CN104031960A - 一种解淀粉芽孢杆菌胞外抗菌脂肽的提取方法及应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种解淀粉芽孢杆菌胞外抗菌脂肽的提取方法及应用，将解淀粉芽孢杆菌接种在LB培养基上培养，然后转接至发酵培养基中培养，培养完后离心，收集培养液上清，将培养液上清酸沉淀后冻干，即得到粗提的解淀粉芽孢杆菌胞外抗菌脂肽。该抗菌脂肽对指示病原菌腊状芽孢杆菌、大肠杆菌O157:H7、产黑色素蜡样芽孢杆菌具有显著的抑菌效果，同时还可抑制多种引起食品腐败变质的革兰氏阳性菌及革兰氏阴性菌。该抗菌脂肽具有良好的蛋白酶稳定性、热稳定性及有机溶剂稳定性，可作为果蔬、食品、饲料等的天然添加剂及生物制品等，具有良好的应用前景。

Description

一种解淀粉芽孢杆菌胞外抗菌脂肽的提取方法及应用

技术领域

本发明属于微生物代谢产物及其应用技术领域，涉及一种解淀粉芽孢杆菌胞外抗菌脂肽的提取方法及应用。

背景技术

微生物杀菌剂的特性与发展趋势与人类生态环境、食品安全、生物多样性等具有良好的相容性，加上现代微生物工业化生产技术体系日趋完善，微生物杀菌剂的研发已经成为热点。微生物杀菌剂目前在我国应用较多的主要是作为微生物农药进行植物病害防治。由于芽孢杆菌具有抑制植物病害的能力，又是自然界中广泛存在的非致病菌，对人畜无害、环境安全，因而备受关注，其中解淀粉芽孢杆菌是重要的生物防止细菌之一。

Caldelra等分离到一株解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)CCMI1051对根霉(Rhizopussp)L-122和哈茨木霉(Trichoderma harzianum)CCMI783等具有强烈的抑制作用。Arrebola等报道解淀粉芽孢杆菌PPCB004可抑制Penicillium crustosum Thom等青霉属真菌的菌丝延伸；Sutyak等人从酸奶厂的益生菌乳制品中分离出1株解淀粉芽孢杆菌，其培养物上清对李斯特菌(Listeriamonocytogenes)、阴道加德纳菌和无乳链球菌有抑制效果，其有效抑菌物质为细菌素。研究表明：芽孢杆菌及其产生的抑菌物质在植物病害生物防治中具有巨大的应用潜力。

王英国等人从堆肥中分离到一株解淀粉芽孢杆菌，其对于尖孢镰刀菌、草莓蛇病菌等植物病原真菌均有很强的抑制作用。李潞滨等人从各地大花惠兰种植地采集的土样中筛选出对大花惠兰根腐病病原菌尖孢镰刀菌具有拮抗活性的解淀粉芽孢杆菌ZL725。王奕文等人首次从不同甜瓜果实表面分离到一株解淀粉芽孢杆菌，对灰葡萄孢、链格孢、尖孢镰刀菌、黑曲霉和粉红单端孢等8种果蔬采后病原真菌显著且广谱的拮抗作用。姜军坡等人从健康牛的粪便中筛选出对大肠杆菌有抑制作用的解淀粉芽孢杆菌BN-9。陈士云等分离的解淀粉芽孢杆菌CH-2对油菜核盘菌具有显著的抑菌作用，可抑制菌丝进一步形成菌核的能力。刘俏等分离的解淀粉芽孢杆菌能强烈一只镰刀菌、曲霉、青霉、毛霉等食品腐败真菌。

芽孢杆菌属(Bacillus spp.)细菌可产生多种抗菌类活性物质，包括脂肽类、肽类、磷脂类、多烯类、氨基酸类、核酸类等，对多种动物、植物及人类病原菌又很好的抑制作用，同时芽孢杆菌还可产生胞外蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶等，因此被广泛用于医药、食品、化妆品、饲料加工、农药、环境保护等行业。

