CN108004134A - 一种药敏试剂盒及其制备方法、以及细菌药敏检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种药敏试剂盒及其制备方法、以及细菌药敏检测方法，药敏试剂盒包括盒体、培养基平板、药敏纸片以及试验器械，盒体内设有容纳腔，培养基平板设于容纳腔，培养基平板包括普通营养琼脂平板、麦康凯琼脂平板、SS琼脂平板以及含辅酶A的胰酪胨大豆肉汤琼脂平板；药敏纸片设于容纳腔，每一所述药敏纸片对应含有泰拉菌素、乙酰异戊酰基泰乐菌素、沃尼妙林、左氧氟沙星、洛美沙星、环丙沙星、恩诺沙星、庆大霉素、卡那霉素、链霉素、泰乐菌素、替米考星、大观霉素、氟苯尼考、头孢噻呋、泰妙菌素、强力霉素、黏菌素、阿莫西林以及林可霉素中的任意一种药物。本发明提供的药敏试剂盒具有试验结果精确、耗时短、操作简便且成本低廉的特点。

Description

一种药敏试剂盒及其制备方法、以及细菌药敏检测方法

技术领域

本发明涉及药物检测技术领域，特别涉及一种药敏试剂盒及其制备方法、以及细菌药敏检测方法。

背景技术

养殖场在动物生产中，部分存在滥用抗生素，比如，为了提高抗生素的保健效果，长时间、超剂量使用抗生素现象严重，导致动物性食品药物残留，危害消费者的健康。随着人们食品安全意识的提高和政府对食品安全的日益重视，抗生素在养殖场的使用越来越规范，针对病原菌选择敏感性药物，可实现动物疾病的精准控制，减少药物治疗成本，降低动物食品的药物残留。

养殖场兽医根据动物临床和病理剖检情况，判断动物疾病的类型，其中细菌性疾病，则可根据药敏试验筛选敏感性药物，从而科学地使用药物治疗和预防细菌性疾病。在现有技术中，药敏试验常通过药敏试剂盒进行，但是目前的药敏盒普遍存在药物种类陈旧单一、试验可操作性不足、耗时较长、试验结果不精确或成本太高的缺点。

发明内容

本发明的主要目的是提出一种药敏试剂盒及其制备方法、以及细菌药敏检测方法，旨在降低药敏试验成本，并缩短药敏试验耗时。

为实现上述目的，本发明提出一种药敏试剂盒，所述药敏试剂盒包括：

盒体，所述盒体内设有容纳腔；

培养基平板，设于所述容纳腔，所述培养基平板包括普通营养琼脂平板、麦康凯琼脂平板、SS琼脂平板以及含辅酶A的胰酪胨大豆肉汤琼脂平板；

药敏纸片，设于所述容纳腔，所述药敏纸片设有20个，且每一所述药敏纸片对应含有泰拉菌素、乙酰异戊酰基泰乐菌素、沃尼妙林、左氧氟沙星、洛美沙星、环丙沙星、恩诺沙星、庆大霉素、卡那霉素、链霉素、泰乐菌素、替米考星、大观霉素、氟苯尼考、头孢噻呋、泰妙菌素、强力霉素、黏菌素、阿莫西林以及林可霉素中的任意一种药物；以及，

试验器械，设于所述容纳腔，所述试验器械包括镊子、组织钳、组织剪、采样袋以及直尺。

本发明还提出一种如上述的药敏试剂盒的制备方法，所述药敏试剂盒包括培养基平板和药敏纸片，所述药敏试剂盒的制备方法包括以下步骤：

配制培养基，使培养基凝固后形成培养基平板；

配制药物溶液，使药物溶液浸泡空白药敏片后形成药敏纸片；

其中，所述培养基包括普通营养琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基、SS琼脂培养基以及含辅酶A的胰酪胨大豆肉汤琼脂培养基，以对应形成普通营养琼脂平板、麦康凯琼脂平板、SS琼脂平板和含辅酶A的胰酪胨大豆肉汤琼脂平板；

所述药物溶液包括对应由如上所述的20种药物中的任意一种配制而成，以对应形成含有所述20种药物中的任意一种药物的药敏纸片。

优选地，所述普通营养琼脂培养基包括以下浓度的组分：蛋白胨10.0g/L、牛肉浸出粉3.0g/L、氯化钠5.0g/L以及琼脂14.0g/L；所述营养琼脂培养基的pH值为7.0～7.4。

