CN108070577A - 一种抗血清干扰Taq DNA聚合酶及其制备和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种从热泉宏基因组中分析得到的抗血清干扰Taq DNA聚合酶，并涉及这种抗血清干扰的Taq DNA聚合酶及其制备方法和应用。本发明的抗血清干扰的Taq DNA聚合酶，其蛋白质氨基酸序列如SEQ ID No：1所示；编码这种抗血清干扰的Taq DNA聚合酶的基因，其核苷酸序列如SEQ ID No：2所示。该酶的蛋白质氨基酸序列与野生Taq DNA聚合酶的氨基酸序列相比，有13个氨基酸的突变。将该序列构建克隆并进行聚合酶的表达和纯化，该酶具有比商业化的Taq DNA聚合酶和野生型的Taq DNA聚合酶更高的聚合酶活性，将该酶用于血清中模拟样本检测，荧光定量PCR结果表明该酶比野生型Taq DNA聚合酶及商品化的聚合酶有更好的耐受性。因此该酶可用于免核酸提取的血清样本进行直接PCR检测。

Description

一种抗血清干扰Taq DNA聚合酶及其制备和应用

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及一种从热泉宏基因组中分析得到的抗血清干扰Taq DNA聚合酶，并涉及这种抗血清干扰的Taq DNA聚合酶的制备方法和应用。

背景技术

Taq DNA聚合酶1976年科学家A.Chien从水生嗜热菌Thermus aquaticus中分离出来的一种耐热的DNA聚合酶(Chien A,Edgar DB,Trela JM.Deoxyribonucleic acidpolymerase from the extreme thermophile Thermus aquaticus.[J].Bacteriol,1976,127(3):1550-1557.)。1983年kary Mullis发明了PCR(polymerase chain reaction)，1988年Randall K.Saiki等首次将Taq DNA聚合酶应用于PCR技术，使得PCR过程实现了自动连续循环。Taq DNA聚合酶是一种耐热的DNA聚合酶，属于DNA聚合酶I家族，酶基因全长2496个碱基，编码832个氨基酸，分子量为94kD。在70℃～75℃时具有最高的生物学活性，在92.5℃酶活性可持续130min，95℃持续40min，97.5℃持续5-6min可保持约50％的酶活性。

Taq DNA聚合酶由于其能在高温下保持活性，广泛用于PCR技术。但随着PCR技术的日益推广与应用，研究人员对Taq DNA聚合酶的性能要求不断提高，使得科研人员不断地寻找新的耐热DNA聚合酶，来弥补野生型Taq DNA聚合酶的部分缺陷，如聚合酶活性不够高，抗干扰能力低等。

发明内容

针对目前现有技术中存在的技术问题，本发明提供一种抗血清干扰Taq DNA聚合酶及其制备和应用。本发明的抗血清干扰Taq DNA聚合酶酶活性高、抗干扰能力强，可用于血清中DNA样本的直接PCR检测。利用本发明建立的制备方法可以得到高纯度Taq DNA聚合酶。

为了实现上述目的，本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明的一个目的是提供一种抗血清干扰的Taq DNA聚合酶，其蛋白质氨基酸序列如SEQ ID No：1所示。

本发明的另一个目的是提供一种编码所述抗血清干扰的Taq DNA聚合酶的基因，其核苷酸序列如SEQ ID No：2所示。

本发明的第三个目的是提供一种制备上述抗血清干扰的Taq DNA聚合酶有方法，具体步骤如下：

(1)克隆SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列；

(2)将步骤(1)所得的核苷酸片段连接到基因表达载体中，构建重组质粒；

(3)将重组质粒转化到宿主细胞中，得到重组细胞；

(4)对步骤(3)中重组细胞进行诱导表达，收集菌体；

(5)裂解步骤(4)中菌体，过滤，收集裂解粗产物；

(6)利用镍柱亲和纯化所述裂解粗产物，得到所述的抗血清干扰的Taq DNA聚合酶。

进一步地，所述步骤(2)中基因表达载体为pET-28a。

进一步地，所述步骤(3)中宿主细胞为原核细胞。

更进一步地，所述步骤(3)中宿主细胞为大肠杆菌感受态细胞E.coli BL21。

更进一步地，步骤(4)中诱导表达方法为：将步骤(3)中重组细胞于5mL LB液体培养基中37℃、180rpm培养8-10h后，转接到500mL LB液体培养基中，37℃、180rpm培养，待OD600至0.4-0.6时，加入IPTG至终浓度为0.5mM，37℃180rpm诱导4h。

进一步地，步骤(5)中是采用溶菌酶裂解菌体，所述溶菌酶的浓度为4mg/ml。

本发明还提供了一种酶制剂，这种酶制剂上述的抗血清干扰的Taq DNA聚合酶。

最后，本发明提供了上述抗血清干扰的Taq DNA聚合酶的应用，所述Taq DNA聚合酶应用于血清中的目的基因检测。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

(1)本发明的抗血清干扰Taq DNA聚合酶是从热泉宏基因组分析得到的，该聚合酶具有良好的热稳定性，酶活性高、抗干扰能力强，可用于免核酸提取的血清样本进行直接PCR检测。

(2)本发明提供的抗血清干扰Taq DNA聚合酶的制备方法，通过重组菌株诱导表达制备出热稳定性好、高活力、抗干扰能力强的Taq DNA聚合酶，且酶表达和纯化效率高，可广泛应用于血清中的目的基因检测。

附图说明

图1为实施例3中野生型Taq DNA聚合酶的SDS-PAGE蛋白电泳图；

图2为实施例3中本发明提供的抗血清干扰Taq DNA聚合酶的SDS-PAGE蛋白电泳图；

图3为实施例5中抗血清干扰Taq DNA聚合酶不同稀释倍数时Taq DNA聚合酶的活性分析；

图中：抗血清干扰Taq DNA聚合酶原浓度633μg/mL，商业化的Taq DNA聚合酶的浓度为230μg/mL，聚合酶原倍对应2、3、4；聚合酶稀释2倍对应5、6、7；聚合酶稀释4倍对应8、9、10；聚合酶稀释8倍对应11、12、13；1为mark；14为商业化的Taq DNA聚合酶。

