CN115232332A - 一种注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种注射用透明质酸‑聚谷氨酸凝胶的制备方法，涉及组织填充和医学生物材料技术领域。所述的制备方法，包括以下步骤：在巯基化的透明质酸水溶液中加入分子量为200‑1200的聚二乙醇混合配制成HA‑PEG混合液；向HA‑PEG混合液中加入酰胺化的聚谷氨酸水溶液混合均匀，然后置于含有光引发剂的缓冲液中进行一次交联；再用紫外光照射进行二次交联，洗涤后得到注射用透明质酸‑聚谷氨酸凝胶。本发明注射用透明质酸‑聚谷氨酸凝胶的制备方法，制备步骤简单，反应条件温和，形成的凝胶一方面可以加强单组分透明质酸凝胶的支撑力，另一方面也可以延长单组分透明质酸凝胶的吸收时间，起到持久填充的作用。

Description

一种注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶及其制备方法
技术领域
本发明涉及组织填充和医学生物材料技术领域，尤其涉及一种注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶的制备方法。
背景技术
理想的软组织填充材料应具备良好的生物相容性、有效性及安全性,并且可以提供合理的长期持续(持久)、有效的体积增大能力，并易于注射。常用的软组织填充材料有透明质酸、胶原蛋白、肉毒素和自体脂肪。透明质酸几乎存在于所有的物种中，广泛分布于人体各部位，因此不具有抗原性，并且表现出优异的耐受性。以透明质酸为主要原料的注射剂进入到人体后，可以保持皮肤内的水分，促进表皮细胞增殖和分化，从而防止皮肤老化。
交联透明质酸填充剂的缺点在于透明质酸在体内受到透明质酸酶的酶解作用而导致降解较快，在体内存留时间较短，填充效果较差，需要多次注射才能达到填充效果，且注射量较大。同时，交联的单组分透明质酸凝胶难以注射。
传统的水凝胶，如：通过物理交联制备的热敏感水凝胶，虽然具有很好的生物相容性和温度敏感性，但由于其机械性能较弱而难以抵抗外界负载。通过迈克尔加成反应制备的水凝胶展现出非常好的生物相容性，然而一般它的成胶时间较长不利于实际应用。席夫碱反应由于其可控的反应速率和温和反应条件是制备水凝胶很好的办法，但是通过席夫碱反应制备的水凝胶往往没有足够的韧性，为了加强水凝胶的抗压缩能力，在水凝胶体系可以引入一个能量耗散路径，如双网络水凝胶，但是此方法制备的水凝胶体系复杂，不利于控制材料的性能。前人通过引入聚乙二醇来提高凝胶网格结构的抗压能力，但是其拉伸强度却很低。
聚谷氨酸的吸水量能达到透明质酸的10倍以上，因此在获得相同体积的水分子时，聚谷氨酸的用量将少于透明质酸，可以增加产品的安全性。但是单纯交联聚谷氨酸会导致溶液黏度高，造成填充注射时的推阻力大，易引发注射困难，同时交联的聚谷氨酸填充剂的降解较快，填充时间短，因此需要改进。
因此，我们需要制备一种抗压、抗拉性能好，成胶时间短、易注射降解慢的可注射凝胶。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供了一种注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶的制备方法，通过构建一种用于皮肤软组织填充的抗降解、力学性能好的注射凝胶，来克服现有技术中的聚二乙醇(PEG)水凝胶抗拉性能差以及单组分透明质酸凝胶易降解的问题。具体包括以下技术方案：
提供一种注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶的制备方法，包括以下步骤：
(1)将透明质酸溶解于纯化水中，制得透明质酸溶液；往透明质酸溶液中加入含有二硫键化合物，搅拌均匀后加入交联剂进行交联，获得透明质酸凝胶；将透明质酸凝胶置于透析液中进行透析纯化后冻干，得到巯基化的透明质酸；