优选地，所述麦康凯琼脂培养基包括以下浓度的组分：蛋白胨20.0g/L、乳糖10.0g/L、牛胆盐5.0g/L、氯化钠5.0g/L、中性红0.075g/L以及琼脂13.0g/L；所述麦康凯琼脂培养基的pH值为7.2～7.6。

优选地，所述SS琼脂培养基包括以下浓度的组分：牛肉粉5.0g/L、蛋白胨5.0g/L、乳糖10.0g/L、牛胆盐8.5g/L、枸橼酸钠8.5g/L、硫代硫酸钠8.5g/L、枸橼酸铁1.0g/L、中性红0.025g/L、煌绿0.00033g/L以及琼脂17.0g/L；所述SS琼脂培养基的pH值为6.9～7.1。

优选地，所述含辅酶A的胰酪胨大豆肉汤琼脂培养基由以下步骤配制而成：

配制胰酪胨大豆肉汤琼脂培养基，将胰酪胨大豆肉汤琼脂培养基于121℃高压灭菌15min后，在无菌操作室冷却至50℃，向胰酪胨大豆肉汤琼脂培养基中加入已过滤除菌的辅酶A，即得含辅酶A的胰酪胨大豆肉汤琼脂培养基；

其中，所述胰酪胨大豆肉汤琼脂培养基包括以下浓度的组分：胰酪胨15g/L、大豆木瓜蛋白酶水解物5g/L、氯化钠5g/L以及琼脂15g/L，所述胰酪胨大豆肉汤琼脂培养基的pH值为7.1～7.5；所述辅酶A的添加量为所述胰酪胨大豆肉汤琼脂培养基体积的10％，所述辅酶A的浓度为0.15g/L。

优选地，配制药物溶液，使药物溶液浸泡空白药敏片后形成药敏纸片的步骤，包括：

将20种药物中的任意一种溶解于溶剂中，形成药物溶液；

取药物溶液滴加到装有空白药敏片的抗生素瓶中，使药物溶液浸泡空白药敏片25～35min后形成药敏片，将药敏片混合并使药敏片贴靠在抗生素瓶的内壁上；

将装有药敏片的抗生素瓶冷冻25～35min后，进行冻干处理26～33h，获得药敏纸片。

本发明还进一步提出一种细菌药敏检测方法，所述细菌药敏检测方法使用如上述的药敏试剂盒进行，包括如下步骤：

无菌采集病料的病变组织，并将病变组织接种至对应的培养基平板上，以使病变组织中的细菌接种至培养基平板；

将药敏纸片贴于已接种细菌的培养基平板上，并使药敏纸片与培养基紧密接触，完成药敏纸片粘贴；

在药敏纸片粘贴完成后的15～30min内，将培养基置于36～38℃条件下培养，12～24h后观测抑菌圈直径，并根据抑菌圈直径判断病料组织中的细菌对药敏纸片中所含药物成分的敏感性。

本发明提供的技术方案中，选用常规和最新兽用药物制作药敏纸片，并根据不同的感染细菌配制不同的培养基平板，所制备的药敏试剂盒具有试验结果精确、耗时短、操作简便且成本低廉的特点，适合于规模化养殖场及基层兽医单位进行细菌性疫病的药敏试验，从而实现动物精准用药。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅为本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。

图1为本发明提供的药敏检测方法的一实施例的药敏试验效果图。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

为解决市售药敏试剂盒的药敏片的药种陈旧单一、试验可操性差的问题，本发明提出一种药敏试剂盒。

在本发明提供的药敏试剂盒的一实施例中，所述药敏试剂盒包括盒体、培养基平板、药敏纸片以及试验器械，所述盒体内设有容纳腔；所述培养基平板设于所述容纳腔，所述培养基平板包括普通营养琼脂平板、麦康凯琼脂平板、SS(Salmonella Shigella)琼脂平板以及含辅酶A(Nicotinamide Adenine Dinucleotide，NAD)的胰酪胨大豆肉汤(TrypticSoy Agar，TSA)琼脂平板；所述药敏纸片设于所述容纳腔，所述药敏纸片设有20个，且每一所述药敏纸片对应含有泰拉菌素、乙酰异戊酰基泰乐菌素、沃尼妙林、左氧氟沙星、洛美沙星、环丙沙星、恩诺沙星、庆大霉素、卡那霉素、链霉素、泰乐菌素、替米考星、大观霉素、氟苯尼考、头孢噻呋、泰妙菌素、强力霉素、黏菌素、阿莫西林以及林可霉素中的任意一种药物；所述试验器械设于所述容纳腔，所述试验器械包括镊子、组织钳、组织剪、采样袋以及直尺。

