药杂志，2000年7月，25(7)402-405)。上述方法样品制备比较繁琐，应用化学毒性试剂较多，且检测方法的专属性和灵敏度相对于气相质谱而言较低。

在农残检测前处理方法中，QuEChERS法是固相萃取技术和基质固相分散技术的衍生和进一步发展，是一种操作简单、溶剂使用量少、分析速度快的前处理技术，与其他前处理方法比较，不需要使用大量的有机溶剂，操作者不需要经过严格培训，实验条件要求也较为宽松，2003年由美国农业部Anastassiades教授等开发以来，得到了广泛的应用。欧盟农药残留前处理技术标准中建议对于基质复杂的干燥草药，提取时每2g药材加入10mL水。QuEChERS法影响因素较多，如提取剂的选择，脱水剂的选择、净化剂的选择等。吴剑威等以体积比95：1的乙腈-水-1％乙酸混合溶液作为提取剂、QuEChERS法加入GCB、PSA、无水硫酸镁净化，采用气相色谱法检测9种农药。(吴剑成等，QuEChERS-气相色谱法快速检测五十种中药材中九种有机氯农药残留的方法研究，分析科学学报，2011,27(2)，167-170)。李家春等采用QuEChERS法结合高效液相色谱法-串联质谱对三七35种农药残留检测，样品采用水浸润过夜，加入含1％醋酸乙腈，无水硫酸镁、无水醋酸钠振荡离心，加无水硫酸镁、PSA吸附剂后，离心，上清液浓缩，用1％醋酸甲醇溶解即得。(李家春等，基于QuEChERS法-超高效液相色谱-串联质谱法的5种中药材中35种有机磷农药残留量的快速分析，药物分析杂志，2016,36(1)122-128)。现有技术中三七药材的有机氯农药残留检测方法前处理采用水、含酸乙腈混合溶液浸泡，造成了三七药材水提取液颜色加深，杂质增多给后期的QuEChERS法净化带来困难，从而影响方法的准确性及可靠性。

发明内容：

为了解决上述技术问题，本发明采用QuEChERS净化法结合气相色谱-串联质谱联用法，对三七药材中23种有机氯农药的残留量进行测定，用基质匹配标准曲线内标法对三七的基质效应进行补偿，用于三七药材的质量控制。

本发明的技术方案是通过下述方法得到的：

一种同时测定三七中23种有机氯类农药残留量的方法，包括如下步骤：

(1)供试品溶液的制备：取三七药材粉末,过2号筛粒，加乙腈浸泡，加氯化钠和无水硫酸镁，涡旋振摇，离心；取上清液，加PSA、C18和无水硫酸镁，涡旋振摇，离心，取上清，水浴旋转蒸发至近干，用丙酮溶解，得样品溶液，4℃冰箱储存待用。

(2)有机氯混合标准溶液制备；取氘代毒死蜱、α-六六六、六氯苯、五氯苯甲醚、β-六六六、δ-六六六、五氯硝基苯、γ-六六六、五氯苯胺、环氧七氯B、氧化氯丹、环氧七氯A、α-硫丹、p,p’-滴滴伊、o,p’-滴滴滴、除草醚、异狄氏剂、β-硫丹、p,p’-滴滴滴、o,p’-滴滴涕、硫丹硫酸酯、p,p’-滴滴涕、甲氧滴滴涕、灭蚁灵，以丙酮为溶剂配制各农药标准储备液；再精密量取一定体积的各农药标准储备液，以丙酮稀释即得有机氯农药混合标准溶液；

(3)空白三七基质溶液制备：取无农药残留的三七药材按照步骤(1)方法制备得无农药残留的三七基质溶液；

(4)基质匹配标准溶液制备：取适量氘代毒死蜱-D10内标溶液及有机氯混合标准溶液置量瓶中，加入空白三七基质溶液稀释得混合标准工作溶液。

(5)测定法：将上述供试品溶液、基质匹配标准溶液进样到气相色谱-串联质谱仪，得到色谱图，根据色谱图计算有机氯类农药残留量；

其中色谱条件如下：

气相色谱条件：气相色谱柱：30m×0.25mm×0.25μm；载气：氦气，流速：0.5-1.5mL/min,优选1mL/min,；进样口温度：180-250℃，优选230℃，进样量：0.8-1.2μL，优选1.0μL不分流进样，升温程序：初始温度100℃，以10℃/min的速度升温至220℃，以8℃/min的速度升温至250℃，保持10min，总运行时间为25.75min。

