CN107998449A - 一种3d打印高强度生物墨水材料 - Google Patents

一种3d打印高强度生物墨水材料 Download PDF

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Abstract

本发明公开一种3D打印高强度生物墨水材料。本发明双交联网络结构，利用形成β折叠结构的丝蛋白和离子交联的海藻酸构建而成，同时利用明胶的温敏快速成胶性能，实现很好地成型效果。本发明生物墨水的力学强度可控，显著提高水凝胶强度。针对不同组织应用特性，通过不同材料配比即可制备出一系列不同强度的生物墨水，3D打印可为病人定制化设计，更适合临床上的应用。

Description

一种3D打印高强度生物墨水材料
技术领域
本发明属于生物医用高分子材料技术领域，特别涉及一种用于3D打印生物支架、组织和器官的生物墨水。
背景技术
生物3D打印是基于3D打印生物材料(生物因子、细胞和生物相容材料)的过程。其中打印材料常称为生物墨水，一种基于细胞相容的水凝胶。
现有的生物墨水根据来源可以分为合成类水凝胶和天然类水凝胶：(1)合成类水凝胶如聚丙烯酰胺(PAAM)、聚乙烯醇(PVA)、聚乙二醇(PEG)、普兰尼克等作为打印墨水时成型效果好，但生物相容性需要进一步化学修饰改善，因此安全性尚谨慎考虑；(2)天然类水凝胶如胶原蛋白、纤维蛋白、蚕丝蛋白、明胶、琼脂糖、海藻酸钠等具有良好的生物相容性以及类似细胞外基质的凝胶结构和功能，在生物打印领域广泛应用。现有常用的生物墨水材料体系，大多为单一水凝胶体系或合成类水凝胶、天然类水凝胶其中的二元复合体系，存在机械强度不足，无法适应组织实际应用的情况。
目前硬组织打印技术渐为成熟，但软组织如血管、皮肤仍需要进一步完善。软组织在体内受到内外力作用，需要较好的拉伸和压缩性能，相应需要可以用于3D打印高强度生物墨水。尽管最近有高强度水凝胶研究报道，但制备这些水凝胶通常存在有毒的化学试剂(如专利CN 106146865A，通过对细胞有毒的有机试剂使水凝胶形成交联网络)或反应过程苛刻(如专利CN 104628936A，通过紫外光长时间交联，对于细胞损伤会很大；如专利CN105601950A，材料制备条件需要温度高达95℃)，限制了它们包裹细胞进行打印。
发明内容
本发明的目的是针对现有生物打印墨水的强度不足，提供一种3D打印高强度生物墨水材料,提供具有可调良好力学性能并能负载细胞，以解决的软组织仿生打印问题。本发明生物墨水复合不同亲水性生物材料和细胞因子，可以支持不同组织细胞的增殖与分化。
本发明3D打印高强度生物墨水材料为多元材料体系，主要利用形成β折叠结构的丝蛋白和离子交联的海藻酸构建而成双交联网络结构，同时利用明胶的温敏快速成胶性能，实现很好地成型效果。在这三元材料体系基础上，复合其他亲水性生物材料、细胞因子及生物细胞，进一步提升生物墨水的生物性能及功能。
其中丝蛋白(又称蚕丝蛋白)作为一种纯天然高分子材料，因其良好的力学性能、生物相容性和可降解性，在组织工程领域极具应用前景。丝蛋白可由蚕茧或蚕丝脱胶制备出再生蚕丝蛋白溶液而得，其中丝蛋白占蚕茧的70-75wt％。丝蛋白溶液，大多以无规线团构象存在，在一定的外界条件(如升温、降低pH值、电场、加入金属离子、超声、涡旋或添加水溶性有机物等)均可诱导和促进蚕丝蛋白构象由无规线团向β折叠转变。通过β折叠结构这一物理交联方式形成蚕丝蛋白水凝胶，可应用于再生医学领域。
其中海藻酸源自海藻和细菌，是一种无毒性、成胶条件温和的天然多糖。线性海藻酸结构，由β-D-甘露糖醛酸(M单体)和α-L-古洛糖醛酸(G单体)依靠β-1,4-糖苷键形成的交替共聚物或嵌段共聚物。可以通过二价阳离子(Zn2+，Ni2+，Co2+，Ca2+，Ba2+，Sr2+等)快速螯合M单体和G单体上的羧基基团，形成交联网络结构，应用于细胞包裹及组织工程。
其中明胶是胶原蛋白的部分水解产物，没有固定的化学结构且分子量分布较宽。经化学预处理后的胶原蛋白在高温作用下发生结构重组，胶原分子的螺旋结构转变为线性结构，变成可溶性的明胶，并可在一定温度条件下发生快速凝胶化。
上述3D打印高强度生物墨水材料采用以下方法制备得到：
步骤(1)、在质量分数为0.5～20％的海藻酸溶液中加入明胶溶液，混合均匀后得到海藻酸-明胶混合液；其中明胶质量含量为2～30％；
步骤(2)、在浓度为2～2000mg/ml多元醇溶液中加入丝蛋白溶液，混合均匀后得到丝蛋白-多元醇混合液；其中丝蛋白质量含量为2～30％；
所述的多元醇包括并不限于：木糖醇、丙二醇、丙三醇中的一种或几种；
步骤(3)、将步骤(1)溶液加入到步骤(2)溶液中，30～80℃环境下搅拌10min～6h，充分溶解均匀，尽量避免气泡，得到水凝胶液。
