CN108004173A - 解淀粉芽孢杆菌菌株及其产生的脂肽混合物与相关应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种解淀粉芽孢杆菌菌株及其产生的脂肽混合物与相关应用，属于微生物发酵技术领域，提供的菌株为Bacillus amyloliquefaciens FJAT‑46737，2017年9月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.14661。其所产生的脂肽混合物包括C14‑C16iturin A，C14‑C16surfactin，C16fengycin A，C16fengycin A2，C16fengycin B和C16fengycin B2。利用该脂肽混合物能够很好的防治动植物病原菌，具有广阔的应用前景。

Description

解淀粉芽孢杆菌菌株及其产生的脂肽混合物与相关应用
技术领域
本发明属于微生物发酵技术领域，具体涉及一株解淀粉芽孢杆菌菌株， 及由该菌株发酵产生的脂肽混合物，以及其在防治病原菌中的应用。
背景技术
番茄青枯病是由青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)引起的一种 毁灭性的土传性维管束病害，轻则减产10％～30％，重则减产50％以上甚至绝 收，造成了巨大的经济损失。该病菌主要通过雨水、灌溉水及农具传播，病 菌从寄主根部或茎基部伤口侵入，在植株体内的维管束组织中扩展，造成导 管堵塞及细胞中毒。目前番茄青枯病防治主要采用栽培措施、作物轮作、品 种抗性选择、化学药剂等，但成效甚微。
研究表明，生物防治以菌治菌、无毒、无污染、无残留，可提高防治植 物病害的能力。芽孢杆菌是一类应用较多的生防细菌，具有抗逆性强、抑菌 谱广、能够在根系定殖、促进植物生长、诱导植物产生抗性等特点，是筛选 生防菌很好的对象。虽然目前已有许多防治青枯病的芽孢杆菌，如枯草芽孢 杆菌(Bacillus subtilis)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)、 蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)、多粘芽孢杆菌(Paenibacilluspolymyxa) 等。但目前大都芽孢杆菌生防制剂处于试验阶段，实际应用少，且存在田间 防效不稳定、防治时间短等问题。所以，筛选到防效好、适应性广的芽孢杆 菌生防菌成为当务之急。
脂肽类抗生素是芽孢杆菌产生的重要抗菌活性物质，能够抗细菌、抗真 菌、抗病毒、抗支原体和抗肿瘤等，具备产量高、生产过程简便、稳定性好、 不易产生耐药性，对人畜毒性低且对环境友好等优点，并且脂肽抗生素还能 够促进细菌在植物根系定殖和诱导植物抗性。因此，脂肽类抗生素可以作为 传统抗生素的替代品，其在农作物病害的生物防治领域具有巨大的研究价值 和应用潜力。
发明内容
为了解决植物病原菌的防治问题，发明人提供了一株防效好、适应性广 的芽孢杆菌生防菌，还提供了一种对病原菌具有很强的抑制作用的脂肽混合 物。技术方案如下：
解淀粉芽孢杆菌菌株FJAT-46737，学名为Bacillus amyloliquefaciens FJAT-46737，分类命名为解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens，于 2017年9月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保 藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.14661。
