CN113271780A - 解淀粉芽孢杆菌fcc1256组合物和控制植物病原体的方法 - Google Patents

Abstract

本申请公开了控制植物上的植物病原体例如真菌和细菌病原体的方法，其中将包含以ATCC No.PTA‑122162保藏的解淀粉芽孢杆菌FCC1256的组合物施用于所述植物，特别是施用于所述植物的地上部分。所述组合物可包含相对重量比为1.3:1.0至3.0:1.0的伊枯草菌素和丰原素。本申请还公开了一种农业组合物以及相应的浓缩物，所述组合物包含所述菌株、载体、表面活性剂和任选包含缓冲剂。

Description

解淀粉芽孢杆菌FCC1256组合物和控制植物病原体的方法

技术领域

本发明公开的主题涉及包含分离的解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)FCC1256菌株的组合物，其施用于植物或植物周围的土壤以治疗由植物病原体引起的植物病害。

发明背景

真菌植物病原体(植物病原体)，包括但不限于葡萄孢霉属(Botrytis spp.)、镰刀菌属(Fusarium spp.)、丝核菌属(Rhizoctonia spp.)，是一种类型植物病虫害，其在农业和园艺业导致严重的经济损失。化学制剂可用于控制真菌植物病原体，但是化学制剂的使用具有包括高成本、低效、出现抗性真菌菌株以及不利的环境影响的缺点。另外，这种化学治疗往往是不加区别的，除了靶向治疗的植物病原体之外，还可能不利地影响有益细菌、真菌和节肢动物。植物病虫害的第二种类型是细菌植物病原体，包括但不限于欧文氏菌属(Erwinia spp.)、黄单胞菌属(Xanthomonas spp.)和假单胞菌属(Pseudomonas spp.)，其在农业和园艺业造成严重的经济损失。与真菌病原体相似，使用化学制剂治疗这些细菌病原体也有缺点。因此，期望且高度需求可用作生物杀虫剂以控制植物中的病原性真菌和细菌的微生物以改良农业可持续性。

已报道一些芽孢杆菌菌种成员作为生物防治菌株，有一些已用于商业产品。例如，目前用于商业性生物防治产品的菌株包括：贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)QST713，用作由Bayer CropScience公司生产的

中的活性成分，以及解淀粉芽孢杆菌D747，用作由Certis公司生产的Double Nickel中的活性成分。此外，目前用于商业性生物刺激产品的芽孢杆菌菌株包括：贝莱斯芽孢杆菌FZB42，用作由ABiTEP GmbH生产的

42中的活性成分。

此外，WO 2016/109396 A1公开了解淀粉芽孢杆菌RTI472，其用于有益于植物生长并用于治疗植物病害例如真菌和细菌感染。

此外，WO 2016/109395 A1公开了解淀粉芽孢杆菌RTI301，其用于促进植物生长并用于治疗植物病害例如真菌和细菌感染。

另外，WO 2015/023662 A1公开了用于抑制真菌植物病原体的生长和/或活性的解淀粉芽孢杆菌菌株。

然而，尽管可获得某些生物杀虫剂，但本领域仍需要改良针对靶疾病及其各自病因病原体的特异性。此外，需要改良可能受到各种生物和非生物因素影响的生物杀虫剂的功效和效力。本发明通过提供新的微生物组合物及其用于控制植物病原体生长的方法从而减轻或预防植物病害来满足本领域的需求。

发明概述

本发明在于从草莓植物土壤中分离新的解淀粉芽孢杆菌菌株。所述解淀粉芽孢杆菌菌株FCC1256已保藏在ATCC，专利登记号为PTA-122162，参见实施例1。

在至少一个实施方案中，本发明涉及控制植物上植物病原体的方法，所述方法包括将包含解淀粉芽孢杆菌FCC1256的组合物施用于所述植物、所述植物的一部分和/或生长或待种植所述植物或植物部分的地点的步骤。

在另一个实施方案中，本发明涉及控制植物上真菌植物病原体和/或细菌植物病原体的方法，所述方法包括将包含解淀粉芽孢杆菌FCC1256的组合物施用于植物的地上部分的步骤。

在一个实施方案中，本发明提供了一种农业组合物，其包含：a)解淀粉芽孢杆菌FCC1256，和b)农业上合适的配制培养基，例如包含合适载体、表面活性剂和任选包含缓冲剂。所述农业组合物特别适用于保护植物免受病原体侵害或治疗易感植物中的病原体感染，例如根据本文所述方法进行。在一些实施方案中，所述组合物包含相对比例分别在1.3:1.0至3.0:1.0如1.5:1.0至2.8:1.0范围的伊枯草菌素(iturin)和丰原素(fengycin)。

在进一步的实施方案中，本发明提供了一种农业组合物的浓缩物，所述浓缩物包含：a)解淀粉芽孢杆菌FCC1256，和b)农业上合适的配制培养基，例如包含合适载体、表面活性剂和任选包含缓冲剂。

附图简述

因此，已经以一般术语描述了本公开的主题，现在将参考以下描述的附图：

图1示出分离的辣椒叶盘试验(Detached Pepper Leaf Disk assay)的结果，其比较了解淀粉芽孢杆菌FCC1256对于未经处理的对照组以及对于商品

Optimum的活性。

图2示出分别来自FCC1256和RTI472培养物的伊枯草菌素、表面活性肽(surfactin)、丰原素和ericin A/S的典型比例。

发明详述

如本文所用，名称“解淀粉芽孢杆菌FCC1256”和“FCC1256”是指以专利登记号PTA-122162保藏的解淀粉芽孢杆菌FCC1256细菌菌株的生物学纯培养物，参见实施例1。在本文所述的方法、组合物等中，所述菌株可以以一种或组合形式存在：作为所述细菌菌株的分离的孢子，作为包含所述细菌菌株的孢子的发酵液，作为包含所述细菌菌株的孢子的经加工的发酵产物，作为所述细菌菌株的分离的营养细胞，作为包含所述细菌菌株的营养细胞的发酵液，以及作为包含所述细菌菌株的营养细胞的经加工的发酵产物。

术语“生物学纯培养物”是指含有单一物种生物体的实验室或发酵培养物，即在本发明中实际上仅是解淀粉芽孢杆菌FCC1256细菌菌株。这意味着，纯培养物的发酵液中包含的任何其他微生物均被视为污染物，其仅以可以忽略的量存在及不会对发酵液的物理和化学组成造成可测量的改变。

术语“经加工的发酵产物”是指其下游经加工的形式，包括但不限于发酵液的浓缩物、过滤的发酵液的固体、重建的发酵液浓缩物和干燥的发酵液(例如冷冻干燥或喷雾干燥的)。

在一些实施方案中，FCC1256作为包含FCC1256的孢子的发酵液或包含FCC1256的孢子的经加工的发酵产物而存在，例如发酵液或喷雾干燥的发酵液的浓缩物。

本文公开的组合物和方法中包括解淀粉芽孢杆菌FCC1256的生物学纯培养物的事实并不排除所述组合物和方法分别可以包括其他限定的微生物菌株，特别是其他生物学纯的微生物菌株。

当在本申请包括权利要求书中使用时，术语“一”，“一个”和“所述”是指“一或多”。因此，例如，除非上下文明显相反，否则提及“一个植物”时包括多个植物。

在本说明书和权利要求书中，除非上下文另外要求，否则以非排他性的含义使用术语“包含”。同样地，术语“包括”及其语法变型是非限制性的，由此列表中的项目列举不排除可以替换或添加入所列举项目中的其它类似项目。

对于本说明书和权利要求的目的，术语“约”当与一个或多个数字或数字范围结合使用时，应理解为是指所有这种数字，包括一个范围内的所有数字，及通过扩展所述数值的上下界限来修改范围。以端点描述的数值范围包括该范围内的所有数字，例如整数，包括其分数(例如，提及1-5包括1、2、3、4和5以及其分数例如1.5、2.25、3.75、4.1等)以及该范围内的任何范围。

对于本说明书和权利要求的目的，术语“代谢物”与具有抗微生物活性的化合物结合使用，其由解淀粉芽孢杆菌FCC1256产生，例如伊枯草菌素、丰原素和表面活性肽。称为伊枯草菌素、丰原素和表面活性肽的代谢物均各自代表一类非常相似的分子结构。在此提及包括伊枯草菌素、丰原素和表面活性肽的量或比例时，所述量/比例是相对于相应代谢物的总量(重量)。所述量可以通过使用合适商业标准的HPLC分析确定。

发明方法

在本发明的某些实施方案中，提供了包括解淀粉芽孢杆菌FCC1256的组合物和方法，其施用于植物以赋予易感植物对抗病原体感染的保护作用。通过本发明的方法，控制植物病原体可以反映在减少的病原体感染、对植物病原体改良的抗性(例如对后续侵害的抗性)、改良的幼苗活力、改良的根发育、改良的植物生长、改良的植物健康、增加的产量、改良的外观，或其组合。

因此，本发明涉及控制植物上植物病原体的方法，所述方法包括将包含解淀粉芽孢杆菌FCC1256的组合物施用于所述植物、所述植物的一部分和/或生长或待种植所述植物或植物部分的地点的步骤。

如本文所用，术语“植物病原体”是指引起植物中感染性疾病的生物体，包括真菌、细菌、病毒、类病毒、病毒样生物体、卵菌、植原体、原生动物、线虫和寄生植物。在一些实施方案中，植物病原体选自真菌和细菌。在一种变化中，植物病原体选自真菌植物病原体。在另一种变化中，植物病原体选自细菌植物病原体。

