CN108057043A - 富含血小板血浆结合人体间充质干细胞分泌因子的混合冻干粉及其制作方法 - Google Patents
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Abstract
本发明揭露了一种富含血小板血浆结合人体间充质干细胞分泌因子的混合冻干粉及其制作方法，其步骤包含：制备富含血小板血浆；培养间充质干细胞分泌因子；冻干与混合富含血小板血浆与间充质干细胞分泌因子。其中，混合冻干粉所含的自体血小板血浆的重量百分比大于间充质干细胞分泌因子的重量百分比。本发明使用自体血液及人体细胞作为素材以增进人体吸收效益及安全性，所使用的培养液为人类血小板血清而非动物胎牛血清以减少蛋白变异，并利用冻干技术克服热敏性及时效造成的变质问题，同时可定制化混合冻干粉配比以供后续不同环境使用。
Description
技术领域
本发明关于一种冻干粉及其制作方法，并且特别地，关于一种结合自体富含血小板血浆与人体间充质干细胞分泌因子的混合冻干粉及其制作方法。
背景技术
富含血小板血浆(platelet rich plasma,PRP)因含有大量具有生物活性的血小板，在一定的条件下，这些血小板可以透过活化过程将储存在其中的多种细胞因子释放在周围环境中，以促进细胞增殖、分化及组织重建修复，因此，对于治疗及医美方面属一新颖且便利的技术。
自体血小板血浆技术除了可运用于骨科治疗之外，在伤口的处理上也已经大量运用在糖尿病足、褥疮等慢性伤口的照顾，同时，眼科也应用此自体血小板血浆治疗角膜溃疡或干眼症，而牙科则可应用于植牙拔牙牙根伤口的填补修复。另外，在医学美容的领域中，可应用此技术于消除皱纹及改善秃发。
另一方面，人类骨髓、脐带、脂肪的间充质干细胞还有纤维母细胞分泌生长因子对于医疗保健的功效已有相关研究报导，常见的生长因子如：EGF、FGF、IGF、VEGF、PDGF、TGF等，对于皱纹、松弛、老化肌肤问题的回春效果令人值得期待。
间充质干细胞及纤维母细胞等细胞培养后所分泌的细胞生长因子复合物透过刺激新细胞的生长，将使胶原蛋白与弹力蛋白快速增生，促进肌肤细胞层可更快速地恢复年轻。在临床组织再生应用的研究中指出，所述的细胞生长因子可促进毛发生长。此外，所述细胞生长因子对于糖尿病患者所造成的局部组织缺血以及在整形手术做为伤口和疤痕的修复拥有一定程度的帮助。
PRP和间充质干细胞所分泌的细胞因子应用于医美、抗衰老、再生临床应用将是未来的趋势，然而在习知技术中若需两者搭配使用，除了需先将两者分别利用冻存方式保存以待后续使用，造成冻存环境的限制及高的维护费用，并在使用时还须解冻与混合以供人体使用，造成后续使用上的繁琐及不便。
由此可见，上述习知技术仍有诸多缺失，实非一良善之设计，而亟待加以改良。有鉴于此，本发明将提出一种结合自体富含血小板血浆与人体间充质干细胞分泌因子的定制化混合冻干粉及其制作方法。
发明内容
本发明的一范畴在于提供一种富含血小板血浆结合人体间充质干细胞分泌因子的混合冻干粉。根据本发明的一具体实施例，本发明富含血小板血浆结合人体间充质干细胞分泌因子的混合冻干粉包含有一富含血小板血浆粉末及一间充质干细胞分泌因子粉末。其中，混合冻干粉内所含的富含血小板血浆粉末的重量百分比大于间充质干细胞分泌因子粉末的重量百分比。
富含血小板血浆由欲使用混合冻干粉的使用者血液中取得。
同时，间充质干细胞分泌因子由人体骨骼、人体脐带、人体脂肪的间充质干细胞或纤维母细胞培养而得。
此外，富含血小板血浆粉末与间充质干细胞分泌因子粉末的重量百分比的比例介于5:1～7:1之间。
本发明的另一范畴在于提供一种富含血小板血浆结合人体间充质干细胞分泌因子的混合冻干粉的制作方法。根据本发明的一具体实施例，本发明富含血小板血浆结合人体间充质干细胞分泌因子的混合冻干粉的制作方法，其包含下列步骤：离心一全血样本并于无菌环境中取得一富含血小板血浆；于无菌环境中培养一人体间充质干细胞以取得富含一间充质干细胞分泌因子的一培养液；分别冷冻干燥该富含血小板血浆及该培养液以得一富含血小板血浆粉末及一间充质干细胞分泌因子粉末；混合该富含血小板血浆粉末与该间充质干细胞分泌因子粉末以得该混合冻干粉。