解淀粉芽孢杆菌菌株产生的脂肽混合物包括C14-C16iturin A，C14-C16 surfactin，C16fengycin A，C16fengycin A2，C16fengycin B和C16fengycin B2。
所述的脂肽混合物的制备方法具体步骤如下：
(1)解淀粉芽孢杆菌菌株FJAT-46737的活化：用接种环将解淀粉芽孢 杆菌菌株FJAT-46737划线于NA固体培养基上，并于恒温培养箱中培养 44-50h，培养温度设定为25-30℃；
(2)种子液的制备：将步骤(1)所获得的解淀粉芽孢杆菌菌株FJAT-46737 的单菌落接种于种子培养基中，并将其置于恒温摇床振荡培养，转速 150-200rpm，温度设定为25-30℃，培养22-26h后即得种子液；
(3)发酵液的制备：将步骤(2)所获得的解淀粉芽孢杆菌菌株FJAT-46737 的种子液接种到已灭菌的发酵培养基中，接种量0.5-2％，搅拌速率150-200rpm，温度设定为25-30℃，发酵培养44-50h，即可得到菌体浓度值 为3.0×108-6.0×108CFU/mL的发酵液；
(4)脂肽混合物的制备：将步骤(3)得到的发酵液离心；离心后弃去 菌体得上清液，在上清液中加入盐酸至pH<2，2-8℃静置22-26h后，再次离 心得到沉淀；利用低温真空冷冻干燥对沉淀进行干燥后，得脂肽混合物。
其中，所述步骤(1)中NA固体培养基的组分为：牛肉浸膏0.3％，蛋白 胨0.5％，葡萄糖1％，琼脂1.8％，以蒸馏水配制，pH 7.0-7.2；所述步骤(2) 中种子培养基与步骤(3)中发酵培养基均为马铃薯葡萄糖营养肉汤PDB，其 组分为：马铃薯浸粉0.5％，蛋白胨1％，氯化钠0.5％，葡萄糖1.5％，以蒸馏 水配制，pH 7.0-7.2；各培养基组分中的百分比均为重量百分比。
解淀粉芽孢杆菌菌株FJAT-46737产生的脂肽混合物在防治病原菌中的应 用。
进一步的，所述病原菌包括青枯雷尔氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、 不同专化型的尖孢镰刀菌中的一种或多种。
一种防治植物病原菌的方法，包括步骤：将上述脂肽混合物配制成脂肽 混合物溶液，将植物苗根系浸泡于该溶液中，取出后移栽于盆中，用于植物 病原菌的防治。所述植物病原菌包括青枯雷尔氏菌、不同专化型的尖孢镰刀 菌中的一种或多种。
进一步的，将上述脂肽混合物配制成脂肽混合物溶液，将番茄苗根系浸 泡于该溶液一段时间，取出后移栽于盆中，用于番茄青枯病的防治。
区别于现有技术，上述技术方案的有益效果在于：
(1)采用解淀粉芽孢杆菌菌株FJAT-46737制备的脂肽混合物对引起番 茄青枯病的青枯雷尔氏菌具有很强的抑制作用，可用于番茄青枯病的防治。
(2)采用浸根方式用脂肽混合物处理植物幼苗，可以尽早并且有效防治 植物病原菌。
(3)采用解淀粉芽孢杆菌菌株FJAT-46737制备的脂肽混合物还对金黄 色葡萄球菌、大肠杆菌、不同专化型的尖孢镰刀菌具有较好的抑制效果，可 用于动植物不同病原菌的防治，防效广。
附图说明
图1解淀粉芽孢杆菌FJAT-46737的菌落形态图
图2解淀粉芽孢杆菌FJAT-46737的16S rRNA进化树
具体实施方式
为详细说明技术方案的技术内容、所实现目的及效果，以下结合具体实 施例并配合附图详予说明。
实施例1：解淀粉芽孢杆菌菌株的筛选
1.菌株的分离
(1)取福建省武夷山市黄岗山土壤样品10g于90mL无菌水中，充分振 荡后吸取1mL土壤悬液进行梯度稀释；