在另一个实施方案中，所述方法包括将包含解淀粉芽孢杆菌FCC1256的组合物施用于植物、植物的一部分和/或植物或植物部分生长或待种植于此的地点，以控制选自如下的植物病原体：锈菌(rust fungus)，葡萄孢霉属(如灰葡萄孢(Botrytis cinerea)，葱鳞葡萄孢(Botrytis squamosal))，欧文氏菌属(如胡萝卜软腐欧文氏菌(Erwiniacarotovora)，解淀粉欧文氏菌(Erwinia amylovora))，狄克氏菌属(Dickeya spp.)(如达旦提狄克氏菌(Dickeya dadantii)，Dickeya solani)，农杆菌属(Agrobacterium spp.)(如根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens))，黄单胞菌属(例如地毯草黄单胞菌(Xanthomonas axonopodis)，野油菜黄单胞菌胡萝卜致病变种(Xanthomonas campestrispv.carotae)，桃李黄单胞菌(Xanthomonas pruni)，藤黄单胞菌(Xanthomonasarboricola)，水稻黄单胞菌水稻致病变种(Xanthomonas oryzae pv.oryzae))，木杆菌属(Xylella spp.)(如苛养木杆菌(Xylella fastidiosa))，暂定菌属(Candidatus spp.)(如韧皮部杆菌(Candidatus liberibacter))，镰刀菌属(如大刀镰刀菌(Fusariumcolmorum)，禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)，尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)，尖孢镰刀菌古巴专化型(Fusarium oxysporum f.sp.cubense)，尖孢镰刀菌番茄专化型(Fusarium oxysporum f.sp.lycopersici)，枝状镰刀菌(Fusarium virguliforme))，核盘菌属(Sclerotinia spp.)(如核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)，小核盘菌(Sclerotinia minor)，银斑核盘菌(Sclerotinia homeocarpa))，尾孢属(Cercospora/Cercosporidium spp.)，钩丝壳霉属(Uncinula spp.)(如葡萄白粉病钩丝壳霉(Uncinulanecator))，柄球菌属(Podosphaera spp.)(如苹果白粉病柄球菌(Podosphaeraleucotricha)，隐蔽柄球菌(Podosphaera clandestine))，拟茎点霉属(Phomopsis spp.)(如葡萄生拟茎点霉菌(Phomopsis viticola))，链格孢属(Alternaria spp.)(如细极链格孢(Alternaria tenuissima)，帕列氏链格孢(Alternaria porri)，互格链格孢(Alternaria alternate)，马铃薯早疫病链格孢(Alternaria solani)，纤细链格孢(Alternaria tenuis))，假单胞菌属(如丁香假单胞菌番茄致病变种(Pseudomonassyringae pv.Tomato))，疫霉属(Phytophthora spp.)(如蔓延疫霉(Phytophthorainfestans)，寄生疫霉(Phytophthora parasitica)，大豆疫霉(Phytophthora sojae)，辣椒疫霉(Phytophthora capsici)，肉桂疫霉(Phytophthora cinnamon)，草莓疫霉(Phytophthora fragariae)，栎树疫霉(Phytophthora ramorum)，棕榈疫霉(Phytophthorapalmivara)，烟草疫霉(Phytophthora nicotianae))，层锈菌属(Phakopsora spp.)(如豆薯层锈菌(Phakopsora pachyrhizi)，山马蝗层锈菌(Phakopsora meibomiae))，曲霉属(Aspergillus spp.)(如黄曲霉(Aspergillus flavus)，黑曲霉(Aspergillus niger))，单胞锈菌属(Uromyces spp.)(如疣顶单胞锈菌(Uromyces appendiculatus))，枝孢属(Cladosporium spp.)(如腊叶枝孢(Cladosporium herbarum))，根霉属(Rhizopus spp.)(如无根根霉(Rhizopus arrhizus))，丝核菌属(如茄属丝核菌(Rhizoctonia solani)，玉蜀黍丝核菌(Rhizoctonia zeae)，稻丝核菌(Rhizoctonia oryzae)，博爱丝核菌(Rhizoctonia caritae)，禾谷丝核菌(Rhizoctonia cerealis)，紫纹羽丝核菌(Rhizoctonia crocorum)，草莓丝核菌(Rhizoctonia fragariae)，多枝丝核菌(Rhizoctonia ramicola)，灌木枯病菌(Rhizoctonia rubi)，豆类丝核菌(Rhizoctonialeguminicola))，大壳球孢属(Macrophomina spp.)(如菜豆壳球孢(Macrophominaphaseolina)，稻瘟病菌属(Magnaporthe spp.)(如Magnaporthe grisea，稻稻瘟病菌(Magnaorthe oryzae))，球腔菌属(Mycosphaerella spp.)(如禾生球腔菌(Mycosphaerella graminocola)，斐济球腔菌(Mycosphaerella fijiensis(黑条叶斑病(Black sigatoga)))，苹果球腔菌(Mycosphaerella pomi)，柑橘球腔菌(Mycosphaerellacitri))，链核盘菌属(Monilinia spp.)(如桃褐腐病菌(Monilinia fruticola)，Monilinia vacciniicorymbosi，核果链核盘菌(Monilinia laxa))，毛盘孢属(Colletotrichum spp.)(如盘长孢状毛盘孢(Colletotrichum gloeosporiodes)，尖毛盘孢(Colletotrichum acutatum)，白毛盘孢(Colletotrichum Candidum))，间座壳属(Diaporthe spp.)(柑桔间座壳(Diaporthe citri))，棒孢属(Corynespora spp.)(如山扁豆生棒孢(Corynespora Cassiicola))，胶锈菌属(Gymnosporangium spp.)(如Gymnosporangium juniperi-virginianae)，裂盾菌属(Schizothyrium spp.)(如苹果裂盾菌(Schizothyrium pomi))，粘壳孢属(Gloeodes spp.)(如仁果粘壳孢(Gloeodespomigena))，葡萄座腔菌属(Botryosphaeria spp.)(如疖葡萄座腔菌(Botryosphaeriadothidea))，明孢盘菌属(Neofabraea spp.)，Wilsonomyces属(Wilsonomyces spp.)(如Wilsonomyces carpophilus)，单丝壳菌属(Sphaerotheca spp.)(如斑点单丝壳菌(Sphaerotheca macularis)，蔷薇单丝壳菌(Sphaerotheca pannosa))，白粉菌属(Erysiphe spp.)，壳多孢属(Stagonospora spp.)(如颖枯壳多孢(Stagonosporanodorum))，腐霉属(Pythium spp.)(如终极腐霉(Pythium ultimum)，瓜果腐霉(Pythiumaphanidermatum)，不规则腐霉(Pythium irregularum)，胡萝卜腐霉(Pythium ulosum)，鲁特里亚腐霉(Pythium lutriarium)，猝倒病腐霉(Pythium sylvatium))，黑星菌属(Venturia spp)(如苹果黑星菌(Venturia inaequalis))，轮枝孢属(Verticilliumspp.)，黑粉菌属(Ustilago spp.)(如裸黑粉菌(Ustilago nuda)，玉蜀黍黑粉菌(Ustilagomaydis)，甘蔗黑粉菌(Ustilago scitaminea))，麦角菌属(Claviceps spp.)(如紫瘢麦角菌(Claviceps puprrea))，腥黑粉菌属(Tilletia spp.)(如小麦网腥黑粉菌(Tilletiatritici)，光滑腥黑粉菌(Tilletia laevis)，粗硬腥黑粉菌(Tilletia horrid)，小麦矮腥黑粉菌(Tilletia controversa))，茎点霉属(Phoma spp.)(如大豆茎点霉(Phomaglycinicola)，棉花茎点霉(Phoma exigua)，黑胫茎点霉(Phoma lingam))，Cocliobolus属(Cocliobolus spp.)(如禾旋孢腔菌(Cocliobolus sativus))，Gaeumanomyces属(Gaeumanomyces spp.)(如燕麦全蚀病菌(Gaeumanomyces gaminis))，毛盘孢属(Colleototricum spp.)，喙孢属(Rhychosporium spp.)(如Rhychosporium secalis)，蠕孢菌属(Biopolaris spp.)，长蠕孢属(Helminthosporium spp.)(如黑麦长蠕孢(Helminthosporium secalis)，玉蜀黍长蠕孢(Helminthosporium maydis)，马铃薯长蠕孢(Helminthosporium solai)，小麦褐斑长蠕孢(Helminthosporium tritici-repentis))或其组合，包括其任何亚种变体。

在一些实施方案中，所述方法适于控制选自如下的一种或多种植物病原体：灰葡萄孢，葱鳞葡萄孢菌，禾谷镰刀菌，尖孢镰刀菌，枝状镰刀菌，蔓延疫霉，寄生疫霉，大豆疫霉，辣椒疫霉，肉桂疫霉，草莓疫霉，栎树疫霉，棕榈疫霉，烟草疫霉，核盘菌，小核盘菌，银斑核盘菌，黄曲霉，丁香假单胞菌番茄致病变种，解淀粉欧文氏菌，茄属丝核菌，Xanthomonaseuvesicatoria，及其任意组合，包括其任何亚种变体。

在一些实施方案中，本发明的方法利用包含解淀粉芽孢杆菌FCC1256的组合物来控制由例如如下的植物病原体导致的疾病：辣椒灰霉(灰葡萄孢)，辣椒疫霉疫病(辣椒疫霉(Phytophthora capsica))，番茄镰刀菌颈腐病(镰刀菌属)，苹果火疫病(解淀粉欧文氏菌)，番茄细菌性斑点病(丁香假单胞菌)，辣椒细菌性斑点病(Xanthomonaseuvesicatoria)，大豆猝倒病(茄属丝核菌)。

如本文所用，在本发明的方法和组合物的上下文中所用短语“控制植物病原体”是指与未使用所述方法或组合物的相应条件相比，植物病原体的生长减少至少10％，例如在一些实施方案中至少减少30％，或至少减少50％，或至少减少70％，或至少减少80％，或至少减少90％，或基本上消除生长。在后一种情况下，生长的消除可以导致植物病原体的目测消除。实施例3、5、6和7展示了通过确定利用解淀粉芽孢杆菌FCC1256对各种植物病原体控制程度的方法学类型。

根据本发明的方法和组合物可用于在广泛植物中预防或治疗由植物病原体引起的疾病，所述植物包括但不限于：玉米、甜玉米、种子玉米、青贮玉米、田地玉米、水稻、小麦、大麦、高粱、芦笋、蓝莓、黑莓、覆盆子、罗甘莓、越橘、蔓越莓、醋栗、接骨木、穗醋栗、藤类浆果(Cane berry)、灌木类浆果(Bush berry)、绿花椰菜、甘蓝、花椰菜、孢子甘蓝、无头甘蓝、羽衣甘蓝、芥菜、苤蓝、黄瓜、罗马甜瓜、甜瓜、香瓜、西葫芦、西瓜、南瓜、茄子、洋葱、蒜、红葱头(Shallots)、橙、西柚、柠檬、柑橘、橘柚、蜜柚、辣椒、番茄、鹅莓、墨西哥番茄、秋葵、葡萄、莴苣、芹菜、菠菜、欧芹、菊苣、豆类、绿豆、四季豆、贝壳豆、大豆、干豆、三角豆、利马豆、豌豆、鹰嘴豆、裂荚豌豆、小扁豆、芥花、蓖麻、椰子、棉花、亚麻、油棕、橄榄、花生、油菜籽、红花、芝麻、向日葵、大豆、苹果、海棠、梨、榅桲、夏花山楂(May haw)、胡萝卜、马铃薯、甘薯、木薯、甜菜、姜、辣根、萝卜、人参、芜箐、杏、樱桃、油桃、桃、李子、黑李、草莓、杏仁、开心果、核桃、胡桃、榛子、栗子、腰果、山毛榉坚果、灰胡桃、夏威夷果、奇异果、香蕉、(蓝色)龙舌兰、牧草、草坪草、一品红木、板栗、橡树、枫树、甘蔗、和糖用甜菜。

