CN110396497A - 基于自体脂肪干细胞外泌体的制备及美容方法 - Google Patents

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Abstract

基于自体脂肪干细胞外泌体的制备及美容方法，它包含如下步骤：一、健康的客户的选择；二、腹部和臀部自体脂肪组织的选择；三、脂肪干细胞的制备；四、脂肪干细胞外泌体的制备的富集；五、脂肪干细胞外泌体的表皮和真皮的美容；采用本发明方法制备的基于自体脂肪干细胞外泌体，能有效利用自体组织，具有易于操作、无免疫原性反应风险、活性高、效果明显、制备成本低廉、可操作性强等优点。

Description

基于自体脂肪干细胞外泌体的制备及美容方法
技术领域
本发明涉及细胞应用技术领域，具体涉及一种基于自体脂肪干细胞外泌体的制备及美容方法。
背景技术
外泌体是指包含了复杂 RNA 和蛋白质的小膜泡 (30-150nm)。现今，外泌体特指直径在40-100nm的盘状囊泡。1983年，外泌体首次于绵羊网织红细胞中被发现。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。
外泌体目前被视为特异性分泌的膜泡，参与细胞间通讯，外泌体富含胆固醇和鞘磷脂。2007年， Valadi等发现鼠的肥大细胞分泌的外泌体可以被人的肥大细胞捕获，并且其携带的mRNA成分可以进入细胞浆中可以被翻译成蛋白质，不仅仅是mRNA，外泌体所转移的microRNA同样具有生物活性，在进入靶细胞后可以靶向调节细胞中mRNA的水平。
外泌体的功能取决于其所来源的细胞类型，其可参与到机体免疫应答、抗原提呈、细胞迁移、细胞分化等方方面面。
发明内容
本发明的目的在于提供一种基于自体脂肪干细胞外泌体的制备及美容方法，具有易于操作，自体细胞，无免疫原性反应，活性高、效果明显等优点。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：它包含如下步骤：
一、健康的客户的选择：选择18-45岁健康人士，男女均可，首先体检，采集其的外周血，用化学发光方法检测乙肝、丙肝、梅毒、艾滋、EB病毒、嗜热T细胞病毒为阴性即为合格；
二、腹部和臀部自体脂肪组织的选择：合格后的人士，在医院做吸脂手术，采用无菌方法提取腹部和臀部的150毫升自体脂肪组织，缝合、腹带压迫塑形；将自体脂肪组织迅速放到含有庆大霉素的PBS缓冲液皮肤保存液中；
三、脂肪干细胞的制备：在GMP制备车间中，150毫升自体脂肪组织放入3个50毫升离心管中，分别加入10毫升的3mg/ml的胶原蛋白酶I和5毫升的0.25%胰酶消化180分钟，再加入血清的DMEM/F12培养基终止消化 、离心、弃掉上清，在细胞沉淀中加入20毫升无血清细胞培养基中培养，每5天换液，第15-20天，观察到梭形细胞长出，7-8个克隆的时候可以传代、冻存；
四、脂肪干细胞外泌体的制备的富集：取对数期细胞，2000转离心，去上清；加入胰酶消化、离心、去上清，加入不含血清替代物的培养基1:10传代，5天以后，收集所有上清，10000转高速离心，取沉淀，检测，冻存，使用前5天，融化；
五、脂肪干细胞外泌体的表皮和真皮的美容；生活美容的方法：洁面，采用钒钛微晶无针水光仪表皮导入；医疗美容的方法：洁面，敷麻膏，去除麻膏，碘伏消毒，脱碘，采用0.8-1.2mm深度水光针将脂肪干细胞外泌体导入，及时用干棉签压迫；医用冷敷贴敷面15分钟，修复真皮组织。
采用上述方案后，本发明有益效果为：采用本发明方法制备的基于自体脂肪干细胞外泌体，能有效利用自体组织，具有易于操作、无免疫原性反应风险、活性高、效果明显、制备成本低廉、可操作性强等优点。
具体实施方式
下面对本发明作进一步的说明。
本具体实施方式采用的技术方案是：它包含如下步骤：
一、健康的客户的选择：选择18-45岁健康人士，男女均可，首先体检，采集其的外周血，用化学发光方法检测乙肝、丙肝、梅毒、艾滋、EB病毒、嗜热T细胞病毒为阴性即为合格；
二、腹部和臀部自体脂肪组织的选择：合格后的人士，在医院做吸脂手术，采用无菌方法提取腹部和臀部的150毫升自体脂肪组织，缝合、腹带压迫塑形；将自体脂肪组织迅速放到含有庆大霉素的PBS缓冲液皮肤保存液中；
三、脂肪干细胞的制备：在GMP制备车间中，150毫升自体脂肪组织放入3个50毫升离心管中，分别加入10毫升的3mg/ml的胶原蛋白酶I和5毫升的0.25%胰酶消化180分钟，再加入血清的DMEM/F12培养基终止消化 、离心、弃掉上清，在细胞沉淀中加入20毫升无血清细胞培养基中培养，每5天换液，第15-20天，观察到梭形细胞长出，7-8个克隆的时候可以传代、冻存；
四、脂肪干细胞外泌体的制备的富集：取对数期细胞，2000转离心，去上清；加入胰酶消化、离心、去上清，加入不含血清替代物的培养基1:10传代，5天以后，收集所有上清，10000转高速离心，取沉淀，检测，冻存，使用前5天，融化；
五、脂肪干细胞外泌体的表皮和真皮的美容；生活美容的方法：洁面，采用钒钛微晶无针水光仪表皮导入；医疗美容的方法：洁面，敷麻膏，去除麻膏，碘伏消毒，脱碘，采用0.8-1.2mm深度水光针将脂肪干细胞外泌体导入，及时用干棉签压迫；医用冷敷贴敷面15分钟，修复真皮组织。
采用本具体实施方式制备的基于自体脂肪干细胞外泌体美容时，先洁面，敷麻膏，去除麻膏，碘伏消毒，脱碘，再采用0.8-1.2mm深度水光针将脂肪干细胞外泌体导入，及时用干棉签压迫；医用冷敷贴敷面15分钟。干细胞外泌体深度导入到皮下组织部位后，迅速被肌肤组织吸收，发挥祛皱、祛黄、填充、嫩肤和修复皮肤作用，从而产生疗效；还能够准确地直接到达真皮层，同时又几乎没有创伤，因此具有准确、安全、高效、适应证广、无并发症等优点，自体脂肪干细胞外泌体可以大批量制备，易于储存和使用。
采用本具体实施方式制备的自体脂肪干细胞外泌体有显著的填充、嫩肤和修复效果：能填充皮肤凹陷，促进松驰下坠的皮肤光滑收紧，恢复皮肤弹性，减少皮肤皱纹和色素沉着；经医美医院统计发现，经自体脂肪干细胞外泌体美容抗衰老获得的美容效果，修复各种衰老、受损组织细胞，从肌底细胞本源进行修复，让细胞重新得到年轻化生理能力，再生新的结蹄组织，面部真皮组织具备持久年轻活力，由内而外的淡化色斑、嫩肤、抹平细纹、皮肤重新焕发水嫩感，恢复紧致弹力，美白，提亮肌肤光泽，提升皮肤弹力，增加皮肤弹力，增加皮肤水分，减少皮肤油分。
以上所述，仅用以说明本发明的技术方案而非限制，本领域普通技术人员对本发明的技术方案所做的其它修改或者等同替换，只要不脱离本发明技术方案的精神和范围，均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (1)