其中，步骤(1)，海藻酸和明胶混合均匀后的效果，为二元材料体系的生物墨水；步骤(2)，丝蛋白和多元醇混合均匀后的效果，为由多元醇诱导形成β折叠的丝蛋白水凝胶；步骤(3)，上述两个体系混合形成双交联网络结构，提高生物墨水强度，通过浓度配制出一定范围内控制生物墨水的强度。该制备步骤为优化步骤，如果材料混合步骤更换，如海藻酸和丝蛋白混合后与明胶共混或明胶和丝蛋白混合后与海藻酸共混，会存在生物墨水稳定性较差，由于丝蛋白溶液，混均搅拌过程也会形成β折叠。
作为优选，根据打印样品不同的应用，步骤(1)中还可加入亲水性生物材料；产物水凝胶液中亲水性生物材料的质量含量为0.1～50％；
所述的亲水性生物材料包括并不限于：琼脂糖、壳聚糖、纳米纤维素、透明质酸、基质胶、胶原蛋白、角蛋白的一种或几种；
作为优选，根据打印样品不同的应用，步骤(3)中还可加入细胞生长因子；产物水凝胶液中细胞生长因子的浓度为0.1-1000ng/mL；
所述的细胞生长因子包括并不限于：表皮生长因子、内皮生长因子、胶质细胞生长因子、成纤维细胞生长因子、多肽生长因子中的一种或几种；
作为优选，根据打印样品不同的应用，步骤(3)中还可加入生物细胞；产物水凝胶液中产物水凝胶液中生物细胞的浓度为0.5百万个/mL-300百万个/mL；
所述的生物细胞包括并不限于：动物细胞、植物细胞、真菌、细菌中的一种或几种。
应用过程：用3D生物打印机将上述本发明生物墨水材料依照CAD模型打印，打印时针筒温度设定为0～40℃，有利于生物墨水顺畅挤出。打印平台温度设置为-40～40℃，有利于打印材料挤出立即成型。打印后，用强化液进行交联后固化1min～24h，得到定型的凝胶材料，其中强化液含有质量分数为1～50％的二价阳离子溶液和浓度10～2000mg/ml的多元醇溶液。所述的二价阳离子溶液包括并不限于：氯化钙溶液、硫酸锌溶液、氯化钡溶液中的一种或几种；多元醇包括并不限于：木糖醇、丙二醇、丙三醇中的一种或几种。
本发明的有益效果是：
本发明生物墨水都是水溶性天然高分子，其成分细胞生物相容性和生物降解性好，促进细胞的黏附、增殖和分化，降解后无毒安全，可包裹细胞进行3D生物打印；整个材料制备过程与打印过程，不涉及对细胞有毒试剂和有害过程；
本发明生物墨水的力学强度可控，显著提高水凝胶强度。针对不同组织应用特性，通过不同材料配比即可制备出一系列不同强度的生物墨水，3D打印可为病人定制化设计，更适合临床上的应用。
附图说明
图1为生物墨水的流变学表征：a为不同剪切速率下的生物墨水的粘度变化；b为不同角速度下的生物墨水的弹性模量(G′)和粘性模量(G″)变化；c为不同温度下的生物墨水粘度变化；d为不同温度下的生物墨水的G′和G″变化；
图2为SEM表征3D打印模型支架(a,b)。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本发明实施方式作进一步地详细描述。
实施例1：
1)在质量浓度为20％的海藻酸水溶液中加入明胶溶液中，使得明胶的质量含量为2％；
2)浓度为200mg/ml的丙三醇溶液中加入丝蛋白溶液，使得混合溶液中的丝蛋白质量分数为30％，并使其混合均匀。
3)将上述步骤1溶液，加入步骤2溶液中，在80℃下均匀混合10min得到生物墨水。
4)使用型号为Regenovo–WS的生物打印机，将上述生物墨水置于打印针筒，选择直径为0.21mm的针头、打印气压为0.40MPa，打印速度为5mm/s，设置针筒温度为40℃、平台温度为40℃，用气压使水凝胶挤压在平台三维沉积大小为15*15*3mm、填充形状为正方形、填充角度为90°的网格支架。
5)将步骤4中打印的支架放置于预先配制好的强化液中交联固化24h，其中强化液含有质量分数为50％氯化钡和质量分数为10mg/ml的丙三醇混合溶液。最终流变测试，得到打印生物支架的弹性模量约为40kPa。相比图1b中，未经强化液处理交联生物墨水弹性模量约为2.4kPa，提高了约为16.7倍。
参见图1，为本发明本实施提供的步骤3的水凝胶的流变性能。从图1a可以看出，随着剪切速率的增加，水凝胶的粘度减小，表现为剪切变稀特性，利于3D打印挤出。从图1b可以看出，弹性模量(G′)和粘性模量(G″)不随着角速度变化，G′一直大于G″，表现为水凝胶弹性体性质，有利于保持打印形态。从图1c和1d可以看出，随着温度的变化，水凝胶的粘度、G′和G″也会发生改变，说明可以通过温度控制打印过程，可将打印温度控制为0～40℃，保证生物墨水顺畅挤出。将打印平台温度控制为-40～40℃，有利于生物墨水挤出立即成型。
本实施例利用上述水凝胶制备的生物支架如图2所示。由图可知，本实施例可以制备不同形状的生物支架，三维支架孔径规则有序排列均匀。经过强化液处理后，三维支架具有一定的拉伸性能。
对比例1：
为证实该三元体系高强度的效果，本申请人用步骤1的海藻酸与明胶形成的水凝胶材料做了对比试验，在实施例1的基础上，步骤2和步骤3去除，步骤5中强化液去除木糖醇，其他条件不变。最终流变测试，未经强化液处理交联生物墨水弹性模量约为1kPa，得到打印生物支架的弹性模量约为4kPa。
