CN104073545A - 鸡源大肠埃希菌药敏试验方法 - Google Patents

鸡源大肠埃希菌药敏试验方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种鸡源大肠埃希菌药敏试验方法，涉及畜牧业，以解决现有药敏试验方法步骤繁琐耗时长的问题。一种鸡源大肠埃希菌药敏试验方法，包括如下步骤：采集样本，从大肠埃希菌致死的鸡的实质脏器取样；接种培养，将采集的大肠埃希菌样本均匀涂布在MH培养基；药敏试验，将药敏纸片均匀贴在涂有大肠埃希菌的MH培养基表面，并置于35℃～42℃的环境中孵育，6小时后获得实验结果。本发明用以简化药敏试验方法步骤减少试验时间。

Description

鸡源大肠埃希菌药敏试验方法
技术领域
本发明涉及畜牧业，特别是指一种鸡源大肠埃希菌药敏试验方法。
背景技术
养鸡业是我国畜牧业发展的支柱产业之一，带动了亿万农民脱贫致富。由于养鸡业的集约化、规模化，造成饲养密度过大、鸡舍环境污染严重，导致鸡病发生逐年增多，其中败血型鸡源大肠埃希菌(条件性致病菌)病发生较为严重，约占鸡病临床病例的25％，致死率约占90％以上，易成为其他疾病的并发病或继发病，给养殖场(户)造成较为严重的经济损失。
药物防治是治疗本病的一项重要措施,但是，兽医临床对规模化、集约化畜禽饲养场大肠杆菌感染采用：一旦有几只或几头发病则全群投药防治的方法。随着抗菌药物的广泛和大剂量使用,鸡源大肠埃希菌的耐药性(多重耐药和泛耐药)逐年增加，(泛耐药菌株又称超级大肠杆菌)，用药成本也大大增加，这不仅给防控该病带来困难,而且禽产品的药物残留已给食品安全和国家出口贸易带来不良影响。用药敏试验对致病性大肠埃希菌进行耐药性检查，筛选出敏感性药物，确定合适的剂量和合理的疗程，是兽医临床的迫切需要。
国际没有禽用药敏标准，我国兽医临床通常参考“纸片法(K-B法)抗菌药敏试验标准”(WS/T125-1999)，采用“细菌分离-鉴定-药敏试验”三步法。标准纸片法药敏试验在进行最终判读时需要18h～24h(病原菌的分离培养)+12h～24h(纯化一代纯菌落的培养)+16h～24h(纯菌落的培养)+16h～24h(药敏试验)，即最少62h～96h。标准药敏试验对试验条件要求较高、步骤较为繁琐，出具报告时间较长，往往会耽误疾病的最佳治疗期，不能满足临床的迫切需要。
农业部(农医发[2011]5号)，药敏试验采用的是微量肉汤稀释法。这一方法操作复杂，耗时较纸片法(K-B法)抗菌药敏试验更长，适合科研工作，临床应用甚为不便，难以推广应用。
崔保安等在“应用快速药敏试验筛选治疗鸡大肠杆菌病的药物”[J].《中国畜禽传染病》1991年第2期报道“取部分肝组织，按1：5加生理盐水研磨制成悬液，静置5分钟，用悬液涂布营养琼脂平板，37℃培养13h～24h判定结果，标本直接药敏试验与分离菌株药敏试验结果一致，节约时间46h～72h。但是肝组织研磨易污染杂菌，药敏判读时间较长。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种鸡源大肠埃希菌药敏试验方法，以解决现有药敏试验方法步骤繁琐耗时长的问题。
为解决上述技术问题，本发明实施例提供一种鸡源大肠埃希菌药敏试验方法，包括如下步骤：
采集样本，从大肠埃希菌致死的鸡的实质脏器从采集大肠埃希菌样本；
接种培养，将采集的大肠埃希菌样本均匀涂布在MH培养基；
药敏试验，将药敏纸片均匀贴在涂有大肠埃希菌的MH培养基表面，并置于35℃～42℃的环境中孵育，6小时后获得实验结果。
其中，所述MH培养基由1.5g～2.0g牛肉粉、1.0g～2.0g可溶性淀粉和17.0g～18.0g酸水解酪蛋白加热溶解于1000ml蒸馏水中，115℃～125℃高压灭菌制得。
其中，所述MH培养基的厚度为3.5mm～4.5mm。
其中，所述药敏纸片含有抗生素，所述药敏纸片的pH值为中性。
其中，所述药敏纸片采用新华1号定性试纸。
其中，所述药敏纸片呈圆形，所述药敏纸片的直径为5～7mm
本发明的上述技术方案的有益效果如下：
上述方案中，直接药敏试验耗时少、费用低，养殖场(户)乐于接受，减少量药物浪费、畜产品残留、耐药菌株的产生、畜禽排泄物抗生素对环境的污染，同时也减少因食物链引起人体耐药菌株的产生，该发明惠及环境保护、动物及人体健康，有利于可持续发展。
附图说明
图1为本发明实施例的步骤流程示意图。
具体实施方式
为使本发明要解决的技术问题、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图及具体实施例进行详细描述。
如图1所示，本发明实施例针对现有的药敏试验方法步骤繁琐耗时长的问题，提供一种鸡源大肠埃希菌药敏试验方法，包括如下步骤：