本发明提供的技术方案中，选用常规和最新的20种兽用药物制作药敏纸片，并根据不同的感染细菌配制不同的培养基平板(例如，大肠杆菌可选用麦康凯琼脂平板，沙门氏菌可选用SS琼脂平板，副猪嗜血杆菌可选用含NAD的TSA琼脂平板，普通葡萄球菌可选用普通营养琼脂平板)，所制备的药敏试剂盒具有试验结果精确、耗时短、操作简便且成本低廉的特点，适合于规模化养殖场及基层兽医单位进行细菌性疫病的药敏试验，从而实现动物精准用药，进而降低治疗成本，克服盲目用药所导致的成本高、效果差和治疗时间长的问题。

其中，所述培养基平板需置于4℃条件下冷藏保存，保质期为60天，所述试验器械可以常温保存，也可以于4℃条件下冷藏保存。故，本发明提供的药敏试剂盒的保质期为60天。在本发明实施例中，所述药敏试剂盒中放置有四套培养基平板，即普通营养琼脂平板、麦康凯琼脂平板、SS琼脂平板和含NAD的TSA琼脂平板；所述药敏试剂盒中放置有分别由20中兽药对应制备而成的20个药敏纸片，且每个药敏纸片均放置于抗生素瓶中(避免外界环境对药敏纸片的污染)，对应的，每个抗生素瓶中均放置有25片由同一种药物制备的药敏纸片。

所述20中药物包括泰拉菌素、乙酰异戊酰基泰乐菌素(爱乐新)、沃尼妙林、左氧氟沙星、洛美沙星、环丙沙星、恩诺沙星、庆大霉素、卡那霉素、链霉素、泰乐菌素、替米考星、大观霉素、氟苯尼考、头孢噻呋、泰妙菌素、强力霉素、黏菌素、阿莫西林以及林可霉素，均选材于国内外知名动保企业的常规和最新兽用药物，克服了现有市售药敏片的药种陈旧单一的问题。

所述试验器械包括一把小镊子、一把组织钳、一把组织剪、20只采样袋以及一把直尺，所述小镊子用于夹取药敏纸片和培养基平板，所述组织钳、组织剪和采样袋用于采集病料的病变组织样本，所述直尺用于测量药敏试验结果。

本发明还提出一种如上述的药敏试剂盒的制备方法，所述药敏试剂盒包括培养基平板和药敏纸片，在本发明提供的药敏试剂盒的制备方法的一实施例中，所述药敏试剂盒的制备方法包括以下步骤：

步骤S10、配制培养基，使培养基凝固后形成培养基平板；

在步骤S10中，所述培养基包括普通营养琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基、SS琼脂培养基和含NAD的TSA琼脂培养基，以对应形成普通营养琼脂平板、麦康凯琼脂平板、SS琼脂平板和含NAD的TSA琼脂平板。

根据动物病变组织的病理变化特征，判定疑似感染细菌，进而选用相应的培养基平板进行药敏试验，例如，大肠杆菌可选用麦康凯琼脂平板，沙门氏菌可选用SS琼脂平板(SS琼脂培养基是肠道细菌常用的强选择性培养基，主要用于沙门菌和志贺菌的筛选，在SS琼脂培养基上这两个细菌形成不分解乳糖的无色)，副猪嗜血杆菌可选用含NAD的TSA琼脂平板，普通葡萄球菌可选用普通的普通营养琼脂平板。针对不同的感染细菌类型，选择相应的培养基来接种细菌，使得对不同细菌的药敏试验更为精确。