其中，混合冻干粉所使用的富含血小板血浆的重量百分比大于培养液的重量百分比。
本发明的再一范畴在于提供一种富含血小板血浆结合人体间充质干细胞分泌因子的混合冻干粉的制作方法。根据本发明的另一具体实施例，本发明富含血小板血浆结合人体间充质干细胞分泌因子的混合冻干粉的制作方法，其包含下列步骤：离心一全血样本并于无菌环境中取得一富含血小板血浆；于无菌环境中培养一人体间充质干细胞以取得富含一间充质干细胞分泌因子的一培养液；混合该富含血小板血浆与该培养液以得一混合液体；冷冻干燥该混合液体以得该混合冻干粉。
其中，混合冻干粉所使用的富含血小板血浆的重量百分比大于培养液的重量百分比。
相较于习知技术，本发明富含血小板血浆结合人体间充质干细胞分泌因子的混合冻干粉及其制作方法利用自体血小板血浆的冻干粉混合间充质干细胞分泌因子的冻干粉以定制化所需的混合冻干粉，具有后续保存简单并在使用时仅需搭配溶剂注射或直接擦拭以简化使用步骤等特点。进一步地，制成自体生长因子冻干粉的样品来源为自体，将不会产生因异体注射后所产生的排斥现象。同时，细胞培养所使用的培养液为人类的血小板血浆而非动物胎牛血清，得以减少胎牛血清的蛋白变异发生。
关于本发明的优点与精神可以藉由以下的发明具体实施方式以及附图得到进一步的了解。
附图说明
图1绘示本发明富含血小板血浆结合人体间充质干细胞分泌因子的混合冻干粉的制作方法的一流程图。
图2绘示本发明富含血小板血浆结合人体间充质干细胞分泌因子的混合冻干粉的制作方法的另一实施例的流程图。
其中，附图标记说明如下：
S11～S14、S21～S24：步骤
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下参照附图并举实施例，对本发明作进一步详细说明。
根据本发明的一具体实施例，本发明富含血小板血浆结合人体间充质干细胞分泌因子的混合冻干粉包含有一富含血小板血浆粉末及一间充质干细胞分泌因子粉末。其中，混合冻干粉内所含的富含血小板血浆粉末的重量百分比大于间充质干细胞分泌因子粉末的重量百分比。
所述富含血小板血浆(Platelet Rich Plasma,PRP)由欲使用混合冻干粉的使用者血液中取得。
由于使用的富含血小板血浆由使用者自体血液中取得，不会因来源不洁而造成肝炎、爱滋等血液传染的问题，亦不会产生排斥问题。
间充质干细胞分泌因子由人体骨骼、人体脐带、人体脂肪的间充质干细胞或纤维母细胞培养而得。
间充质干细胞分泌因子亦可由欲使用混合冻干粉的使用者本身的间充质干细胞或纤维母细胞培养而得，此时将使得本发明混合冻干粉的大部分原料来自使用者本身，而较不易产生身体排斥问题。
此外，富含血小板血浆粉末与间充质干细胞分泌因子粉末的重量百分比的比例介于5:1～7:1之间。
上述富含血小板血浆粉末与间充质干细胞分泌因子粉末为分别对富含血小版血浆与间充质干细胞分泌因子经-80℃急速冷冻与-55℃冷冻干燥12～16小时而得的冻干粉。
请参照图1，图1绘示本发明富含血小板血浆结合人体间充质干细胞分泌因子的混合冻干粉的制作方法的一流程图。本发明的另一范畴在于提供一种富含血小板血浆结合人体间充质干细胞分泌因子的混合冻干粉的制作方法。根据本发明的一具体实施例，本发明富含血小板血浆结合人体间充质干细胞分泌因子的混合冻干粉的制作方法，其包含下列步骤：S11：离心一全血样本并于无菌环境中取得一富含血小板血浆；S12：于无菌环境中培养一人体间充质干细胞以取得富含一间充质干细胞分泌因子的一培养液；S13：分别冷冻干燥富含血小板血浆及培养液以得一富含血小板血浆粉末及一间充质干细胞分泌因子粉末；S14：混合富含血小板血浆粉末与间充质干细胞分泌因子粉末以得混合冻干粉。
其中，混合冻干粉所使用的富含血小板血浆的重量百分比大于培养液的重量百分比。
步骤S11：离心全血样本并于无菌环境中取得富含血小板血浆包含以下子步骤；自欲使用混合冻干粉的一使用者抽取全血样本；将全血样本以每分钟1,000～1,500转的转速离心5～15分钟；于无菌环境中取出离心后的富含该富含血小板血浆的全血样本的上层液。