采集样本，从大肠埃希菌致死的鸡的实质脏器上采集大肠埃希菌样本；
接种培养，将采集的大肠埃希菌样本均匀涂布在MH培养基(Mueller-Hinton Broth，肉汤培养基)；
药敏试验，将药敏纸片均匀贴在涂有大肠埃希菌的MH培养基表面，并置于35℃～42℃的环境中孵育，6小时后获得实验结果。具体地，本发明鸡源大肠埃希菌药敏试验方法的实施步骤如下：
S1、由2g牛肉粉、1.5g可溶性淀粉和17.5g酸水解酪蛋白加热溶解于1000ml蒸馏水中，121℃高压灭菌制得厚度为4mm的MH培养基。
S2、取新华1号定性滤纸，用打孔机打成6mm直径的圆形小纸片。取圆纸片50片放入清洁干燥的抗生素空瓶中，瓶口以单层牛皮纸包扎。经15磅15-20分钟高压消毒后，放在37℃温箱或烘箱中，使完全干燥。
在上述含有50片纸片的抗生素瓶内加入硫酸妥布霉素0.25ml，并翻动纸片，使各纸片充分浸透硫酸妥布霉素，翻动纸片时不能将纸片捣烂。同时在瓶口上记录药物名称，放37℃温箱内过夜，干燥后即密盖，置阴暗干燥处存放，此时药敏纸片的pH值为中性。
S3、采集样本，从大肠埃希菌致死的鸡的实质脏器上采集大肠埃希菌样本，实质脏器可以为心脏或、肝脏；大肠埃希菌可附着在肝脏、心脏表面形成生物被膜—肝周炎、心包炎，生物被膜含有巨大数量细菌，培养基表面接种较大数量细菌时可形成菌苔。
取材较人医临床方便，禽类直肠温度40℃～42℃，适宜大肠杆菌生长。大量大肠杆菌菌体附着在鸡体内脏器官及其表面形成的生物被膜，生物被膜富集菌体数量往往高于0.5麦氏单位；在实际培养中，0.5麦氏比浊度涂布MH培养基孵育一段时间后现形成单个菌落再融合成菌苔，而从肝周炎、心包炎取样直接涂布MH培养基孵育一段时间后直接形成菌苔。
S4、接种培养，用灭菌接种环取适量细菌分别在MH培养基边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至MH培养基的1/2。然后，找到第二点划线至MH培养基的1/2，依次划线，直至细菌均匀密布于MH培养基。
S5、药敏试验，将镊子于酒精灯火焰灭菌后略停，取药敏纸片贴到MH培养基表面。为了使药敏纸片与培养基紧密相贴，可用镊子轻按几下药敏纸片。为了使能准确的观察结果，要求药敏纸片能有规律的分布于MH培养基上；一般可在MH培养基中央贴一片，外周可等距离贴若干片(外周一般可贴七片)，置于38.5℃的环境中孵育。
大肠埃希菌属快速生长嗜温菌，生长温度范围10℃～45℃，最适生长温度20℃～40℃。在适宜条件下分裂一次仅需20min，对数生长期持续6h～10h，该期的病原菌致病力最强，对抗菌药物的作用较为敏感。
S6、判读结构，在涂有大肠埃希菌的MH培养基上，抗菌药物在MH培养基内向四周扩散，其浓度呈梯度递减，因此在纸片周围一定距离内的大肠埃希菌生长受到抑制。一段时间培养后形成一个抑菌圈，抑菌圈越大，说明该菌对此药敏感性越大，反之越小，若无抑菌圈，则说明该菌对此药具有耐药性。其直径大小与药物浓度、划线细菌浓度有直接关系。
由于大肠埃希菌在6小时后进入对数生长期，此时的大肠埃希菌对抗菌药物的作用较为敏感，根据药物敏感实验判定标准表1可直接判读结果。
表1
抑菌圈直径(mm) 敏感度
20以上 极敏
15～20 高敏
10～14 中敏
10以下 低敏
0 不敏
本发明开展以来，研究结果推广应用至3市动物疫病预防控制中心门诊，涵盖30余县(市、区)。直接药敏试验12557例，新增产量156.9余万只，新增产值4079.7万元，新增利税1569万元，增收节支5648.7万元，节约差旅费62.7万余元。获得养殖场(户)的认可和一致好评。
本发明技术有助于临床兽医对致病性大肠埃希菌感染及时合理用药，最大限度的减少经济损失。该技术如果在全国兽医领域推广应用，将会取得巨大的经济效益。由于该技术可有效减少抗生素使用，所以不仅能减少动物性食品中抗生素残留对人体健康(过敏、毒性作用、细菌耐药性、致畸、致突变和致癌等作用)的影响，而且能减少社会资源(抗生素研发、生产、包装、运输等)浪费，同时还能有效减少抗生素残留对环境污染，有益于食品安全和生态环境建设，社会效益极其显著。
上述方案中，直接药敏试验耗时少、费用低，养殖场(户)乐于接受，减少量药物浪费、畜产品残留、耐药菌株的产生、畜禽排泄物抗生素对环境的污染，同时也减少因食物链引起人体耐药菌株的产生，该发明惠及环境保护、动物及人体健康，有利于可持续发展。
以上所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明所述原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (7)