(2)将聚谷氨酸或聚谷氨酸盐溶解于纯化水中，制得聚谷氨酸溶液或聚谷氨酸盐溶液；往聚谷氨酸溶液或聚谷氨酸盐溶液中加入酪胺盐酸盐，混合均匀后加入交联剂进行交联，获得聚谷氨酸凝胶；将聚谷氨酸凝胶置于透析液中进行透析纯化后冻干，得到酰胺化的聚谷氨酸；
(3)将巯基化的透明质酸溶解于纯化水中，制得巯基化的透明质酸水溶液；往巯基化的透明质酸水溶液中加入分子量为200-1200的聚二乙醇混合配制成HA-PEG混合液；将酰胺化的聚谷氨酸溶解于纯化水中，制得酰胺化的聚谷氨酸水溶液；然后向HA-PEG混合液中加入酰胺化的聚谷氨酸水溶液混合均匀，然后置于含有光引发剂的缓冲液中进行一次交联；再用紫外光照射进行二次交联，经乙醇和/或纯化水洗涤、灭菌后得到注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶；
进一步的，步骤(1)中：
所述的透明质酸溶液的质量浓度为0.5-5％；
所述含有二硫键化合物与透明质酸的质量比为(0.2-2)：1；所述交联剂与透明质酸的质量比为(0.3-3)：1；
所述的含有二硫键化合物选自半胱胺盐酸盐、二硫代二酰胺、二硫代二丙酰胺、二硫代二丁酰胺、二硫代二乙酰肼、二硫代二丙酰肼、二硫代二丁酰肼中的至少一种。
进一步的，步骤(2)中：
所述聚谷氨酸溶液或聚谷氨酸盐溶液中，聚谷氨酸的质量浓度为0.5-5％；聚谷氨酸与酪胺盐酸盐的质量比为1：(0.5-5)，聚谷氨酸与交联剂的质量比为1：(0.5-5)；
所述的聚谷氨酸盐选自聚谷氨酸钠、聚谷氨酸钾、聚谷氨酸镁、聚谷氨酸钙、聚谷氨酸锌中的至少一种。
优选的，步骤(1)和(2)中：交联剂选自聚乙二醇缩水甘油醚(PEGDE)、1,4-丁二醇二缩水甘油醚(BDDE)、碳二亚胺盐酸盐(EDC)、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)、己二酸二酰肼(ADH)中的至少一种，交联时间为8-24h。
优选的，步骤(1)和(2)中：所述的透析，采用的透析液包括渗透压调节剂和有机试剂；渗透压调节剂包括葡萄糖、氯化钠、磷酸盐、枸橼酸盐中的一种或者多种；有机溶剂包括乙醇、乙二醇、正己醇、甲醇、异丙醇及其与水的混合物中的一种或多种。透析时间为48-96h。
进一步的，步骤(3)中：所述巯基化的透明质酸水溶液的质量浓度为2％-20％；所述的HA-PEG混合液中，聚二乙醇的质量浓度为5％-40％；所述酰胺化的聚谷氨酸水溶液的质量浓度为2％-20％；所述HA-PEG混合液与酰胺化的聚谷氨酸水溶液的体积比(0.1-10)：1。
本发明中，优选分子量为200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1100或1200大小的聚乙二醇，均可提高水凝胶的抗拉性能，特别是分子量为800的聚乙二醇，效果最佳。
所述的光引发剂选自2-羟基-4-(2-羟乙氧基)-2-甲基苯丙酮(光引发剂I2959)、六氯苯(HCB)、氯菌酸酐(HET)、二苯甲酮(BP)、4-氯二苯甲酮(4-CPB)中的至少一种。光引发剂占HA-PEG与聚谷氨酸混合溶液的质量体积浓度(W/V)的0.1-1％。
所述的缓冲液的pH为7.0-7.8，优选磷酸盐缓冲液、PBS缓冲液、巴比妥缓冲液中的至少一种。
所述一次交联、二次交联的交联时间为1-10min。
灭菌方式为辐照灭菌或电子束灭菌，灭菌剂量不大于20kGy。