图4为实施例5中分别用抗血清干扰Taq DNA聚合酶和市售的酶来扩增难扩增的片段时，PCR扩增结果；

图5为实施例5中野生型的Taq DNA聚合酶二倍稀释的qPCR结果；

图6为实施例5中宏基因组分析得到的Taq DNA聚合酶二倍稀释的qPCR结果；

图7为实施例5中市售的qPCR预混物对血清中模拟样本检测的测试结果；

图8为实施例5中野生型Taq DNA聚合酶对血清中模拟样本检测的测试结果；

图9为实施例5中宏基因组分析得到的Taq DNA聚合酶对血清中模拟样本检测的测试结果；

具体实施方式

展示一下实例来具体说明本发明的某些实施例，且不应解释为限制本发明的范围。对本发明公开的内容可以同时从材料、方法和反应条件进行改进，所有这些改进，均应落入本发明的的精神和范围之内。非特殊说明，本发明实施例采用的试剂均为市售商品，本发明实施例采用的数据库均为公开的在线数据库。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人编著的《分子克隆：实验室手册》(NewYork:ColdSpring Harbor Laboratory Press,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。

由于野生型Taq DNA有着活性和抗干扰能力较低的缺陷，在许多应用领域受到限制。因此，本发明提供一种从热泉宏基因组分析得到的Taq DNA聚合酶，通过对宏基因组中的Taq DNA聚合酶基因进行扩增，得到一个与野生型相比有13个氨基酸位点突变的Taq DNA聚合酶，该聚合酶具有良好的热稳定性，其活性和抗干扰能力均有明显的提高。

本发明的抗血清干扰的Taq DNA聚合酶是从热泉宏基因组中得到的，这种宏基因组分析得到的Taq DNA聚合酶，其蛋白质氨基酸序列如SEQ ID No：1所示，编码这种Taq DNA聚合酶的基因的核苷酸序列如SEQ ID No：2所示，与野生型Taq DNA聚合酶相比(野生型TaqDNA聚合酶编码序列如SEQ ID No.3所示，野生型Taq DNA聚合酶的氨基酸序列如SEQ IDNo.4所示)，宏基因组分析得来的Taq DNA聚合酶序列与野生型Taq DNA聚合酶序列的区别在于(前面的字母表示野生型Taq DNA聚合酶，后面的字母表示上述的Taq DNA聚合酶)2位E->R，61位S->A，79位E->G，109位V->R，121位G->V，155位V->A，216位R->A，329位E->G，556位K->R，630位L->R，734位Q->E，775位A->M，777位G->A。

由于蛋白编码序列的多态性及变异，天然存在的蛋白质会出现基因突变，编码序列中碱基被缺失、替代或增加，或氨基酸的缺失、插入、取代或其它变异，从而导致蛋白质的氨基酸序列出现一个或多个氨基酸被缺失、替代或增加。因此，存在着一些生理和生物活性上基本等同于无变异蛋白质的蛋白。这些结构不同于相应的蛋白质、但与该蛋白质没有明显的功能差异的多肽或蛋白称为功能等同变异体。功能等同的变异体同样适用于通过缺失、插入和突变等人工手段改变一个或多个密码子，从而向一种蛋白质的氨基酸序列中导入这类变异而制成的多肽。尽管这样能获得更多不同形式的变异体，但所得的变异体作为功能等同变异体的前提是其生理活性基本等同于原始无变异蛋白质的活性。

一般的，功能等同变异体的编码序列是同源的，因此，由至少一种改变(如蛋白质的编码序列中一个或多个碱基的缺失、插入或取代或者蛋白质的氨基酸序列中有一个或多个氨基酸缺失、插入或取代)所得的多肽或蛋白一般具有功能上等同于所述蛋白质的活性，因此，由上述核苷酸序列编码得到的多肽或上述氨基酸序列组成的多肽，如果编码得到的蛋白与突变型Taq DNA聚合酶没有明显的功能差异，也包括在本发明的范围内。

实施例1：抗血清干扰的Taq DNA聚合酶基因表达载体的制备

一般的，基因表达序列可根据需要表达的突变型Taq DNA聚合酶，从基因库(GeneBank)中选取相应的基因序列，并根据需要设计突变引物，突变其中的某个或某段碱基序列。

本实施例中，基因表达序列采用如下操作制得：

1.获得SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列，克隆该序列

采样地点：云南省腾冲市热海(海拔1390m)

泥土混合样：怀胎井(88℃)，珍珠泉(98℃)，鼓鸣泉(85℃)，蛤蟆嘴4号山坡土(79.9℃)，混匀后取10g备用。

水样：蛤蟆嘴1号(65.2℃)，蛤蟆嘴3号(88℃)，蛤蟆嘴4号山坡流水(79.9℃)，怀胎井左(91.7℃)，怀胎井右(78.7℃)，珍珠泉(91.7℃)，眼镜泉右(84.4℃)，眼镜泉左(91.3)，取20L热泉水过滤后的滤膜备用。

以从云南省腾冲市采集的水样和土样提取的宏基因组DNA为模板，设计包括酶切位点的引物进行PCR扩增，得到基于宏基因组序列的Taq DNA聚合酶基因表达序列。具体实验方法如下：

将10g混匀的泥土混合物和热泉水过滤后的滤膜进行宏基因组DNA提取及测序。将测序结果中的基因预测的CDS序列构建数据库(makeblastdb)，然后taq酶序列与构建的库进行blastn比对，E-value设为1e-5。找到一条与野生型Taq DNA聚合酶的核苷酸有98％相似性的基因，该基因与野生型Taq DNA聚合酶的氨基酸序列有13个氨基酸的不同，经分析，这些氨基酸处在DNA聚合酶结构的关键位点，由于是热泉样本(温度90度以上)，推测其有更好的热稳定性。

以宏基因组为模板准备PCR反应体系，采用的Takara的Pyrobest DNA聚合酶，PCR反应体系为50μL，包括10×Pyrobest buffer II 5μL，dNTP mixture(各2.5mM)4μL，10μM引物各1μL，Pyrobest DNA聚合酶(5U/μL)0.25μL，宏基因组模板1μL，加灭菌蒸馏水至50μL。

由于宏基因组序列复杂多样，引物设计时应尽量多地匹配互补碱基，使退火温度尽量高，且不形成太过稳定的引物二聚体及错配片段以及不形成引物发卡结构等。再在引物的5’端加上核酸内切酶位点(NdeI和SalI)及保护碱基。具体的引物如下：

正向引物：5’-ACTCATATGATGGAGGGGATGCTGCCCCTCTTTGA-3’

反向引物：5’-ATTGTCGACTCACTCCTTGGCGGAGAGCCAGTCC-3’