步骤S20、配制药物溶液，使药物溶液浸泡空白药敏片后形成药敏纸片；

在步骤S20中，所述药物溶液对应由如上所述的20种药物中的任意一种配制而成，以对应形成含有所述20种药物中的任意一种药物的药敏纸片。

以市售的常规和最新的多种兽用药物为原材料，对应制作成相应的药敏纸片，用于检测细菌对不同兽用药物的药物成分的敏感性，以针对引起动物病变的细菌选择合理的药物。

在步骤S10中，所述普通营养琼脂培养基包括以下浓度的组分：蛋白胨10.0g/L、牛肉浸出粉3.0g/L、氯化钠5.0g/L以及琼脂14.0g/L；所述营养琼脂培养基的pH值为7.0～7.4(25℃时)。在本发明实施例中，以配制的营养琼脂培养基制作营养琼脂平板的操作如下：按上述组分配制营养琼脂培养基，并于121℃高压灭菌15min后备用；取一次性平皿(直径为10cm)以及15mL已灭菌的营养琼脂培养基，将营养琼脂培养基倾倒于平皿上，静置冷却至培养基凝固，从而形成营养琼脂平板，10皿一扎打包，即10个营养琼脂平板(连同平皿)为一扎放入药敏试剂盒中。

所述麦康凯琼脂培养基包括以下浓度的组分：蛋白胨20.0g/L、乳糖10.0g/L、牛胆盐5.0g/L、氯化钠5.0g/L、中性红0.075g/L以及琼脂13.0g/L；所述麦康凯琼脂培养基的pH值为7.2～7.6(25℃时)。在本发明实施例中，以配制的麦康凯琼脂培养基制作麦康凯琼脂平板的操作如下：按上述组分配制麦康凯琼脂培养基，并于121℃高压灭菌15min后备用；取一次性平皿(直径为10cm)以及15mL已灭菌的麦康凯琼脂培养基，将麦康凯琼脂培养基倾倒于平皿上，静置冷却至培养基凝固，从而形成麦康凯琼脂平板，10皿一扎打包，即10个麦康凯琼脂平板(连同平皿)为一扎放入药敏试剂盒中。

所述SS琼脂培养基包括以下浓度的组分：牛肉粉5.0g/L、蛋白胨5.0g/L、乳糖10.0g/L、牛胆盐8.5g/L、枸橼酸钠8.5g/L、硫代硫酸钠8.5g/L、枸橼酸铁1.0g/L、中性红0.025g/L、煌绿0.00033g/L以及琼脂17.0g/L；所述SS琼脂培养基的pH值为6.9～7.1(25℃时)。在本发明实施例中，以配制的SS琼脂培养基制作SS琼脂平板的操作如下：按上述组分配制SS琼脂培养基，并于121℃高压灭菌15min后备用；取一次性平皿(直径为10cm)以及15mL已灭菌的SS琼脂培养基，将SS琼脂培养基倾倒于平皿上，静置冷却至培养基凝固，从而形成SS琼脂平板，10皿一扎打包，即10个SS琼脂平板(连同平皿)为一扎放入药敏试剂盒中。

所述含NAD的TSA琼脂培养基由以下步骤配制而成：配制TSA琼脂培养基，将TSA琼脂培养基于121℃高压灭菌15min后，在无菌操作室冷却至50℃，向TSA琼脂培养基中加入已过滤除菌的辅酶A(NAD)，即得含NAD的TSA琼脂培养基；其中，所述TSA琼脂培养基包括以下浓度的组分：胰酪胨15g/L、大豆木瓜蛋白酶水解物5g/L、氯化钠5g/L以及琼脂15g/L，所述TSA琼脂培养基的pH值为7.1～7.5(25℃时)；所述NAD的添加量为所述TSA琼脂培养基体积的10％，所述NAD的浓度为0.15g/L。

在本发明实施例中，配制的含NAD的TSA琼脂平板的操作如下：取一次性平皿(直径为10cm)以及15mL配制的含NAD的TSA琼脂培养基(已灭菌)，将培养基倾倒于平皿上，静置冷却至培养基凝固，从而形成含NAD的TSA琼脂平板，10皿一扎打包，即10个含NAD的TSA琼脂平板(连同平皿)为一扎放入药敏试剂盒中。

在本发明提供的药敏试剂盒的制备方法的另一实施例中，步骤S20包括：

步骤S21、将20种药物中的任意一种溶解于溶剂中，形成药物溶液；

所述20种药物包括泰拉菌素、乙酰异戊酰基泰乐菌素(爱乐新)、沃尼妙林、左氧氟沙星、洛美沙星、环丙沙星、恩诺沙星、庆大霉素、卡那霉素、链霉素、泰乐菌素、替米考星、大观霉素、氟苯尼考、头孢噻呋、泰妙菌素、强力霉素、黏菌素、阿莫西林以及林可霉素。所述20种药物在对应的药敏纸片中的药物浓度依据规模化养殖场的用药特征和临床选药标准进行设计，所述药敏纸片中的药物含量如表1所示。