(2)将步骤(1)获得的土壤稀释液涂布于NA固体培养基平板上，然后 将平板置于30℃恒温培养箱内培养48h；
其中，NA固体培养基的组分为：蛋白胨0.5％，牛肉浸膏0.3％，葡萄糖 1.0％，琼脂1.8％，以蒸馏水配制，pH 7.2，各组分中的百分比均为重量比。
(3)先挑取步骤(2)培养获得的单菌落进行涂片，碱性品红染色后镜 检，选取能够产生芽孢的菌株转入斜面培养基保存，作为待测菌株，然后将 待测菌株划线于NA固体培养基平板上，并将该平板置于30℃恒温培养箱内培 养48h；
(4)以青枯雷尔氏菌为指示菌，采用双层平板法对步骤(3)平板上收 集到的待测菌株进行筛选，具体操作为：用NA液体培养基培养青枯雷尔氏菌， 搅拌速率170rpm，温度设定为30℃，培养48h后，吸取青枯雷尔氏菌液0.5mL， 加入到熔化并冷却到50℃的80mL NA半固体培养基中，混匀后作为上层培养 基，倾覆在预先已凝固的下层培养基即NA固体培养基上。待上层培养基凝固， 采用接种环将待测菌株在含青枯雷尔氏菌的平板上划点。而后，将平板置于 30℃恒温培养箱内培养48h，从而筛选出对青枯雷尔氏菌有抑菌效果的菌株。
其中，NA液体培养基的组分为：蛋白胨0.5％，牛肉浸膏0.3％，葡萄糖 1.0％，以蒸馏水配制，pH 7.2，各组分中的百分比均为重量比；NA半固体培 养基的组分为：蛋白胨0.5％，牛肉浸膏0.3％，葡萄糖1.0％，琼脂0.9％， 以蒸馏水配制，pH 7.2，各组分中的百分比均为重量比。
2.菌株的鉴定
将所获得的对青枯雷尔氏菌具有最强抑制作用的菌株进行理化及生物学 特性测定。结果得到菌株FJAT-46737，见图1，其主要形态如下：菌落浅黄 色、干皱、不透明，革兰氏染色呈阳性，营养体细胞杆状；有芽孢，芽孢近 椭圆形，中生或次端生，不膨大。
菌株FJAT-46737的生物学特性测定采用API 20E和API 50CH(购自)，其具体生理生化鉴定结果见表1和表2。
该菌株氧化酶反应为阴性，能水解明胶，不能水解尿素，硝酸盐不能还 原为亚硝酸盐；能利用露醇、肌醇、山梨醇、鼠李糖和蜜二糖作碳源；不能 利用葡萄糖，蔗糖，苦杏仁苷和阿拉伯糖；能利用柠檬酸钠和丙酮酸钠。
该菌株不能利用下列化合物：邻硝基苯-半乳糖苷，精氨酸，赖氨酸， 鸟氨酸，硫代硫酸钠和色氨酸。
该菌株能利用下列化合物产酸：甘油、L-阿拉伯糖、核糖、D-木糖、半 乳糖、葡萄糖、果糖、甘露糖、卫茅醇、肌醇、甘露醇、山梨糖醇、α-甲基 -D-葡糖苷、N-乙酰葡糖胺、苦杏仁苷、熊果苷、七叶灵、柳醇、纤维二糖、 麦芽糖、乳糖、蜜二糖、蔗糖、海藻糖、棉子糖、淀粉、肝糖、龙胆二糖和 D-松二糖；不能利用下列化合物产酸：赤癣醇、D-阿拉伯糖、L-阿拉伯糖、L-木糖、阿东醇、β-甲基-D-木糖甙、山梨糖、鼠李糖、α-甲基-D-甘露糖 甙、菊糖、松叁糖、木糖醇、D-来苏糖、D-塔格糖、D-岩糖、L-岩糖、D-阿 拉伯糖醇、L-阿拉伯糖醇、葡萄糖酸盐、2-酮基-葡萄糖酸盐和5-酮基-葡萄 糖酸盐。
表1菌株FJAT-46737的API 20E测定结果
注：+示有作用或有反应；-示无作用或无反应。
表2菌株FJAT-46737的API 50CH测定结果
注：+示有作用或有反应；-示无作用或无反应。