芽孢杆菌产生的抗菌物质主要有小分子的抗生素和大分子的拮抗蛋白或细胞壁降解酶类两大类物质。孙立军等从解淀粉芽孢杆菌ES-2中分离出一系列抗菌脂肽具有抗细菌、真菌、病毒、支原体的功能及良好的表面活性作用。Romano等从解淀粉芽孢杆菌BO5A中分离出的环状脂肽对尖孢镰刀菌、黑曲霉、葡萄贵腐霉、青霉具有很好的抑制作用。Arias等从解淀粉芽孢杆菌GA1中分离出的一菌脂肽对革兰氏阳性菌有特异的抑制作用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens C-1胞外抗菌脂肽的提取方法及应用，该抗菌脂肽具有良好的抑菌效果，为探寻新型生物抗菌类物质开拓了新思路及新研究领域。

为达到上述目的，本发明采取的技术方案为：

一种解淀粉芽孢杆菌胞外抗菌脂肽的提取方法，包括以下步骤：

1)将解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens C-1单菌落接种在LB液体培养基中，在20～40℃下培养过夜；然后转接至种子培养基中，在20～40℃下培养5h，再转接至发酵培养基中，在20～40℃下培养36～72h；其中种子培养基和发酵培养基是在LB液体培养基中添加质量分数为0.5～5％的葡萄糖或蔗糖作为附加碳源；

2)培养完成后，离心，收集培养液上清；

3)将培养液上清依次经酸沉淀、冻干后得到解淀粉芽孢杆菌胞外抗菌脂肽。

所述步骤1)的具体步骤是将解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens C-1单菌落接种在LB液体培养基中，在20～40℃下、150～250rpm恒温摇床中培养过夜，得到培养物；然后按照1～3％的转接量将培养物转接至种子培养基中，在20～40℃下、150～250rpm恒温摇床中培养5h，得到种子培养物；再按1～3％的转接量将种子培养物转接至发酵培养基中，在20～40℃下、150～250rpm恒温箱中培养36～72h。

所述步骤2)中的离心是在10000rpm、10min、4℃的条件下离心收集培养液上清。

所述的骤3)的具体步骤是调节培养液上清的pH值小于等于2.0，混匀后在4℃下静置，然后离心收集沉淀，将沉淀冷冻干燥后即为提取的解淀粉芽孢杆菌胞外抗菌脂肽。

所述的步骤3)中用浓度为6mol/L的盐酸调节培养液上清的pH值；静置时间为12～24h；离心是在10000rpm、10min、4℃的条件下离心收集沉淀。

所述的提取方法提取的解淀粉芽孢杆菌胞外抗菌脂肽在制备抗菌药物中的应用。

所述的抗菌药物为抗革兰氏阳性菌药物和或抗革兰氏阴性菌药物。

所述的抗革兰氏阳性菌药物为抗产黑色素蜡样芽孢杆菌药物、抗蜡样芽孢杆菌药物、抗枯草芽孢杆菌药物、抗金黄色葡萄球菌药物中的一种或几种；

所述的抗革兰氏阴性菌药物为抗大肠杆菌药物、抗沙门氏菌药物、抗痢疾志贺氏菌药物中的一种或几种。

所述的抗大肠杆菌药物为抗大肠杆菌O157：H7药物。

所述的提取方法提取的解淀粉芽孢杆菌胞外抗菌脂肽在制备生物型抑菌剂、免疫佐剂、食品添加剂、饲料添加剂、化妆品添加剂及保健食品中的应用。

相对于现有技术，本发明具有一下有益效果：

本发明提供的解淀粉芽孢杆菌胞外抗菌脂肽的提取方法，将解淀粉芽孢杆菌菌株Bacillus amyloliquefaciens C-1(简写为B.amyloliquefaciens C-1，现保存于中国典型培养物保藏中，保藏号为CCTCC NO:M2012177)进行常规的发酵培养，再对培养液上清进行酸沉淀，即得到解淀粉芽孢杆菌胞外抗菌脂肽。该方法具有抗菌脂肽产量高(1.2g/L)，发酵、提取操作简单，适用于工业化规模生产，开发应用潜在价值大等优点。

