CN108047314A - 一种缩宫素的纯化方法 - Google Patents

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夏星辉
王群芳
胡晶锦
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Abstract

本发明涉及一种缩宫素的纯化方法，包括步骤（1）、液氨进行真空干燥；步骤（2）、干燥后的反应瓶中加入酸溶液，溶解干粉；步骤（3）、在步骤（2）得到的液体中下部通入空气或者氧气进行氧化，得到缩宫素溶液中间体；步骤（4）、通过高相液相色谱柱对缩宫素溶液中间体进行纯化；步骤（5）、将步骤（4）收集到的有效组分洗脱液进行旋转蒸发。本发明根据缩宫素溶液中的各组分在流动相和固定相中具有不同的分配系数，被分离成单个组分依次从柱内流出，收集到所需的缩宫素组分。再通过旋蒸将缩宫素内有机溶剂蒸发，分离出缩宫素，本发明的制备方法操作简单，效率高，得到的缩宫素纯度高，单个杂质≤2.0%，总杂质≤5%；单位效价大于1500单位/ml。

Description

一种缩宫素的纯化方法
技术领域
本发明属于医药技术领域，涉及一种缩宫素的纯化方法。
背景技术
缩宫素溶液又称为催产素，是一种原料药，分子式：C43H66N12O12S2，分子量：1007.19，是由9个氨基酸残基组成、具有生物活性的多肽氨基酸产品。其中2个半胱氨酸在1,6位形成一个二硫键，相对分子质量是1007.2，等电点7.7，在酸性溶液中稳定，在血液循环中以自由肽的形式存在。易溶于水，溶于丙酮、稀醋酸和丁醇，微溶于乙腈。缩宫素临床上主要用于催生引产、产后止血和产时子宫收缩乏力等。此外催产素还具有广泛的生理功能，尤其是对中枢神经系统的作用。结构式：
2、制备工艺
催产素作为药品主要有人工合成和从动物脑垂体提取两个来源。人工合成缩宫素有液相合成法和固相合成法。
NH3+Na＝[H]++NH2—Na NH2—Na+Na＝[H]++NH—Na
液氨和钠生成络合物，放出氢原子，氢原子起还原作用，将保护九肽分子中二半胱氨酸上的S—苄基和第一个半胱氨酸分子的α—氨基保护基脱下，经氧化即得缩宫素溶液。
液相合成法合成的缩宫素溶液中有较多的杂质成份，并导致目标产品缩宫素的纯度必须经过多次处理才能达到期望的化学纯度。
申请号201710001528的发明专利公开了一种缩宫素的纯化方法。该制备方法包括下述步骤：采用高效液相反相色谱法将缩宫素前体粗品溶液依次进行反相环化、反相纯化、反相脱盐，即可；高效液相反相色谱法的填料为硅胶C18；所述的缩宫素前体粗品为含两游离巯基的缩宫素前体粗品。该发明的制备方法运用了反相吸附环化、纯化、除盐一步法制得多肽纯品，优化了生产工艺，适合工业化连续生产，但是该发明中制得的缩宫素纯度较低必须经过多次处理才能达到期望的化学纯度。
申请号为201310399939.5的发明专利涉及一种卡贝缩宫素的纯化方法，其特征包括以下步骤：步骤1.将卡贝缩宫素粗品用水溶解，调节pH到酸性；步骤2.按体积分数设置梯度，使用流动相A冲洗聚合物反相填料柱；步骤3.将步骤1溶液载入聚合物反相填料中；步骤4.按体积分数设置梯度，洗脱梯度的初始状态流动相B为5％，保持2分钟，然后在5分钟内将流动相B比例增至25％，然后在30分钟内将流动相B比例增至40％。收集全部洗脱馏分；步骤5.将洗脱馏分经过干燥得到纯品卡贝缩宫素。但是该发明中制得的缩宫素含有杂质较多，每毫升里效价低。