利用细菌16S rRNA通用引物(Hopwood DA,etc. Genetic Manipulation ofStreptomyces.A Laboratory Manual. Norwich:John Innes Foundation,1985)扩增菌株FJAT-46737的16S rRNA基因序列，获得的序列长度为1422bp。基于16S rRNA基因序列构建了系统发育树如图2所示，结果表明，菌株FJAT-46737与Bacillus amyloliquefaciensFZB42聚在一起，二者的亲缘关系最近，相似度为99.72％。 结合形态学观察、表1和表2的生理生化特性及16S rRNA基因序列鉴定结果， 参考《常见细菌系统鉴定手册》，将菌株FJAT-46737初步鉴定为解淀粉芽孢 杆菌菌株(Bacillus amyloliquefaciens)。
实施例2：脂肽混合物的制备及鉴定
1.脂肽混合物的制备
(1)解淀粉芽孢杆菌菌株FJAT-46737的活化：用接种环将解淀粉芽孢 杆菌菌株FJAT-46737划线于菌株的NA固体培养基上，并于恒温培养箱中培 养48h，且培养温度设定为30℃；其中NA固体培养基的组分为：牛肉浸膏0.3％， 蛋白胨0.5％，葡萄糖1.0％，琼脂1.8％，以蒸馏水配制，pH 7.0-7.2，各培养 基组分中的百分比均为重量比。
(2)种子液的制备：将步骤(1)所获得的解淀粉芽孢杆菌FJAT-46737 的单菌落接种于盛装有种子培养基的三角瓶中(瓶装量为50mL/250mL三角 瓶)，并将三角瓶置于恒温摇床振荡培养，转速170rpm，温度设定为30℃， 培养24h后即得种子液；
(3)发酵液的制备：将步骤(2)所获得的解淀粉芽孢杆菌FJAT-46737 的种子液接种到发酵培养基中，接种量1％，搅拌速率170rpm，温度设定为30℃， 培养48h后，测定的菌体浓度值为5.0×108CFU/mL，则获得所需的发酵液。
其中，步骤(2)中种子培养基与步骤(3)中发酵培养基均为PDB培养 基(马铃薯葡萄糖营养肉汤)，其组分为：马铃薯浸粉0.5％、蛋白胨1％、氯 化钠0.5％、葡萄糖1.5％，以水配制，pH 7.0-7.2，且各培养基组分中的百分 比均为重量比。
(4)脂肽混合物的制备：将步骤(3)得到的发酵液离心，转速为9000rpm； 离心后弃去菌体得上清液，在上清液中加入2mo l/L盐酸至pH<2，4℃静置24h 后，再次离心得到沉淀；利用低温真空冷冻干燥对沉淀进行干燥后，得脂肽 混合物。
2.解淀粉芽孢杆菌FJAT-46737发酵上清液及其脂肽混合物对番茄青枯 雷尔氏菌的平板拮抗试验
(1)试验材料
预先在平板上培养2d的病原菌——番茄青枯雷尔氏菌FJAT-91(郑雪 芳等.番茄青枯病生防芽孢杆菌的筛选与鉴定.中国生物防治学报,2016, 32(5)：657-665)，该菌种保存于福建省农业科学院农业生物资源研究所菌 种保藏库。
(2)试验方法
采用抑菌圈法测定不同培养基、不同温度和不同初始pH值条件下培养的 解淀粉芽孢杆菌FJAT-46737上清液及脂肽混合物对青枯雷尔氏菌的抑制作 用。不同培养基组成见表3。
表3培养基成分组成表
青枯雷尔氏菌在30℃、170rpm下培养2d后，吸取青枯雷尔氏菌液0.5mL， 加入到熔化并冷却到50℃的80mL NA半固体培养基中，混匀后作为上层培养 基，倾覆在预先已凝固的下层培养基即NA固体培养基上。待上层培养基凝固， 平板冷却后在平板中间打直径7mm孔，分别注入脂肽混合物(用甲醇配成终浓 度为10mg/mL)的溶液80μL，以无菌甲醇溶液为空白对照，以0.16mg/mL的 链霉素为阳性对照，每个处理3次重复，30℃培养2d后，测抑菌圈直径。
(3)试验结果
不同培养基组成、温度和初始pH值条件下培养得到的解淀粉芽孢杆菌 FJAT-46737发酵上清液和脂肽混合物对青枯雷尔氏菌的抑制作用如表4所示。 从表4中可以看出，除培养基A得到芽孢杆菌FJAT-46737的发酵上清液抑菌 能力弱外，其他五种培养基得到的芽孢杆菌FJAT-46737发酵上清液和脂肽混 合物均对青枯雷尔氏菌具有较强的抑制作用，其中采用C、D和E培养基培养 得到的发酵上清液和脂肽混合物抑制效果最强，且他们的抑菌能力无显著差 异。