质谱条件：电子轰击离子源，电压为70eV；离子源温度230℃，接口温度250℃，溶剂延迟时间2.8min，碰撞气：氩气；多反应离子监测。

其中，步骤(1)三七药材粉末乙腈浸泡加入氯化钠目的是盐析作用，使乙腈和样品中水分分离,而加入硫酸镁的目的是吸水使农药分配到提取溶剂中，提取的更加完全。所述PSA(乙二胺-N-丙基硅烷，一种吸附剂，用来去除三七本身的化学成分。

优选的，本发明步骤(1)的方法如下：取药材粉末，精密称定，置离心管中，加2-6倍量(质量体积比)乙腈浸泡20-40min，加0.2-1倍药材量的氯化钠和加0.1-0.5倍药材量的无水硫酸镁，涡旋振摇1-5min，以8000-12000r/min的速度离心5-10min。取上清液置离心管中，加PSA，C₁₈和无水硫酸镁重量比为1:1:1涡旋振摇1-4min以5000-10000r/min的速度离心5-10min，取上清液于35-45℃下水浴旋转蒸发至近干，用丙酮溶解，得样品溶液，4℃冰箱储存待用。

更优选的，本发明步骤(1)的方法如下：取药材粉末1份，精密称定，置50mL聚丙烯塑料离心管中，加1:5乙腈浸泡30min，加氯化钠1份和无水硫酸镁0.5份，涡旋振摇2min，以10000r/min的速度离心10min。取上清液7mL置10mL EP管中，加PSA，C₁₈和无水硫酸镁各0.2份，涡旋振摇2min，以5000r/min的速度离心10min，取上清5mL于50mL鸡心瓶中，于40℃下水浴旋转蒸发至近干，用2mL丙酮溶解，得样品溶液，4℃冰箱储存待用。

其中，步骤(2)中有机氯混合标准溶液的配制方法如下：

以丙酮为溶剂配制成质量浓度为100mg/L的各农药标准储备液，再精密量取一定体积的各农药标准储备液，以丙酮稀释，得到质量浓度为2mg/L的23种有机氯农药混合标准溶液，于-18℃下冰箱内保存。

其中，步骤(4)三七空白基质匹配标准溶液配制方法如下：

精密量取适量氘代毒死蜱-D10(内标)溶液及混合标准溶液置2mL量瓶中，加空白三七基质溶液稀释至刻度，得到质量浓度分别为0.001,0.002,0.005,0.010,0.025,0.050,0.075,0.100mg/L的基质匹配标准工作溶液，其中内标溶液质量浓度为0.050mg/L。

本发明的方法是经过筛选获得的，筛选过程如下：

1质谱条件优化

本发明在多反应离子监测(MRM)模式下进行定量分析。一级质谱中，以电子轰击的电离方式将目标物电离为碎片离子，经质量分析器把不同质荷比的离子分开，选取其中质荷比较大且相对丰度较高的特征碎片离子作为前体离子；二级质谱中，使前体离子与碰撞气氩气碰撞裂解，产生产物离子；收集产物离子，得到目标物的二级质谱图。在前体离子和氩气碰撞过程中，对碰撞电压进行优化，使峰响应更高、灵敏度增加优化结果如表1所示。

表1 23种农药及内标的保留时间及质谱分析参数

2前处理方法的优化

中药农药残留的检测是在复杂基质的条件下进行痕量残留的分析，前处理需要同时解决两个问题，一是除去复杂基质中的干扰物质，二是农药的回收率要满足要求。所以前处理方式的选取是农药残留检测的技术难点。

本发明研究了浸泡与超声不同提取方式对有机氯农药回收率的影响。浸泡30min和超声30min的回收率结果如表2所示，故选择浸泡30min作为提取方式：

表2不同提取方式的回收率

由于大部分有机氯类农药具有对硫酸稳定的特性，因此本发明尝试采取磺化法对药材三七进行处理，称样1g，加入30mL石油醚浸泡1h，抽滤，洗涤残渣，转移至100mL圆底烧瓶中，于40℃下水浴旋转蒸发至近干，以正己烷溶解并转移至2mL容量瓶中定容，加入0.1mL浓硫酸，充分震摇，反应完全后离心，取上清液，进GC-MS。异狄氏剂未出峰，表明异狄氏剂对硫酸不稳定。虽然硫酸磺化法具有良好的净化基质的作用，但本发明不宜采用硫酸磺化法。