本发明向透明质酸(HA)中引入不同分子量的聚二乙醇(PEG)，通过控制PEG的分子量及其浓度提高单纯HA水凝胶的抗压缩性能和抗拉性能；再然后通过酰胺化聚谷氨酸(PGA)，利用席夫碱反应原位合成HA/PGA水凝胶；为了进一步提高复合凝胶的力学性能，将上述水凝胶置于紫外光照条件下进行二度交联，HA-PEG上的双键和PGA上的双键发生自由基聚合形成第二层网络结构，制备出机械性能优异的半互穿网络水凝胶(注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶)，延长单纯水凝胶的降解时间，使得可以持久的达到填充效果；同时，通过本法制备的凝胶具有与人体相适应的pH和渗透压，终端灭菌形成可直接注射于软组织，可以起到填充和润滑作用。
除此之外，本发明制备的方法首先是通过席夫碱反应第一次交联，快速在原位形成水凝胶，再然后通过紫外光照发生聚合反应进行二次交联，再次调控水凝胶的交联度，因此，通过本发明制备的水凝胶可实现交联度分级可控。本发明制备的注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶，随着组分含量的增加，其凝胶网络结构逐渐变的致密，由此可以说明，本发明制备的凝胶可以通过控制各组分的添加含量，来实现不同部位填充需求；其次，采用光照交联和自交联过程较快，可方便的将药物混入到溶液中，并注射到组织损伤处快速形成凝胶，为原位注射形成凝胶提供可能性和便捷性。
本发明制备的注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶，制备步骤简单，反应条件温和，工艺易于实现，交联剂用量少、均匀度好，形成的凝胶力学性能优于单组分的凝胶，降解速率较单组分的凝胶慢，说明采用本发明制备方法制备的凝胶一方面可以加强单组分透明质酸凝胶的支撑力，另一方面也可以延长单组分透明质酸凝胶的吸收时间，起到持久填充的作用。
本发明的聚谷氨酸、透明质酸原料可采用发酵获取，是天然可降解的聚合物，且具有超强的吸水性能。
附图说明
此处所说明的附图用来提供对本发明的进一步理解，构成本申请的一部分，并不构成对本发明的不当限定，在附图中：
图1：本发明实施例1-10制备的注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶的溶胀度测试结果；
图2：本发明实施例11、实施例13、实施例4、实施例12、实施例14-20、实施例1制备而成的注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶的压缩性能测试结果；
图3：本发明实施例11、实施例13、实施例4、实施例12、实施例14、实施例1制备而成的注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶的拉伸强度测试结果；
图4：本发明实施例1、实施例4、实施例11制备而成的注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶的体外酶解试验测试结果；
图5：本发明实施例4制备而成的注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶样品的SEM图；
图6：本发明实施例1制备而成的注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶样品的SEM图；
图7：本发明阴性对照组的体外细胞毒性测试结果；
图8：本发明实施例1制备而成的注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶样品的体外细胞毒性测试结果；
图9：本发明实施例4制备而成的注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶样品的体外细胞毒性测试结果；