实施例2：
1)制备质量浓度为10％的海藻酸溶液，量取10ml上述的海藻酸溶液加入到5ml的400mg/ml的明胶溶液中并于40℃下均匀混合。
2)配制浓度为1g/ml的木糖醇溶液，移取5ml上述木糖醇溶液加入丝蛋白溶液，使得混合溶液中的丝蛋白质量分数为20％，并使其混合均匀。
3)将上述步骤1海藻酸钠与明胶混合溶液，加入步骤2的木糖醇与丝蛋白溶液中并于40℃下均匀混合，得到水凝胶。
4)使用型号为Regenovo3D BioprinterTM的生物打印机，将上述水凝胶置于打印针筒，选择直径为0.41mm的针头、打印气压为0.1MPa，打印速度为10mm/s，设置针筒温度为40℃、平台温度为-5℃，用气压使水凝胶挤压在平台三维沉积大小为20*20*3mm、填充形状为正方形、填充角度为90°的网格支架。
5)将步骤4中打印的支架放置于预先配制好的强化液中交联固化6h，其中强化液含有质量分数为10％氯化钙和质量分数为1g/ml的木糖醇混合溶液。最终流变测试，未经强化液处理交联生物墨水弹性模量约为3.5kPa，打印生物支架的弹性模量约为35kPa。
实施例3：
1)制备质量浓度为5％的海藻酸溶液，量取10ml上述的海藻酸溶液加入到5ml的400mg/ml的明胶溶液中，并加入5ml质量分数为2％的透明质酸和5ml浓度为1mg/ml的胶原蛋白溶液，在40℃下均匀混合。
2)配制浓度为1g/ml的丙二醇溶液，移取5ml上述丙二醇溶液加入丝蛋白溶液，使得混合溶液中的丝蛋白质量分数为15％，并使其混合均匀。
3)将上述步骤1海藻酸与明胶混合溶液，加入步骤2的丙二醇与丝蛋白中，在40℃下均匀混合得到水凝胶。
4)使用型号为Regenovo–Pro的生物打印机，将上述水凝胶置于打印针筒，选择直径为0.34mm的针头、打印气压为0.15MPa，打印速度为10mm/s，设置针筒温度为25℃、平台温度为25℃，用气压使水凝胶挤压在平台三维沉积大小为10*10*5mm、填充形状为正方形、填充角度为90°的网格支架。
5)将步骤4中打印的支架放置于预先配制好的强化液中交联固化3h，其中强化液含有质量分数为5％氯化钙和质量分数为1.5g/ml的丙二醇混合溶液。最终流变测试，未经强化液处理交联生物墨水弹性模量约为3.2kPa，得到打印生物支架的弹性模量约为29kPa。
实施例4：
1)制备质量浓度为2％的海藻酸水溶液，量取10ml上述的海藻酸溶液加入到5ml的200mg/ml的明胶溶液中，并加入5ml质量分数为0.5％的透明质酸和5ml浓度为1mg/ml的胶原蛋白溶液，在40℃下均匀混合。
2)配制浓度为1g/ml的丙三醇溶液，移取5ml上述丙三醇溶液加入丝蛋白溶液，使得混合溶液中的丝蛋白质量分数为10％，并使其混合均匀。
3)将上述步骤1丝蛋白与明胶混合溶液，加入步骤2的丙三醇与海藻酸钠中，再此水凝胶中加入表皮细胞生长因子配制浓度为10ng/ml、内皮细胞和成纤维细胞密度分别为每毫升50百万个细胞，在37℃下均匀混合得到生物墨水。
4)使用型号为Regenovo–WS的生物打印机，将上述生物墨水置于打印针筒，选择直径为0.21mm的针头、打印气压为0.10MPa，打印速度为5mm/s，设置针筒温度为37℃、平台温度为4℃，用气压使水凝胶挤压在平台三维沉积大小为15*15*4mm、填充形状为正方形、填充角度为90°的网格支架。
5)将步骤4中打印的支架放置于预先配制好的强化液中交联固化5min，其中强化液含有质量分数为20％氯化钙和质量分数为1g/ml的丙三醇混合溶液。最终流变测试，未经强化液处理交联生物墨水弹性模量约为2.8kPa，打印生物支架的弹性模量约为24kPa。通过细胞活性检测，细胞存活率75％或更多存活。
实施例5：
1)在质量浓度为0.5％的海藻酸水溶液中加入明胶溶液中，使得明胶的质量含量为30％；
2)浓度为2g/ml的丙三醇溶液，浓度为2g/ml的丙二醇溶液中加入丝蛋白溶液，使得混合溶液中的丝蛋白质量分数为2％，并使其混合均匀。
3)将上述步骤1溶液，加入步骤2溶液中，在30℃下均匀混合6h得到生物墨水。
4)使用型号为Regenovo–WS的生物打印机，将上述生物墨水置于打印针筒，选择直径为0.11mm的针头、打印气压为0.20MPa，打印速度为5mm/s，设置针筒温度为10℃、平台温度为-40℃，用气压使水凝胶挤压在平台三维沉积大小为20*20*3mm、填充形状为正方形、填充角度为90°的网格支架。
5)将步骤4中打印的支架放置于预先配制好的强化液中交联固化24h，其中强化液含有质量分数为50％氯化钡和质量分数为10mg/ml的丙三醇混合溶液。最终流变测试，未经强化液处理交联生物墨水弹性模量约为3.2kPa，打印生物支架的弹性模量约为22kPa。
上述实施例、对比例的生物墨水强度如下表1：
表1未强化与强化后的海藻酸/明胶与高强度生物墨水的模量
实施例6：
在实施例2的基础上将透明质酸、胶原蛋白溶液分别更换为表格1成分的亲水性生物材料，其他条件不变。