PCR扩增的条件为95℃变性30s，循环周期为95℃，30s，70℃，30s，72℃，2min，35个循环。PCR反应结束后降温至16℃。之后将上述Taq DNA聚合酶基因表达序列转化到pET-28a载体中，得到的载体经基因测序后，得到的Taq DNA聚合酶核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，并得到了含有目的Taq DNA聚合酶基因的表达载体，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

实施例2：抗血清干扰的Taq DNA聚合酶的表达和纯化

基因表达载体转化操作参见试剂盒生产厂家推荐的方法实现，宿主细胞为感受态细胞，例如大肠杆菌感受态细胞，将构建好的基因表达载体加入感受态细胞，热激处理，使感受态细胞的细胞膜结构扰动，细胞膜上出现空隙以便基因表达载体进入细胞，之后恒温培养，使宿主细胞复苏。本实施例中抗血清干扰的Taq DNA聚合酶的表达和纯化的具体方法如下：

将宏基因组分析得到的Taq DNA聚合酶基因表达载体(pET28a-Taq DNA)转化到大肠杆菌感受态细胞BL21中。抗性筛选挑取单克隆于5mL LB液体培养基中37℃180rpm培养8-10h后，转接到500mL LB液体培养基中，37℃180rpm培养2h左右，待OD600至0.4-0.6，加入IPTG至终浓度为0.5mM，37℃180rpm诱导4h。500mL菌液于250mL离心管中8000rpm离心5min收集菌体，每100mL培养物加入10mL Binding buffer，加入溶菌酶至终浓度为4mg/mL，室温裂解15min，8000rpm离心10min，取上清，75℃水浴1h，10000rpm离心20min，得上清粗酶液。采用镍柱材料填充层析柱，将镍柱材料混匀后，取2-3mL至层析柱中，20mL双蒸水洗涤柱子，接着用Binding buffer(20mM Tris-HCl pH8.0、20mM咪唑、500mM NaCl)平衡柱子，将粗酶液加入到镍柱中。20mL Bindingbuffer洗柱子，之后用继续用washing buffer(20mM Tris-HCl pH8.0、40mM咪唑、500mM NaCl)洗掉杂蛋白。最后加入Elutionbuffer(20mM Tris-HClpH8.0、250mM咪唑、500mM NaCl)将目的蛋白洗出，收集流出液。以考马斯亮蓝G-250监测蛋白浓度变化，从而确定洗脱时间。将流出液置于酶保存buffer中透析(20mM Tris-HCl 8.0、100mM KCl、0.1mM EDTA、1mM DTT、50％甘油)，每6h换一次液，换液3次，收集终产品，得到纯化的宏基因组分析得到的Taq DNA聚合酶。

实施例3：SDS-PAGE蛋白电泳验证抗血清干扰的Taq DNA聚合酶的蛋白大小和纯度

将上述得到的Taq DNA聚合酶进行SDS-PAGE蛋白电泳检测，鉴定突变型Taq DNA聚合酶蛋白的大小和纯度。

SDS-PAGE浓缩胶使用浓度为5％，分离胶使用浓度为8％。取40μL透析后的蛋白样品与10μL 5×蛋白加样缓冲液混匀后煮沸10min进行制样。样品制备好后取10μL，同蛋白Marker(ProteinRuler II(12-120kDa),Thermo Scientific Fermentas)一起上样，以50V恒定电压电泳30min，当蛋白样品电泳至浓缩胶与分离胶间隔处，更换电压为150V恒定电泳至分离胶底部。电泳完成后，小心拨出凝胶并使用考马斯亮蓝染色液于摇床上染色20min，将染色后的凝胶置于脱色液中进行脱色，间隔更换脱色液至可见蛋白样品与蛋白分子量标记(Marker)，使用凝胶成像系统观察凝胶并进行分析。结果如图2所示，图2中右边泳道为蛋白Marker，分子量分别是12、20、30、40、50、60、80、100、120kDa，图2中左边泳道为表达纯化的Taq DNA聚合酶，从图2的条带位置(与图1中右侧野生型Taq DNA聚合酶的条带比较，位置大小相近)，结合测序结果初步判断，宏基因组分析得到的序列表达纯化的Taq DNA聚合酶大小正确(约为94kDa)，从图2中SDS-PAGE的条带中的杂带很少很弱可以看出，纯化的TaqDNA纯度较高。

实施例4：应用本发明的抗血清干扰的Taq DNA聚合酶的酶反应缓冲液的研制

测试了各种对Taq DNA聚合酶的酶活性的可能影响因素，包括盐浓度、缓冲溶液组成、Mg²⁺浓度、表面活性剂等，得到了应用于本发明的Taq DNA聚合酶的酶反应缓冲液，10×反应buffer为：200mMTris-HCl pH8.3，500mM KCl，20mMMgCl₂，100mM硫酸铵，0.5％NP40，1％TritonX-100。分别使用本实施例提供的反应缓冲液和商业化的缓冲液来扩增upE基因序列(核苷酸序列如SEQ ID No.5所示)，以荧光定量PCR方法比较了该反应缓冲液与商业化的缓冲液对Ct值的影响。

正向引物序列为：CGAATTCCTACATTCCACTGTTT，

反向引物序列为：GGATCCCGTTAAACCCACTCGTCAG，

扩增反应体系为：PCR体系：50μL

PCR条件：

荧光定量PCR方法结果见表1，从表1可以看出，本实施例的缓冲液与商业化的缓冲液相比，ΔCt值很小，说明本实施例的的酶反应缓冲液能与上述宏基因组分析得到的TaqDNA聚合酶配合使用，配制成PCR反应体系，用于样本的PCR检测。

表1本发明的Taq DNA聚合酶和野生Taq DNA聚合酶对Ct值的影响

Ct值	商业反应液	本发明中的反应液	ΔCt
				野生型TaqDNA聚合酶	26.88±0.06	26.82±0.06	0.06
本发明的TaqDNA聚合酶	27.17±0.12	27.37±0.06	0.20