表1药敏纸片中的药物含量

其中，药物含量分别为10μg、20μg、25μg和30μg规格的药敏纸片在配制药物溶液时，对应配制的药物溶液的浓度分别为1mg/mL、2mg/mL、2.5mg/mL和3mg/mL。需要注意的是，在对应配制不同的药物溶液时，水溶性药物可直接用蒸馏水溶解，不溶于水的药物可选用易挥发的有机溶剂(如甲醇、乙醇等)溶解(后续制备药敏纸片时需通过烘干等方式将有机溶剂除去)，配制的药物溶液在用于后续制备药敏纸片之前，需使用0.2μm细菌滤器进行过滤去菌。

步骤S22、取药物溶液滴加到装有空白药敏片的抗生素瓶中，使药物溶液浸泡空白药敏片25～35min后形成药敏片，将药敏片混合并使药敏片贴靠在抗生素瓶的内壁上；

具体操作时，可采用如下方法进行：在生物安全柜中，使用移液枪移取500μL的药物溶液，均匀滴加到装有50片空白药敏纸片的抗生素瓶中，使药物溶液充分浸泡空白药敏纸片25～35min形成药敏片，然后使用灭菌的接种针将药敏片均匀混合，并小心是药敏片贴靠在抗生素瓶的内壁上，同时给抗生素瓶做好药物标识。

步骤S23、将装有药敏片的抗生素瓶冷冻25～35min后，进行冻干处理26～33h，获得药敏纸片。

具体操作时，可采用如下方法进行：调节冷冻干燥机冷井温度至-70℃，将装有药敏片的抗生素瓶放置于托盘上并放入冷井中，冷冻25～35min后，盖上真空罩，打开真空泵，进行冻干处理26～33h(在本发明的一实施例中，冻干处理时间优选为30h)后，轻拍抗生素瓶，药敏片能从抗生素瓶的内壁自然滑落，表明药敏片已干燥形成药敏纸片，此时，从冻干机中取出装有药敏片的抗生素瓶，即可获得药敏纸片，并对应将药敏纸片放置于新的抗生素瓶中，每瓶25片，盖上盖子密封好，即可放入所述药敏试剂盒内待用。另外，剩余的药敏纸片可仍然放置于抗生素瓶中，盖上瓶盖后放入自封袋中，置于-20℃的冰箱中保存，保质时间为3个月。

本发明还进一步提出一种细菌药敏检测方法，所述细菌药敏检测方法使用如上所述的药敏试剂盒进行，在本发明提供的细菌药敏检测方法的一实施例中，所述细菌药敏检测方法包括如下步骤：

步骤S30、无菌采集病料的病变组织，并将病变组织接种至对应的培养基平板上，以使病变组织中的细菌接种至培养基平板；

使用所述药敏试剂盒中的组织钳、组织剪和采样袋，无菌采集病料病变严重的组织或心、肝、脾、肺、肾等，放置于灭菌平皿中，依据病变组织的病理变化特征，判定疑似感染细菌，进而选择相应的培养基平板，例如，大肠杆菌可选用麦康凯琼脂平板，沙门氏菌可选用SS琼脂平板，副猪嗜血杆菌可选用含NAD的TSA琼脂平板，普通葡萄球菌可选用普通营养琼脂平板。根据不同的感染细菌配制不同的培养基平板，从而提高药敏试验结果的准确性。

具体操作时，可采用如下方法：将组织钳、镊子、组织剪灭菌后放入生物安全柜中，用镊子从所述药敏试剂盒中夹取对应的培养基平板(包含培养平皿)，用组织钳钳夹病变组织，用组织剪剪出平整切面，然后有顺序地将病变组织紧密涂抹于对应的培养基平板上，使病变组织中的细菌接种至培养基平板，然后移除病变组织，获得病料涂片，进行后续的药敏试验。

步骤S40、将药敏纸片贴于已接种细菌的培养基平板上，并使药敏纸片与培养基紧密接触，完成药敏纸片粘贴；

待病变组织中的细菌接种于培养基平板后，移除病变组织，然后使用经灼烧器灭菌的镊子，从放置药敏纸片的抗生素瓶中夹取相应的药敏纸片，将所述药敏纸片贴在已接种细菌的培养基平板上，并用镊子在药敏纸片表面轻压，使药敏纸片和培养基紧密接触，完成药敏纸片的粘贴。需要注意的是，药敏纸片粘贴之后，应在装有培养基平板的培养平皿的外侧与贴片处对应的位置贴上药物标识，标明药敏纸片所含有的药物名称。