中国专利CN101531705公开了一种卡贝缩宫素的纯化方法，具体步骤为：先对卡贝缩宫素素粗肽溶液进行反相色谱梯度洗脱纯化，然后采用阴离子交换法将磷酸盐、三氟醋酸盐转成醋酸盐。但是该法收率不高，每毫升里效价低。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明提供一种缩宫素的纯化方法，增加纯化工艺有利于去除杂质，提高产品纯度。我们使用高效液相，根据缩宫素溶液中的各组分在流动相和固定相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸附的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，根据紫外-可见光检测器检测得的信号，收集到所需的缩宫素组分。再通过旋蒸将缩宫素内有机溶剂蒸发，分离出缩宫素。本发明通过制备柱梯度洗脱以及旋转蒸发，从而提高产品的纯度，本发明的制备方法操作简单，效率高，得到的缩宫素纯度高，杂质少，有关物质，单个杂质≤2.0％，总杂质≤5％；单位效价大于1500单位/ml。
本发明提供了如下的技术方案：
一种缩宫素的纯化方法，包括以下步骤：
步骤(1)、收集液氨进行真空干燥；
步骤(2)、干燥后的反应瓶中加入酸溶液，溶解干粉；
步骤(3)、在步骤(2)得到的液体中下部通入空气或氧气进行氧化，得到缩宫素溶液中间体；
步骤(4)、通过高相液相色谱柱对缩宫素溶液中间体进行纯化；
步骤(5)、将步骤(4)收集到的有效组分洗脱液进行旋转蒸发。
优选的是，步骤(1)中收集无水液氨的具体做法为：将液氨倒入三颈圆底烧瓶中，抽干成无水液氨。
在上述任一方案中优选的是，步骤(1)中收集液氨的具体做法为：液氨至反应瓶中，加入九肽中间体、氯化铵至反应瓶中，搅拌溶解得清液。
在上述任一方案中优选的是，步骤(1)中真空干燥的具体做法为：开启真空泵，待挥发出的氨气抽光，控制真空度，以不抽出液体为宜，直到液体抽干，反应瓶壁白色粉末脱落。
在上述任一方案中优选的是，步骤(2)中干燥后的反应瓶中加入酸溶液后，溶解干粉并稀释，调节pH后，将溶液吸入到玻璃反应釜中。
在上述任一方案中优选的是，步骤(2)中酸溶液为2％-4％的冰醋酸溶液。由于九肽在酸水中比较稳定，故采用2-4％的冰醋酸溶液。
在上述任一方案中优选的是，步骤(2)中用氢氧化钠溶液或冰醋酸调节pH至6-8。
在上述任一方案中优选的是，步骤(3)中溶液还需要过滤，过滤后调节pH值。该步骤是必须是先过滤，之后调节pH值,顺序不可变，由于溶液内有杂质，如果先调了ph值，杂质会溶解，最后获得的缩宫素纯度则降低了。
在上述任一方案中优选的是，步骤(3)中氧化时控制温度10-35℃，通空气或氧气6-12小时进行氧化。
在上述任一方案中优选的是，步骤(3)中氧化时控制温度10-35℃，通空气或氧气6小时进行氧化。
在上述任一方案中优选的是，步骤(3)中氧化时控制温度10-35℃，通空气或氧气9小时进行氧化。
在上述任一方案中优选的是，步骤(3)中氧化时控制温度10-35℃，通空气或氧气12小时进行氧化。
在上述任一方案中优选的是，步骤(3)中氧化过后的溶液用0.8um过滤器过滤。经过0.8μm过滤器过滤，初步去除杂质。
在上述任一方案中优选的是，步骤(3)中加入冰醋酸调节pH值至2.0-4.0。
在上述任一方案中优选的是，步骤(4)中纯化的方法包括以下步骤：
步骤(4.1)、乙酸水溶液作为流动相A，异丙醇作为流动相B，色谱工作站设定线性流速为150-300cm/h,设定紫外检测波长为280nm，用流动相A冲洗；