选择E培养基进行芽孢杆菌FJAT-46737的不同培养温度实验。结果表明， 当培养温度≥35℃，芽孢杆菌FJAT-46737的发酵上清液无抑菌效果，当培养 温度为40℃时，得到的脂肽混合物无抑菌效果，该菌株在25℃下培养得到的 发酵上清液和脂肽混合物抑菌效果最强。
选择E培养基，调整不同初始pH值，在25℃下培养。研究发现，不同初 始pH值培养基培养芽孢杆菌FJAT-46737的上清液和脂肽混合物对青枯雷尔氏 菌的抑制能力无显著差异。
表4不同培养条件下发酵上清液和脂肽混合物对青枯雷尔氏菌的抑制作用
注：同一行不同字母表示经Duncan法检测在0.05水平上差异显著。
3.对能够防治番茄青枯病的脂肽混合物组成进行测定
(1)试验材料
30mg/mL脂肽混合物
(2)试验方法
利用LC-QTOF-MS/MS技术对芽孢杆菌FJAT-46737产生的脂肽混合物进行 测定，测试条件如下：
液相色谱条件：色谱柱为Agilent ZORBAX Extend-C18色谱柱(2.1×150mm， 1.8-Micron)，流速为0.3mL/min；流动相A为0.1％甲酸水；流动相B为甲醇； 洗脱程序0，60％B；60min,100％B；65min,60％B。
质谱条件：ESI(+/–)、干燥气温度350℃、干燥气流速8L/min、雾 化气压力(nebulizer)30psig、Fragmentor 175V、Collision Energy 100 V、Skimmer 65V、扫描方式auto MS/MS；离子扫描范围：100–3000m/z。
(3)试验结果
利用LC-QTOF-MS/MS技术对芽孢杆菌FJAT-46737产生的脂肽混合物进行 测定，脂肽混合物组成如表5所示。结果表明，解淀粉芽孢杆菌FJAT-46737 产生的脂肽混合物包括C14-C16iturin A,C14-C16surfactin,C16fengycin A, C16fengycin A2,C16fengycin B和C16fengycin B2。
表5解淀粉芽孢杆菌FJAT-46737的脂肽混合物组成
实施例3：脂肽混合物对番茄青枯病的盆栽防治试验
(1)试验材料
供试品种：农科180番茄，购自福建农科农业良种开发有限公司。
(2)试验方法
试验地点设在福建省农业科学院温室，分别设置处理组1(芽孢杆菌浓度 为1.0×108CFU/mL)、处理组2(发酵上清液2倍稀释处理组)、处理组3(1mg/ml 脂肽混合物浸根1h)、阳性对照组(只接种青枯雷尔氏菌)、阴性对照组(清 水)，每组实验30株番茄苗，每盆3株。
处理组1：芽孢杆菌FJAT-46737经NA固体培养基平板活化后，接种于PDB 液体培养基中，于170rpm、25℃培养48h，菌液稀释至108CFU/mL；
处理组2：将发酵液离心后，弃去菌体，得到上清液，稀释2倍；将稀释 的发酵上清液灌根接种4～5叶龄的番茄盆栽苗上，100mL/盆；
处理组3：将4～5叶龄的番茄苗根系浸泡于1mg/mL脂肽混合物溶液中1h 后，取出移栽于盆中。
3d后接种致病性青枯雷尔氏菌FJAT-91(接种浓度108CFU/mL)，接种量 为100mL/盆，以只接种致病性青枯雷尔氏菌FJAT-91的番茄苗做阳性对照， 以清水为阴性对照。接种后每天观察番茄植株的发病情况，阳性对照发病率90％以上时，统计不同处理番茄植株的发病率，并计算芽孢杆菌FJAT-46737、 发酵上清液和脂肽混合物对番茄青枯病的防治效果。