表1
实施例7：
1)制备质量浓度为2％的海藻酸水溶液，量取10ml上述的海藻酸溶液加入到5ml的200mg/ml的明胶溶液中，并加入5ml质量分数为0.5％的透明质酸和5ml浓度为1mg/ml的胶原蛋白溶液，在40℃下均匀混合。
2)配制浓度为1g/ml的丙三醇溶液，移取5ml上述丙三醇溶液加入丝蛋白溶液，使得混合溶液中的丝蛋白质量分数为10％，并使其混合均匀。
3)将上述步骤1丝蛋白与明胶混合溶液，加入步骤2的丙三醇与海藻酸钠中，再此水凝胶中分别加入表格2细胞生长因子，在37℃下均匀混合得到生物墨水。
4)使用型号为Regenovo–WS的生物打印机，将上述生物墨水置于打印针筒，选择直径为0.34mm的针头、打印气压为0.10MPa，打印速度为5mm/s，设置针筒温度为37℃、平台温度为4℃，用气压使水凝胶挤压在平台三维沉积大小为15*15*4mm、填充形状为正方形、填充角度为90°的网格支架。
5)将步骤4中打印的支架放置于预先配制好的强化液中交联固化5min，其中强化液含有质量分数为20％氯化钙和质量分数为200mg/ml的丙三醇混合溶液。
表2
实施例8：
1)制备质量浓度为2％的海藻酸水溶液，量取10ml上述的海藻酸溶液加入到5ml的200mg/ml的明胶溶液中，并加入5ml质量分数为0.5％的透明质酸和5ml浓度为1mg/ml的胶原蛋白溶液，在40℃下均匀混合。
2)配制浓度为1g/ml的丙三醇溶液，移取5ml上述丙三醇溶液加入丝蛋白溶液，使得混合溶液中的丝蛋白质量分数为10％，并使其混合均匀。
3)将上述步骤1丝蛋白与明胶混合溶液，加入步骤2的丙三醇与海藻酸钠中，再此水凝胶中加入表格3生物细胞，在37℃下均匀混合得到生物墨水。
4)使用型号为Regenovo–WS的生物打印机，将上述生物墨水置于打印针筒，选择直径为0.21mm的针头、打印气压为0.10MPa，打印速度为5mm/s，设置针筒温度为37℃、平台温度为4℃，用气压使水凝胶挤压在平台三维沉积大小为20*20*3mm、填充形状为正方形、填充角度为90°的网格支架。
5)将步骤4中打印的支架放置于预先配制好的强化液中交联固化5min，其中强化液含有质量分数为20％氯化钙和质量分数为200mg/ml的丙三醇混合溶液。
表3
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并非用于限定本发明的保护范围。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换、改进等，均包含在本发明的保护范围内。

Claims (10)

1.一种3D打印高强度生物墨水材料，其特征在于为多元材料体系，利用形成β折叠结构的丝蛋白和离子交联的海藻酸构建而成双交联网络结构，同时利用明胶的温敏快速成胶性能。
2.如权利要求1所述的一种3D打印高强度生物墨水材料，其特征在于多元材料体系是指丝蛋白、海藻酸、明胶等材料组成的复合体系。
3.如权利要求1所述的一种3D打印高强度生物墨水材料的制备方法，其特征在于该方法具体是：
步骤(1)、在质量分数为0.5～20％的海藻酸溶液中加入明胶溶液，混合均匀后得到海藻酸-明胶混合液；其中明胶质量含量为2～30％；
步骤(2)、在浓度为2～2000mg/ml多元醇溶液中加入丝蛋白溶液，混合均匀后得到丝蛋白-多元醇混合液；其中丝蛋白质量含量为2～30％；
步骤(3)、将步骤(1)溶液加入到步骤(2)溶液中，30～80℃环境下搅拌均匀，充分溶解，尽量避免气泡，得到水凝胶液。
4.如权利要求3所述的一种3D打印高强度生物墨水材料，其特征在于步骤(1)中还可加入亲水性生物材料；产物水凝胶液中亲水性生物材料的质量含量为0.1～50％；
所述的亲水性生物材料包括但并不限于：琼脂糖、壳聚糖、纳米纤维素、透明质酸、基质胶、胶原蛋白、角蛋白的一种或几种。
5.如权利要求3所述的一种3D打印高强度生物墨水材料，其特征在于所述的多元醇包括但并不限于：木糖醇、丙二醇、丙三醇中的一种或几种。
6.如权利要求3所述的一种3D打印高强度生物墨水材料，其特征在于步骤(3)中还可加入细胞生长因子；产物水凝胶液中细胞生长因子的浓度为0.1-1000ng/mL；
所述的细胞生长因子包括但并不限于：表皮生长因子、内皮生长因子、胶质细胞生长因子、成纤维细胞生长因子、多肽生长因子中的一种或几种。
7.如权利要求3所述的一种3D打印高强度生物墨水材料，其特征在于步骤(3)中还可加入生物细胞；产物水凝胶液中产物水凝胶液中生物细胞的浓度为0.5百万个/mL-300百万个/mL；
所述的生物细胞但包括但并不限于：动物细胞、植物细胞、真菌、细菌中的一种或几种。
8.如权利要求1所述的一种3D打印高强度生物墨水材料的应用，其特征在于用3D生物打印机将上述生物墨水材料依照CAD模型打印，其中打印时针筒温度设定为0～40℃，打印平台温度设置为-40～40℃；打印后，用强化液进行交联后固化1min～24h，得到定型产品。