图10：本发明阳性对照组的体外细胞毒性测试结果。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
应当理解，当在本说明书和所附权利要求书中使用时，术语“包括”和“包含”指示所描述特征、整体、步骤、操作、元素和/或组件的存在，但并不排除一个或多个其它特征、整体、步骤、操作、元素、组件和/或其集合的存在或添加。
还应当理解，在此本发明说明书中所使用的术语仅仅是出于描述特定实施例的目的而并不意在限制本发明。如在本发明说明书和所附权利要求书中所使用的那样，除非上下文清楚地指明其它情况，否则单数形式的“一”、“一个”及“该”意在包括复数形式。
还应当进一步理解，在本发明说明书和所附权利要求书中使用的术语“和/或”是指相关联列出的项中的一个或多个的任何组合以及所有可能组合，并且包括这些组合。
为了更充分理解本发明的技术内容，下面结合具体实施例对本发明的技术方案进一步介绍和说明。
实施例1
本实施例提供一种注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶的制备方法，包括以下步骤：
将透明质酸溶解于纯化水中，制备得到透明质酸溶液(质量浓度1％)，然后加入半胱胺盐酸盐(在溶液中质量浓度0.8％)，搅拌均匀后，加入EDC(在溶液中质量浓度2.0％)和NHS(在溶液中质量浓度0.5％)进行交联，在30℃水浴中持续搅拌交联16h，将体系pH控制在7.0左右，获得透明质酸凝胶，然后将透明质酸凝胶转移到透析袋中，在水和乙醇的混合液中透析1d，在氯化钠溶液中透析1d，最后在纯化水中透析2d，最后将透析纯化后的透明质酸凝胶冻干，得到巯基化的透明质酸，4-8℃低温保存，备用。
将聚谷氨酸溶解于纯化水中，制备得到聚谷氨酸溶液(质量浓度1％)，然后加入酪胺盐酸盐(在溶液中质量浓度0.5％)，搅拌均匀后，加入EDC(在溶液中质量浓度2.0％)和1.0％的NHS(在溶液中质量浓度1.0％)进行引发交联，在30℃水浴中持续搅拌交联16h，将体系pH控制在4.0-6.0左右，获得聚谷氨酸凝胶，然后将聚谷氨酸凝胶转移到透析袋中，在水和乙醇的混合液中透析1d，在氯化钠溶液中透析1d，最后在纯化水中透析2d，最后将透析纯化后的聚谷氨酸凝胶冻干，得到酰胺化的聚谷氨酸，4-8℃低温保存，备用。
将巯基化的透明质酸溶解于纯化水中配成质量浓度5％的巯基化的透明质酸溶液，然后加入PEG800配制成HA-PEG混合液，PEG800在HA-PEG混合液中的质量浓度为20％，然后快速搅拌混合1min；将酰胺化的聚谷氨酸溶解于纯化水中，配成质量浓度5％的酰胺化的聚谷氨酸水溶液；向HA-PEG混合液中加入酰胺化的聚谷氨酸水溶液混合均匀，HA-PEG混合液与酰胺化的聚谷氨酸水溶液的体积比1：1，然后置于含有光引发剂I2959的PBS水溶液(光引发剂I2959在HA-PEG与聚谷氨酸混合溶液中的质量体积浓度为0.25％)中混匀，倒入圆柱型模具后，于室温下交联1min-10min，然后再用紫外照射器照射3min进行二次交联，脱模后用75％的乙醇溶液消毒洗涤2h，最后再用清水洗涤3-5次；最后将凝胶灌装于注射器中，10kGy电子束灭菌后即得注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶。
实施例2：
本实施例提供一种注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶的制备方法，包括以下步骤：
将透明质酸溶解于纯化水中，制备得到透明质酸溶液(质量浓度1％)，然后加入半胱胺盐酸盐(在溶液中质量浓度0.8％)，搅拌均匀后，加入EDC(在溶液中质量浓度2.0％)和NHS(在溶液中质量浓度0.5％)进行交联，在30℃水浴中持续搅拌交联16h，将体系pH控制在7.0左右，获得透明质酸凝胶，然后将透明质酸凝胶转移到透析袋中，在水和乙醇的混合液中透析1d，在氯化钠溶液中透析1d，最后在纯化水中透析2d，最后将透析纯化后的透明质酸凝胶冻干，得到巯基化的透明质酸，4-8℃低温保存，备用。