番茄病情分级标准：0级：无症状；1级：1片叶萎蔫；2级：2-3片叶萎蔫； 3级：除顶部2-3片叶外，其他叶片萎蔫；4级：整株叶片萎蔫。
病情指数＝100×∑(各级病叶数×各级代表值)/(调查总叶数×最高级 代表值)
相对防治效果(％)＝(阳性对照组病情指数—处理组病情指数)/阳性对 照病情指数×100％
(3)试验结果
为了评估解淀粉芽孢杆菌FJAT-46737的盆栽防效，设置了发酵液处理组 1、阳性对照和阴性对照。盆栽实验结果表明，接种第7d，阳性对照发病率为 94.4％，病情指数为93.8％；阴性对照组发病率为0；处理组1发病率为36.7％， 病情指数为31.7％，计算其防效为66.2％。
进一步，为了明确解淀粉芽孢杆菌FJAT-46737的生防机理，设置了发酵 上清液处理组2、脂肽混合物处理组3、阳性对照和阴性对照。盆栽实验结果 表明，接种第7天，阳性对照发病率为100％，病情指数为97.2％；阴性对照 发病率为0％；处理组2发病率为23.33％，病情指数为17.5％；处理组3发病 率为3.7％，病情指数为3.7％。计算的处理组2和处理组3的盆栽防效分别是 82.0％和96.2％。所以，采用脂肽混合物浸根方式处理番茄苗，对致病性青枯 雷尔氏菌能起到很好的防治效果。同样，也能用脂肽混合物浸根方式处理花 生苗等其他植物幼苗，来防治青枯雷尔氏菌等植物病原菌。
实施例4：脂肽混合物对多种病原菌的平板拮抗试验
(1)试验材料
预先在平板上培养2-7d的病原菌，包括青枯雷尔氏菌、金黄色葡萄球菌、 大肠杆菌、不同专化型的尖孢镰刀菌，各菌株保存于福建省农业科学院农业 生物资源研究所菌种库。
(2)试验方法
采用抑菌圈法测定不同浓度的芽孢杆菌FJAT-46737产生的脂肽混合物对 多种病原菌的抑制作用。病原菌在30℃、170rpm下培养2d后，吸取病原菌 液0.5mL，加入到熔化并冷却到50℃的80mL含0.9％琼脂的半固体培养基(青 枯雷尔氏菌和金黄色葡萄球菌用NA培养基、大肠杆菌用LB培养基、尖胞镰 刀菌用PDB培养基)中，混匀后作为上层培养基，倾覆在预先已凝固的含1.8％ 琼脂的下层培养基(青枯菌和金黄色葡萄球菌用NA固体培养基；大肠杆菌用 LB固体培养基；尖胞镰刀菌用PDA固体培养基，其组分为新鲜土豆250g/L、 葡萄糖20g/L、琼脂18g/L，以蒸馏水配制，pH 7.0-7.2)上。待上层培养基 凝固，平板冷却后在平板中间打直径7mm孔，分别注入不同浓度脂肽混合物 (2.5-30mg/mL)的溶液80μL，以无菌甲醇溶液为空白对照，细菌以0.16mg/mL 的链霉素为阳性对照，真菌为0.5mg/mL潮霉素为阳性对照，每个处理3次重 复，30℃培养2-5d后，测抑菌圈直径。
(3)试验结果
芽孢杆菌FAJT-46737产生的脂肽混合物对青枯雷尔氏菌、金黄色葡萄球 菌、大肠杆菌、不同专化型的尖孢镰刀菌抑菌结果如表6和表7所示。结果 表明，该菌产生的脂肽混合物对多种病原菌均具有较强的抑制效果，且呈剂 量效应，浓度越高，抑菌效果越好。
表6不同浓度的脂肽混合物对多种病原细菌的抑制作用
表7不同浓度的脂肽混合物对不同专化型尖孢镰刀菌的抑制作用
综上，本发明利用解淀粉芽孢杆菌FJAT-46737(Bacillus amyloliquefaciensFJAT-46737)制备所得的脂肽混合物不仅对番茄青枯病 病原菌具有较强的抑制作用，并且采用浸根方式早期防治植物病原菌也具有 很好的效果，而且对除青枯菌以外的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和尖孢镰刀 菌都具有很好的防治效果。因此，本发明在病原菌，尤其是植物病原菌防治 方面具有广阔的应用前景。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利所做的均等变 化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。