在农残检测前处理方法中本文考察了提取时加入10mL水充分润湿10min，再以10mL乙腈浸泡30min和只采用10mL乙腈浸泡30min两种提取方法。两种提取方法回收率均在70～120％之间，满足农药残留分析要求。两种提取方法经净化后空白基质色谱图见图1。在回收率满足要求的前提下，尽量选择共提物较少的方式，避免干扰测定、污染检测器并减少基质效应。三七加水浸泡乙腈后提取液颜色深，杂质多，且后期除水过程复杂。所以选择直接乙腈提取。

三七药材中主要成分为皂苷类，且含有少量的氨基酸、蛋白质、多糖、黄酮类、炔、醇类及挥发油等。乙腈提取后这些物质同待测农药一起被提取出来，GC-MS/MS测定时，这些成分的存在会使待测农药的色谱峰峰型变差或响应的增高、降低，这都对有机氯农药的定量产生干扰。QuEChERS法中，最常用的吸附剂有C18，PSA和GCB。吸附剂C18能吸附非极性成分，如脂肪、叶绿素、酯类及甾醇类等；PSA能除去大部分的脂肪酸，极性色素，有机酸，糖和酚类等成分；吸附剂GCB的作用为吸附提取出来的色素且对具有平面结构的农药产生吸附作用。测定的农药中，六六六、六氯苯及五氯硝基苯等均为平面结构，但本文中，三七经乙腈提取后，提取液澄清，故无需加入吸附剂GCB。在提取液中加入PSA，多糖的等极性成分被吸附除去，这些成分易在进样口和柱头聚积，从而引起基质效应，影响农药的色谱行为，但PSA的加入并不能去除皂苷等非极性成分，而C18的加入，可有效的去除这类杂质。三七样品经乙腈提取，C18，PSA净化后能去除大部分基质，净化效果好。不干扰农药定量测定，故本文选择C18、PSA作为吸附剂的QuEChERS前处理方法。

3基质效应

基质是样品中除被分析物以外的组分，常对分析物的分析有显著干扰，并且影响分析结果的准确性，这些影响和干扰被称为基质效应。基质效应在常量分析中并不显著，但在痕量残留分析中却极大的影响分析的准确度。通过三七空白基质溶液和溶剂配制的标准曲线斜率的比值来对每种农药的基质效应进行评价。

所述农药的基质效应评价可通过如下公式计算：

S_溶剂指有机氯混合标准工作溶液的线性方程斜率

S_基质指空白三七基质匹配标准工作溶液的线性方程斜率

MF的值为正或负时，代表基质效应的增强或减弱。MF为0时，不存在基质效应，MF值在±20％之内，则基质效应较小；MF值在±50％之内，则为中等基质效应。

图2可知，灭蚁灵基质效应较大，α-六六六、五氯硝基苯等基质效应较小，六氯苯、五氯苯甲醚等为中等基质效应。减少基质效应影响的方法一般有：加入同位素标记目标物，优化前处理和分析条件，标准添加法及基质匹配标准溶液校准方法等，其中优化前处理和分析条件法不能完全消除基质效应，且易降低回收率，同位素标记物的种类少，价格昂贵；标准添加比较繁琐。因此，本发明采用基质匹配标准溶液内标法对基质效应进行补偿。

本发明采用QuEChERS-气相色谱-三重四极杆串联质谱法，建立了三七中23种常见的有机氯类农药残留量的检测方法。同时，用基质匹配标准曲线内标法对三七的基质效应进行了补偿。本方法操作简便，准确可靠，灵敏度高，为三七中有机氯农药残留测定提供了一种有力的分析手段。对30批药材进行测样发现五氯硝基苯存在超标现象。相关标准中已将五氯硝基苯列为禁用农药，但由于其价格低，药效好等特点，仍存在使用的情况。为了保护三七质量，保证用药安全，促进进出口贸易，建议使用其它低毒高效、降解较快的农药替代。

4.方法学验证

4.1线性

在质量浓度在0.001～0.100mg/L范围内，基质匹配标准工作溶液经GC-MS/MS测定后，以相对峰面积(A_对照品/A_内标)对相对质量浓度(C_对照品/C_内标)作图，绘制工作曲线，结果见表3，表明响应值和浓度之间均显示良好的线性关系，相关系数(r²)均大于0.99。