将聚谷氨酸溶解于纯化水中，制备得到聚谷氨酸溶液(质量浓度1％)，然后加入酪胺盐酸盐(在溶液中质量浓度0.5％)，搅拌均匀后，加入EDC(在溶液中质量浓度2.0％)和1.0％的NHS(在溶液中质量浓度1.0％)进行引发交联，在30℃水浴中持续搅拌交联16h，将体系pH控制在4.0-6.0左右，获得聚谷氨酸凝胶，然后将聚谷氨酸凝胶转移到透析袋中，在水和乙醇的混合液中透析1d，在氯化钠溶液中透析1d，最后在纯化水中透析2d，最后将透析纯化后的聚谷氨酸凝胶冻干，得到酰胺化的聚谷氨酸，4-8℃低温保存，备用。
将巯基化的透明质酸溶解于纯化水中配成质量浓度3％的巯基化的透明质酸溶液，然后加入PEG400配制成HA-PEG混合液，PEG400在HA-PEG混合液中的质量浓度为10％，然后快速搅拌混合1min；将酰胺化的聚谷氨酸溶解于纯化水中，配成质量浓度3％的酰胺化的聚谷氨酸水溶液；向HA-PEG混合液中加入酰胺化的聚谷氨酸水溶液混合均匀，HA-PEG混合液与酰胺化的聚谷氨酸水溶液的体积比3：1，然后置于含有光引发剂I2959的PBS水溶液(光引发剂I2959在HA-PEG与聚谷氨酸混合溶液中的质量体积浓度为0.25％)中混匀，倒入圆柱型模具后，于室温下交联1min-10min，然后再用紫外照射器照射3min进行二次交联，脱模后用75％的乙醇溶液消毒洗涤2h，最后再用清水洗涤3-5次；最后将凝胶灌装于注射器中，10kGy电子束灭菌后即得注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶。
实施例3：
本实施例的注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶的制备方法与实施例2相比，其区别在于：巯基化的透明质酸溶液与酰胺化的聚谷氨酸水溶液体积比为2：1。本实施例制备方法的具体步骤如下：
将透明质酸溶解于纯化水中，制备得到透明质酸溶液(质量浓度1％)，然后加入半胱胺盐酸盐(在溶液中质量浓度0.8％)，搅拌均匀后，加入EDC(在溶液中质量浓度2.0％)和NHS(在溶液中质量浓度0.5％)进行交联，在30℃水浴中持续搅拌交联16h，将体系pH控制在7.0左右，获得透明质酸凝胶，然后将透明质酸凝胶转移到透析袋中，在水和乙醇的混合液中透析1d，在氯化钠溶液中透析1d，最后在纯化水中透析2d，最后将透析纯化后的透明质酸凝胶冻干，得到巯基化的透明质酸，4-8℃低温保存，备用。
将聚谷氨酸溶解于纯化水中，制备得到聚谷氨酸溶液(质量浓度1％)，然后加入酪胺盐酸盐(在溶液中质量浓度0.5％)，搅拌均匀后，加入EDC(在溶液中质量浓度2.0％)和1.0％的NHS(在溶液中质量浓度1.0％)进行引发交联，在30℃水浴中持续搅拌交联16h，将体系pH控制在4.0-6.0左右，获得聚谷氨酸凝胶，然后将聚谷氨酸凝胶转移到透析袋中，在水和乙醇的混合液中透析1d，在氯化钠溶液中透析1d，最后在纯化水中透析2d，最后将透析纯化后的聚谷氨酸凝胶冻干，得到酰胺化的聚谷氨酸，4-8℃低温保存，备用。