在一些实施方案中，所述植物是大豆、豆、四季豆、小麦、棉花、玉米、辣椒、番茄、马铃薯、木薯、葡萄、草莓、香蕉、花生、西葫芦、南瓜、茄子和黄瓜。

在其他实施方案中，所述植物选自苹果、芦笋、杨梅、熊莓、黑莓、高灌木和低灌木蓝莓、美洲稠李、穗醋栗、接骨木、醋栗、越橘、lingonberry、罗甘莓、桑葚、针樱桃、覆盆子、Salaberry、萨斯卡通鲜莓(Saskatoon berry)、沙棘和野生覆盆子、黑莓或覆盆子、葡萄、草莓、猕猴桃、绿花椰菜、芥蓝、束球花甘蓝(broccoli raab)、抱子甘蓝、甘蓝、花椰菜、绿花椰菜、无头甘蓝、羽衣甘蓝、苤蓝、日本芜菁、芥菜、芥末菠菜和油菜、洋葱、蒜、韭菜、红葱头和细香葱、芹菜、罗马甜瓜、中式葫芦(Chinese was gourd)、黄瓜、食用葫芦、甜瓜、香瓜、南瓜、西葫芦、西瓜、茄子、鹅莓、秋葵、辣椒、墨西哥番茄和番茄。

在其他实施方案中，所述植物选自辣椒、黄瓜、苹果、芦笋、香蕉、柑桔、奇异果、甜瓜、桃、梨、菠萝、仁果、石榴、芹菜、洋葱、蒜、葡萄、韭蔥(leaks)、红葱头、细香葱、绿花椰菜、甘蓝、花椰菜、葫芦、番茄、马铃薯、小麦、水稻或大豆。

在本发明方法的至少一个实施方案中，将所述组合物施用于植物、植物的一部分和/或植物或植物部分生长或将要种植的地点，例如植物的叶子、植物的茎皮、植物的果实、植物的花、植物的种子、植物的根、植物的插条、植物的嫁接物、植物周围的土壤或生长介质；在将植物的种子播种到土壤或生长介质中之前的土壤或生长介质；在将植物、植物插条或植物嫁接物种植在土壤或生长介质中之前的土壤或生长介质。

在一种变化中，本发明涉及一种控制植物上的真菌植物病原体和/或细菌植物病原体的方法，所述方法包括将包含以ATCC No.PTA-122162保藏的解淀粉芽孢杆菌FCC1256的组合物施用于植物的地上部分。

如本文所用，短语“将……施用于植物的地上部分”等是指将所述组合物施用于植物的茎、叶、花和/或果实。在其他实施方案中，针对植物或植物部分生长或将要种植的地点施用所述组合物，例如施用于植物的根系或植物的根系周围的土壤，或施用于待种植植物(或植物部分)的土壤中；这些统称为“将……施用于植物周围的土壤中”。

将包含解淀粉芽孢杆菌FCC1256的组合物施用于植物、植物的一部分和/或植物或植物部分生长或将要种植的地点可以通过任何常规方式来完成，例如通过喷雾施用、滴灌、制粉(粉末施用)、施用泡沫(泡沫施用)等。

对于施用于植物的地上部分，喷雾施用或粉末施用可能被证明是特别令人感兴趣的。

对于施用于植物周围的土壤，喷雾施用、滴灌施用、粉末施用和泡沫施用可能是令人感兴趣的。在一种变化中，通过与种子种植关联的滴灌或泡沫施用以沟内施用施用于植物周围的土壤。

在一些实施方案中，所述致病性感染可以由以下之一或组合引起的：

大豆锈菌(豆薯层锈菌、山马蝗层锈菌)以及植物是大豆；

灰霉病(灰葡萄孢)以及植物是葡萄、草莓或辣椒；

链格孢属(例如马铃薯早疫病链格孢)以及植物是番茄或马铃薯；

豆锈病(疣顶单胞锈菌)以及植物是刀豆；

扩散叉丝壳(Microsphaera diffusa)(大豆白粉病)以及植物是大豆；

斐济球腔菌(黑条叶斑病)或尖孢镰刀菌古巴专化型(萎蔫病)以及植物是香蕉；

黄单胞菌属或水稻黄单胞菌水稻致病变种以及植物是水稻；

地毯草黄单胞菌以及植物是木薯；

野油菜黄单胞菌以及植物是番茄；

白粉菌以及植物是葫芦；

南方白霉以及植物包括花生；

叶斑病以及植物是花生；

禾谷镰刀菌(小麦赤霉病)以及植物是小麦；

禾生球腔菌(Mycosphaerella graminicola)(小麦壳针孢(Septoria tritici)斑病)以及植物是小麦；

颖枯壳多孢(颖枯病和颖枯壳针孢(Septoria nodorum)斑病)以及植物是小麦；

解淀粉欧文氏菌以及植物选自苹果、梨和其他仁果；

苹果黑星菌以及植物选自苹果、梨和其他仁果；

核盘菌(白霉病)以及植物是四季豆或马铃薯；

银斑核盘菌(币斑病)以及植物包括草坪草；

或者

立枯丝核菌(Rhizotonia solani)以及植物选自小麦、水稻、草坪草、大豆、玉米、豆科植物和蔬菜作物。

在上述实施方案的一种变化中，通过将所述组合物施用于植物的地上部分来控制植物病原体。

在本文的实施方案中，以有效量施用所述组合物。术语“有效量”是指足以控制至少一种植物病原体的组合物的量。

在实施方案中，施用所述组合物使得解淀粉芽孢杆菌FCC1256的比率在4.0x10⁹CFU/ha至4.0x10¹⁷ CFU/ha的范围内，如4.0x10¹⁰ CFU/ha至4.0x10¹⁶ CFU/ha。通常，解淀粉芽孢杆菌FCC1256以其孢子而不是营养细胞的形式施用。

在本发明方法的一些实施方案中，所述组合物是液体形式，解淀粉芽孢杆菌FCC1256在组合物中以1.0x10⁶ CFU/mL至1.0x10¹² CFU/mL如1.0x10⁷ CFU/mL至1.0x10¹¹CFU/mL的浓度存在。

在施用的组合物是液体形式的实施方案中，所述组合物可以是选自悬浮液、悬浮液浓缩物(SC)、油分散体(OD)和泡沫的液体制剂形式。

在本发明方法的其他实施方案中，所述组合物是固体形式，解淀粉芽孢杆菌FCC1256在组合物中以1.0x10⁶ CFU/g至1.0x10¹² CFU/g如1.0x10⁷ CFU/g至1.0x10¹¹CFU/g的浓度存在。

在施用的组合物是固体形式的实施方案中，所述组合物可以是选自可喷粉粉末(DP)、水分散性颗粒剂(WG)和可湿性粉末(WP)的制剂形式。

在一些实施方案中，施用的组合物包含相对重量比为1.3:1.0至3.0:1.0如1.5:1.0至2.8:1.0的伊枯草菌素和丰原素，所有测量值均在该范围内。

在本发明的方法中使用的包含解淀粉芽孢杆菌FCC1256的组合物的性质、实施方案和变化将在下文标题为“本发明的农业组合物”的章节中进一步描述。

本发明的农业组合物

本文所述的组合物及其以下进一步详述的实施方案在上文所述的方法中特别有用，但不限于这种应用。在本标题下描述的组合物是指即用型组合物。在一些实施方案中，可以方便地在使用前制备适于稀释的浓缩组合物以获得即用型农业组合物，例如以降低运输成本或延长保质期等。这种浓缩的制剂在下文标题为“农业组合物的浓缩物”的章节进一步描述。

因此，本发明涉及一种农业组合物，其包含：a)解淀粉芽孢杆菌，和b)农业上合适的配制介质。

术语“农业上合适的”是指这种配制介质(即没有任何故意包含其他活性成分)对于预期施用该农业组合物的一种或多种植物不应具有显著的有害作用。因此，“农业上合适的配制介质”包括可以将解淀粉芽孢杆菌FCC1256放入其中的任何这种配制介质，以便于运输有效量以施用于感兴趣的植物部分，以及其另外适合于农业应用。

所述配制介质可以包括液体或固体载体，以及选自如下的一种或多种其它成分：表面活性剂、防腐剂、湿润剂、干燥剂、消泡剂、防冻剂、分散剂、粘合剂、乳化剂、染料、紫外线保护剂、漂变控制剂、喷雾沉积助剂、自由流动剂、缓冲剂和增稠剂、以及其组合。

液体载体的实例包括水、动物油及其衍生物、矿物油及其衍生物、植物油及其衍生物、醇、多元醇、甘油三酸酯、天然和合成聚合物及其非离子衍生物。固体载体的实例包括矿物质、粘土、二氧化硅、无机盐和有机盐、糖、淀粉、蜡、磨碎的动物壳、植物材料包括纤维、壳(husks shells)和粉末。

在实施方案中，所述配制介质包含合适的载体和表面活性剂。在其变化中，所述配制介质还包含缓冲剂。

在一些实施方案中，所述农业组合物包含相对重量比为1.3:1.0至3.0:1.0、如1.5:1.0至2.8:1.0的伊枯草菌素和丰原素，所有测量值均在该范围内。

在一些实施方案中，所述组合物可以是选自悬浮液、悬浮液浓缩物(SC)、油分散体(OD)、泡沫、可喷粉粉末(DP)、水分散性颗粒剂(WG)和可湿性粉末(WP)的制剂形式。

通常，解淀粉芽孢杆菌FCC1256以其孢子而不是营养细胞的形式包含在合适的制剂中。例如，所述制剂可包括等分的包含FCC1256的孢子的发酵液或包含FCC1256的孢子的加工的发酵产物如发酵液的浓缩物或喷雾干燥的发酵液。

一些实施方案中，所述农业组合物是液体形式，解淀粉芽孢杆菌FCC1256在组合物中以1.0x10⁶ CFU/g至1.0x10¹² CFU/g、如1.0x10⁷ CFU/g至1.0x10¹¹ CFU/g的浓度存在。

在农业组合物是液体形式的实施方案中，所述组合物可以是选自悬浮液、悬浮液浓缩物(SC)、油分散体(OD)和泡沫的制剂形式。

在其它实施方案中，所述农业组合物是固体形式，解淀粉芽孢杆菌FCC1256在组合物中以1.0x10⁶ CFU/g至1.0x10¹² CFU/g、如1.0x10⁷ CFU/g至1.0x10¹¹ CFU/g的浓度存在。

在农业组合物是固体形式的实施方案中，所述组合物可以是选自可喷粉粉末(DP)、水分散性颗粒剂(WG)和可湿性粉末(WP)的制剂形式。

在与微生物、生物或化学杀虫剂、杀真菌剂、杀线虫剂、杀细菌剂或植物生长调节剂组合输送FCC1256的方法中，所述组合物可以呈液体、油分散体、粉末、干的可湿性粉末、可涂抹的颗粒或干的可湿性颗粒的形式。