其中全血样本包含有一抗凝固剂。
于实际应用中，可将含有抗凝固剂的全血样本经过每分钟1,200转离心10分钟以分离出血浆及血球，并于无菌环境中将富含血小板血浆的上层液体取出做后续处理。
由于使用的富含血小板血浆由使用者自体血液中取得，不会因来源不洁而造成肝炎、爱滋等血液传染的问题，亦不会产生排他性，对于人体吸收及安全性将有更进一步的保障。
其中步骤S12：于无菌环境中培养人体间充质干细胞以取得富含间充质干细胞分泌因子的培养液包含以下子步骤：在无菌环境中于一生长液内培养人体间充质干细胞；当生长液内的人体间充质干细胞的细胞生长密度大于80％后再持续培养2～3天后，收集培养液。
所述的人体间充质干细胞取自人体骨骼、脐带、脂肪或纤维母细胞。
更进一步地，选用的人体间充质干细胞可由欲使用该混合冻干粉的使用者身上取得，以增进其适应性。
生长液包含DMEM培养基、5％的人体血小板血浆及1mM的非必要氨基酸。所使用的DMEM培养基包含有4.0mM的左旋谷氨酰胺(L-Glutamine)及4500mg/L的葡萄糖(Glucose)，且不含丙酮酸钠(Sodium Pyruvate)、酚红(Phenol Red)及抗生素，可避免产生免疫排斥现象及变易。添加5％的人体血小板血浆及1mM的非必要氨基酸可加速细胞的生长，所使用的5％人体血小板血浆不限于由欲使用混合冻干粉的使用者身上取得，即代表可使用市售的人体血小板血浆。
步骤S13：分别冷冻干燥富含血小板血浆及培养液以得富含血小板血浆粉末及间充质干细胞分泌因子粉末包含以下子步骤：分别急速冷冻富含血小板血浆与培养液至-80℃；分别于-55℃干燥急速冷冻后的富含血小板血浆与培养液12～16小时以得富含血小板血浆粉末及间充质干细胞分泌因子粉末。
混合冻干粉所使用的富含血小板血浆与培养液的重量百分比比例介于5:1～7:1之间。
于实际应用中，可根据后续注射条件或直接擦拭吸收使用的方式，以定制化调变混合比例。同时，本发明的混合冻干粉于使用时可溶解于一溶剂中以便注射使用，或混合于一浆料以便于擦拭使用。
上述的步骤过程中需维持洁净以避免受外在环境污染。
请参阅图2，图2绘示本发明富含血小板血浆结合人体间充质干细胞分泌因子的混合冻干粉的制作方法的另一实施例的流程图。本发明的再一范畴在于提供一种富含血小板血浆结合人体间充质干细胞分泌因子的混合冻干粉的制作方法。根据本发明的另一具体实施例，本发明富含血小板血浆结合人体间充质干细胞分泌因子的混合冻干粉的制作方法，其包含下列步骤：S21：离心一全血样本并于无菌环境中取得一富含血小板血浆；S22：于无菌环境中培养一人体间充质干细胞以取得富含一间充质干细胞分泌因子的一培养液；S23：混合富含血小板血浆与培养液以得一混合液体；S24：冷冻干燥混合液体以得混合冻干粉。
其中，混合冻干粉所使用的富含血小板血浆的重量百分比大于培养液的重量百分比。
更进一步地，混合冻干粉所使用的富含血小板血浆与培养液的重量百分比的比例介于5:1～7:1之间。
步骤S21：离心全血样本并于无菌环境中取得富含血小板血浆包含以下子步骤：自欲使用混合冻干粉的一使用者抽取全血样本；将全血样本以每分钟1,000～1,500转的转速离心5～15分钟；于无菌环境中取出富含该富含血小板血浆的全血样本离心后的一上层液。
其中全血样本包含有一抗凝固剂。
于实际应用中，可将含有抗凝固剂的全血样本经过每分钟1,200转离心10分钟以分离出血浆及血球，并于无菌环境中将富含血小板血浆的上层液体取出做后续处理。
由于使用的富含血小板血浆由使用者自体血液中取得，不会因来源不净而造成肝炎、爱滋等血液传染的问题，亦不会产生排他性，对于人体吸收及安全性将有更进一步的保障。
步骤S22：于无菌环境中培养人体间充质干细胞以取得富含间充质干细胞分泌因子的培养液包含以下子步骤：在无菌环境中于一生长液内培养人体间充质干细胞；当生长液内的人体间充质干细胞的细胞生长密度大于80％后再持续培养2～3天后，收集培养液。
所使用的人体间充质干细胞取自人体骨骼、脐带、脂肪或纤维母细胞。