在进行药敏试验时，为确保试验结果的准确性，针对每一个病料涂片，各种药敏纸片需至少进行三组平行试验，即每一病料涂片上应至少贴设三个含有同一药物成分的药敏纸片，此时应注意各个药敏纸片之间的中心间距不得小于24mm，药敏纸片距培养平皿边不得小于15mm，一旦药敏纸片接触培养基表面，则不可再移动(因为此时药物已经开始扩散)。

步骤S50、在药敏纸片粘贴完成后的15～30min内，将培养基置于36～38℃条件下培养，12～24h后观测抑菌圈直径，并根据抑菌圈直径判断病料组织中的细菌对药敏纸片中所含药物成分的敏感性。

药敏纸片贴设完成后，在15～30min内，将培养平皿翻过来置于培养箱中进行细菌培养，于36～38℃条件下培养12～24h后，从培养箱中取出培养平皿，正对光线观测抑菌圈(或杀菌圈)，用所述药敏试剂盒中的直尺测量抑菌圈(或杀菌圈)的直径并记录，取三组平行试验的平均值作为该药敏纸片中所含药物成分的抑菌圈(或杀菌圈)直径，并根据抑菌圈(或杀菌圈)直径判断病料组织中的细菌对药敏纸片中所含药物成分的敏感性。敏感性判定标准如下：抑菌圈直径＞15mm，判定为高度敏感；抑菌圈直径为10～15mm，判定为中度敏感；0mm＜抑菌圈直径＜10mm，判定为低度敏感；无抑菌圈，判定为不敏感。

其中，所述药敏纸片贴设于培养基上，在经过细菌培养后形成抑菌圈(或杀菌圈)的效果如图1所示，图1中，直径D即为需要测量的抑菌圈(或杀菌圈)的直径。接种至培养基上的细菌经恒温培养12～24h后，即可观测药敏试验结果，使得药敏试验耗时较短；通过抑菌圈(杀菌圈)直径的测量来判定病料组织中的细菌对药敏纸片中所含的药物成分的敏感性，具有试验结果形象直观的特点，且整个所述药敏检测方法操作简便，大大提高了药敏试验的可操作性。

综上所述，本发明实施例提供的药敏试剂盒，设有分别由20种药物对应制作而成的20个药敏纸片以及针对不同细菌配制的专用培养基，解决了市售药敏片的药种陈旧单一、试验可操作性不足以及试验结果不精确的问题，实现了一站式药敏试验；其中的药敏纸片选用国内外知名动保企业的常规和最新20种兽用药物，依据规模化养殖场的用药特征，进行试验药物浓度和临床选用标准的设计，效果明显，使得所述药敏试剂盒具有耗时短(12～24h出结果)、操作简便和试验结果形象直观的特点，适合规模化养殖场及基层兽医单位进行细菌性疫病的药敏试验，从而实现动物精准用药，降低治疗成本，克服盲目用药所至成本高、效果差和治疗时间长等问题。

以上仅为本发明的优选实施例，并非因此限制本发明的专利范围，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之类，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包括在本发明的专利保护范围内。

Claims (8)

1.一种药敏试剂盒，其特征在于，所述药敏试剂盒包括：

盒体，所述盒体内设有容纳腔；

培养基平板，设于所述容纳腔，所述培养基平板包括普通营养琼脂平板、麦康凯琼脂平板、SS琼脂平板以及含辅酶A的胰酪胨大豆肉汤琼脂平板；

药敏纸片，设于所述容纳腔，所述药敏纸片设有20个，且每一所述药敏纸片对应含有20种药物中的任意一种，所述20种药物包括泰拉菌素、乙酰异戊酰基泰乐菌素、沃尼妙林、左氧氟沙星、洛美沙星、环丙沙星、恩诺沙星、庆大霉素、卡那霉素、链霉素、泰乐菌素、替米考星、大观霉素、氟苯尼考、头孢噻呋、泰妙菌素、强力霉素、黏菌素、阿莫西林以及林可霉素；以及，