在一些实施方案中，除配制介质外，所述农业组合物还可包括微生物或化学杀虫剂、杀真菌剂、杀线虫剂、杀细菌剂、植物生长调节剂或植物生长促进剂中之一或组合，例如：

杀虫剂：A0)各种杀虫剂，包括agrigata，磷化铝，钝绥螨属(amblyseius)，蚜小蜂属(aphelinus)，蚜茧蜂属(aphidius)，食蚜瘿蚊(aphidoletes)，青蒿素，苜蓿银纹夜蛾NPV，三唑锡，枯草芽孢杆菌(Bacillus-subtilis)，苏云金芽孢杆菌艾扎瓦亚种(Bacillusthuringiensis spp.aizawai)，苏云金芽孢杆菌库斯塔克亚种(Bacillus thuringiensisspp.kurstaki)，苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)，球孢白僵菌(Beauveriabassiana)，β-氟氯氰菊酯，杀虫双，溴氟菊酯，乙基溴硫磷，溴螨酯，辣椒辣素，杀螟丹，南蛇藤提取物，灭幼脲，氯氧磷，氟啶脲，蛇床素，冰晶石，杀螟腈，氯氟氰菊酯，三环锡，氯氰菊酯，dacnusa，DCIP，二氯丙烯，开乐散，diglyphus，diglyphus+dacnusa，混灭威，依马菌素，恩蚜小蜂属(encarsia)，EPN，浆角蚜小蜂属(eretmocerus)，二溴乙烯，桉叶脑，喹螨醚，仲丁威(BPMC)，唑螨酯，溴氟菊酯(Flubrocythrinate)，氟螨嗪(flufenzine)，伐虫脒，安果磷，呋线威，γ-氯氟氰菊酯，大蒜汁，颗粒体病毒，Harmonia，棉铃虫NPV，吲哚-3-基丁酸，碘代甲烷，铁，水胺硫磷(isocarbofos)，异柳磷，甲基异柳磷(isofenphos-m)，异丙威，异拌磷，林丹，浏阳霉素，苦参碱，地胺磷，四聚乙醛，金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)，甲胺磷，速灭威(MTMC)，灭蚁灵，m-异硫氰酸酯，杀虫单，疣孢漆斑菌(Myrotheciumverrucaria)，二溴磷(naled)，芙新姬小蜂(Neochrysocharis formosa)，尼古丁，烟碱，氧乐果，小花蝽属(orius)，氧化苦参碱，拟青霉(paecilomyces)，乙基对硫磷(parathion-e)，巴斯德氏菌属(pasteuria)，信息素，磷酸，发光杆菌属(photorhabdus)，辛硫磷(phoxim)，植绥螨属(phytoseiulus)，乙基嘧啶磷(pirimiphos-e)，甜菜夜蛾(Plutella xylostella)GV，多角体病毒，多酚提取物，油酸钾，丙溴磷，补骨内酯(prosuler)，丙硫磷，吡唑硫磷，除虫菊酯，哒嗪硫磷(pyridaphenthion)，嘧螨醚，吡丙醚(pyriproxifen)，皂树提取物(quillay-extract)，喹甲硫酯，鱼藤酮，皂苷，saponozit，氟硅酸钠，氟虫胺，硫，丁基嘧啶磷(tebupirimfos)，七氟菊酯，双硫磷，四氯杀螨砜，久效威，甲基乙拌磷，转基因(例如Cry3Bb1)，唑蚜威，木霉属，赤眼蜂属(trichogramma)，杀铃脲，轮枝孢属(verticillium)，藜芦碱，κ-联苯菊酯，κ-七氟菊酯，dichoromezotiaz，溴虫氟苯双酰胺(broflanilide)，联苯吡嗪菌胺(pyraziflumid)；A1)氨甲酸酯类，包括：涕灭威、棉铃威、丙硫克百威、胺甲萘、虫螨威、丁硫克百威、灭虫威、灭多虫、杀线威、抗蚜威、残杀威(propoxur)和硫双威；A2)有机磷酸酯类，包括：乙酰甲胺磷，益棉磷，保棉磷，毒虫畏，毒死蜱，甲基毒死蜱，硫赶式甲基内吸磷，二嗪农，敌敌畏/DDVP，百治磷，乐果，乙拌磷，乙硫磷，杀螟松，倍硫磷，异恶唑磷，马拉硫磷，甲胺磷(methamidaphos)，杀扑磷，速灭磷，久效磷，氧乐果(oxymethoate)，亚砜磷，对硫磷，对硫磷甲酯，稻丰散，甲拌磷，伏杀硫磷，亚胺硫磷，磷胺，甲基嘧啶磷，喹硫磷，特丁磷，杀虫畏，三唑磷和敌百虫；A3)环戊二烯有机氯化合物类，例如硫丹；A4)苯基吡唑类(fiproles)类，包括：乙虫清(ethiprole)，氟虫腈，pyrafluprole和pyriprole；A5)新烟碱类，包括：啶虫脒，噻虫胺(clothianidin)，呋虫胺(dinotefuran)，吡虫啉，尼藤吡蓝，噻虫啉(thiacloprid)以及快胜；A6)多杀菌素类(spinosyns)，例如多杀菌素(spinosad)和乙基多杀菌素(spinetoram)；A7)菌素(mectins)类的氯通道活化剂，包括阿巴克丁，埃玛菌素，伊维菌素，雷皮菌素(lepimectin)和弥拜菌素(milbemectin)；A8)保幼激素模拟物(juvenile hormone mimics)，例如烯虫乙酯，烯虫炔酯，甲氧普烯、苯氧威和吡丙醚；A9)选择性同翅类取食阻滞剂，例如吡蚜酮，氟啶虫酰胺(flonicamid)和氟虫吡喹(pyrifluquinazon)；A10)螨生长抑制剂，例如四螨嗪，噻螨酮和乙螨唑(etoxazole)；A11)线粒体ATP合酶的抑制剂，例如丁醚脲，苯丁锡和快螨特；氧化磷酸化的解偶联剂，例如虫螨腈；A12)烟碱乙酰胆碱受体通道阻断剂，例如杀虫磺，盐酸杀螟丹，杀虫环和杀虫双(thiocyclam sodium)；A13)来自苯酰脲类的0型几丁质生物合成抑制剂，包括双三氟虫脲(bistrifluron)、二氟苯隆、氟虫脲、氟铃脲、氯芬奴隆、氟酰脲(novaluron)和氟苯脲；A14)1型几丁质生物合成抑制剂，例如噻嗪酮；A15)蜕皮干扰剂，例如环丙马秦；A16)蜕皮激素受体激动剂，例如甲氧虫酰肼(methoxyfenozide)，虫酰肼，氯虫酰肼(halofenozide)和环虫酰肼(chromafenozide)；A17)章胺(octopamin)受体激动剂，例如阿米曲士；A18)线粒体复合物电子转移抑制剂哒螨灵，吡螨胺，唑虫酰胺(tolfenpyrad)，嘧虫胺(flufenerim)，腈吡螨酯(cyenopyrafen)，丁氟螨酯(cyflumetofen)，伏蚁腙或灭螨醌(acequinocyl)或嘧螨酯(fluacrypyrim)；A19)电压依赖性钠通道阻断剂，例如茚虫威(indoxacarb)和氰氟虫腙(metaflumizone)；A20)脂合成抑制剂，例如螺螨酯(spirodiclofen)，螺甲螨酯(spiromesifen)和螺虫乙酯(spirotetramat)；A21)来自二酰胺类的兰尼碱受体调节剂，包括：氟虫双酰胺(flubendiamide)，邻苯二甲酰胺化合物(R)-3-氯-N1-{2-甲基-4-[1,2,2,2-四氟-1-(三氟甲基)乙基]苯基}-N2-(1-甲基-2-甲基磺酰基乙基)邻苯二甲酰胺和(S)-3-氯-N1-{2-甲基-4-[1,2,2,2-四氟-1-(三氟甲基)乙基]苯基}-N2-(1-甲基-2-甲基磺酰基乙基)邻苯二甲酰胺，氯虫酰胺(chlorantraniliprole)和氰虫酰胺(cyantraniliprole)；A22)作用模式未知或不确定的化合物，例如印楝素、amidoflumet，联苯肼酯(Bifenazate)，联氟砜(fluensulfone)，胡椒基丁醚，啶虫丙醚，氟啶虫胺腈(sulfoxaflor)；或A23)来自拟除虫菊酯类的钠通道调节剂，包括氟丙菊酯，丙烯除虫菊酯，联苯菊酯，氟氯氰菊酯，λ-氯氟氰菊酯，氯氰菊酯，α-氯氰菊酯，β-氯氰菊酯，ζ-氯氰菊酯，溴氰菊酯，杀灭阿菊酯，依芬普司，甲氰菊酯，氰戊菊酯，氟氰戊菊酯，τ-氟胺氰菊酯，扑灭司林，硅白灵和四溴菊酯。