步骤(4.2)、将A泵的溶剂过滤头放入缩宫素溶液中间体中，设定线性流速为150-300cm/h，开始上样，上样结束，停A泵，将A泵的溶剂过滤头放入装有流动相A的器皿中，设定线性流速为150-300cm/h，用流动相A对滤头进行冲洗；
步骤(4.3)、开始梯度洗脱，分段收集有效成分，完成纯化。
在上述任一方案中优选的是，步骤(4.3)中分段收集的具体方法为：在主峰迅速上升时开始收集主峰组分，当主峰下降至出现拐点时开始分段收集，在出现较大杂质峰的上升处停止收集，继续进行梯度洗脱，根据图谱将拐点前的分段收集的有效成分合并入大样，拐点后的收集液弃去，完成纯化步骤。
在上述任一方案中优选的是，步骤(4.3)中梯度洗脱时乙酸水溶液作为流动相A，异丙醇作为流动相B。
在上述任一方案中优选的是，步骤(4.3)中梯度洗脱的最优程序如下所示：
时间/min A％ B％
0 97 3
25 97 3
75 85 15
76 75 25
90 75 25
在上述任一方案中优选的是，步骤(5)旋转蒸发的具体方法为：将步骤(4)收集到的有效组分洗脱液合并，按样品上柱的收集时间判断收集量，并根据合并组分的起终点(起点和终点)估算出合并液的体积；将样品液倒入旋蒸瓶中，开启旋转蒸发仪，设定水浴温度，开启真空泵和冷却水，调节调速旋钮，开始旋蒸，直至旋蒸完所有有效组分。旋转蒸发可以除去纯化步骤产生的有机溶剂异丙醇。
在上述任一方案中优选的是，旋转蒸发之前需要用4mol/L氢氧化钠溶液或冰醋酸调节pH至2.0～4.0。
在上述任一方案中优选的是，所述水浴温度为50-55℃。
在上述任一方案中优选的是，所述步骤(5)之后还包括过滤步骤。
在上述任一方案中优选的是，所述过滤的具体方法为：将旋蒸的浓缩液合并，经0.8um过滤器过滤，用适量纯化水冲洗过滤系统，调节pH，0.8um滤膜过滤，可以去除杂质和异物，使产品性状为无色澄明液体
在上述任一方案中优选的是，所述过滤的具体方法为：调节pH时采用4mol/L氢氧化钠溶液或冰醋酸调节pH至2.0-4.0。保证最终的缩宫素溶液的pH在2.0-4.0之间。
本发明的有益效果体现在：本发明提供一种缩宫素的纯化方法，增加纯化工艺有利于去除杂质，提高产品纯度。我们使用制备高效液相，根据缩宫素溶液中的各组分在流动相和固定相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸附的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，根据紫外-可见光检测器检测得的信号，收集到所需的缩宫素组分。再通过旋蒸将缩宫素内有机溶剂蒸发，分离出缩宫素。本发明优化纯化方法(包括对液体通入空气进行氧化时间的调整，以及酸溶液浓度的调整)通过制备柱梯度洗脱以及旋转蒸发，从而提高产品的纯度，残留溶剂小于5000ppm，有关物质，单个杂质≤2.0％，总杂质≤5％。本发明的制备方法操作简单，效率高，得到的缩宫素纯度高，单位效价大于1500单位/ml。
具体实施方式
为了进一步了解本发明的技术特征，下面结合具体实施例对本发明进行详细地阐述。实施例只对本发明具有示例性的作用，而不具有任何限制性的作用，本领域的技术人员在本发明的基础上做出的任何非实质性的修改，都应属于本发明的保护范围。
实施例1：
一种缩宫素的纯化方法，方法包括以下步骤：
1.九肽—中间体生产工艺过程
1.1.制备