更进一步地，所使用的人体间充质干细胞得取自于欲使用混合冻干粉的使用者，以增进混合冻干粉的适应性。
上述的生长液包含DMEM培养基、5％的人体血小板血浆及1mM的非必要氨基酸，其中DMEM培养基包含有4.0mM的左旋谷氨酰胺(L-Glutamine)及4500mg/L的葡萄糖(Glucose)。因不含丙酮酸钠(Sodium Pyruvate)、酚红(Phenol Red)及抗生素，可避免产生免疫排斥现象及变易。添加5％的人体血小板血浆及1mM的非必要氨基酸可加速细胞的生长，所使用的5％人体血小板血浆不限于由欲使用混合冻干粉的使用者身上取得，即代表可使用市售的人体血小板血浆。
步骤S24：冷冻干燥混合液体以得混合冻干粉包含以下子步骤：急速冷冻混合液体至-80℃；将急速冷冻后的混合液体于-55℃干燥12～16小时以得混合冻干粉。
由于先制备混合液体再进行冷冻及脱水动作可减少所需制程的动作，进而降低过程中受污染的可能性。
综上所述，本发明富含血小板血浆结合人体间充质干细胞分泌因子的混合冻干粉及其制作方法利用使用者自体血液作为素材以增进混合冻干粉的人体吸收效益及安全性，并利用冻干技术以克服热敏性及时效所造成的变质问题。同时可依据后续的注射使用或擦拭吸收方式的不同定制混合比例，再将本发明的混合冻干粉与所需溶剂或浆料混合后做进一步的使用。
相较于习知技术，本发明富含血小板血浆结合人体间充质干细胞分泌因子的混合冻干粉及其制作方法利用自体血小板血浆的冻干粉混合间充质干细胞分泌因子的冻干粉以定制化所需的混合冻干粉，具有后续保存简单并在使用时仅需搭配溶剂注射或直接擦拭以简化使用步骤等特点。进一步地，制成自体生长因子冻干粉的样品来源为自体，将不会产生因异体注射后所产生的排斥现象。同时，细胞培养所使用的培养液为人类的血小板血浆而非动物胎牛血清，得以减少胎牛血清的蛋白变异发生。
藉由以上较佳具体实施例的详述，希望能更加清楚描述本发明的特征与精神，而并非以上述所揭露的较佳具体实施例来对本发明的范畴加以限制。相反地，其目的是希望能涵盖各种改变及具相等性的安排于本发明所欲申请的权利要求书的范畴内。
Claims (12)
1.一种富含血小板血浆结合人体间充质干细胞分泌因子的混合冻干粉，其包含有：
一富含血小板血浆粉末；以及
一间充质干细胞分泌因子粉末；
其中，该混合冻干粉内所含的该富含血小板血浆粉末的重量百分比大于该间充质干细胞分泌因子粉末的重量百分比。
2.如权利要求1所述的混合冻干粉，其中该间充质干细胞分泌因子由人体骨骼、人体脐带、人体脂肪的间充质干细胞或纤维母细胞培养而得。
3.如权利要求1所述的混合冻干粉，其中该富含血小板血浆由欲使用该混合冻干粉的一使用者血液中取得。
4.如权利要求1所述的混合冻干粉，其中该富含血小板血浆粉末与该间充质干细胞分泌因子粉末的重量百分比的比例介于5:1～7:1之间。
5.如权利要求1所述的混合冻干粉，其中该富含血小板血浆粉末与该间充质干细胞分泌因子粉末为分别对该富含血小版血浆与该间充质干细胞分泌因子经-80℃急速冷冻与-55℃冷冻干燥12～16小时而得的冻干粉。
6.一种富含血小板血浆结合人体间充质干细胞分泌因子的混合冻干粉的制作方法，其包含下列步骤：
离心一全血样本并于无菌环境中取得一富含血小板血浆；
于无菌环境中培养一人体间充质干细胞以取得富含一间充质干细胞分泌因子的一培养液；
分别冷冻干燥该富含血小板血浆及该培养液以得一富含血小板血浆粉末及一间充质干细胞分泌因子粉末；以及
混合该富含血小板血浆粉末与该间充质干细胞分泌因子粉末以得该混合冻干粉；
其中，该混合冻干粉所使用的该富含血小板血浆的重量百分比大于该培养液的重量百分比。
7.如权利要求6所述的制作方法，其中离心该全血样本并于无菌环境中取得该富含血小板血浆的步骤包含以下子步骤：
自欲使用该混合冻干粉的一使用者抽取该全血样本；
将该全血样本以每分钟1,000～1,500转的转速离心5～15分钟；以及
于无菌环境中取出富含该富含血小板血浆的该全血样本离心后的一上层液。
8.如权利要求6所述的制作方法，其中于无菌环境中培养该人体间充质干细胞以取得富含该间充质干细胞分泌因子的该培养液的步骤包含以下子步骤：