将巯基化的透明质酸溶解于纯化水中配成质量浓度3％的巯基化的透明质酸溶液，然后加入PEG400配制成HA-PEG混合液，PEG400在HA-PEG混合液中的质量浓度为10％，然后快速搅拌混合1min；将酰胺化的聚谷氨酸溶解于纯化水中，配成质量浓度3％的酰胺化的聚谷氨酸水溶液；向HA-PEG混合液中加入酰胺化的聚谷氨酸水溶液混合均匀，HA-PEG混合液与酰胺化的聚谷氨酸水溶液的体积比2：1，然后置于含有光引发剂I2959的PBS水溶液(光引发剂I2959在HA-PEG与聚谷氨酸混合溶液中的质量体积浓度为0.25％)中混匀，倒入圆柱型模具后，于室温下交联1min-10min，然后再用紫外照射器照射3min进行二次交联，脱模后用75％的乙醇溶液消毒洗涤2h，最后再用清水洗涤3-5次；最后将凝胶灌装于注射器中，10kGy电子束灭菌后即得注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶。
实施例4：
本实施例的注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶的制备方法与实施例2相比，其区别在于：巯基化的透明质酸溶液与酰胺化的聚谷氨酸水溶液体积比为1：1。本实施例制备方法的具体步骤如下：
将透明质酸溶解于纯化水中，制备得到透明质酸溶液(质量浓度1％)，然后加入半胱胺盐酸盐(在溶液中质量浓度0.8％)，搅拌均匀后，加入EDC(在溶液中质量浓度2.0％)和NHS(在溶液中质量浓度0.5％)进行交联，在30℃水浴中持续搅拌交联16h，将体系pH控制在7.0左右，获得透明质酸凝胶，然后将透明质酸凝胶转移到透析袋中，在水和乙醇的混合液中透析1d，在氯化钠溶液中透析1d，最后在纯化水中透析2d，最后将透析纯化后的透明质酸凝胶冻干，得到巯基化的透明质酸，4-8℃低温保存，备用。
将聚谷氨酸溶解于纯化水中，制备得到聚谷氨酸溶液(质量浓度1％)，然后加入酪胺盐酸盐(在溶液中质量浓度0.5％)，搅拌均匀后，加入EDC(在溶液中质量浓度2.0％)和1.0％的NHS(在溶液中质量浓度1.0％)进行引发交联，在30℃水浴中持续搅拌交联16h，将体系pH控制在4.0-6.0左右，获得聚谷氨酸凝胶，然后将聚谷氨酸凝胶转移到透析袋中，在水和乙醇的混合液中透析1d，在氯化钠溶液中透析1d，最后在纯化水中透析2d，最后将透析纯化后的聚谷氨酸凝胶冻干，得到酰胺化的聚谷氨酸，4-8℃低温保存，备用。
将巯基化的透明质酸溶解于纯化水中配成质量浓度3％的巯基化的透明质酸溶液，然后加入PEG400配制成HA-PEG混合液，PEG400在HA-PEG混合液中的质量浓度为10％，然后快速搅拌混合1min；将酰胺化的聚谷氨酸溶解于纯化水中，配成质量浓度3％的酰胺化的聚谷氨酸水溶液；向HA-PEG混合液中加入酰胺化的聚谷氨酸水溶液混合均匀，HA-PEG混合液与酰胺化的聚谷氨酸水溶液的体积比1：1，然后置于含有光引发剂I2959的PBS水溶液(光引发剂I2959在HA-PEG与聚谷氨酸混合溶液中的质量体积浓度为0.25％)中混匀，倒入圆柱型模具后，于室温下交联1min-10min，然后再用紫外照射器照射3min进行二次交联，脱模后用75％的乙醇溶液消毒洗涤2h，最后再用清水洗涤3-5次；最后将凝胶灌装于注射器中，10kGy电子束灭菌后即得注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶。
实施例5：
本实施例的注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶的制备方法与实施例2相比，其区别在于：巯基化的透明质酸溶液与酰胺化的聚谷氨酸水溶液体积比为1：2。本实施例制备方法的具体步骤如下：
将透明质酸溶解于纯化水中，制备得到透明质酸溶液(质量浓度1％)，然后加入半胱胺盐酸盐(在溶液中质量浓度0.8％)，搅拌均匀后，加入EDC(在溶液中质量浓度2.0％)和NHS(在溶液中质量浓度0.5％)进行交联，在30℃水浴中持续搅拌交联16h，将体系pH控制在7.0左右，获得透明质酸凝胶，然后将透明质酸凝胶转移到透析袋中，在水和乙醇的混合液中透析1d，在氯化钠溶液中透析1d，最后在纯化水中透析2d，最后将透析纯化后的透明质酸凝胶冻干，得到巯基化的透明质酸，4-8℃低温保存，备用。