本发明提取的解淀粉芽孢杆菌胞外抗菌脂肽具有显著的抑菌效果，对指示病原菌蜡样芽孢杆菌、大肠杆菌O157:H7、产黑色素蜡样芽孢杆菌具有显著的抑菌效果，对这三株菌的6h抑菌率分别为70％、93％、96％，同时该抗菌脂肽还可抑制多种引起食品腐败变质的革兰氏阳性菌(如枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌等)以及革兰氏阴性菌(如大肠杆菌、沙门氏菌、痢疾志贺氏菌等)，能够应用于制备抗菌药物。且该抗菌脂肽具有良好的蛋白酶稳定性、热稳定性及有机溶剂稳定性。该抗菌脂肽作为生物型抑菌剂，可用作兽药注射剂、免疫佐剂等生物制品、以及果蔬、食品、饲料等的天然添加剂、化妆品添加剂、保健食品原料等，具有良好的应用前景。

具体的，该抗菌脂肽对蛋白酶(蛋白酶K、胃蛋白酶、胰蛋白酶)处理非常稳定，其对大肠杆菌O157:H7的抑菌率分别为处理前的95％、99％、99％，对产黑色素蜡样芽孢杆菌B.cereus MS10362R的抑菌率分别为处理前的97％、93％、99％。该抗菌脂肽对温度(50℃、80℃、120℃)处理不敏感，对大肠杆菌O157:H7的抑菌率分别为处理前的95％、92％、90％，对产黑色素蜡样芽孢杆菌B.cereus MS10362R的抑菌率分别为处理前的97％、98％、95％，处理前后的抑菌效果无显著差异。该抗菌脂肽对有机溶剂(甲醇、丙酮、乙腈)处理非常稳定，均保持活性，对大肠杆菌O157:H7的抑菌率分别为处理前的95％、92％、90％，对产黑色素蜡样芽孢杆菌B.cereus MS10362R的抑菌率分别为处理前的94％、93％、90％，在甲醇中的活性最高。

附图说明

图1为B.amyloliquefaciens C-1菌株的形态，其中A为在固体培养基上的菌落形态；B为扫描电子显微镜下的菌体形态；

图2为B.amyloliquefaciens C-1发酵液上清的抑菌圈。测试菌为产黑色素B.cereus MS10362R，1，2，3，4，6，7分别代表12h、24h、36h、48h、60h、72h的发酵液无菌上清样品，空白孔为四环素阳性对照；

图3为B.amyloliquefaciens C-1发酵液上清调节pH值后酸沉淀出的胞外抗菌脂肽；

图4为B.amyloliquefaciens C-1胞外抗菌脂肽的抑菌圈。左上为测试菌E.coliO157：H7，右上为测试菌B.cereus CMCC63301，下方为测试菌产黑色素B.cereus MS10362R，其中“原”代表培养物上清，“上”代表析出抗菌脂肽后的上清，“下”代表提取出的抗菌脂肽。

图5是B.amyloliquefaciens C-1胞外抗菌脂肽对E.coliO157：H7(A)、B.cereus CMCC63301(B)、B.cereus MS10362R(C)生长的抑制作用曲线图。

具体实施方式

发明人所在的实验室从免洗蔬菜拼盘样品中分离出的一株解淀粉芽孢杆菌菌株Bacillus amyloliquefaciens C-1(简写为B.amyloliquefaciens C-1)，现保存于中国典型培养物保藏中(CCTCC)，保藏号为CCTCC NO:M2012177。该菌高产胞外多糖，且表现出良好的抑制肿瘤细胞生长及诱导凋亡的效果(已申请专利，申请号：201210268667.0)。同时该菌的发酵液上清还具有显著的抑菌效果，且实验已证明该抑菌效果与胞外多糖无关。目前已证实该菌株能够产生具有显著抑菌作用的胞外代谢产物-脂肽类活性物质(抗菌脂肽)，特别是对致病菌大肠杆菌O157：H7的抑菌作用为首次报道，同时具有非常稳定的耐热性、耐蛋白酶作用、耐有机溶剂处理等特性。解淀粉芽孢杆菌菌株Bacillus amyloliquefaciensC-1产生的胞外抗菌脂肽可作为果蔬、食品、饲料、化妆品等的天然食品添加剂及生物制品等，具有良好的应用前景，并且适用于工业化生产，开发应用潜在价值大。