9.如权利要求8所述的应用，其特征在于强化液含有质量分数为1～50％的二价阳离子溶液和浓度10～2000mg/ml的多元醇溶液。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于二价阳离子溶液包括但并不限于：氯化钙溶液、硫酸锌溶液、氯化钡溶液中的一种或几种；多元醇包括但并不限于：木糖醇、丙二醇、丙三醇中的一种或几种。
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Cited By (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108567992A (zh) * 2018-03-21 2018-09-25 暨南大学 一种用于脊椎损伤血管快速修复的3d打印生物墨水及其制备方法
CN109180988A (zh) * 2018-08-27 2019-01-11 武汉理工大学 一种功能化纳米纤维素水凝胶及其制备方法
CN109238522A (zh) * 2018-09-21 2019-01-18 南开大学 一种可穿戴的柔性应力传感器及其制备方法和应用
CN109316630A (zh) * 2018-11-19 2019-02-12 重庆凝骄生物科技有限公司 一种生物仿生基质的3d打印墨水及其制备方法
CN109381749A (zh) * 2018-10-23 2019-02-26 杭州捷诺飞生物科技股份有限公司 骨组织修复墨水、组合物、支架及制备方法以及试剂盒
CN110170071A (zh) * 2019-05-09 2019-08-27 中国人民解放军总医院 促进海藻酸盐基3d打印生物墨水体内外降解和细胞伸展黏附的方法
CN110229352A (zh) * 2019-07-03 2019-09-13 上海大学 一种复合水凝胶材料的制备及其复合支架打印方法
WO2020034914A1 (en) * 2018-08-14 2020-02-20 Shanghaitech University Programmable and printable biofilms as engineered living materials
CN111184915A (zh) * 2018-11-14 2020-05-22 杭州捷诺飞生物科技股份有限公司 用于血管网络发生的工程化人工结构体及构建方法与应用
CN111454614A (zh) * 2020-05-28 2020-07-28 苏州大学 3d生物打印墨水及其制备方法和应用
CN111662873A (zh) * 2020-05-14 2020-09-15 清华大学 一种适于太空环境的生物3d打印方法
EP3715119A1 (en) * 2019-03-25 2020-09-30 Osaka University Ink for 3d printing system
CN111825888A (zh) * 2019-04-10 2020-10-27 东北林业大学 一种凝胶打印用壳聚糖墨水制备及成形方法
CN112194802A (zh) * 2020-09-21 2021-01-08 中国农业大学 一种可生物降解的3d打印凝胶的制备、其产物和应用
CN109568658B (zh) * 2018-12-19 2021-02-26 复旦大学附属中山医院 一种基于3d打印的细胞均一性分布的生物墨水及其装配方法
CN112480746A (zh) * 2020-11-23 2021-03-12 苏州千里眼医疗科技有限公司 一种以鱼皮胶原蛋白为基质的3d打印墨水及其制备方法
CN112972765A (zh) * 2021-02-22 2021-06-18 苏州大学 丝素蛋白3d打印生物墨水及其应用
CN113004579A (zh) * 2021-04-23 2021-06-22 南京工业大学 一种基于苯硼酸共聚物固定颗粒凝胶的生物墨水、用途及制备方法
CN113385140A (zh) * 2021-05-08 2021-09-14 西安交通大学 用于3d打印的蒙脱石纳米片凝胶墨水及制备方法和基于其的吸附材料和应用
CN114288477A (zh) * 2021-12-20 2022-04-08 江苏江山聚源生物技术有限公司 重组胶原蛋白水凝胶3d打印墨水及其应用
IT202100004412A1 (it) * 2021-02-25 2022-08-25 Univ Degli Studi Di Pavia Bioinchiostri a fibroina di seta e relativi usi per biostampa 3d