1.一种鸡源大肠埃希菌药敏试验方法，其特征在于，包括如下步骤：
采集样本，从大肠埃希菌致死的鸡的实质脏器上采集大肠埃希菌样本；
接种培养，将采集的大肠埃希菌样本均匀涂布在MH培养基；
药敏试验，将药敏纸片均匀贴在涂有大肠埃希菌的MH培养基表面，并置于35℃～42℃的环境中孵育，6小时后获得实验结果。
2.根据权利要求1所述的鸡源大肠埃希菌药敏试验方法，其特征在于，所述实质脏器为心脏或肝脏。
3.根据权利要求1所述的鸡源大肠埃希菌药敏试验方法，其特征在于，所述MH培养基由1.5g～2.0g牛肉粉、1.0g～2.0g可溶性淀粉和17.0g～18.0g酸水解酪蛋白加热溶解于1000ml蒸馏水中，115℃～125℃高压灭菌制得。
4.根据权利要求3所述的鸡源大肠埃希菌药敏试验方法，其特征在于，所述MH培养基的厚度为3.5mm～4.5mm。
5.根据权利要求1所述的鸡源大肠埃希菌药敏试验方法，其特征在于，所述药敏纸片含有抗生素，所述药敏纸片的pH值为中性。
6.根据权利要求1所述的鸡源大肠埃希菌药敏试验方法，其特征在于，所述药敏纸片采用新华1号定性试纸。
7.根据权利要求1所述的鸡源大肠埃希菌药敏试验方法，其特征在于，所述药敏纸片呈圆形，所述药敏纸片的直径为5～7mm。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106282299A (zh) * 2015-05-14 2017-01-04 北京中医药大学 一种体外人工获得细菌耐药菌株的方法
CN108004134A (zh) * 2017-12-21 2018-05-08 武汉轻工大学 一种药敏试剂盒及其制备方法、以及细菌药敏检测方法

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
单伟国等: "耐碳青霉烯类药物肠杆菌科细菌耐药机制分析 ", 《中国卫生检验杂志》 *
单伟国等: "耐碳青霉烯类药物肠杆菌科细菌耐药机制分析", 《中国卫生检验杂志》, vol. 21, no. 11, 30 November 2011 (2011-11-30), pages 2790 - 2792 *
崔敏莉等: "2007年自贡市食源性沙门菌菌型分布及药敏结果分析 ", 《检验医学与临床》 *
崔敏莉等: "2007年自贡市食源性沙门菌菌型分布及药敏结果分析", 《检验医学与临床》, vol. 5, no. 23, 31 December 2008 (2008-12-31), pages 1434 - 1436 *
楼宜嘉编著: "《新药临床前评价教程》", 31 January 2004 *
胡进访红等: "外用金黄膏抗感染的实验研究 ", 《中国基层医药》 *
胡进访红等: "外用金黄膏抗感染的实验研究", 《中国基层医药》, vol. 11, no. 06, 30 June 2004 (2004-06-30), pages 696 - 697 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106282299A (zh) * 2015-05-14 2017-01-04 北京中医药大学 一种体外人工获得细菌耐药菌株的方法
CN108004134A (zh) * 2017-12-21 2018-05-08 武汉轻工大学 一种药敏试剂盒及其制备方法、以及细菌药敏检测方法

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