表3 23种农药的线性方程、线性范围及相关系数

4.2回收率和重复性

本发明采用标准加入法，向已知的阴性三七样品中加入混合标准溶液和内标溶液，制备加标水平分别为0.01、0.05和0.10mg/kg的样品，每个水平重复3次，按上述优化后的方法提取净化样品，并进行GC-MS/MS分析，基质匹配内标法定量，计算平均回收率和相对标准偏差(RSD，n＝9)。如表3所示，所有的农药的平均回收率均在71.3％～121.9％之间，RSD在2.6％～13.6％之间。重复性是指在同样的操作条件下，在较短时间间隔的精密度，也称间隙测量精密度。平行制备6份加标水平为0.05mg/kg样品溶液，计算回收率和相对标准偏差(RSD，n＝6)，平均回收率在83.1％～102.1％之间，RSD在1.4％～9.3％之间，结果表明重复性良好。

4.3定量限

本发明通过基质加标试验，向三七空白基质中添加多个加标水平较低的农药混合标准溶液，每个加标水平各平行6次，所得的溶液进GC-MS/MS分析，计算平均回收率和相对标准偏差(RSD，n＝6)，平均回收率在70％～120％之间，RSD在20％以内即为该物质的定量限。

表4 23种农药的定量限、回收率

本发明在于提供一种同时测定三七中23种有机氯类农药残留量的方法，该方法采用QuEChERS-气相色谱-三重四极杆串联质谱法，建立三七中23种常见的有机氯类农药残留量的检测方法。试样用乙腈提取，经吸附剂C18、PSA吸附净化后，以气相色谱-三重四极杆串联质谱多反应监测(MRM)模式，进行基质匹配标准曲线内标法定量测定。本发明对30批三七药材进行了测定，10批检测出了五氯硝基苯，8批检测出了五氯苯胺。该方法前处理简单快速，准确可靠，灵敏度高等优点，适合三七中有机氯农药残留的测定。

附图说明：

图1水浸泡乙腈提取(a)和乙腈提取(b)的三七空白基质总离子流色谱图

图2 23种有机氯农药基质效应

具体实施方式：

以下通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。

实施例1、

一种同时测定三七中23种有机氯类农药残留量的方法，包括如下步骤：

步骤(1)

取药材粉末1份，精密称定，置50mL聚丙烯塑料离心管中，加1:5乙腈浸泡30min，加氯化钠1份和无水硫酸镁0.5份，涡旋振摇2min，以10000r/min的速度离心10min。取上清液7mL置10mL EP管中，加PSA，C₁₈和无水硫酸镁各0.2份，涡旋振摇2min，以5000r/min的速度离心10min，取上清5mL于50mL鸡心瓶中，于40℃下水浴旋转蒸发至近干，用2mL丙酮溶解，得样品溶液，4℃冰箱储存待用。

步骤(2)

取氘代毒死蜱、α-六六六、六氯苯、五氯苯甲醚、β-六六六、δ-六六六、五氯硝基苯、γ-六六六、五氯苯胺、环氧七氯B、氧化氯丹、环氧七氯A、α-硫丹、p,p’-滴滴伊、o,p’-滴滴滴、除草醚、异狄氏剂、β-硫丹、p,p’-滴滴滴、o,p’-滴滴涕、硫丹硫酸酯、p,p’-滴滴涕、甲氧滴滴涕、灭蚁灵，以丙酮为溶剂配制成质量浓度为100mg/L的各农药标准储备液，再精密量取一定体积的各农药标准储备液，以丙酮稀释，得到质量浓度为2mg/L的23种有机氯农药混合标准溶液，于-18℃下冰箱内保存。

步骤(3)

取无农药残留的三七药材按照步骤(1)方法制备得无农药残留的三七基质溶液；

步骤(4)

精密量取适量氘代毒死蜱-D10(内标)溶液及混合标准溶液置2mL量瓶中，加空白三七基质溶液稀释至刻度，得到质量浓度分别为0.001,0.002,0.005,0.010,0.025,0.050,0.075,0.100mg/L的基质匹配标准工作溶液，其中内标溶液质量浓度为0.050mg/L。

步骤(5)