US11491702B2 (en) * 2018-08-08 2022-11-08 New Jersey Institute Of Technology Additive manufacturing of channels
WO2022236266A1 (en) * 2021-05-03 2022-11-10 Sigma-Aldrich Co. Llc Facile curable bioink formulations
CN115382020A (zh) * 2022-09-21 2022-11-25 银丰低温医学科技有限公司 基于人源脱细胞基质的生物墨水及其制备方法与应用
US11806444B2 (en) 2019-08-06 2023-11-07 New Jersey Institute Of Technology Additive manufacturing of cell-laden functional hydrogel and live cell constructs
CN118185324A (zh) * 2024-05-16 2024-06-14 中国肉类食品综合研究中心 双交联可食用生物墨水、其制备方法及其在细胞培育肉制备中的应用

Citations (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20130006834A (ko) * 2011-06-24 2013-01-18 주식회사 바이오알파 피부 및 상처 보호를 위한 실크 필름의 제조방법
CN103463668A (zh) * 2013-09-05 2013-12-25 浙江大学 一种丝素-海藻酸钙生物创面多孔敷料的制备方法
CN103877617A (zh) * 2014-02-21 2014-06-25 广西师范大学 可注射蚕丝素蛋白-海藻酸盐双交联水凝胶及其制备方法和使用方法
CN104382670A (zh) * 2014-12-08 2015-03-04 西安交通大学 一种人工器官的仿生构建方法
CN104887346A (zh) * 2015-06-19 2015-09-09 西安交通大学 一种高精度的生物3d打印方法
WO2016154148A1 (en) * 2015-03-20 2016-09-29 Massachusetts Eye And Ear Infirmary Artificial tympanic membrane devices and uses
CN106237387A (zh) * 2016-08-24 2016-12-21 浙江省人民医院 一种三维打印生物墨水材料的制作方法
CN106279749A (zh) * 2016-09-22 2017-01-04 大连工业大学 一种海藻酸盐与丝素蛋白复合海绵的制备方法
CN106265129A (zh) * 2016-09-21 2017-01-04 大连工业大学 一种丝素蛋白‑海藻酸盐复合膜及其制备方法和应用
CN106267370A (zh) * 2016-08-16 2017-01-04 东华大学 丝素蛋白/纤维素3d打印墨水
CN106492272A (zh) * 2015-11-27 2017-03-15 广州迈普再生医学科技有限公司 组织修复用纤维膜及其制备方法和应用、以及组织修复用制品
CN106955650A (zh) * 2017-04-01 2017-07-18 东华大学 一种三维多孔框架增强纤维气凝胶材料及其制备方法

Patent Citations (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20130006834A (ko) * 2011-06-24 2013-01-18 주식회사 바이오알파 피부 및 상처 보호를 위한 실크 필름의 제조방법
CN103463668A (zh) * 2013-09-05 2013-12-25 浙江大学 一种丝素-海藻酸钙生物创面多孔敷料的制备方法
CN103877617A (zh) * 2014-02-21 2014-06-25 广西师范大学 可注射蚕丝素蛋白-海藻酸盐双交联水凝胶及其制备方法和使用方法
CN104382670A (zh) * 2014-12-08 2015-03-04 西安交通大学 一种人工器官的仿生构建方法
WO2016154148A1 (en) * 2015-03-20 2016-09-29 Massachusetts Eye And Ear Infirmary Artificial tympanic membrane devices and uses
CN104887346A (zh) * 2015-06-19 2015-09-09 西安交通大学 一种高精度的生物3d打印方法
CN106492272A (zh) * 2015-11-27 2017-03-15 广州迈普再生医学科技有限公司 组织修复用纤维膜及其制备方法和应用、以及组织修复用制品