实施例5抗血清干扰的Taq DNA聚合酶与野生型Taq DNA聚合酶的性能比较

1.酶活性比较

将本发明的抗血清干扰的Taq DNA聚合酶用普通PCR的方法进行倍比稀释(稀释倍数表2所示)，本发明制备的Taq DNA聚合酶原浓度为633μg/mL的Taq DNA聚合酶，通过原倍、2倍、4倍、8倍稀释(原倍对应图3中的泳道2，3，4；2倍对应图3中的泳道5，6，7；4倍对应图3中的泳道8，9，10；8倍对应图3中的泳道11，12，13)，发现稀释8倍后(浓度约为80μg/mL)与商业化的Taq DNA聚合酶(浓度为230μg/mL)条带的亮度相当(使用实施例4中的条件扩增实施例4中的upE基因序列)。进一步的，对于一难扩增的目的基因软腐菌pel基因(其核苷酸序列如SEQ ID No.6所示)，用上述纯化的Taq DNA聚合酶进行扩增，并与商业化的Taq DNA聚合酶进行了平行试验。

正向引物：5′-TTACCGGACGCCGAGCTGTGGCGT-3′

反向引物：5′-CAGGAAGATGCGTTATCGCGAGT-3′

PCR体系：50μL

PCR条件：

如图4所示，1为Meta-Taq扩增出来的条带，2为市售的酶扩增的结果显示无条带，难扩增的pel基因用商业化的Taq DNA聚合酶都没有扩增出条带，而利用本发明的纯化的Taq DNA聚合酶扩增得到了一个基因。

此外用荧光定量PCR比较了抗血清干扰的Taq DNA聚合酶和野生型Taq DNA聚合酶的酶活性。将上述Taq DNA聚合酶与野生型Taq DNA聚合酶在同一实验条件下进行检测，具体的，将两种酶各自在相同模板浓度条件下进行检测，结果如图5和图6所示，图中每条曲线代表一个PCR反应，图中的横坐标表示PCR的循环次数，纵坐标表示荧光值。图5为野生型TaqDNA聚合酶的倍比稀释结果，野生型的Taq DNA聚合酶在稀释到8倍时，已经没有活性了，图6为宏基因组分析得到的Taq DNA聚合酶的活性检测结果，该酶在稀释到16倍，仍有活性，相应的Ct值结果列于表2。由此可得，本发明得到的Taq DNA聚合酶的活性比野生型Taq DNA聚合酶的活性有明显的提高。

表2本发明的TaqDNA聚合酶和野生型TaqDNA聚合酶酶活性的比较

2.酶抗干扰能力的比较

以扩增金葡菌的mecA基因片段为例(其核苷酸序列如SEQ ID No.7所示)，选择4μL兔血清样品加入至体系作为干扰。

正向引物：5'-GCTCAAATTTCAAACAAAAATTTAGATAATG-3'

反向引物：5'-TGAAAGGATCTGTACTGGGTTAATCAGT-3'

探针：5'-FAM-AGCTGATTCAGGTTACGGACAAGGTGA-BHQ1-3'

商业化的荧光定量PCR：20μL体系，10μL mix试剂；引物和探针各0.4μL(20μM)，水6.8μL；模板2μL

Taq DNA聚合酶的荧光定量PCR体系：20μL

PCR条件

分别比较了三种体系：一是商业化的qPCR的预混物，二是野生型的Taq DNA聚合酶，三是抗血清干扰的Taq DNA聚合酶。比较了水样与添加血清的Ct值变化，三种体系得到的荧光定量PCR结果分别如图7、8、9所示。三种体系的ΔCt值如表3所示。从图7、8、9可以看出，本发明的抗血清干扰的Taq DNA聚合酶在添加血清后，Ct值的变化ΔCt最小，其它受血清干扰都很大。由此可以看出，本发明的Taq DNA聚合酶具有很高的抗血清干扰能力。

表3本发明的Taq DNA聚合酶、含聚合酶商品预混物、含聚合酶商品预混物抗干扰能力的比较

Ct值	无血清	有血清	ΔCt
				含聚合酶商品预混物	27.19±0.11	28.39±0.02	1.2
含聚合酶商品预混物	26.88±0.06	29.03±0.24	2.2
				本发明的TaqDNA聚合酶	27.17±0.12	27.39±0.10	0.22

在其他的生物样品(如血浆、体液、分泌物或排泄物等，如棉拭子、粪便等样本须进行预处理后使用)中，不进行核酸提取操作，直接加入含本发明所述的Taq DNA聚合酶的体系，也能实现PCR扩增，并具有良好的重复性和检测灵敏度。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

序列表

<110> 中国科学院武汉病毒研究所

<120> 一种抗血清干扰Taq DNA聚合酶及其制备和应用

<160> 7

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 832

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

Met Glu Gly Met Leu Pro Leu Phe Glu Pro Lys Gly Arg Val Leu Leu

1 5 10 15

Val Asp Gly His His Leu Ala Tyr Arg Thr Phe His Ala Leu Lys Gly

20 25 30

Leu Thr Thr Ser Arg Gly Glu Pro Val Gln Ala Val Tyr Gly Phe Ala

35 40 45

Lys Ser Leu Leu Lys Ala Leu Lys Glu Asp Gly Asp Ser Val Ile Val

50 55 60

Val Phe Asp Ala Lys Ala Pro Ser Phe Arg His Glu Ala Tyr Glu Gly

65 70 75 80

Tyr Lys Ala Gly Arg Ala Pro Thr Pro Glu Asp Phe Pro Arg Gln Leu

85 90 95

Ala Leu Ile Lys Glu Leu Val Asp Leu Leu Gly Leu Val Arg Leu Glu

100 105 110

Val Pro Gly Tyr Glu Ala Asp Asp Gly Leu Ala Ser Leu Ala Lys Lys

115 120 125

Ala Glu Lys Glu Gly Tyr Glu Val Arg Ile Leu Thr Ala Asp Lys Asp

130 135 140

Leu Tyr Gln Leu Leu Ser Asp Arg Ile His Val Leu His Pro Glu Gly

145 150 155 160

Tyr Leu Ile Thr Pro Ala Trp Leu Trp Glu Lys Tyr Gly Leu Arg Pro

165 170 175

Asp Gln Trp Ala Asp Tyr Arg Ala Leu Thr Gly Asp Glu Ser Asp Asn

180 185 190

Leu Pro Gly Val Lys Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Arg Lys Leu Leu