试验器械，设于所述容纳腔，所述试验器械包括镊子、组织钳、组织剪、采样袋以及直尺。

2.一种如权利要求1所述的药敏试剂盒的制备方法，其特征在于，所述药敏试剂盒包括培养基平板和药敏纸片，所述药敏试剂盒的制备方法包括以下步骤：

配制培养基，使培养基凝固后形成培养基平板；

配制药物溶液，使药物溶液浸泡空白药敏片后形成药敏纸片；

其中，所述培养基包括普通营养琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基、SS琼脂培养基以及含辅酶A的胰酪胨大豆肉汤琼脂培养基，以对应形成普通营养琼脂平板、麦康凯琼脂平板、SS琼脂平板和含辅酶A的胰酪胨大豆肉汤琼脂平板；

所述药物溶液对应由如权利要求1所述的20种药物中的任意一种配制而成，以对应形成含有所述20种药物中的任意一种药物的药敏纸片。

3.如权利要求2所述的药敏试剂盒的制备方法，其特征在于，所述普通营养琼脂培养基包括以下浓度的组分：蛋白胨10.0g/L、牛肉浸出粉3.0g/L、氯化钠5.0g/L以及琼脂14.0g/L；所述营养琼脂培养基的pH值为7.0～7.4。

4.如权利要求2所述的药敏试剂盒的制备方法，其特征在于，所述麦康凯琼脂培养基包括以下浓度的组分：蛋白胨20.0g/L、乳糖10.0g/L、牛胆盐5.0g/L、氯化钠5.0g/L、中性红0.075g/L以及琼脂13.0g/L；所述麦康凯琼脂培养基的pH值为7.2～7.6。

5.如权利要求2所述的药敏试剂盒的制备方法，其特征在于，所述SS琼脂培养基包括以下浓度的组分：牛肉粉5.0g/L、蛋白胨5.0g/L、乳糖10.0g/L、牛胆盐8.5g/L、枸橼酸钠8.5g/L、硫代硫酸钠8.5g/L、枸橼酸铁1.0g/L、中性红0.025g/L、煌绿0.00033g/L以及琼脂17.0g/L；所述SS琼脂培养基的pH值为6.9～7.1。

6.如权利要求2所述的药敏试剂盒的制备方法，其特征在于，所述含辅酶A的胰酪胨大豆肉汤琼脂培养基由以下步骤配制而成：

配制胰酪胨大豆肉汤琼脂培养基，将胰酪胨大豆肉汤琼脂培养基于121℃高压灭菌15min后，在无菌操作室冷却至50℃，向胰酪胨大豆肉汤琼脂培养基中加入已过滤除菌的辅酶A，即得含辅酶A的胰酪胨大豆肉汤琼脂培养基；

其中，所述胰酪胨大豆肉汤琼脂培养基包括以下浓度的组分：胰酪胨15g/L、大豆木瓜蛋白酶水解物5g/L、氯化钠5g/L以及琼脂15g/L，所述胰酪胨大豆肉汤琼脂培养基的pH值为7.1～7.5；所述辅酶A的添加量为所述胰酪胨大豆肉汤琼脂培养基体积的10％，所述辅酶A的浓度为0.15g/L。

7.如权利要求2所述的药敏试剂盒的制备方法，其特征在于，配制药物溶液，使药物溶液浸泡空白药敏片后形成药敏纸片的步骤，包括：

将20种药物中的任意一种溶解于溶剂中，形成药物溶液；

取药物溶液滴加到装有空白药敏片的抗生素瓶中，使药物溶液浸泡空白药敏片25～35min后形成药敏片，将药敏片混合并使药敏片贴靠在抗生素瓶的内壁上；

将装有药敏片的抗生素瓶冷冻25～35min后，进行冻干处理26～33h，获得药敏纸片。

8.一种细菌药敏检测方法，其特征在于，所述细菌药敏检测方法使用如权利要求1所述的药敏试剂盒进行，包括如下步骤：

无菌采集病料的病变组织，并将病变组织接种至对应的培养基平板上，以使病变组织中的细菌接种至培养基平板；

将药敏纸片贴于已接种细菌的培养基平板上，并使药敏纸片与培养基紧密接触，完成药敏纸片粘贴；

在药敏纸片粘贴完成后的15～30min内，将培养基置于36～38℃条件下培养，12～24h后观测抑菌圈直径，并根据抑菌圈直径判断病料组织中的细菌对药敏纸片中所含药物成分的敏感性。