将约600ml液氨倒入1L的三颈圆底烧瓶中，将反应瓶放在磁力搅拌器上，再加入九肽中间体16g，搅拌溶解，加入适量氯化铵；
1.2.真空干燥
开启真空泵，拔掉反应瓶上干燥管。待挥发出的氨气抽光，再将弯头塞入瓶口中，控制真空度，以不抽出液体为宜。直到液体抽干，反应瓶壁白色粉末脱落。
1.3.溶解
在不锈钢桶中配制2-4％的冰醋酸溶液20L，加入800ml到干燥后的反应瓶中，溶解干粉并清洗干净，将溶解液倒入不锈钢桶中，补加纯化水至40L，用4mol/L氢氧化钠溶液或冰醋酸调节pH至6.0-8.0，将溶液吸入到玻璃反应釜中。
1.4.氧化
在液体的中下部通入空气进行氧化，保持内温10～35℃，通空气或氧气9小时进行氧化。氧化过后的溶液用0.8um过滤器过滤，加入冰醋酸调节pH值至2.0～4.0，混匀，分装。先过滤后调节pH值，先过滤去除一些大颗粒的杂质，过滤后，再进行上柱，避免有大颗粒的堵塞柱头。
2.中间体—原料药生产工艺过程
2.1纯化
按醋酸：纯化水为1L：20L比例配制(约5％)乙酸水溶液，作为流动相A，异丙醇作为流动相B，分别将A、B两台制备泵的溶剂过滤头放入对应的A、B流动相中，开启两台制备泵、紫外检测器，打开色谱工作站，设定线性流速为150-300cm/h,设定紫外检测波长为280nm，用流动相A冲洗2个柱体积以上，停泵。将A泵的溶剂过滤头放入缩宫素溶液中，设定线性流速为150-300cm/h，运行A泵，开始上样，直至样品全部吸入后，上样结束，停A泵，将A泵的溶剂过滤头放入装有流动相A的烧杯中，设定线性流速为150-300cm/h，用流动相A冲洗1个柱体积以上，对滤头进行冲洗。设定梯度洗脱的程序如表1所示：
表1梯度洗脱程序
时间/min A％ B％
0 97 3
25 97 3
75 85 15
76 75 25
90 75 25
开始洗脱，洗脱液收集入废液桶弃用。观察图谱，在主峰迅速上升时开始收集主峰组分，当主峰下降至出现拐点时开始分段收集(约每分钟收集一瓶)，在出现较大杂质峰的上升处停止收集，继续进行梯度洗脱，将洗脱液流入废液桶。完成有效成分收集后，根据图谱将拐点前的分段收集的有效成分合并入大样，拐点后的收集液弃去。待梯度洗脱运行完成后，关闭制备泵和紫外检测器，完成纯化步骤。
2.2.旋转蒸发
将纯化步骤收集到的有效组分洗脱液合并，再按样品上柱的收集时间判断收集量，并根据合并组分的起终点估算出合并液的体积。用4mol/L氢氧化钠溶液或冰醋酸调节pH至2.0～4.0。计算将合并液平均分成若干等分的量，将一等分的样品液倒入旋蒸瓶中，开启旋转蒸发仪，设定水浴温度为50-55℃，开启真空泵和冷却水，调节调速旋钮，开始旋蒸，若收集瓶中的收集液量多于旋蒸液的26％时(事先计算本次旋蒸需要旋出的量，按旋出量≥需旋蒸量×26％计算)，停止旋蒸，将蒸馏瓶中的缩宫素溶液倒出，重复以上操作，直至旋蒸完所有有效组分。
2.3.过滤
将旋蒸的浓缩液合并，经0.8um过滤器过滤，用适量纯化水冲洗过滤系统，使终体积为5L(若滤后缩宫素溶液体积大于5L，则用约500ml纯化水对过滤系统进行冲洗)，测定pH，若pH不在2.0-4.0，则用4mol/L氢氧化钠溶液或冰醋酸调节pH至2.0-4.0。
2.4.分装
2.4.1.洗瓶
聚乙烯塑料瓶、内塞、瓶盖用重铬酸钾/浓硫酸浸泡或荡洗13～17min，用纯化水冲洗5次，直至pH值近中性为止，80℃烘干。
2.4.2.分装
称出皮重，把溶液分装在经处理过的聚乙烯塑料瓶中。