Claims (8)

1.解淀粉芽孢杆菌菌株，其特征在于：所述的菌株为解淀粉芽孢杆菌FJAT-46737，学名为Bacil/us amyloliquefaciens FJAT-46737，于2017年9月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.14661。
2.一种如权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌菌株产生的脂肽混合物，其特征在于：所述的脂肽混合物包括C14-C16 iturin A，C14-C16 surfactin，C16 fengycin A，C16 fengycinA2，C16 fengycin B和C16 fengycin B2。
3.一种脂肽混合物的制备方法，其他特征在于，包括以下步骤：
解淀粉芽孢杆菌菌株FJAT-46737的活化：用接种环将解淀粉芽孢杆菌菌株FJAT-46737划线于NA固体培养基上，并于恒温培养箱中培养46-50h，培养温度设定为25-30℃，得到活化的解淀粉芽孢杆菌菌株FJAT-46737；
种子液的制备：将所述活化的的解淀粉芽孢杆菌菌株FJAT-46737的单菌落接种于种子培养基中，并将其置于恒温摇床振荡培养，转速150-200rpm，温度设定为25-30℃，培养22-26h后即得种子液；
发酵液的制备：将获得的解淀粉芽孢杆菌菌株FJAT-46737的种子液接种到已灭菌的发酵培养基中，接种量0.5-2％，搅拌速率150-200rpm，温度设定为25-30℃，发酵培养44-50h，即可得到菌体浓度值为3.0×108-6.0×108CFU/mL的发酵液；
脂肽混合物的制备：将发酵液离心；离心后弃去菌体得上清液，在上清液中加入盐酸至pH＜2，2-8℃静置22-26h后，再次离心得到沉淀；利用低温真空冷冻干燥对沉淀进行干燥后，得脂肽混合物。
4.根据权利要求3所述的脂肽混合物的制备方法，其特征在于：所述的NA固体培养基的组分为：牛肉浸膏0.3％，蛋白胨0.5％，葡萄糖1％，琼脂1.8％，以蒸馏水配制，pH 7.0-7.2；所述的种子培养基与发酵培养基均为马铃薯葡萄糖营养肉汤PDB，其组分为：马铃薯浸粉0.5％，蛋白胨1％，氯化钠0.5％，葡萄糖1.5％，以蒸馏水配制，pH 7.0-7.2；各培养基组分中的百分比均为重量百分比。
5.一种如权利要求2或3所述的脂肽混合物在防治病原菌中的应用。
6.根据权利要求5所述的脂肽混合物在防治病原菌中的应用，其特征在于：所述病原菌包括青枯雷尔氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、不同专化型的尖孢镰刀菌中的一种或多种。
7.一种防治植物病原菌的方法，其特征在于，包括步骤：将权利要求2或3所述的脂肽混合物配制成脂肽混合物溶液，将植物苗根系浸泡于该溶液中，取出后移栽于盆中，用于植物病原菌的防治。
8.根据权利要求7所述防治植物病原菌的方法，其特征在于：所述植物病原菌包括青枯雷尔氏菌、不同专化型的尖孢镰刀菌中的一种或多种。
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