CN106267370A (zh) * 2016-08-16 2017-01-04 东华大学 丝素蛋白/纤维素3d打印墨水
CN106237387A (zh) * 2016-08-24 2016-12-21 浙江省人民医院 一种三维打印生物墨水材料的制作方法
CN106265129A (zh) * 2016-09-21 2017-01-04 大连工业大学 一种丝素蛋白‑海藻酸盐复合膜及其制备方法和应用
CN106279749A (zh) * 2016-09-22 2017-01-04 大连工业大学 一种海藻酸盐与丝素蛋白复合海绵的制备方法
CN106955650A (zh) * 2017-04-01 2017-07-18 东华大学 一种三维多孔框架增强纤维气凝胶材料及其制备方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
LING WANG等: "Automated quantitative assessment of threedimensional bioprinted hydrogel scaffolds using optical coherence tomography", 《BIOMEDICAL OPTICS EXPRESS》 *
YESHUN ZHANG等: "Design and performance of a sericin-alginate interpenetrating network hydrogel for cell and drug delivery", 《SCIENTIFIC REPORTS 》 *

Cited By (39)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108567992B (zh) * 2018-03-21 2021-02-05 暨南大学 一种用于脊椎损伤血管快速修复的3d打印生物墨水及其制备方法
CN108567992A (zh) * 2018-03-21 2018-09-25 暨南大学 一种用于脊椎损伤血管快速修复的3d打印生物墨水及其制备方法
US11491702B2 (en) * 2018-08-08 2022-11-08 New Jersey Institute Of Technology Additive manufacturing of channels
US11931951B2 (en) 2018-08-08 2024-03-19 New Jersey Institute Of Technology Dual printing additive manufacturing of 3D scaffolds with channel diameters ranging from 100-500 microns
WO2020034914A1 (en) * 2018-08-14 2020-02-20 Shanghaitech University Programmable and printable biofilms as engineered living materials
CN112840029A (zh) * 2018-08-14 2021-05-25 上海科技大学 作为工程化活体材料的可编程和可打印的生物膜
CN109180988B (zh) * 2018-08-27 2021-07-30 武汉理工大学 一种功能化纳米纤维素水凝胶及其制备方法
CN109180988A (zh) * 2018-08-27 2019-01-11 武汉理工大学 一种功能化纳米纤维素水凝胶及其制备方法
CN109238522A (zh) * 2018-09-21 2019-01-18 南开大学 一种可穿戴的柔性应力传感器及其制备方法和应用
CN109381749A (zh) * 2018-10-23 2019-02-26 杭州捷诺飞生物科技股份有限公司 骨组织修复墨水、组合物、支架及制备方法以及试剂盒
CN109381749B (zh) * 2018-10-23 2021-11-05 杭州捷诺飞生物科技股份有限公司 骨组织修复墨水、组合物、支架及制备方法以及试剂盒
CN111184915A (zh) * 2018-11-14 2020-05-22 杭州捷诺飞生物科技股份有限公司 用于血管网络发生的工程化人工结构体及构建方法与应用
CN109316630A (zh) * 2018-11-19 2019-02-12 重庆凝骄生物科技有限公司 一种生物仿生基质的3d打印墨水及其制备方法
CN109316630B (zh) * 2018-11-19 2021-03-26 中国人民解放军陆军军医大学第一附属医院 一种生物仿生基质的3d打印墨水及其制备方法