本发明可以提高纯度，有关物质，单个杂质≤2.0％，总杂质≤5％；残留溶剂，≤5000ppm，每毫升效价可以达到1500单位以上。
实施例2：
一种缩宫素的纯化方法，和实施例1不同的是，设定梯度洗脱的程序如表2所示：
表2梯度洗脱程序
时间/min A％ B％
0 95 5
25 95 5
75 80 20
76 70 30
90 70 30
其他步骤同实施例1，制备的缩宫素质量检测结果如表4所示。
实施例3：
一种缩宫素的纯化方法，和实施例1不同的是：设定梯度洗脱的程序如表3所示：
表3梯度洗脱程序
时间/min A％ B％
0 98 2
25 98 2
75 90 10
76 80 20
90 80 20
其他步骤同实施例1，实施例1-实施例3制备的缩宫素质量检测结果如表4所示。
表4实施例1-实施例3制备的缩宫素质量检测
表4的结果证明，在其他条件相同的情况下，设定梯度洗脱的的最优程序如表1中所示，得到的缩宫素效价最高，在此基础上，无论流动相A增加还是减少，得到的缩宫素效价均明显降低。
实施例4：
一种缩宫素的纯化方法，和实施例1不同的是：
1.5.氧化
在液体的中下部通入空气进行氧化，保持内温10～35℃，通空气或氧气4小时进行氧化。氧化过后的溶液用0.8um过滤器过滤，加入冰醋酸调节pH值至2.0～4.0，混匀，分装在塑料桶中、贴签，每桶装20L。其他步骤同实施例1，本实施例制备的缩宫素效价检测值如表5所示。
实施例5
一种缩宫素的纯化方法，和实施例1不同的是：
1.5.氧化
在液体的中下部通入空气进行氧化，保持内温10～35℃，通空气或氧气约6小时进行氧化。氧化过后的溶液用0.8um过滤器过滤，加入冰醋酸调节pH值至2.0～4.0，混匀，分装在塑料桶中、贴签，每桶装20L。其他步骤同实施例1，本实施例制备的缩宫素效价检测值如表5所示。
实施例6
一种缩宫素的纯化方法，和实施例1不同的是：
1.5.氧化
在液体的中下部通入空气进行氧化，保持内温10～35℃，通空气或氧气约12小时进行氧化。氧化过后的溶液用0.8um过滤器过滤，加入冰醋酸调节pH值至2.0～4.0，分装在塑料桶中、贴签，每桶装20L。其他步骤同实施例1，本实施例制备的缩宫素效价检测值如表5所示。
实施例7
一种缩宫素的纯化方法，和实施例1不同的是：
1.5.氧化
在液体的中下部通入空气进行氧化，保持内温10～35℃，通空气或氧气约14小时进行氧化。氧化过后的溶液用0.8um过滤器过滤，加入冰醋酸调节pH值至2.0～4.0，分装在塑料桶中、贴签，每桶装20L。其他步骤同实施例1，本实施例制备的缩宫素效价检测值如表5所示。
表5实施例1、实施例4、实施例5、实施例6和实施例7制备的的缩宫素效价
检测结果对比。
通空气氧化时间(h) 缩宫素效价值(单位/ml)
实施例1 9 2247单位/ml
实施例4 4 671单位/ml
实施例5 6 1568单位/ml
实施例6 12 1675单位/ml
实施例7 14 523单位/ml
表5的结果证明，在其他条件相同的情况下，通空气氧化的合理时间为6-12小时，在此时间范围内缩宫素效价均大于1500单位/ml，最优时间为9小时，得到的缩宫素效价最高，2247单位/ml，在此基础上，无论氧化时间增加还是减少，得到的缩宫素效价均明显降低。
实施例8
一种缩宫素的纯化方法，和实施例1不同的是：
1.4.溶解
在不锈钢桶中配制1.0％的冰醋酸溶液20L，加入800ml到干燥后的反应瓶中，溶解干粉并清洗干净，将溶解液倒入不锈钢桶中，补加纯化水至40L，用4mol/L氢氧化钠溶液或冰醋酸调节pH至2.0-4.0，将溶液吸入到玻璃反应釜中。其他步骤同实施例1，本实施例制备的缩宫素效价检测值如表6所示。