1)解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens C-1分离株的理化性质

将B.amyloliquefaciens C-1菌株划线培养于LB+1％葡萄糖的固体培养基上30℃培养，观察菌苔、菌落形态(24h培养物)；显微镜下观察菌体(24h培养物)及芽孢形态(60h培养物)。从平板培养基上调取单菌落接种于LB+1％葡萄糖的液体培养基中30℃培养过夜，采用细菌成套生化鉴定管鉴定C-1的生化性质，包括氧化酶、MR/VP试验、明胶、淀粉、酪蛋白水解试验、赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶、山梨醇、纤维二糖、葡萄糖及棉子糖的发酵、半固体动力实验、柠檬酸盐利用实验、硝酸盐还原试验。分别将C-1菌株接种于LB+1％葡萄糖培养基中5℃、30℃、37℃、50℃培养，观察C-1的最佳生长状态。

结果：C-1菌株在LB+1％葡萄糖的固体培养基上的菌苔呈白色、湿润、饱满(图1A)；菌体杆状，长度约1.9～4.0μm，宽度约0.8～1.1μm，革兰氏阳性、杆状、形成芽孢，芽孢椭圆(图1B)。好氧，化能异养，氧化酶阴性，M.R试验阴性，VP试验阳性，可水解明胶、淀粉、酪蛋白，赖氨酸脱羧酶阴性，鸟氨酸脱羧酶阴性，发酵山梨醇、纤维二糖、葡萄糖，不发酵棉子糖，半固体动力实验阳性，西蒙氏柠檬酸盐利用实验阴性，硝酸盐还原阳性。5℃、50℃菌不生长，最适生长温度为30℃。

2)解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens C-1发酵产胞外抑菌物质

接种B.amyloliquefaciens C-1单菌落至3mL LB液体培养基，20～40℃、150～250rpm恒温摇床中培养过夜；次日按照1～3％的转接量将培养物转接至含50mL种子培养基的锥形瓶中，20～40℃、150～250rpm恒温摇床中培养5h，按1～3％的转接量转接至4个250ml装有150ml C-1发酵培养基的锥形瓶中，20～40℃、150～250rpm恒温箱中培养36～72h，其中种子培养基和发酵培养基是在LB液体培养基中添加质量分数为0.5～5％的葡萄糖或蔗糖作为附加碳源。培养完成后于4℃、10000rpm离心10min，收集培养液上清，用浓度为6mol/L的盐酸调节培养液上清的pH值小于等于2.0，混匀后在4℃下静置12～24h，然后4℃、10000rpm离心10min收集沉淀，将沉淀冷冻干燥后即为提取的解淀粉芽孢杆菌胞外抗菌脂肽。

3)解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens C-1发酵上清抑菌试验

以革兰氏阳性细菌产黑色素蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)MS10362R作为测试菌，同时也选择了可引起食品腐败变质的革兰氏阳性菌蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)CMCC63301、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)subsp.subtilisstr.168、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)W12，革兰氏阴性菌大肠杆菌(Escherichia coli)O157：H7、沙门氏菌(Salmonella spp.)cdc87、痢疾志贺氏菌(Shigella spp.)cdc181。采用牛津杯法测定。测试菌涂布于LB固体平板培养基上，每个牛津杯里加过滤除菌上清200μl，蜡样芽孢杆菌在30℃培养箱培养，大肠杆菌在37℃培养箱培养，24h后观察抑菌圈。

Bacillus amyloliquefaciens C-1菌株在LB+1％葡萄糖液体培养基中30℃震荡培养60h，取培养物上清，以产黑色素蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)MS10362R为测试菌，抑菌效果最为显著(图2)，胞外脂肽产量达到峰值。测试菌株的抑菌圈见表1。

表1发酵液上清的抑菌效果

*革兰氏阳性细菌使用四环素，革兰氏阴性细菌使用卡那霉素

4)解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens C-1胞外脂肽提取

B.amyloliquefaciens C-1种子培养物按3％转接量接入250ml LB+1％葡萄糖培养基中，30℃，200rpm震荡培养60h，4℃、10000rpm离心10min取上清，上清液用6M盐酸调节pH值至2.0，混匀后4℃静置24h，4℃、10000rpm离心10min收集脂肽沉淀，冷冻干燥后为粗提脂肽，产量为1.2g/L(图3)。