(5)测定法：将上述供试品溶液、基质匹配标准溶液进样到气相色谱-串联质谱仪，得到色谱图，根据色谱图计算有机氯类农药残留量；

其中色谱条件如下：

气相色谱条件：气相色谱柱：30m×0.25mm×0.25μm；载气：氦气，流速：1mL/min,；进样口温度：230℃，进样量：1.0μL不分流进样，升温程序：初始温度100℃，以10℃/min的速度升温至220℃，以8℃/min的速度升温至250℃，保持10min，总运行时间为25.75min。

质谱条件：电子轰击离子源，电压为70eV；离子源温度230℃，接口温度250℃，溶剂延迟时间2.8min，碰撞气：氩气；多反应离子监测。

实施例2

按照实施例1的方法，对来自云南的30批三七药材进行测定。结果见表5。其中10批检测出了五氯硝基苯，检出率为33％，8批检测出了五氯苯胺，检出率为27％。2015版《中国药典》规定五氯硝基苯的最大残留限量为0.01mg/kg。30批三七药材中2批的五氯硝基苯农药残留量超过了中国药典规定，残留量分别为0.226mg/kg和0.208mg/kg，而五氯苯胺为五氯硝基苯的代谢物，其测定的最大残留量为0.058mg/kg。

表5检测结果

(注：“-”表示未检出，“+”表示检出，“++”表示超标)

Claims (7)

1.一种同时测定三七中23种有机氯类农药残留量的方法，包括如下步骤：

(1)供试品溶液的制备：取三七药材粉末,过2号筛粒，加乙腈浸泡，加氯化钠和无水硫酸镁，涡旋振摇，离心；取上清液，加PSA、C18和无水硫酸镁，涡旋振摇，离心，取上清，水浴旋转蒸发至近干，用丙酮溶解，得样品溶液，4℃冰箱储存待用；

(2)有机氯混合标准溶液制备；取氘代毒死蜱、α-六六六、六氯苯、五氯苯甲醚、β-六六六、δ-六六六、五氯硝基苯、γ-六六六、五氯苯胺、环氧七氯B、氧化氯丹、环氧七氯A、α-硫丹、p,p’-滴滴伊、o,p’-滴滴滴、除草醚、异狄氏剂、β-硫丹、p,p’-滴滴滴、o,p’-滴滴涕、硫丹硫酸酯、p,p’-滴滴涕、甲氧滴滴涕、灭蚁灵，以丙酮为溶剂配制各农药标准储备液；再精密量取一定体积的各农药标准储备液，以丙酮稀释即得有机氯农药混合标准溶液；

(3)空白三七基质溶液制备：取无农药残留的三七药材按照步骤(1)方法制备得无农药残留的三七基质溶液；

(4)基质匹配标准溶液制备：取适量氘代毒死蜱-D10内标溶液及有机氯混合标准溶液置量瓶中，加入空白三七基质溶液稀释得混合标准工作溶液；

(5)测定法：将上述供试品溶液、基质匹配标准溶液进样到气相色谱-串联质谱仪，得到色谱图，根据色谱图计算有机氯类农药残留量；

其中色谱条件如下：

气相色谱条件：气相色谱柱：30m×0.25mm×0.25μm；载气：氦气，流速：0.5-1.5mL/min；进样口温度：180-250℃，进样量：0.8-1.2μL不分流进样，升温程序：初始温度100℃，以10℃/min的速度升温至220℃，以8℃/min的速度升温至250℃，保持10min，总运行时间为25.75min；

质谱条件：电子轰击离子源，电压为70eV；离子源温度230℃，接口温度250℃，溶剂延迟时间2.8min，碰撞气：氩气；多反应离子监测。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，其中色谱条件如下：

气相色谱条件：气相色谱柱：30m×0.25mm×0.25μm；载气：氦气，流速：1mL/min,；进样口温度：230℃，进样量：1.0μL不分流进样，升温程序：初始温度100℃，以10℃/min的速度升温至220℃，以8℃/min的速度升温至250℃，保持10min，总运行时间为25.75min。