实施例9
一种缩宫素的纯化方法，和实施例1不同的是：
1.4.溶解
在不锈钢桶中配制5％的冰醋酸溶液20L，加入800ml到干燥后的反应瓶中，溶解干粉并清洗干净，将溶解液倒入不锈钢桶中，补加纯化水至40L，用4mol/L氢氧化钠溶液或冰醋酸调节pH至2.0-4.0，将溶液吸入到玻璃反应釜中。其他步骤同实施例1，本实施例制备的缩宫素效价检测值如表6所示。
实施例10
一种缩宫素的纯化方法，和实施例1不同的是：
1.4.溶解
在不锈钢桶中配制2％的冰醋酸溶液20L，加入800ml到干燥后的反应瓶中，溶解干粉并清洗干净，将溶解液倒入不锈钢桶中，补加纯化水至40L，用4mol/L氢氧化钠溶液或冰醋酸调节pH至2.0-4.0，将溶液吸入到玻璃反应釜中。其他步骤同实施例1，本实施例制备的缩宫素效价检测值如表6所示。
实施例11
一种缩宫素的纯化方法，和实施例1不同的是：
1.4.溶解
在不锈钢桶中配制4％的冰醋酸溶液20L，加入800ml到干燥后的反应瓶中，溶解干粉并清洗干净，将溶解液倒入不锈钢桶中，补加纯化水至40L，用4mol/L氢氧化钠溶液或冰醋酸调节pH至2.0-4.0，将溶液吸入到玻璃反应釜中。其他步骤同实施例1，本实施例制备的缩宫素效价检测值如表6所示。
表6实施例1、实施例7-实施例10制备的的缩宫素效价检测结果对比
表6的结果证明，在其他条件相同的情况下，冰醋酸的浓度在2％-4％范围内，得到的缩宫素效价效价较高，冰醋酸的最优浓度为3.0％，得到的缩宫素效价最高，2247单位/ml，在此基础上，无论冰醋酸的浓度增加还是减少，得到的缩宫素效价均明显降低。

Claims (9)

1.一种缩宫素的纯化方法，包括以下步骤：
步骤（1）、收集液氨进行真空干燥；
步骤（2）、干燥后的反应瓶中加入酸溶液，溶解干粉；
步骤（3）、在步骤（2）得到的液体中下部通入空气或氧气进行氧化，得到缩宫素溶液中间体；
步骤（4）、通过高相液相色谱柱对缩宫素溶液中间体进行纯化；
步骤（5）、将步骤（4）收集到的有效组分洗脱液进行旋转蒸发。
2.根据权利要求1所述的缩宫素的纯化方法，其特征在于：步骤（1）中收集液氨的具体做法为：液氨至反应瓶中，加入九肽中间体、氯化铵至反应瓶中，搅拌溶解得清液。
3.根据权利要求1所述的缩宫素的纯化方法，其特征在于：步骤（1）中真空干燥的具体做法为：开启真空泵，待挥发出的氨气抽光，控制真空度，以不抽出液体为宜，直到液体抽干，反应瓶壁白色粉末脱落。
4.根据权利要求1所述的缩宫素的纯化方法，其特征在于：步骤（2）中干燥后的反应瓶中加入酸溶液后，溶解干粉并稀释，调节pH后，将溶液吸入到玻璃反应釜中。
5.根据权利要求1所述的缩宫素的纯化方法，其特征在于：步骤（2）中酸溶液为2%-4%的冰醋酸溶液。
6.根据权利要求1所述的缩宫素的纯化方法，其特征在于：步骤（3）中氧化时控制温度10-35℃，通空气或氧气6-12小时进行氧化。
7.根据权利要求1所述的缩宫素的纯化方法，其特征在于：步骤（4）中纯化的方法包括以下步骤：
步骤(4.1)、乙酸水溶液作为流动相A，异丙醇作为流动相B，色谱工作站设定线性流速为150-300cm/h,设定紫外检测波长为280nm，用流动相A冲洗；