195 200 205

Glu Glu Trp Gly Ser Leu Glu Arg Leu Leu Lys Asn Leu Asp Arg Leu

210 215 220

Lys Pro Ala Ile Arg Glu Lys Ile Leu Ala His Met Asp Asp Leu Lys

225 230 235 240

Leu Ser Trp Asp Leu Ala Lys Val Arg Thr Asp Leu Pro Leu Glu Val

245 250 255

Asp Phe Ala Lys Arg Arg Glu Pro Asp Arg Glu Arg Leu Arg Ala Phe

260 265 270

Leu Glu Arg Leu Glu Phe Gly Ser Leu Leu His Glu Phe Gly Leu Leu

275 280 285

Glu Ser Pro Lys Ala Leu Glu Glu Ala Pro Trp Pro Pro Pro Glu Gly

290 295 300

Ala Phe Val Gly Phe Val Leu Ser Arg Lys Glu Pro Met Trp Ala Asp

305 310 315 320

Leu Leu Ala Leu Ala Ala Ala Arg Glu Gly Arg Val His Arg Ala Pro

325 330 335

Glu Pro Tyr Lys Ala Leu Arg Asp Leu Lys Glu Ala Arg Gly Leu Leu

340 345 350

Ala Lys Asp Leu Ser Val Leu Ala Leu Arg Glu Gly Leu Gly Leu Pro

355 360 365

Pro Gly Asp Asp Pro Met Leu Leu Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ser Asn

370 375 380

Thr Thr Pro Glu Gly Val Ala Arg Arg Tyr Gly Gly Glu Trp Thr Glu

385 390 395 400

Glu Ala Gly Glu Arg Ala Ala Leu Ser Glu Arg Leu Phe Ala Asn Leu

405 410 415

Trp Gly Arg Leu Glu Gly Glu Glu Arg Leu Leu Trp Leu Tyr Arg Glu

420 425 430

Val Glu Arg Pro Leu Ser Ala Val Leu Ala His Met Glu Ala Thr Gly

435 440 445

Val Arg Leu Asp Val Ala Tyr Leu Arg Ala Leu Ser Leu Glu Val Ala

450 455 460

Glu Glu Ile Ala Arg Leu Glu Ala Glu Val Phe Arg Leu Ala Gly His

465 470 475 480

Pro Phe Asn Leu Asn Ser Arg Asp Gln Leu Glu Arg Val Leu Phe Asp

485 490 495

Glu Leu Gly Leu Pro Ala Ile Gly Lys Thr Glu Lys Thr Gly Lys Arg

500 505 510

Ser Thr Ser Ala Ala Val Leu Glu Ala Leu Arg Glu Ala His Pro Ile

515 520 525

Val Glu Lys Ile Leu Gln Tyr Arg Glu Leu Thr Lys Leu Lys Ser Thr

530 535 540

Tyr Ile Asp Pro Leu Pro Asp Leu Ile His Pro Lys Thr Gly Arg Leu

545 550 555 560

His Thr Arg Phe Asn Gln Thr Ala Thr Ala Thr Gly Arg Leu Ser Ser

565 570 575

Ser Asp Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Val Arg Thr Pro Leu Gly Gln

580 585 590

Arg Ile Arg Arg Ala Phe Ile Ala Glu Glu Gly Trp Leu Leu Val Ala

595 600 605

Leu Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Leu Ser Gly

610 615 620

Asp Glu Asn Leu Ile Leu Val Phe Gln Glu Gly Arg Asp Ile His Thr

625 630 635 640

Glu Thr Ala Ser Trp Met Phe Gly Val Pro Arg Glu Ala Val Asp Pro

645 650 655

Leu Met Arg Arg Ala Ala Lys Thr Ile Asn Phe Gly Val Leu Tyr Gly

660 665 670

Met Ser Ala His Arg Leu Ser Gln Glu Leu Ala Ile Pro Tyr Glu Glu

675 680 685

Ala Gln Ala Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe Pro Lys Val Arg