杀真菌剂/杀细菌剂：B0)苯并烯氟菌唑(benzovindiflupyr)，anitiperonosporic，唑嘧菌胺(ametoctradin)，吲唑磺菌胺(amisulbrom)，铜盐(例如氢氧化铜，氯氧化铜，硫酸铜，过硫酸铜)，啶酰菌胺(boscalid)，thiflumazide，flutianil，呋霜灵，噻苯哒唑，麦锈灵，灭锈胺，异丙噻菌胺(isofetamid)，甲呋酰胺，联苯吡菌胺(bixafen)，氟唑菌酰胺(fluxapyroxad)，戊苯吡菌胺(penflufen)，氟唑环菌胺(sedaxane)，丁香菌酯(coumoxystrobin)，烯肟菌酯(enoxastrobin)，氟菌螨酯(flufenoxystrobin)，唑菌酯(pyraoxystrobin)，唑胺菌酯(pyrametostrobin)，氯啶菌酯(triclopyricarb)，烯肟菌胺(fenaminstrobin)，苯氧菌胺(metominostrobin)，pyribencarb，消螨多(meptyldinocap)，三苯基乙酸锡，三苯基氯化锡，三苯基氢氧化锡，土霉素，乙菌利，地茂散，四氯硝基苯，土菌灵，iodocarb，硫菌威，枯草芽孢杆菌，互叶白千层提取物，白羽扇豆(Lupinus albus doce)提取物，BLAD多肽，氯啶菌酯(pyrisoxazole)，恶咪唑(oxpoconazole)，乙环唑，胺苯吡菌酮(fenpyrazamine)，萘替芬，特比萘芬，有效霉素，丁吡吗啉(pyrimorph)，霜霉灭(valifenalate)，四氯苯酞(fthalide)，烯丙苯噻唑，异噻菌胺(isotianil)，昆布多糖，大虎杖(Reynoutria sachalinensis)提取物，磷酸和磷酸盐，叶枯酞(teclofthalam)，咪唑嗪，pyriofenone，有机油，碳酸氢钾，百菌清，唑呋草(fluoroimide)；B1)唑类，包括：联苯三唑醇，糠菌唑，环丙唑醇，苯醚甲环唑，烯唑醇，恩康唑，氟环唑，氟喹唑，腈苯唑，氟硅唑，粉唑醇，己唑醇，亚胺唑，种菌唑，叶菌唑，腈菌唑，戊菌唑，丙环唑，丙硫菌唑，硅氟唑，三唑酮，三唑醇，戊唑醇，氟醚唑，灭菌唑，咪鲜胺，稻瘟酯，抑霉唑，氟菌唑，氰霜唑(cyazofamid)，苯菌灵，多菌灵，噻苯哒唑，麦穗宁，噻唑菌胺，土菌灵和恶霉灵，阿扎康唑，烯唑醇-M，恶咪唑，多效唑，烯效唑，1-(4-氯-苯基)-2-([1,2,4]三唑-1-基)-环庚醇和imazalilsulfphate；B2)甲氧基丙烯酸酯类(strobilurins)，包括：腈嘧菌酯，醚菌胺，烯肟菌酯，氟嘧菌酯，醚菌酯，苯氧菌胺(methominostrobin)，肟醚菌胺，啶氧菌酯，吡唑醚菌酯(pyraclostrobin)，布洛芬，烯肟菌酯，(2-氯-5-[1-(3-甲基苄氧基亚氨基)乙基]苯基)氨基甲酸甲酯，(2-氯-5-[1-(6-甲基吡啶-2-基甲氧基亚氨基)乙基]苯甲基)氨基甲酸甲酯和2-(邻-(2,5-二甲基苯氧基亚甲基)-苯基)-3-甲氧基丙烯酸甲酯，2-(2-(6-(3-氯-2-甲基-苯氧基)5-氟-嘧啶-4-基氧基-苯基)-2-甲氧基亚氨基-N-甲基-乙酰胺和3-甲氧基-2-(2-(N-(4-甲氧基-苯基)-环丙烷羧酰亚胺基-硫甲基)-苯基)-丙烯酸甲酯；B3)羧酰胺类，包括：萎锈灵，苯霜灵，精苯霜灵(benalaxyl-M)，环酰菌胺(fenhexamid)，氟酰胺，福拉比，灭锈胺，甲霜灵，精甲霜灵(mefenoxam)，甲呋酰胺，恶霜灵，氧化萎锈灵，吡噻菌胺(penthiopyrad)，吡唑萘菌胺(isopyrazam)，噻呋酰胺，噻酰菌胺(tiadinil)，3,4-二氯-N-(2-氰基苯基)异噻唑-5-羧酰胺，烯酰吗啉，氟吗啉(flumorph)，氟酰菌胺(flumetover)，氟吡菌胺(picobenzamid)，苯酰菌胺(zoxamide)，环丙酰菌胺(carpropamid)，双氯氰菌胺(diclocymet)，双炔酰菌胺(mandipropamid)，N-(2-(4-[3-(4-氯苯基)丙-2-炔基氧基]-3-甲氧基苯基)乙基)-2-甲磺酰基-氨基-3-甲基丁酰胺，N-(2-(4-[3-(4-氯-苯基)丙-2-炔基氧基]-3-甲氧基-苯基)乙基)-2-乙烷磺酰氨基-3-甲基丁酰胺，3-(4-氯苯基)-3-(2-异丙氧基羰基-氨基-3-甲基-丁酰基氨基)丙酸甲酯，N-(4'-溴联苯基-2-基)-4-二氟甲基-甲基噻唑-δ-羧酰胺，N-(4'-三氟甲基-联苯基-2-基)-4-二氟甲基-2-甲基噻唑-5-羧酰胺，N-(4'-氯-3'-氟联苯基-2-基)-4-二氟甲基-2-甲基-噻唑-5-羧酰胺，N-(3\4'-二氯-4-氟联苯基-2-基)-3-二氟-甲基-1-甲基-吡唑-4-羧酰胺，N-(3',4'-二氯-5-氟联苯基-2-基)-3-二氟甲基-1-甲基吡唑-4-羧酰胺，N-(2-氰基-苯基)-3,4-二氯异噻唑-5-羧酰胺，2-氨基-4-甲基-噻唑-5-羧酰替苯胺，2-氯-N-(1,1,3-三甲基-茚满-4-基)-烟酰胺，N-(2-(1,3-二甲基丁基)-苯基)-1,3-二甲基-5-氟-1H-吡唑-4-羧酰胺，N-(4'-氯-3',5-二氟-联苯基-2-基)-3-二氟甲基-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酰胺，N-(4'-氯-3',5-二氟-联苯基-2-基)-3-三氟甲基-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酰胺，N-(3',4'-二氯-5-氟-联苯基-2-基)-3-三氟甲基-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酰胺，N-(3',5-二氟-4'-甲基-联苯基-2-基)-3-二氟甲基-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酰胺，N-(3',5-二氟-4'-甲基-联苯基-2-基)-3-三氟甲基-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酰胺，N-(顺式-2-二环丙基-2-基-苯基)-3-二氟甲基-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酰胺，N-(反式-2-二环丙基-2-基-苯基)-3-二氟-甲基-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酰胺，氟吡菌酰胺(fluopyram)，N-(3-乙基-3,5-5-三甲基-环己基)-3-甲酰基氨基-2-羟基-苯甲酰胺，土霉素(oxytetracyclin)，硅噻菌胺(silthiofam)，N-(6-甲氧基-吡啶-3-基)环丙烷羧酰胺，2-碘-N-苯基-苯甲酰胺，N-(2-二环-丙基-2-基-苯基)-3-二氟甲基-1-甲基吡唑-4-基羧酰胺；B4)杂环化合物，包括：氟啶胺，啶斑肟，乙嘧酚磺酸酯，嘧菌环胺(cyprodinil)，氯苯嘧啶醇，嘧菌腙，嘧菌胺，氟苯嘧啶醇，嘧霉胺，嗪氨灵，拌种咯，咯菌腈，二甲基吗啉(aldimorph)，十二环吗啉，丁苯吗啉，十三吗啉，苯锈啶，异菌脲，腐霉利，乙烯菌核利，噁唑菌酮(famoxadone)，咪唑菌酮(fenamidone)，辛噻酮，烯丙苯噻唑，5-氯-7-(4-甲基-哌啶-1–基)-6-(2,4,6-三氟苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶，敌菌灵，哒菌清，咯喹酮，丙氧喹啉(proquinazid)，三环唑，2-丁氧基-6-碘-3-丙基色原-4-酮，阿拉酸式苯-S-甲基(acibenzolar-S-methyl)，敌菌丹，克菌丹，棉隆，灭菌丹，氰菌胺(fenoxanil)，喹氧灵(quinoxyfen)，N,N-二甲基-3-(3-溴-6-氟-2-甲基吲哚-1-磺酰基)-[1,2,4]三唑-1-磺酰胺，5-乙基-6-辛基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-2,7-二胺，2,3,5,6-四氯-4-甲磺酰基-吡啶，3,4,5-三氯-吡啶-2,6-二-腈，N-(1-(5-溴-3-氯-吡啶-2-基)-乙基)-2,4-二氯-烟酰胺，N-((5-溴-3-氯吡啶-2-基)-甲基)-2,4-二氯-烟酰胺，二氟林(diflumetorim)，三氯甲基吡啶，吗菌灵醋酸盐，fluoroimid，杀稻瘟菌素s，灭螨猛，咪菌威，野燕枯，野燕枯-甲基硫酸盐，奥索利酸和粉病灵(piperalin)；B5)氨甲酸酯类，包括：代森锰锌，代森锰，威百亩(metam)，磺菌威(methasulphocarb)，代森联，福美铁，丙森锌，福美双，代森锌，福美锌，乙霉威，异丙菌胺(iprovalicarb)，苯噻菌胺(benthiavalicarb)，霜霉威，霜霉威盐酸盐，4-氟苯基N-(1-(1-(4-氰基苯基)-乙磺酰基)丁-2-基)氨甲酸酯，3-(4-氯-苯基)-3-(2-异丙氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基氨基)丙酸甲酯；或B6)其它杀真菌剂，包括：胍，多果定，多果定游离碱，双胍辛胺，双胍盐，春雷霉素，土霉素及其盐，链霉素，多抗霉素，有效霉素A，乐杀螨，消螨普，消螨通，二噻农，稻瘟灵，三苯锡盐，敌瘟磷，异稻瘟净，三乙膦酸，三乙膦酸铝，磷酸和其盐，吡菌磷，甲基立枯磷，苯氟磺胺，磺菌胺，六氯苯，四氯苯酞，戊菌隆，五氯硝苯，硫芬酯，甲基硫芬酯，对甲抑菌灵，环氟菌胺(cyflufenamid)，霜脲氰，甲菌定，乙嘧酚，呋霜灵，苯菌酮和螺环菌胺，双胍辛乙酸盐，双胍辛胺三乙酸盐(iminoctadine-triacetate)，双胍三辛烷苯磺酸盐(iminoctadine-tris(albesilate))，春雷霉素盐酸盐水合物，双氯酚，五氯苯酚及其盐，N-(4-氯-2-硝基-苯基)-N-乙基-4-甲基-苯磺酰胺，氯硝胺，酞菌酯，四氧硝基苯(tecnazen)，联苯，溴硝丙二醇，二苯胺，灭粉霉素，喹啉铜，调环酸钙，N-(环丙基甲氧基亚氨基-(6-二氟甲氧基-2,3-二氟-苯基)甲基)-2-苯基乙酰胺，N'-(4-(4-氯-3-三氟甲基-苯氧基)-2,5-二甲基-苯基)-N-乙基-N-甲基甲脒，N'-(4-(4-氟-3-三氟甲基-苯氧基)-2,5-二甲基-苯基)-N-乙基-N-甲基甲脒，N'-(2-甲基-5-三氟甲基-4-(3-三甲基硅烷基-丙氧基)-苯基)-N-乙基-N-甲基甲脒，N'-(5-二氟甲基-2-甲基4-(3-三甲基硅烷基-丙氧基)-苯基)-N-乙基-N-甲基甲脒和氟茚唑菌胺(fluindapyr)。