5)解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens C-1胞外脂肽的抑菌圈

将脂肽溶解用无菌水配成10mg/ml的溶液，过滤除菌，以革兰氏阳性细菌蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)CMCC63301、产黑色素蜡样芽孢杆菌(Bacilluscereus)MS10362R和大肠杆菌(Escherichia coli)O157：H7作为测试菌，采用牛津杯法测定。测试菌涂布于LB固体平板培养基上，每个牛津杯里加脂肽溶液200μl，蜡样芽孢杆菌在30℃培养箱培养，大肠杆菌在37℃培养箱培养，24h后观察抑菌圈。

结果：以B.cereus CMCC63301、产黑色素B.cereus MS10362R、E.coliO157：H7作为测试菌，采用牛津杯法测定，其抑菌圈直径为分别为15mm、20mm、22mm(图4)；对这3株菌的6h抑菌率分别为70％、96％、93％，其对测试菌株的生长抑制曲线见图5。

6)解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens C-1胞外脂肽的抑菌率

革兰氏阳性细菌蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)CMCC63301、产黑色素蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)MS10362R和大肠杆菌(Escherichia coli)O157：H7作为测试菌，过夜培养，培养液用LB液体培养基稀释至1％，取2ml分别置入24孔板中，每孔加入20μl10mg/ml脂肽溶液，混匀，加入20μl无菌水的孔作为阴性对照。酶标仪测定初始的OD₆₀₀。将24孔板分别置于30℃(蜡样芽孢杆菌)、37℃(大肠杆菌)培养6h，每小时测定一次OD₆₀₀，观察脂肽对病原菌生长的抑制作用，并绘制抑制曲线，计算抑制率。

抑制率＝1-(B₂-B₀)/(A₂-A₀)×100％

A为阴性对照组OD₆₀₀，A₀为oh数据，A₂为6h数据；

B为添加脂肽的处理组OD₆₀₀，B₀为oh数据，B₂为6h数据。

7)解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens C-1胞外脂肽的稳定性

10mg/ml脂肽溶液分别置于80℃、100℃、120℃下处理30min，处理后放于室温，对处理后的脂肽溶液进行6)的抑菌活性测定实验，以未处理的脂肽为阳性对照。绘制抑制曲线，并计算抑制率。

10mg/ml脂肽溶液分别用0.1％胰蛋白、0.1％胃蛋白酶、0.1％蛋白酶K处理，37度孵育1h，对处理后的脂肽溶液进行6)的抑菌活性测定实验，以未处理的脂肽为阳性对照。绘制抑制曲线，并计算抑制率。

分别用甲醇、乙腈、丙酮溶解脂肽，配成10mg/ml脂肽溶液，对处理后的脂肽溶液进行6)的抑菌活性测定实验，以未处理的脂肽为阳性对照。绘制抑制曲线，并计算抑制率。

结果：对测试菌E.coliO157：H7，C-1脂肽对蛋白酶(蛋白酶K、胃蛋白酶、胰蛋白酶)处理非常稳定，其抑菌率分别为处理前的95％、99％、99％。C-1脂肽对温度(50℃、80℃、120℃)处理不敏感，抑菌率分别为处理前的95％、92％、90％，处理前后的抑菌效果无显著差异。C-1脂肽对有机溶剂(甲醇、丙酮、乙腈)处理非常稳定，均保持活性，其抑菌率分别为处理前的95％、92％、90％，在甲醇中的活性最高。

对测试菌产黑色素B.cereus MS10362R，C-1脂肽对蛋白酶(蛋白酶K、胃蛋白酶、胰蛋白酶)处理非常稳定，其抑菌率分别为处理前的97％、93％、99％。C-1脂肽对温度(50℃、80℃、120℃)处理不敏感，抑菌率分别为处理前的97％、98％、95％，处理前后的抑菌效果无显著差异。C-1脂肽对有机溶剂(甲醇、丙酮、乙腈)处理非常稳定，均保持活性，其抑菌率分别为处理前的94％、93％、90％，在甲醇中的活性最高。

表2不同处理的B.amyloliquefaciens C-1脂肽对E.coliO157：H7、B.cereusMS10362R生长的抑制作用

本发明涉及一株解淀粉芽孢杆菌的发酵、抗菌脂肽的提取方法，及抗菌脂肽的抑菌活性、抑菌谱鉴定、稳定性等研究，属于微生物学技术领域。粗提的B.amyloliquefaciens C-1胞外抗菌脂肽对指示病原菌蜡样芽孢杆菌、大肠杆菌O157:H7、产黑色素蜡样芽孢杆菌具有显著的抑菌效果，同时还可抑制多种引起食品腐败变质的革兰氏阳性菌，如枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌等，革兰氏阴性菌，如大肠杆菌、沙门氏菌、痢疾志贺氏菌；该抗菌脂肽具有良好的蛋白酶稳定性、热稳定性及有机溶剂稳定性。