690 695 700

Ala Trp Ile Glu Lys Thr Leu Glu Glu Gly Arg Arg Arg Gly Tyr Val

705 710 715 720

Glu Thr Leu Phe Gly Arg Arg Arg Tyr Val Pro Asp Leu Gln Ala Arg

725 730 735

Val Lys Ser Val Arg Glu Ala Ala Glu Arg Met Ala Phe Asn Met Pro

740 745 750

Val Gln Gly Thr Ala Ala Asp Leu Met Lys Leu Ala Met Val Lys Leu

755 760 765

Phe Pro Arg Leu Glu Glu Ala Gly Gly Arg Met Leu Leu Gln Val His

770 775 780

Asp Glu Leu Val Leu Glu Ala Pro Lys Glu Arg Ala Glu Ala Val Ala

785 790 795 800

Arg Leu Ala Lys Glu Val Met Glu Gly Val Tyr Pro Leu Ala Val Pro

805 810 815

Leu Glu Val Glu Val Gly Ile Gly Glu Asp Trp Leu Ser Ala Lys Glu

820 825 830

<210> 2

<211> 2499

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

atggagggga tgctgcccct ctttgagccc aagggccggg tcctcctggt ggacggccac 60

cacctggcct accgcacctt ccacgccctg aagggcctca ccaccagccg gggggagccg 120

gtgcaggcgg tctacggctt cgccaagagc ctcctcaagg ccctcaagga ggacggggac 180

tcggtgatcg tggtctttga cgccaaggcc ccctccttcc gccacgaggc ctacgagggg 240

tacaaggcgg gccgggcccc cacgccggag gacttccccc ggcaactcgc cctcatcaag 300

gagctggtgg acctcctggg gctggtgcgc ctcgaggtcc cgggctacga ggcggacgac 360

ggcctggcca gcctggccaa gaaggcggaa aaggagggct acgaggtccg catcctcacc 420

gccgacaaag acctttacca gctcctttcc gaccgcatcc atgtcctcca ccccgagggg 480

tacctcatca ccccggcctg gctctgggaa aagtacggcc tgaggcccga ccagtgggcc 540

gactaccggg ccctgaccgg ggacgagtcc gacaaccttc ccggggtcaa gggcatcggg 600

gagaagacgg cgagaaagct tctggaggag tgggggagcc tggaaaggct cctcaagaac 660

ctggaccggc tgaagcccgc catccgggag aagatcctgg cccacatgga cgatctgaag 720

ctctcctggg acctagccaa ggtgcgcacc gacctgcccc tggaggtgga cttcgccaaa 780

aggcgggagc ccgaccggga gaggcttagg gcctttctgg agaggcttga gtttggaagc 840

ctcctccacg agttcggcct tctggagagc cccaaggccc tggaggaggc cccctggccc 900

ccgccggaag gggccttcgt gggcttcgtg ctttcccgca aggagcccat gtgggccgat 960

cttctggccc tggccgccgc cagggagggc cgggtccacc gggcccccga gccttataaa 1020

gccctcaggg acctgaagga ggcgcggggg cttctcgcca aagacctgag cgttctggcc 1080

ctgagggaag gtcttggcct cccgcccggc gacgacccca tgctcctcgc ctacctcctg 1140

gacccttcca acaccacccc cgagggggtg gcccggcgct acggcgggga gtggacggag 1200

gaggcggggg agcgggccgc cctttccgag aggctcttcg ccaacctgtg ggggaggctt 1260

gagggggagg agaggctcct ttggctttac cgggaggtgg agaggcccct ttccgctgtc 1320

ctggcccaca tggaggccac gggggtgcgc ctggacgtgg cctacctcag ggccttgtcc 1380

ctggaggtgg ccgaggagat cgcccgcctc gaggccgagg tcttccgcct ggccggccac 1440

cccttcaacc tcaactcccg ggaccagctg gaaagggtcc tctttgacga gctagggctt 1500

cccgccatcg gcaagacgga gaagaccggc aagcgctcca ccagcgccgc cgtcctggag 1560

gccctccgcg aggcccaccc catcgtggag aagatcctgc agtaccggga gctcaccaag 1620

ttgaagagca cctacattga ccccctgccg gacctcatcc accccaaaac cgggcgcctc 1680

cacacccgct tcaaccagac ggccacggcc acgggcaggc taagtagctc cgatcccaac 1740

cttcagaaca tccccgtccg caccccgctt gggcagagga tccgccgggc cttcatcgcc 1800

gaggaggggt ggctattggt ggccctggac tatagccaga tagagctcag ggtgctggcc 1860

cacctctccg gcgacgagaa cctgattctg gtcttccagg aggggcggga catccacacg 1920

gagaccgcca gctggatgtt cggcgtcccc cgggaggccg tggaccccct gatgcgccgt 1980

gcggccaaga ccatcaactt cggggtcctc tacggcatgt cggcccaccg cctctcccag 2040

gagctagcca tcccttacga ggaggcccag gccttcattg agcgctactt ccagagcttc 2100

cccaaggtgc gggcctggat tgagaagacc ctggaggagg gcaggaggcg ggggtacgtg 2160

gagaccctct tcggccgccg ccgctacgtg ccagacctcc aggcccgggt gaagagcgtg 2220

cgggaggcgg ccgagcgcat ggccttcaac atgcccgtcc agggcaccgc cgccgacctc 2280

atgaagctgg ctatggtgaa gctcttcccc aggctggagg aggcgggggg ccggatgctc 2340

cttcaggtcc acgacgagct ggtcctcgag gccccaaaag agagggcgga ggccgtggcc 2400

cggctggcca aggaggtcat ggaaggggtg tatcccctgg ccgtgcccct ggaggtggag 2460

gtggggatag gggaggactg gctctccgcc aaggagtga 2499

<210> 3

<211> 2499

<212> DNA

<213> 水生嗜热菌(Thermus aquaticus)