步骤(4.2)、将A泵的溶剂过滤头放入缩宫素溶液中间体中，设定线性流速为150-300cm/h，开始上样，上样结束，停A泵，将A泵的溶剂过滤头放入装有流动相A的器皿中，设定线性流速为150-300cm/h，用流动相A对滤头进行冲洗；
步骤(4.3)、开始梯度洗脱，分段收集有效成分，完成纯化。
8.根据权利要求7所述的缩宫素的纯化方法，其特征在于：步骤(4.3)中分段收集的具体方法为：在主峰迅速上升时开始收集主峰组分，当主峰下降至出现拐点时开始分段收集，在出现较大杂质峰的上升处停止收集，继续进行梯度洗脱，根据图谱将拐点前的分段收集的有效成分合并入大样，拐点后的收集液弃去，完成纯化步骤。
9.根据权利要求1所述的缩宫素的纯化方法，其特征在于：步骤（5）旋转蒸发的具体方法为：将步骤（4）收集到的有效组分洗脱液合并，按样品上柱的收集时间判断收集量，并根据合并组分的起终点估算出合并液的体积；将样品液倒入旋蒸瓶中，开启旋转蒸发仪，设定水浴温度，开启真空泵和冷却水，调节调速旋钮，开始旋蒸，直至旋蒸完所有有效组分。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113827700A (zh) * 2021-09-30 2021-12-24 上海上药第一生化药业有限公司 含缩宫素的药物组合物及其冻干粉、缩宫素的纯化方法
CN113827700B (zh) * 2021-09-30 2024-06-04 上海上药第一生化药业有限公司 含缩宫素的药物组合物及其冻干粉、缩宫素的纯化方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1845751A (zh) * 2003-09-05 2006-10-11 默克公司 固定相和利用该固定相的纯化方法
CN1990501A (zh) * 2005-12-29 2007-07-04 周逸明 固相多肽合成缩宫素的制备方法
CN101914136A (zh) * 2010-08-17 2010-12-15 安徽宏业药业有限公司 一种液相合成缩宫素的方法
CN103467573A (zh) * 2013-09-02 2013-12-25 深圳翰宇药业股份有限公司 一种卡贝缩宫素的制备方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1845751A (zh) * 2003-09-05 2006-10-11 默克公司 固定相和利用该固定相的纯化方法
CN1990501A (zh) * 2005-12-29 2007-07-04 周逸明 固相多肽合成缩宫素的制备方法
CN101914136A (zh) * 2010-08-17 2010-12-15 安徽宏业药业有限公司 一种液相合成缩宫素的方法
CN103467573A (zh) * 2013-09-02 2013-12-25 深圳翰宇药业股份有限公司 一种卡贝缩宫素的制备方法

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113827700A (zh) * 2021-09-30 2021-12-24 上海上药第一生化药业有限公司 含缩宫素的药物组合物及其冻干粉、缩宫素的纯化方法
CN113827700B (zh) * 2021-09-30 2024-06-04 上海上药第一生化药业有限公司 含缩宫素的药物组合物及其冻干粉、缩宫素的纯化方法

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