CN109568658B (zh) * 2018-12-19 2021-02-26 复旦大学附属中山医院 一种基于3d打印的细胞均一性分布的生物墨水及其装配方法
CN111732854A (zh) * 2019-03-25 2020-10-02 国立大学法人大阪大学 3d打印系统用油墨
EP3715119A1 (en) * 2019-03-25 2020-09-30 Osaka University Ink for 3d printing system
CN111825888A (zh) * 2019-04-10 2020-10-27 东北林业大学 一种凝胶打印用壳聚糖墨水制备及成形方法
CN110170071A (zh) * 2019-05-09 2019-08-27 中国人民解放军总医院 促进海藻酸盐基3d打印生物墨水体内外降解和细胞伸展黏附的方法
CN110229352A (zh) * 2019-07-03 2019-09-13 上海大学 一种复合水凝胶材料的制备及其复合支架打印方法
CN110229352B (zh) * 2019-07-03 2022-07-08 上海大学 一种复合水凝胶材料的制备及其复合支架打印方法
US11806444B2 (en) 2019-08-06 2023-11-07 New Jersey Institute Of Technology Additive manufacturing of cell-laden functional hydrogel and live cell constructs
CN111662873A (zh) * 2020-05-14 2020-09-15 清华大学 一种适于太空环境的生物3d打印方法
CN111662873B (zh) * 2020-05-14 2023-01-06 清华大学 一种适于太空环境的生物3d打印方法
CN111454614A (zh) * 2020-05-28 2020-07-28 苏州大学 3d生物打印墨水及其制备方法和应用
CN111454614B (zh) * 2020-05-28 2022-05-24 苏州大学 3d生物打印墨水及其制备方法和应用
CN112194802A (zh) * 2020-09-21 2021-01-08 中国农业大学 一种可生物降解的3d打印凝胶的制备、其产物和应用
CN112194802B (zh) * 2020-09-21 2021-11-19 中国农业大学 一种可生物降解的3d打印凝胶的制备、其产物和应用
CN112480746A (zh) * 2020-11-23 2021-03-12 苏州千里眼医疗科技有限公司 一种以鱼皮胶原蛋白为基质的3d打印墨水及其制备方法
CN112972765A (zh) * 2021-02-22 2021-06-18 苏州大学 丝素蛋白3d打印生物墨水及其应用
IT202100004412A1 (it) * 2021-02-25 2022-08-25 Univ Degli Studi Di Pavia Bioinchiostri a fibroina di seta e relativi usi per biostampa 3d
WO2022180565A1 (en) * 2021-02-25 2022-09-01 Universita' Degli Studi Di Pavia Silk fibroin and related use for 3d bioprinting
CN113004579A (zh) * 2021-04-23 2021-06-22 南京工业大学 一种基于苯硼酸共聚物固定颗粒凝胶的生物墨水、用途及制备方法
WO2022236266A1 (en) * 2021-05-03 2022-11-10 Sigma-Aldrich Co. Llc Facile curable bioink formulations
CN113385140A (zh) * 2021-05-08 2021-09-14 西安交通大学 用于3d打印的蒙脱石纳米片凝胶墨水及制备方法和基于其的吸附材料和应用
CN114288477A (zh) * 2021-12-20 2022-04-08 江苏江山聚源生物技术有限公司 重组胶原蛋白水凝胶3d打印墨水及其应用
CN115382020A (zh) * 2022-09-21 2022-11-25 银丰低温医学科技有限公司 基于人源脱细胞基质的生物墨水及其制备方法与应用
CN115382020B (zh) * 2022-09-21 2023-12-15 银丰低温医学科技有限公司 基于人源脱细胞基质的生物墨水及其制备方法与应用
CN118185324A (zh) * 2024-05-16 2024-06-14 中国肉类食品综合研究中心 双交联可食用生物墨水、其制备方法及其在细胞培育肉制备中的应用

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