<400> 3

atgaggggga tgctgcccct ctttgagccc aagggccggg tcctcctggt ggacggccac 60

cacctggcct accgcacctt ccacgccctg aagggcctca ccaccagccg gggggagccg 120

gtgcaggcgg tctacggctt cgccaagagc ctcctcaagg ccctcaagga ggacggggac 180

gcggtgatcg tggtctttga cgccaaggcc ccctccttcc gccacgaggc ctacgggggg 240

tacaaggcgg gccgggcccc cacgccggag gactttcccc ggcaactcgc cctcatcaag 300

gagctggtgg acctcctggg gctggcgcgc ctcgaggtcc cgggctacga ggcggacgac 360

gtcctggcca gcctggccaa gaaggcggaa aaggagggct acgaggtccg catcctcacc 420

gccgacaaag acctttacca gctcctttcc gaccgcatcc acgccctcca ccccgagggg 480

tacctcatca ccccggcctg gctttgggaa aagtacggcc tgaggcccga ccagtgggcc 540

gactaccggg ccctgaccgg ggacgagtcc gacaaccttc ccggggtcaa gggcatcggg 600

gagaagacgg cgaggaagct tctggaggag tgggggagcc tggaagccct cctcaagaac 660

ctggaccggc tgaagcccgc catccgggag aagatcctgg cccacatgga cgatctgaag 720

ctctcctggg acctggccaa ggtgcgcacc gacctgcccc tggaggtgga cttcgccaaa 780

aggcgggagc ccgaccggga gaggcttagg gcctttctgg agaggcttga gtttggcagc 840

ctcctccacg agttcggcct tctggaaagc cccaaggccc tggaggaggc cccctggccc 900

ccgccggaag gggccttcgt gggctttgtg ctttcccgca aggagcccat gtgggccgat 960

cttctggccc tggccgccgc cagggggggc cgggtccacc gggcccccga gccttataaa 1020

gccctcaggg acctgaagga ggcgcggggg cttctcgcca aagacctgag cgttctggcc 1080

ctgagggaag gccttggcct cccgcccggc gacgacccca tgctcctcgc ctacctcctg 1140

gacccttcca acaccacccc cgagggggtg gcccggcgct acggcgggga gtggacggag 1200

gaggcggggg agcgggccgc cctttccgag aggctcttcg ccaacctgtg ggggaggctt 1260

gagggggagg agaggctcct ttggctttac cgggaggtgg agaggcccct ttccgctgtc 1320

ctggcccaca tggaggccac gggggtgcgc ctggacgtgg cctatctcag ggccttgtcc 1380

ctggaggtgg ccgaggagat cgcccgcctc gaggccgagg tcttccgcct ggccggccac 1440

cccttcaacc tcaactcccg ggaccagctg gaaagggtcc tctttgacga gctagggctt 1500

cccgccatcg gcaagacgga gaagaccggc aagcgctcca ccagcgccgc cgtcctggag 1560

gccctccgcg aggcccaccc catcgtggag aagatcctgc agtaccggga gctcaccaag 1620

ctgaagagca cctacattga ccccttgccg gacctcatcc accccaggac gggccgcctc 1680

cacacccgct tcaaccagac ggccacggcc acgggcaggc taagtagctc cgatcccaac 1740

ctccagaaca tccccgtccg caccccgctt gggcagagga tccgccgggc cttcatcgcc 1800

gaggaggggt ggctattggt ggccctggac tatagccaga tagagctcag ggtgctggcc 1860

cacctctccg gcgacgagaa cctgatccgg gtcttccagg aggggcggga catccacacg 1920

gagaccgcca gctggatgtt cggcgtcccc cgggaggccg tggaccccct gatgcgccgg 1980

gcggccaaga ccatcaactt cggggtcctc tacggcatgt cggcccaccg cctctcccag 2040

gagctagcca tcccttacga ggaggcccag gccttcattg agcgctactt tcagagcttc 2100

cccaaggtgc gggcctggat tgagaagacc ctggaggagg gcaggaggcg ggggtacgtg 2160

gagaccctct tcggccgccg ccgctacgtg ccagacctag aggcccgggt gaagagcgtg 2220

cgggaggcgg ccgagcgcat ggccttcaac atgcccgtcc agggcaccgc cgccgacctc 2280

atgaagctgg ctatggtgaa gctcttcccc aggctggagg aaatgggggc caggatgctc 2340

cttcaggtcc acgacgagct ggtcctcgag gccccaaaag agagggcgga ggccgtggcc 2400

cggctggcca aggaggtcat ggagggggtg tatcccctgg ccgtgcccct ggaggtggag 2460

gtggggatag gggaggactg gctctccgcc aaggagtga 2499

<210> 4

<211> 832

<212> PRT

<213> 水生嗜热菌(Thermus aquaticus)

<400> 4

Met Arg Gly Met Leu Pro Leu Phe Glu Pro Lys Gly Arg Val Leu Leu

1 5 10 15

Val Asp Gly His His Leu Ala Tyr Arg Thr Phe His Ala Leu Lys Gly

20 25 30

Leu Thr Thr Ser Arg Gly Glu Pro Val Gln Ala Val Tyr Gly Phe Ala

35 40 45

Lys Ser Leu Leu Lys Ala Leu Lys Glu Asp Gly Asp Ala Val Ile Val

50 55 60

Val Phe Asp Ala Lys Ala Pro Ser Phe Arg His Glu Ala Tyr Gly Gly

65 70 75 80

Tyr Lys Ala Gly Arg Ala Pro Thr Pro Glu Asp Phe Pro Arg Gln Leu

85 90 95

Ala Leu Ile Lys Glu Leu Val Asp Leu Leu Gly Leu Ala Arg Leu Glu

100 105 110

Val Pro Gly Tyr Glu Ala Asp Asp Val Leu Ala Ser Leu Ala Lys Lys

115 120 125

Ala Glu Lys Glu Gly Tyr Glu Val Arg Ile Leu Thr Ala Asp Lys Asp

130 135 140

Leu Tyr Gln Leu Leu Ser Asp Arg Ile His Ala Leu His Pro Glu Gly

145 150 155 160

Tyr Leu Ile Thr Pro Ala Trp Leu Trp Glu Lys Tyr Gly Leu Arg Pro

165 170 175

Asp Gln Trp Ala Asp Tyr Arg Ala Leu Thr Gly Asp Glu Ser Asp Asn

180 185 190

Leu Pro Gly Val Lys Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Arg Lys Leu Leu

195 200 205

Glu Glu Trp Gly Ser Leu Glu Ala Leu Leu Lys Asn Leu Asp Arg Leu

210 215 220

Lys Pro Ala Ile Arg Glu Lys Ile Leu Ala His Met Asp Asp Leu Lys

225 230 235 240

Leu Ser Trp Asp Leu Ala Lys Val Arg Thr Asp Leu Pro Leu Glu Val

245 250 255

Asp Phe Ala Lys Arg Arg Glu Pro Asp Arg Glu Arg Leu Arg Ala Phe

260 265 270

Leu Glu Arg Leu Glu Phe Gly Ser Leu Leu His Glu Phe Gly Leu Leu

275 280 285

Glu Ser Pro Lys Ala Leu Glu Glu Ala Pro Trp Pro Pro Pro Glu Gly

290 295 300

Ala Phe Val Gly Phe Val Leu Ser Arg Lys Glu Pro Met Trp Ala Asp

305 310 315 320

Leu Leu Ala Leu Ala Ala Ala Arg Gly Gly Arg Val His Arg Ala Pro

325 330 335

Glu Pro Tyr Lys Ala Leu Arg Asp Leu Lys Glu Ala Arg Gly Leu Leu

340 345 350

Ala Lys Asp Leu Ser Val Leu Ala Leu Arg Glu Gly Leu Gly Leu Pro

355 360 365

Pro Gly Asp Asp Pro Met Leu Leu Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ser Asn

370 375 380

Thr Thr Pro Glu Gly Val Ala Arg Arg Tyr Gly Gly Glu Trp Thr Glu

385 390 395 400

Glu Ala Gly Glu Arg Ala Ala Leu Ser Glu Arg Leu Phe Ala Asn Leu

405 410 415

Trp Gly Arg Leu Glu Gly Glu Glu Arg Leu Leu Trp Leu Tyr Arg Glu

420 425 430

Val Glu Arg Pro Leu Ser Ala Val Leu Ala His Met Glu Ala Thr Gly

435 440 445

Val Arg Leu Asp Val Ala Tyr Leu Arg Ala Leu Ser Leu Glu Val Ala

450 455 460

Glu Glu Ile Ala Arg Leu Glu Ala Glu Val Phe Arg Leu Ala Gly His

465 470 475 480

Pro Phe Asn Leu Asn Ser Arg Asp Gln Leu Glu Arg Val Leu Phe Asp

485 490 495

Glu Leu Gly Leu Pro Ala Ile Gly Lys Thr Glu Lys Thr Gly Lys Arg

500 505 510

Ser Thr Ser Ala Ala Val Leu Glu Ala Leu Arg Glu Ala His Pro Ile

515 520 525

Val Glu Lys Ile Leu Gln Tyr Arg Glu Leu Thr Lys Leu Lys Ser Thr

530 535 540

Tyr Ile Asp Pro Leu Pro Asp Leu Ile His Pro Arg Thr Gly Arg Leu

545 550 555 560

His Thr Arg Phe Asn Gln Thr Ala Thr Ala Thr Gly Arg Leu Ser Ser

565 570 575

Ser Asp Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Val Arg Thr Pro Leu Gly Gln