杀线虫剂：C1)苯菌灵，除线威，涕灭砜威，环线威，除线特(diamidafos)，苯线磷，硫线磷，除线磷，灭线磷，丰索磷，噻唑膦，速杀硫磷(heterophos)，isamidofof，氯唑磷，磷虫威(phosphocarb)，硫磷嗪，imicyafos，甲基灭蚜磷，乙酰虫腈(acetoprole)，benclothiaz，氯化苦，棉隆，氟噻虫砜(fluensulfone)，1,3-二氯丙烯(telone)，二甲基二硫醚，威百亩(metam sodium)，metam potassium，metam盐(所有MITC产生剂)，甲基溴，生物土壤改良剂(例如芥菜籽，芥菜籽提取物)，土壤蒸汽熏蒸，异硫氰酸烯丙酯(AITC)，硫酸二甲酯，糠醛(furfual，醛)。

植物生长调节剂：D1)抗植物生长素，例如氯贝酸，2,3,5-三-碘苯甲酸；D2)植物生长素，例如4-CPA，2,4-D，2,4-DB，2,4-DEP，2,4-滴丙酸，2,4,5-涕丙酸，IAA，IBA，萘乙酰胺，α-萘乙酸，1-萘酚，萘氧乙酸，环烷酸钾，环烷酸钠，2,4,5-T；D3)细胞激肽类，例如2iP，苄基腺嘌呤，4-羟基苯乙醇，激动素，玉米素；D4)脱叶剂，例如氰氨化钙，噻节因，草多索，乙烯利，脱叶亚磷，甲氧隆，五氯苯酚，噻苯隆，脱叶磷(tribufos)；D5)乙烯抑制剂，例如四烯雌酮(aviglycine)，1-甲基环丙烯；D6)乙烯释放剂，例如ACC，乙烯硅，乙烯利，乙二肟；D7)杀配子剂，例如杀雄嗪(fenridazon)，马来酸酰肼；D8)赤霉素类，例如赤霉素，赤霉酸；D9)生长抑制剂，例如脱落酸，环丙嘧啶醇，仲丁灵，胺甲萘，矮形磷，氯普芬，调呋酸，氟节胺(flumetralin)，增糖胺，杀木膦，草甘二膦，异嘧醇(isopyrimol)，茉莉酸，马来酸酰肼，甲呱鎓(mepiquat)，哌壮素(piproctanyl)，茉莉酸丙酯(prohydrojasmon)，苯胺灵，调节胺(tiaojiean)，2,3,5-三-碘苯甲酸；D10)形态素类，例如chlorfluren，整形醇，二氯抑草丁(dichlorflurenol)，抑草丁；D11)生长阻滞剂，例如矮壮素，丁酰肼，呋嘧醇，氟草磺，多效唑，四环唑，烯效唑；D12)生长刺激剂，例如油菜甾醇内酯，乙基芸苔素内酯，DCPTA，氯吡脲，恶霉灵，补骨内酯(prosuler)，三十烷醇；D13)未分类的植物生长调节剂，例如菊乙胺酯(bachmedesh)，benzofluor，buminafos，香芹酮，氯化胆碱，ciobutide，苯哒嗪钾(clofencet)，氨腈，环烷基酰苯胺，环己酰亚胺，环丙磺酰胺(cyprosulfamide)，丙酰芸苔素内酯(epocholeone)，吲熟酯，乙烯，呋苯硫脲(fuphenthiourea)，乙二醇缩糖醛(furalane)，增产肟，氯乙亚磺酸(holosulf)，抗倒胺，karetazan，砷酸铅，磺菌威，调环酸，pydanon，杀雄啉(sintofen)，抑芽唑，抗倒酯(trinexapac)。

植物生长促进剂：E1)。

农业组合物的浓缩物

本发明还涉及一种农业组合物的浓缩物，所述浓缩物包含：a)解淀粉芽孢杆菌FCC1256，和b)农业上合适的制剂介质，例如包含合适的载体、表面活性剂和任选包含缓冲剂。

可以通过用如上文针对农业组合物进一步指定的合适的液体载体特别是水相载体以适当稀释浓缩物而获得农业制剂。术语“水相载体”旨在表示主要基于水且包含至多5％重量的非水成分的液体载体。在一些实施方案中，仅通过用水稀释。

通常，稀释是浓缩物与载体重量比为1:10至1:5000，如1:20至1:1000。

在实施方案中，所述浓缩物是选自悬浮浓缩物(SC或SD)、超低体积悬浮液(SU)、种子处理悬浮液(FS)、油分散体(OD)、糊剂(PA)、凝胶(GD)、水分散性颗粒(WG)、可喷粉粉末(DP)、水分散性片剂(WT)、用于浆料处理的水分散性粉末(WS)和可湿性粉末(WP)的制剂。

通常，解淀粉芽孢杆菌FCC1256以其孢子形式而不是营养细胞的形式包含在合适制剂中。例如，所述制剂可包括等分的包含FCC1256的孢子的发酵液或包含FCC1256的孢子的经加工的发酵产物，如发酵液的浓缩物或喷雾干燥的发酵液。

在一些实施方案中，所述浓缩物是液体形式，解淀粉芽孢杆菌FCC1256在浓缩物中以1.0x10⁸ CFU/mL至1.0x10¹⁴ CFU/mL如1.0x10⁹ CFU/mL至1.0x10¹³CFU/mL的浓度存在。

在浓缩物是液体形式的实施方案中，浓缩物可以是选自悬浮液浓缩物(SC或SD)、超低体积悬浮液(SU)、种子处理悬浮液(FS)、油分散体(OD)、糊剂(PA)、凝胶(GD)、特别是悬浮浓缩物(SC)和油分散体(OD)的制剂形式。

在其他实施方案中，所述浓缩物为固体形式，解淀粉芽孢杆菌FCC1256以1.0x10⁸CFU/g至1.0x10¹⁴ CFU/g如1.0x10⁹ CFU/g至1.0x10¹³ CFU/g的浓度存在于浓缩物中。

在浓缩物是固体形式的实施方案中，浓缩物可以是选自水分散性颗粒(WG)、可喷粉粉末(DP)、水分散性片剂(WT)、水分散性粉末、用于浆料处理的水分散性粉末(WS)和可湿性粉末(WP)、特别是可湿性粉末(WP)和水分散性颗粒剂(WG)的制剂形式。

在一些实施方案中，所述浓缩物包含相对重量比为1.3:1.0至3.0:1.0如1.5:1.0至2.8:1.0的伊枯草菌素和丰原素，所有测量值均在该范围内。

实施例

包括以下实施例以向本领域技术人员提供指导，用于实践本公开主题的代表性实施方案。根据本发明以及本领域的一般技能水平，本领域技术人员能够理解以下实施例仅用于示例，并且可采用多种改变、修改以及变化，而不偏离本公开主题的范围。

方法

伊枯草菌素、丰原素和表面活性肽的鉴别

使用带有梯度筛选的C18柱，通过反相LC–DAD对样品进行分析，从而可以同时检测所有三个脂肽家族。流动相由预混有0.1％甲酸的水和乙腈组成。根据化合物的保留时间和UV光谱与可信标准品对比而对化合物进行鉴定。

菌落形成单位(CFU)的确定

样品的CFU(对于液体样品表示为CFU/mL，对于固体样品表示为CFU/g)可以根据BSEN 15784:2009确定(Animal feeding stuffs.Isolation and enumeration ofpresumptive Bacillus spp.)。

实施例1

通过序列分析鉴定一种细菌分离物为解淀粉芽孢杆菌

从美国北卡罗来纳州Autryville的草莓植物土壤中分离与植物相关的细菌菌株，在本文中称为解淀粉芽孢杆菌FCC1256。解淀粉芽孢杆菌FCC1256菌株根据国际承认用于专利程序的微生物保藏布达佩斯条约规定于2015年5月12日保藏在美国弗吉尼亚州Manassas的美国典型培养物保藏中心(ATCC)，专利登录号为PTA-122162。

最初，提取解淀粉芽孢杆菌FCC1256的全基因组序列数据以鉴别常规用于系统发生分配分析的核心表型标记基因。选择用于这个分析的基因都是单拷贝，基因组中所述基因只有一个拷贝，并且具有细胞的核心管家功能。选自RAST注释文件的六个基因是DNA定向的RNA聚合酶β亚基(rpoB)，DNA修复重组酶A(recA 2)，DNA错配修复蛋白S(mutS)，甘油摄取促进蛋白(glpF)，DNA促旋酶亚基B(gyrB)和DNA伴侣K(dnaK)。对于每个选择的基因，使用芽孢杆菌属的代表性基因组菌株(枯草芽孢杆菌簇和蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)簇)进行比较。为此，通过高度保守的16S rRNA和rpoB基因的序列分析，FCC1256被鉴定为解淀粉芽孢杆菌新菌株。

每个基因还包括一个外群序列(outgroup sequence)。这些外群序列是从系统发生差异细菌的基因组中提取的，以提供系统发生计算的鲁棒性指示。

首先从NCBI下载每个参考基因组并在RAST注释管线中进行注释。随后对生成的每个注释表进行搜索以鉴别每个选择的管家基因，然后将每个基因的序列复制并粘贴到MEGA5.2软件程序中的新核苷酸比对中。一旦已经将每个基因序列加载到比对中，使用ClustalW比对算法对所有特定基因序列进行比对。比对每组基因后，对序列进行修剪以确保每个序列具有相同数目的核苷酸。修剪步骤后，将比对序列用于创建系统发生树。

将每个系统发育树重复1000次以评估系统发生分组的鲁棒性。对于每棵树，将FCC1256与其他解淀粉芽孢杆菌菌株如DSM7、RTI301和RTI472进行比对和生成树。这些结果高度确信地表明FCC1256确实是解淀粉芽孢杆菌。

还确定了FCC1256对许多病原体的拮抗作用。下表1提供了结果概述。

表1.解淀粉芽孢杆菌FCC1256对主要植物病原体的拮抗性质

抗微生物测定	FCC1256
		<u>真菌病原体：</u>
黄曲霉	++
		灰葡萄孢	+++
禾谷镰刀菌	+++
		尖孢镰刀菌	++
枝状镰刀菌	+
		辣椒疫霉	+
茄属丝核菌	++
		<u>细菌病原体：</u>
解淀粉欧文氏菌	++
		Xanthomonas euvesicatoria	++