1.基于自体脂肪干细胞外泌体的制备及美容方法，其特征在于它包含如下步骤：
一、健康的客户的选择：选择18-45岁健康人士，男女均可，首先体检，采集其的外周血，用化学发光方法检测乙肝、丙肝、梅毒、艾滋、EB病毒、嗜热T细胞病毒为阴性即为合格；
二、腹部和臀部自体脂肪组织的选择：合格后的人士，在医院做吸脂手术，采用无菌方法提取腹部和臀部的150毫升自体脂肪组织，缝合、腹带压迫塑形；将自体脂肪组织迅速放到含有庆大霉素的PBS缓冲液皮肤保存液中；
三、脂肪干细胞的制备：在GMP制备车间中，150毫升自体脂肪组织放入3个50毫升离心管中，分别加入10毫升的3mg/ml的胶原蛋白酶I和5毫升的0.25%胰酶消化180分钟，再加入血清的DMEM/F12培养基终止消化 、离心、弃掉上清，在细胞沉淀中加入20毫升无血清细胞培养基中培养，每5天换液，第15-20天，观察到梭形细胞长出，7-8个克隆的时候可以传代、冻存；
四、脂肪干细胞外泌体的制备的富集：取对数期细胞，2000转离心，去上清；加入胰酶消化、离心、去上清，加入不含血清替代物的培养基1:10传代，5天以后，收集所有上清，10000转高速离心，取沉淀，检测，冻存，使用前5天，融化；
五、脂肪干细胞外泌体的表皮和真皮的美容；生活美容的方法：洁面，采用钒钛微晶无针水光仪表皮导入；医疗美容的方法：洁面，敷麻膏，去除麻膏，碘伏消毒，脱碘，采用0.8-1.2mm深度水光针将脂肪干细胞外泌体导入，及时用干棉签压迫；医用冷敷贴敷面15分钟，修复真皮组织。
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