本发明利用B.amyloliquefaciens C-1生产抗菌脂肽物质，可作为果蔬、食品、饲料、化妆品等的天然食品添加剂、生物制品等，具有良好的应用前景，并且该菌株抗菌脂肽产量高，发酵简单，适用于工业化规模生产，开发应用潜在价值大。

可对B.amyloliquefaciens C-1菌株进行分子生物学改造，在原有基础上进一步提高产脂肽能力，经规模发酵并提取脂肽，作为生物型抑菌剂，用于保健食品原料、食品添加剂、饲料添加剂、化妆品、兽药注射剂、免疫佐剂等。

开发新型细菌胞外脂肽功能产品，也可与其他活性物质(多糖类、多酚类等)协同作用，获得复合活性添加物。

Claims (10)

1.一种解淀粉芽孢杆菌胞外抗菌脂肽的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens C-1单菌落接种在LB液体培养基中，在20～40℃下培养过夜；然后转接至种子培养基中，在20～40℃下培养5h，再转接至发酵培养基中，在20～40℃下培养36～72h；其中种子培养基和发酵培养基是在LB液体培养基中添加质量分数为0.5～5％的葡萄糖或蔗糖作为附加碳源；

2)培养完成后，离心，收集培养液上清；

3)将培养液上清依次经酸沉淀、冻干后得到解淀粉芽孢杆菌胞外抗菌脂肽。

2.根据权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌胞外抗菌脂肽的提取方法，其特征在于：所述步骤1)的具体步骤是将解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciensC-1单菌落接种在LB液体培养基中，在20～40℃下、150～250rpm恒温摇床中培养过夜，得到培养物；然后按照1～3％的转接量将培养物转接至种子培养基中，在20～40℃下、150～250rpm恒温摇床中培养5h，得到种子培养物；再按1～3％的转接量将种子培养物转接至发酵培养基中，在20～40℃下、150～250rpm恒温箱中培养36～72h。

3.根据权利要求1或2所述的解淀粉芽孢杆菌胞外抗菌脂肽的提取方法，其特征在于：所述步骤2)中的离心是在10000rpm、10min、4℃的条件下离心收集培养液上清。

4.根据权利要求1或2所述的解淀粉芽孢杆菌胞外抗菌脂肽的提取方法，其特征在于：所述的骤3)的具体步骤是调节培养液上清的pH值小于等于2.0，混匀后在4℃下静置，然后离心收集沉淀，将沉淀冷冻干燥后即为提取的解淀粉芽孢杆菌胞外抗菌脂肽。

5.根据权利要求4所述的解淀粉芽孢杆菌胞外抗菌脂肽的提取方法，其特征在于：所述的步骤3)中用浓度为6mol/L的盐酸调节培养液上清的pH值；静置时间为12～24h；离心是在10000rpm、10min、4℃的条件下离心收集沉淀。

6.根据权利要求1-5中任意一项所述的提取方法提取的解淀粉芽孢杆菌胞外抗菌脂肽在制备抗菌药物中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述的抗菌药物为抗革兰氏阳性菌药物和或抗革兰氏阴性菌药物。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述的抗革兰氏阳性菌药物为抗产黑色素蜡样芽孢杆菌药物、抗蜡样芽孢杆菌药物、抗枯草芽孢杆菌药物、抗金黄色葡萄球菌药物中的一种或几种；

所述的抗革兰氏阴性菌药物为抗大肠杆菌药物、抗沙门氏菌药物、抗痢疾志贺氏菌药物中的一种或几种。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：所述的抗大肠杆菌药物为抗大肠杆菌O157：H7药物。

10.根据权利要求1-5中任意一项所述的提取方法提取的解淀粉芽孢杆菌胞外抗菌脂肽在制备生物型抑菌剂、免疫佐剂、食品添加剂、饲料添加剂、化妆品添加剂及保健食品中的应用。