+++非常强活性，++强活性，+活性，+-弱活性，-未观察到活性

另外，进行了实验以确定解淀粉芽孢杆菌FCC1256在体外和在各种植物中在不同条件下的拮抗活性。实验结果在下文实施例3、5、6和7中提供。

所述实验示出与含有贝莱斯芽孢杆菌QST713作为活性成分的可商购

(Bayer CropScience，Inc.)相比，解淀粉芽孢杆菌FCC1256赋予对抗或控制植物病原体感染的保护作用的能力。

实施例2

解淀粉芽孢杆菌FCC1256的发酵

首先将解淀粉芽孢杆菌FCC1256从甘油原液中取出在固体869培养基上划线培养，所述培养基含(在1L中)：10g蛋白胨，5g酵母提取物，1g D-葡萄糖，0.3g CaCl₂和15g粉末状琼脂。在30℃温育过夜后，挑取一个菌落，接种于具有50mL培养基的250mL摇瓶中，所述培养基含有(1L)：10g蛋白胨，6g酵母提取物，2g KCl和0.1gMgSO₄·7H₂O。高压灭菌后，将以下溶液加入培养基中：5mL的20％葡萄糖，1mL的1M CaCl₂、1mL的0.1M MnCl₂和10μL的0.1MFeSO₄。将摇瓶在摇瓶温育器在30℃和200rpm温育，直到OD600达到1.0。收集细胞沉淀用于接种发酵罐(工作体积1.5L，Bioflo 320，Eppendorf)。发酵在30℃进行，搅拌速度为800rpm，空气供应速率为2L/min。在发酵期间中取样以监测细胞生长、细胞孢子形成和代谢物浓度。发酵168小时后，大多数解淀粉芽孢杆菌FCC1256细胞已形成孢子，收获整个培养混合物。

在上述培养基中发酵解淀粉芽孢杆菌FCC1256和参考菌株QST713(得自商业

产品的贝莱斯芽孢杆菌)。使用OD600测量，测量发酵期间的生物量水平。比较解淀粉芽孢杆菌FCC1256菌株和QST713的代谢物谱，示出在相同条件下，FCC1256产生的伊枯草菌素明显高于QST713。

对代谢物浓缩物的进一步评估表明，FCC1256的伊枯草菌素:丰原素:表面活性肽的重量比约为3.3:1.4:1，这可能有助于菌株对抗植物病原体的拮抗活性。

实施例3

解淀粉芽孢杆菌FCC1256的抗微生物性质

将解淀粉芽孢杆菌FCC1256和QST713铺板于TSA平板中并在30℃过夜生长(16-18小时)。随后，将单个菌落转移至培养基中(生长培养基H₂O，914.3mL；NH₄NO₃，8g；Na₂HPO₄，7.15g；KH₂PO₄，6.8g；酵母提取物0.5g；用4mL 4M KOH调节至pH7.5；将45mL生长培养基移至250mL带挡板的培养瓶中，在121℃高压灭菌15分钟。高压灭菌后，在每个培养瓶中加入以下溶液：0.1M CaCl₂ 5μL，0.1M MnCl₂ 5μL，0.1M FeSO₄ 35μL，0.1M ZnCl₂ 5μL，1M MgSO₄ 100μL，葡萄糖50％溶胶(最终浓度40g/L)4mL)并在30℃和连续搅拌(220rpm)下温育168小时。将菌株在带有GL 45螺纹(

Germany)的250mL带挡板的培养瓶中生长，最终工作体积为50mL。

在这项研究中，总共使用了14种叶植物病原体(12种真菌和2种细菌)。表2示出了病原体、生长条件和使用的培养基的说明。除丁香假单胞菌和地毯草黄单胞菌在胰酪胨大豆琼脂(TSA)固体培养基中检测外，这个实验中使用的所有叶病原体均在马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)固体培养基中检测。在处理前每种病原体的温育时间为3-5天。对于丁香假单胞菌和地毯草黄单胞菌，其中使用菌苔平板进行测试，在869培养基上制备过夜培养物，同时在制备菌苔之前将小麦壳针孢在马铃薯葡萄糖培养液中培养5天。

通过应用20μL细胞评估活性。使用未过滤的发酵材料，对所有病原体一式三份进行所有应用。真菌病原体的评级计时时间因菌种而异。计时时间应对应于对照斑点平板上菌落边缘达到半径约25mm。为了进行评估，使用了半定量方法，参见以下4级量表系统(0-3)，其中：0：无可见抗微生物作用；1：轻微作用，但没有明显透明区；2：明显透明区；3：存在较大透明区。结果示于表2中。

表2.FCC1256对叶病原体的抗微生物性质

实施例4

解淀粉芽孢杆菌FCC1256的表型性状

除了拮抗性质外，还测量了解淀粉芽孢杆菌FCC1256的各种表型性状，数据示于表3。根据下文表3所述程序进行测定。

表3.表型测定：解淀粉芽孢杆菌FCC1256的植物激素产生、乙偶姻和吲哚乙酸(IAA)及营养素循环。

特性测定	FCC1256
		乙偶姻产生(MR-VP)	+++
几丁质酶活性	+
		吲哚-3-乙酸产生	-
蛋白酶活性	++
		磷酸盐溶解	+

+++非常强，++强，+一些，+-弱，-未观测到

乙偶姻检测.将培养基中的20μL起始培养物移至1mL Methyl Red VogesProskauer培养基(Sigma Aldrich 39484)中。将培养物在30℃和200rpm温育2天。将0.5mL培养物与0.3mL 5％α-萘酚(Sigma Aldrich N1000)混合，然后与0.1mL 40％KOH混合。温育30分钟后对样品进行解释。显示红色表示乙偶姻产生。未接种的培养基用作阴性对照(Sokol et al.,1979,Journal of Clinical Microbiology 9:538-540)。

几丁质酶活性.将10％湿重胶体几丁质加入改良的PVK琼脂培养基中(每升：10g葡萄糖，0.2g氯化钾，0.5g硫酸铵，0.2g氯化钠，0.1g七水硫酸镁，0.5g酵母提取物，2mg硫酸锰，2mg硫酸铁和15克琼脂，pH 7，高压灭菌)。将细菌铺在这些几丁质平板上；透明区表示几丁质酶活性(N.K.S.Murthy&Bleakley,2012.“Simplified Method of PreparingColloidal Chitin Used for Screening of Chitinase Producing Microorganisms”.The Internet Journal of Microbiology 10(2))。

吲哚-3-乙酸.将培养基中的20μL起始培养物移至补充有0.5g/L色氨酸(SigmaAldrich T0254)的1mL 1/10 869培养基中。将培养物在30℃和200rpm避光温育4-5天。离心样品，将0.1mL上清液与0.2mL Salkowski试剂(35％高氯酸，10mM FeCl₃)混合。避光温育30分钟后，产生粉红色的样品记录为IAA合成阳性。IAA(Sigma Aldrich I5148)的稀释液用作阳性对比；将未接种的培养基用作阴性对照(Taghavi,et al.,2009,Applied andEnvironmental Microbiology 75:748-757)。

蛋白酶活性.将细菌铺板于补充有10％牛奶的869培养基上。透明区表示分解蛋白质的能力，提示蛋白酶活性(Sokol et al.,1979,Journal of Clinical Microbiology 9:538-540)。

磷酸盐溶解测试.将细菌铺板在高压灭菌的由每升10g葡萄糖、5g三磷酸钙、0.2g氯化钾、0.5g硫酸铵、0.2g氯化钠、0.1g七水硫酸镁、0.5g酵母提取物、2mg硫酸锰、2mg硫酸铁和15g琼脂组成的Pikovskaya(PVK)琼脂培养基(pH7)上。透明区表示磷酸盐溶解细菌(Sharma et al.,2011,Journal of Microbiology and Biotechnology Research1:90-95)。

实施例5

解淀粉芽孢杆菌FCC1256对辣椒灰霉(灰葡萄孢)的拮抗作用

在温室中对辣椒进行了研究，以确定FCC1256预防和/或改善植物病原体辣椒灰霉(灰葡萄孢)的作用。

制剂：

将FCC1256的分离孢子在100％耗尽发酵液(SFB)中以1x10⁸CFU/mL浓度配制(即重建的发酵液浓缩物)。制备相似的FCC1256制剂，但加入营养素(每升2g蔗糖+1.5g酵母提取物+0.2g MgSO₄·7H₂O)。

类似地，将解淀粉芽孢杆菌RTI472的分离孢子在100％耗尽发酵液(SFB)中以1x10⁸CFU/mL浓度配制。通过加入营养素制备相似的RTI472制剂(如上文关于FCC1256所述)。

以孢子浓度为1x10⁸CFU/mL应用

Optimum(Bayer CropScience,Inc.)。

以50g a.i./ha(Tebuconazole)的比率应用Horizon(Horizon AG-Products)。

处理施用方法：

使用履带喷雾器将上述每种制剂接种于在温室中28天龄辣椒植物上。履带喷雾器有一个顶置喷嘴(TeeJet SS8001E扁平风扇)，压力为276kPa(40psi)。喷嘴高度为在辣椒植物叶片上方36厘米(14英寸)。施用量为200L/ha，实验中的重复次数为6。将处理植物与未接受任何处理的对照植物一起接种一次。

感染率：

在处理施用后一天，将受试植物用灰葡萄孢感染，感染率为500,000分生孢子/mL。

在辣椒灰霉(灰葡萄孢)感染后三天，针对上述每种制剂评估疾病控制的百分比(平均值)。

实验结果显示在下表4中，示出与RTI472和

Optimum相比，在以相同比率施用时，对辣椒灰霉(灰葡萄孢)的优异控制作用。

表4.与

Optimum和其他参考相比，解淀粉芽孢杆菌FCC1256控制辣椒灰霉(灰葡萄孢)的结果。

实施例6

解淀粉芽孢杆菌FCC1256对辣椒疫霉疫病的拮抗作用

在温室中对辣椒进行了研究，以确定FCC1256预防和/或改善植物病原体辣椒疫霉疫病(辣椒疫霉)的作用的能力。

制剂：

将FCC1256的分离孢子在100％耗尽发酵液(SFB)中以1x10⁸CFU/mL浓度配制(即重建的发酵液浓缩物)。制备相似的FCC1256制剂，但加入营养素(每升2g蔗糖+1.5g酵母提取物+0.2g MgSO₄·7H₂O)。

类似地，将解淀粉芽孢杆菌RTI472的分离孢子在100％耗尽发酵液(SFB)中以1x10⁸CFU/mL浓度配制。通过加入营养素制备相似的RTI472制剂(如上文关于FCC1256所述)。

以孢子浓度为1x10⁸CFU/mL应用

Optimum(Bayer CropScience,Inc.)。

以0.5lb a.i./acre的比率施用Ridomil Gold(Syngenta，Inc.)(精甲霜灵)。

处理施用方法：

将28天龄辣椒植物的土壤用10mL含有上述每种制剂的水浸湿。每个实验的重复次数等于6。将处理植物与未接受任何处理的对照植物一起接种一次。

感染率：

对于每项研究，在处理施用的同一天，将测试植物用辣椒疫霉FF157感染，感染率为1mL的1,000游动孢子/mL。

辣椒疫霉疫病(辣椒疫霉)感染植物后八天，评估每种处理的疾病控制百分比。在感染后8天，疾病严重程度评分为9.8(0＝健康；10＝死亡)。

结果示出，与

Soil相比，当以相同比率施用时，FC1256对辣椒疫霉疫病的统计学优异的控制作用。

表5.与

Optimum相比，解淀粉芽孢杆菌FCC1256控制辣椒疫霉疫病的结果。

实施例7

比较解淀粉芽孢杆菌FCC1256与未经处理对照以及商购产品

Optimum的活性的分离辣椒叶盘测定

辣椒(Piper capsicum)植物在温室中于20-25℃、日照14-16小时的条件下生长6-7周。从每棵植物中收集中间部分完全展开的四片叶子，放入具有湿滤纸的培养皿中。用水(未处理对照)或