质谱条件：电子轰击离子源，电压为70eV；离子源温度230℃，接口温度250℃，溶剂延迟时间2.8min，碰撞气：氩气；多反应离子监测。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，其中，步骤(1)的方法如下：取药材粉末，精密称定，置离心管中，加2-6倍量(质量体积比)乙腈浸泡20-40min，加0.2-1倍药材量的氯化钠和加0.1-0.5倍药材量的无水硫酸镁，涡旋振摇1-5min，以8000-12000r/min的速度离心5-10min。取上清液置离心管中，加PSA，C₁₈和无水硫酸镁重量比为1:1:1涡旋振摇1-4min以5000-10000r/min的速度离心5-10min，取上清液于35-45℃下水浴旋转蒸发至近干，用丙酮溶解，得样品溶液，4℃冰箱储存待用。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，其中，步骤(1)的方法如下：取药材粉末1份，精密称定，置50mL聚丙烯塑料离心管中，加1:5乙腈浸泡30min，加氯化钠1份和无水硫酸镁0.5份，涡旋振摇2min，以10000r/min的速度离心10min。取上清液7mL置10mL EP管中，加PSA，C₁₈和无水硫酸镁各0.2份，涡旋振摇2min，以5000r/min的速度离心10min，取上清5mL于50mL鸡心瓶中，于40℃下水浴旋转蒸发至近干，用2mL丙酮溶解，得样品溶液，4℃冰箱储存待用。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，其中，步骤(2)的方法如下：以丙酮为溶剂配制成质量浓度为100mg/L的各农药标准储备液，再精密量取一定体积的各农药标准储备液，以丙酮稀释，得到质量浓度为2mg/L的23种有机氯农药混合标准溶液，于-18℃下冰箱内保存。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，其中，步骤(4)的方法如下：精密量取适量氘代毒死蜱-D10(内标)溶液及混合标准溶液置2mL量瓶中，加空白三七基质溶液稀释至刻度，得到质量浓度分别为0.001,0.002,0.005,0.010,0.025,0.050,0.075,0.100mg/L的基质匹配标准工作溶液，其中内标溶液质量浓度为0.050mg/L。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤如下：

步骤(1)

取药材粉末1份，精密称定，置50mL聚丙烯塑料离心管中，加1:5乙腈浸泡30min，加氯化钠1份和无水硫酸镁0.5份，涡旋振摇2min，以10000r/min的速度离心10min。取上清液7mL置10mL EP管中，加PSA，C₁₈和无水硫酸镁各0.2份，涡旋振摇2min，以5000r/min的速度离心10min，取上清5mL于50mL鸡心瓶中，于40℃下水浴旋转蒸发至近干，用2mL丙酮溶解，得样品溶液，4℃冰箱储存待用。

步骤(2)

取氘代毒死蜱、α-六六六、六氯苯、五氯苯甲醚、β-六六六、δ-六六六、五氯硝基苯、γ-六六六、五氯苯胺、环氧七氯B、氧化氯丹、环氧七氯A、α-硫丹、p,p’-滴滴伊、o,p’-滴滴滴、除草醚、异狄氏剂、β-硫丹、p,p’-滴滴滴、o,p’-滴滴涕、硫丹硫酸酯、p,p’-滴滴涕、甲氧滴滴涕、灭蚁灵，以丙酮为溶剂配制成质量浓度为100mg/L的各农药标准储备液，再精密量取一定体积的各农药标准储备液，以丙酮稀释，得到质量浓度为2mg/L的23种有机氯农药混合标准溶液，于-18℃下冰箱内保存。

步骤(3)

取无农药残留的三七药材按照步骤(1)方法制备得无农药残留的三七基质溶液；

步骤(4)

精密量取适量氘代毒死蜱-D10(内标)溶液及混合标准溶液置2mL量瓶中，加空白三七基质溶液稀释至刻度，得到质量浓度分别为0.001,0.002,0.005,0.010,0.025,0.050,0.075,0.100mg/L的基质匹配标准工作溶液，其中内标溶液质量浓度为0.050mg/L。

步骤(5)

将上述供试品溶液、基质匹配标准溶液进样到气相色谱-串联质谱仪，得到色谱图，根据色谱图计算有机氯类农药残留量；

其中色谱条件如下：

气相色谱条件：气相色谱柱：30m×0.25mm×0.25μm；载气：氦气，流速：1mL/min,；进样口温度：230℃，进样量：1.0μL不分流进样，升温程序：初始温度100℃，以10℃/min的速度升温至220℃，以8℃/min的速度升温至250℃，保持10min，总运行时间为25.75min；

质谱条件：电子轰击离子源，电压为70eV；离子源温度230℃，接口温度250℃，溶剂延迟时间2.8min，碰撞气：氩气；多反应离子监测。