580 585 590

Arg Ile Arg Arg Ala Phe Ile Ala Glu Glu Gly Trp Leu Leu Val Ala

595 600 605

Leu Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Leu Ser Gly

610 615 620

Asp Glu Asn Leu Ile Arg Val Phe Gln Glu Gly Arg Asp Ile His Thr

625 630 635 640

Glu Thr Ala Ser Trp Met Phe Gly Val Pro Arg Glu Ala Val Asp Pro

645 650 655

Leu Met Arg Arg Ala Ala Lys Thr Ile Asn Phe Gly Val Leu Tyr Gly

660 665 670

Met Ser Ala His Arg Leu Ser Gln Glu Leu Ala Ile Pro Tyr Glu Glu

675 680 685

Ala Gln Ala Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe Pro Lys Val Arg

690 695 700

Ala Trp Ile Glu Lys Thr Leu Glu Glu Gly Arg Arg Arg Gly Tyr Val

705 710 715 720

Glu Thr Leu Phe Gly Arg Arg Arg Tyr Val Pro Asp Leu Glu Ala Arg

725 730 735

Val Lys Ser Val Arg Glu Ala Ala Glu Arg Met Ala Phe Asn Met Pro

740 745 750

Val Gln Gly Thr Ala Ala Asp Leu Met Lys Leu Ala Met Val Lys Leu

755 760 765

Phe Pro Arg Leu Glu Glu Met Gly Ala Arg Met Leu Leu Gln Val His

770 775 780

Asp Glu Leu Val Leu Glu Ala Pro Lys Glu Arg Ala Glu Ala Val Ala

785 790 795 800

Arg Leu Ala Lys Glu Val Met Glu Gly Val Tyr Pro Leu Ala Val Pro

805 810 815

Leu Glu Val Glu Val Gly Ile Gly Glu Asp Trp Leu Ser Ala Lys Glu

820 825 830

<210> 5

<211> 650

<212> DNA

<213> 中东呼吸系统综合征冠状病毒(Unknown)

<400> 5

aattcctaca ttccactgtt tgacatgcgt tcccacttta ttcgtgttag tacagtttct 60

tctcatggta tggtccctgt aatacacacc aaaccattat ttattagaaa cttcgatcag 120

cgttgcagct gttctcgttg tttttatttg cactcttcca cttatataga gtgcacttat 180

attagccgtt ttagtaagat tagcctagtt tctgtaactg acttctcctt aaacggcaat 240

gtttccactg ttttcgtgcc tgcaacgcgc gattcagttc ctcttcacat aatcgccccg 300

agctcgctta tcgtttaagc agctctgcgc tactatgggt cccgtgtaga ggctaatcca 360

ttagtctctc tttggacata tggaaaacga actatgttac cctttgtcca agaacgaata 420

gggttgttca tagtaaactt tttcattttt accgtagtat gtgctataac actcttggtg 480

tgtatggctt tccttacggc tactagatta tgtgtgcaat gtatgacagg cttcaatacc 540

ctgttagttc agcccgcatt atacttgtat aatactggac gttcagtcta tgtaaaattc 600

caggatagta aaccccctct accacctgac gagtgggttt aacgggatcc 650

<210> 6

<211> 421

<212> DNA

<213> 软腐菌(Erwinia carotovora)

<400> 6

aggtggcact ttgggtagta ggctcgctcg ccgcaagggg ctgggtgagt taggttcagc 60

tccgggtaaa gacaccaaag tggatctcgc taccaagaac aacgatcctt acgccctgtt 120

cgcgctgctg gatctgtatc aggcgagcaa agtgaaagac tatctgtcgc tggcggaaaa 180

agtgggcgat aacattatca gcacgcgtta taagaacggt ttctttatgg ccgatcccaa 240

cagacaatat gctgatgtcg ataccatcga gccttatgcc ctgttagcgc tggaagcggc 300

ggtacgcaat cagccacagt ccgttgcgcc gttcctgaat ggtgcgggct tcactgaagg 360

cggctaccgt atggaagatg gctcaactcg cgtgtccact cgcgataacg acatcttcct 420

g 421

<210> 7

<211> 99

<212> DNA

<213> 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)

<400> 7

gctcaaattt caaacaaaaa tttagataat gaaatattat tagctgattc aggttacgga 60

caaggtgaaa tactgattaa cccagtacag atcctttca 99

Claims (10)

1.一种抗血清干扰的Taq DNA聚合酶，其特征在于，其蛋白质氨基酸序列如SEQ ID No：1所示。

2.一种编码权利要求1所述的抗血清干扰的Taq DNA聚合酶的基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID No：2所示。

3.一种制备权利要求1所述的抗血清干扰的Taq DNA聚合酶的方法，其特征在于，具体步骤如下：

(1)克隆SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列；

(2)将步骤(1)所得的核苷酸片段连接到基因表达载体中，构建重组质粒；

(3)将重组质粒转化到宿主细胞中，得到重组细胞；

(4)对步骤(3)中重组细胞进行诱导表达，收集菌体；

(5)裂解步骤(4)中菌体，过滤，收集裂解粗产物；

(6)利用镍柱亲和纯化所述裂解粗产物，得到所述的抗血清干扰的Taq DNA聚合酶。

4.根据权利要求3所述的一种制备抗血清干扰的Taq DNA聚合酶的方法，其特征在于，所述步骤(2)中基因表达载体为pET-28a。

5.根据权利要求3所述的一种制备抗血清干扰的Taq DNA聚合酶的方法，其特征在于，所述步骤(3)中宿主细胞为原核细胞。

6.根据权利要求5所述的一种制备抗血清干扰的Taq DNA聚合酶的方法，其特征在于，所述步骤(3)中宿主细胞为大肠杆菌感受态细胞E.coli BL21。

7.根据权利要求6所述的一种制备抗血清干扰的Taq DNA聚合酶的方法，其特征在于，步骤(4)中诱导表达方法为：将步骤(3)中重组细胞于5mL LB液体培养基中37℃、180rpm培养8-10h后，转接到500mL LB液体培养基中，37℃、180rpm培养，待OD600至0.4-0.6时，加入IPTG至终浓度为0.5mM，37℃180rpm诱导4h。

8.根据权利要求3所述的一种制备抗血清干扰的Taq DNA聚合酶的方法，其特征在于，步骤(5)中是采用溶菌酶裂解菌体，所述溶菌酶的浓度为4mg/ml。

9.一种酶制剂，其特征在于，包括权利要求1的抗血清干扰的Taq DNA聚合酶。

10.一种权利要求1的抗血清干扰的Taq DNA聚合酶的应用，其特征在于，所述Taq DNA聚合酶应用于血清中的目的基因检测。