Optimum悬浮液(阳性对照)或FCC1256发酵液(两个不同批次)喷洒叶片。然后将盖子盖在培养皿上，置于生长室中温育，所述生长室设定为与在温室中大约相同的生长条件。

第二天，通过喷雾灰葡萄孢的孢子悬浮液接种叶片，所述悬浮液调节为500,000个孢子/mL。然后将培养皿放回生长室，并在4天、6天和9天后进行评估，以追踪疾病的进展。

结果示于图1。第1列示出

Optimum参考组(应用量2.8kg/ha)；第2列示出未处理接种对照组；第3列示出未处理未接种对照组，第4列和第5列显示两个不同发酵批次的解淀粉芽孢杆菌FCC1256。第1行和第2行示出接种后4天的结果。第5行和第6行示出相同叶子，但是在接种后6天，第3行和第4行再次示出相同叶子，但是在接种后9天。

通过目测可以清楚地看到，未处理接种对照组(第2列)的叶子即使在4天后也受到了严重破坏，未处理未接种对照组(第3列)的叶子在整个9天的实验中仍保持新鲜。

Optimum参考组显示3天后一些病原体得到控制，因为叶片在6天和9天后受到了严重破坏。另一方面，FCC1256发酵液在4天和6天后显示出很好的病原体控制，在9天后显示出可接受的控制。

实施例8

(a)解淀粉芽孢杆菌FCC1256的浓缩物

如下所述制备FCC1256的浓缩物：混合20％FCC1256发酵浓缩物、45％水、30％甘油(86.5％)、5％的Marasperse AG(木质素磺酸钠；阴离子分散剂)，使用HK₂PO₄·H₂O/KH₂PO₄缓冲液将pH调节至6.0-7.5。最终组合物的孢子含量(FCC1256)通常在1.0×10¹⁰CFU/mL至1.0×10¹²CFU/mL的范围内。

(b)解淀粉芽孢杆菌FCC1256的浓缩物

如下所述制备FCC1256的组合物：混合50％FCC1256发酵浓缩物、4.8％水、40％甘油(86.5％)、5％的Marasperse AG(木质素磺酸钠；阴离子分散剂)、0.1％消泡剂和0.1％Kelzan(增稠剂)，使用HK₂PO₄·H₂O/KH₂PO₄缓冲液将pH调节至6.0-7.5。最终组合物的孢子含量(FCC1256)通常在1.0×10¹⁰CFU/mL至1.0×10¹²CFU/mL的范围内。

(c)解淀粉芽孢杆菌FCC1256的农业组合物

将上述(a)或(b)的浓缩物用水以1:12的比例稀释以产生农业组合物。所述组合物可以例如200-600L/ha的施用率施用。

实施例9

比较解淀粉芽孢杆菌FCC1256与未处理对照以及其他解淀粉芽孢杆菌菌株针对辣 椒灰霉(灰葡萄孢)的抗真菌活性的全植物辣椒测定

在相似条件下发酵四种不同的解淀粉芽孢杆菌菌株FCC1256、DSM7、RTI472和RTI301(见实施例2)，不同的是使用具有60mL培养物的500mL摇瓶以较小规模进行发酵。生长温度为28℃，搅拌速度为200rpm，温育时间为144小时。每个发酵提供的孢子浓度在1x10⁷CFU/mL的量级。

使用Agrofino 201土壤基质，在7x7x7cm的塑料罐中生产辣椒植物(辣椒品种Lamuyo F1)。其在测试时是6周龄。在160ppm使用N:P:K＝20:20:20施肥每两天为植物浇水。每个测试模式使用六个重复样本，每个重复样本包含1棵植物(1罐)。

使用三喷嘴喷杆以1000L/ha的估计体积在实验室喷雾器内对每棵植物进行处理。使用四种不同的解淀粉芽孢杆菌菌株FCC1256、DSM7、RTI472和RTI301，剂量为在100mL去矿质水中稀释的20mL发酵液并与0.2％vol/vol的佐剂混合物混合。还评估了具有0.2％vol/vol佐剂混合物且无芽孢杆菌菌株的发酵培养基作为参考。

施用后，将植物在20℃、70％RH和16小时光周期下储存在生长室中。施用杀真菌剂后24小时，通过对处理过的植物经手动喷洒接种灰葡萄孢直至流溢进行接种。接种浓度是在PDB培养基中50,000个孢子/mL(灰葡萄孢菌株FF248)。接种后，将植物在20℃(无光照)的露水室内保存48小时以利于感染。然后将植物置于20℃、70％RH、16小时光周期的生长室中，直至病害评级。

接种后三天进行病害评估，通过对每株植物四个完全发育的叶片评估严重程度％。然后计算每罐平均严重度％(表6中列出)，并使用Abott公式计算检测菌株的效力：

％对照组A＝100*((％严重度A-％未处理组严重度)/％未处理组严重度)

表6.与解淀粉芽孢杆菌菌株RTI301、DSM7和RTI472相比，解淀粉芽孢杆菌FCC1256对辣椒灰霉(灰葡萄孢)的控制结果。

菌株	疾病控制百分比
		RTI301	26(±26)
DSM7	72(±10)
		RTI472	83(±11)
FCC1256	94(±6)
		发酵培养基(参考)	3(±5)
未处理(对照)	0(±0)

参考文献

本说明书中提及的所有出版物、专利申请、专利和其他参考文献均以其全部内容并入本文作参考。

尽管出于清楚理解的目的已经通过图示和示例的方式详细地描述了前述主题，但是本领域技术人员将理解，可以在所附权利要求书的范围内进行某些改变和修改。

Claims (17)

1.一种控制植物上植物病原体的方法，所述方法包括以下步骤：将包含以ATCCNo.PTA-122162保藏的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)FCC1256的组合物施用于所述植物、所述植物的一部分和/或所述植物或植物部分生长或将要种植的地点。

2.一种控制植物上真菌植物病原体和/或细菌植物病原体的方法，所述方法包括以下步骤：将包含以ATCC No.PTA-122162保藏的解淀粉芽孢杆菌FCC1256的组合物施用于所述植物的地上部分。

3.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述组合物是液体形式，并且其中解淀粉芽孢杆菌FCC1256以1.0×10⁶CFU/mL至1.0×10¹²CFU/mL的浓度存在于所述组合物中。

4.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述组合物是选自悬浮液、悬浮液浓缩物(SC)、油分散体(OD)和泡沫的液体制剂形式。

5.根据权利要求1-2中任一项的方法，其中所述组合物是固体形式，其中所述解淀粉芽孢杆菌FCC1256以1.0×10⁶CFU/g至1.0×10¹²CFU/g的浓度存在于所述组合物中。

6.根据权利要求1-2和5中任一项的方法，其中所述组合物是选自可喷粉粉末(DP)、水分散性颗粒(WG)和可湿性粉末(WP)的固体制剂形式。

7.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述组合物以4.0×10⁹CFU/ha至4.0×10¹⁷CFU/ha的比率施用。

8.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述植物病原体选自：灰葡萄孢(Botrytiscinerea)、葱鳞葡萄孢(Botrytis squamosa)、禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、枝状镰刀菌(Fusarium virguliforme)、蔓延疫霉(Phytophthora infestans)、寄生疫霉(Phytophthora parasitica)、大豆疫霉(Phytophthora sojae)、辣椒疫霉(Phytophthora capsici)、肉桂疫霉(Phytophthoracinnamon)、草莓疫霉(Phytophthora fragariae)、栎树疫霉(Phytophthora ramorum)、棕榈疫霉(Phytophthora palmivara)、烟草疫霉(Phytophthora nicotianae)、核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)、小核盘菌(Sclerotinia minor)、银斑核盘菌(Sclerotiniahomeocarpa)、黄曲霉(Aspergillus Favus)、丁香假单胞菌番茄致病变种(Pseudomonassyringae pv.Tomato)、解淀粉欧文氏菌(Erwinia amylovora)、茄属丝核菌(Rhizoctoniasolani)、Xanthomonas euvesicatoria及其任意组合。

9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述植物选自：辣椒、黄瓜、苹果、芦笋、浆果、香蕉、柑桔、奇异果、甜瓜、桃、梨、菠萝、仁果、石榴、芹菜、洋葱、蒜、葡萄、韭蔥、红葱头、细香葱、绿花椰菜、甘蓝、花椰菜、葫芦、番茄、马铃薯、小麦、水稻或大豆。

10.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述组合物包含相对重量比在1.3:1.0至3.0:1.0范围的伊枯草菌素和丰原素。

11.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述组合物还包括农业上合适的制剂介质，其包含合适的载体、表面活性剂和任选包含缓冲剂。

12.一种农业组合物，其包含：

a)以ATCC No.PTA-122162保藏的解淀粉芽孢杆菌FCC1256，及

b)农业上合适的制剂介质，其包含合适的载体、表面活性剂和任选包含缓冲剂。

13.根据权利要求12的组合物，其包含相对重量比在1.3:1.0至3.0:1.0范围的伊枯草菌素和丰原素。

14.根据权利要求12-13中任一项的组合物，其中所述组合物是选自悬浮液、悬浮液浓缩物(SC)、油分散体(OD)、泡沫、可喷粉粉末(DP)、水分散性颗粒(WG)和可湿性粉末(WP)的制剂形式。

15.一种用于农业组合物的浓缩物，所述浓缩物包含：

a)以ATCC No.PTA-122162保藏的解淀粉芽孢杆菌FCC1256，及

b)农业上合适的制剂介质，其包含合适的载体、表面活性剂和任选包含缓冲剂。

16.根据权利要求15的浓缩物，其是选自悬浮浓缩物(SC或SD)、超低体积悬浮液(SU)、种子处理悬浮液(FS)、油分散体(OD)、糊剂(PA)、凝胶(GD)、水分散性颗粒(WG)、可喷粉粉末(DP)、水分散性片剂(WT)、用于浆液处理的水分散性粉末(WS)和可湿性粉末(WP)的制剂形式。

17.根据权利要求15-16中任一项的浓缩物，其包含相对重量比在1.3:1.0至3.0:1.0范围的伊枯草菌素和丰原素。

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