在无菌环境中于一生长液内培养该人体间充质干细胞；以及
当该生长液内的该人体间充质干细胞的细胞生长密度大于80％后再持续培养2～3天后，收集该培养液。
9.如权利要求8所述的制作方法，其中该生长液包含DMEM培养基、5％的人体血小板血浆及1mM的非必要氨基酸，以及该DMEM培养基包含有4.0mM的左旋谷氨酰胺(L-Glutamine)及4500mg/L的葡萄糖(Glucose)，且不含丙酮酸钠(Sodium Pyruvate)、酚红(Phenol Red)及抗生素。
10.如权利要求6所述的制作方法，其中分别冷冻干燥该富含血小板血浆及该培养液以得该富含血小板血浆粉末及该间充质干细胞分泌因子粉末的步骤包含以下子步骤：
分别急速冷冻该富含血小板血浆与该培养液至-80℃；以及
分别于-55℃干燥急速冷冻后的该富含血小板血浆与该培养液12～16小时以得该富含血小板血浆粉末及该间充质干细胞分泌因子粉末。
11.一种富含血小板血浆结合人体间充质干细胞分泌因子的混合冻干粉的制作方法，其包含下列步骤：
离心一全血样本并于无菌环境中取得一富含血小板血浆；
于无菌环境中培养一人体间充质干细胞以取得富含一间充质干细胞分泌因子的一培养液；
混合该富含血小板血浆与该培养液以得一混合液体；以及
冷冻干燥该混合液体以得该混合冻干粉；
其中，该混合冻干粉所使用的该富含血小板血浆的重量百分比大于该培养液的重量百分比。
12.如权利要求11所述的制作方法，其中冷冻干燥该混合液体以得该混合冻干粉的步骤包含以下子步骤：
急速冷冻该混合液体至-80℃；以及
将急速冷冻后的该混合液体于-55℃干燥12～16小时以得该混合冻干粉。
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Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110279893A (zh) * | 2019-08-13 | 2019-09-27 | 成都清科生物科技有限公司 | 一种外泌体冻干粉及其制备方法和包含该外泌体冻干粉的制剂 |
| CN110585243A (zh) * | 2019-08-12 | 2019-12-20 | 丰泽康生物医药（深圳）有限公司 | 用于治疗糖皮质激素依赖性皮炎的多潜能细胞活性物与富血小板血浆复合物及制法和应用 |
| CN111760064A (zh) * | 2020-08-25 | 2020-10-13 | 重庆大学附属肿瘤医院 | 一种用于治疗糖尿病足的敷料及其制备方法 |
| CN113969260A (zh) * | 2020-07-24 | 2022-01-25 | 吕瑞华 | 血小板外泌体结合干细胞外泌体的混合冻晶粉及其制作方法 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007129453A1 (ja) * | 2006-04-19 | 2007-11-15 | National University Corporation Nagoya University | 歯周軟組織再生用組成物及びその製造方法 |
| CN104906052A (zh) * | 2014-03-14 | 2015-09-16 | 复旦大学附属中山医院 | 一种自体来源富血小板血浆冻干粉的制备方法 |
| CN104922658A (zh) * | 2015-07-16 | 2015-09-23 | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 | 一种具有抗衰老功效的组合物及其制剂 |
| CN105030647A (zh) * | 2015-09-14 | 2015-11-11 | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 | 一种减少皱纹的制剂及其制备方法 |
| CN105543313A (zh) * | 2015-12-29 | 2016-05-04 | 四川新生命干细胞科技股份有限公司 | 一种人源间充质干细胞因子及其制备方法和用途 |
| CN105950550A (zh) * | 2016-07-21 | 2016-09-21 | 四川新生命干细胞科技股份有限公司 | 一种间充质干细胞无血清培养基、细胞分离培养方法 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| TWI656877B (zh) * | 2012-03-16 | 2019-04-21 | 傅毓秀 | 含臍帶間質幹細胞培養液或由其製得之產物之用於治療皮膚創傷之醫藥組合物 |
| CN105477018A (zh) * | 2015-12-07 | 2016-04-13 | 深圳爱生再生医学科技有限公司 | 修复皮肤溃疡的干细胞制剂及其制备方法 |
| CN106039293A (zh) * | 2016-07-28 | 2016-10-26 | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 | 一种修复皮肤溃疡的组合物及其制备方法 |
-
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Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007129453A1 (ja) * | 2006-04-19 | 2007-11-15 | National University Corporation Nagoya University | 歯周軟組織再生用組成物及びその製造方法 |
| CN104906052A (zh) * | 2014-03-14 | 2015-09-16 | 复旦大学附属中山医院 | 一种自体来源富血小板血浆冻干粉的制备方法 |
| CN104922658A (zh) * | 2015-07-16 | 2015-09-23 | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 | 一种具有抗衰老功效的组合物及其制剂 |
| CN105030647A (zh) * | 2015-09-14 | 2015-11-11 | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 | 一种减少皱纹的制剂及其制备方法 |
| CN105543313A (zh) * | 2015-12-29 | 2016-05-04 | 四川新生命干细胞科技股份有限公司 | 一种人源间充质干细胞因子及其制备方法和用途 |
| CN105950550A (zh) * | 2016-07-21 | 2016-09-21 | 四川新生命干细胞科技股份有限公司 | 一种间充质干细胞无血清培养基、细胞分离培养方法 |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110585243A (zh) * | 2019-08-12 | 2019-12-20 | 丰泽康生物医药（深圳）有限公司 | 用于治疗糖皮质激素依赖性皮炎的多潜能细胞活性物与富血小板血浆复合物及制法和应用 |
| CN110279893A (zh) * | 2019-08-13 | 2019-09-27 | 成都清科生物科技有限公司 | 一种外泌体冻干粉及其制备方法和包含该外泌体冻干粉的制剂 |
| CN113969260A (zh) * | 2020-07-24 | 2022-01-25 | 吕瑞华 | 血小板外泌体结合干细胞外泌体的混合冻晶粉及其制作方法 |
| CN111760064A (zh) * | 2020-08-25 | 2020-10-13 | 重庆大学附属肿瘤医院 | 一种用于治疗糖尿病足的敷料及其制备方法 |
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