将聚谷氨酸溶解于纯化水中，制备得到聚谷氨酸溶液(质量浓度1％)，然后加入酪胺盐酸盐(在溶液中质量浓度0.5％)，搅拌均匀后，加入EDC(在溶液中质量浓度2.0％)和1.0％的NHS(在溶液中质量浓度1.0％)进行引发交联，在30℃水浴中持续搅拌交联16h，将体系pH控制在4.0-6.0左右，获得聚谷氨酸凝胶，然后将聚谷氨酸凝胶转移到透析袋中，在水和乙醇的混合液中透析1d，在氯化钠溶液中透析1d，最后在纯化水中透析2d，最后将透析纯化后的聚谷氨酸凝胶冻干，得到酰胺化的聚谷氨酸，4-8℃低温保存，备用。
将巯基化的透明质酸溶解于纯化水中配成质量浓度3％的巯基化的透明质酸溶液，然后加入PEG400配制成HA-PEG混合液，PEG400在HA-PEG混合液中的质量浓度为10％，然后快速搅拌混合1min；将酰胺化的聚谷氨酸溶解于纯化水中，配成质量浓度3％的酰胺化的聚谷氨酸水溶液；向HA-PEG混合液中加入酰胺化的聚谷氨酸水溶液混合均匀，HA-PEG混合液与酰胺化的聚谷氨酸水溶液的体积比1：2，然后置于含有光引发剂I2959的PBS水溶液(光引发剂I2959在HA-PEG与聚谷氨酸混合溶液中的质量体积浓度为0.25％)中混匀，倒入圆柱型模具后，于室温下交联1min-10min，然后再用紫外照射器照射3min进行二次交联，脱模后用75％的乙醇溶液消毒洗涤2h，最后再用清水洗涤3-5次；最后将凝胶灌装于注射器中，10kGy电子束灭菌后即得注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶。
实施例6
本实施例的注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶的制备方法与实施例2相比，其区别在于：巯基化的透明质酸溶液与酰胺化的聚谷氨酸水溶液体积比为1:3。本实施例制备方法的具体步骤如下：
将透明质酸溶解于纯化水中，制备得到透明质酸溶液(质量浓度1％)，然后加入半胱胺盐酸盐(在溶液中质量浓度0.8％)，搅拌均匀后，加入EDC(在溶液中质量浓度2.0％)和NHS(在溶液中质量浓度0.5％)进行交联，在30℃水浴中持续搅拌交联16h，将体系pH控制在7.0左右，获得透明质酸凝胶，然后将透明质酸凝胶转移到透析袋中，在水和乙醇的混合液中透析1d，在氯化钠溶液中透析1d，最后在纯化水中透析2d，最后将透析纯化后的透明质酸凝胶冻干，得到巯基化的透明质酸，4-8℃低温保存，备用。
将聚谷氨酸溶解于纯化水中，制备得到聚谷氨酸溶液(质量浓度1％)，然后加入酪胺盐酸盐(在溶液中质量浓度0.5％)，搅拌均匀后，加入EDC(在溶液中质量浓度2.0％)和1.0％的NHS(在溶液中质量浓度1.0％)进行引发交联，在30℃水浴中持续搅拌交联16h，将体系pH控制在4.0-6.0左右，获得聚谷氨酸凝胶，然后将聚谷氨酸凝胶转移到透析袋中，在水和乙醇的混合液中透析1d，在氯化钠溶液中透析1d，最后在纯化水中透析2d，最后将透析纯化后的聚谷氨酸凝胶冻干，得到酰胺化的聚谷氨酸，4-8℃低温保存，备用。
将巯基化的透明质酸溶解于纯化水中配成质量浓度3％的巯基化的透明质酸溶液，然后加入PEG400配制成HA-PEG混合液，PEG400在HA-PEG混合液中的质量浓度为10％，然后快速搅拌混合1min；将酰胺化的聚谷氨酸溶解于纯化水中，配成质量浓度3％的酰胺化的聚谷氨酸水溶液；向HA-PEG混合液中加入酰胺化的聚谷氨酸水溶液混合均匀，HA-PEG混合液与酰胺化的聚谷氨酸水溶液的体积比1:3，然后置于含有光引发剂I2959的PBS水溶液(光引发剂I2959在HA-PEG与聚谷氨酸混合溶液中的质量体积浓度为0.25％)中混匀，倒入圆柱型模具后，于室温下交联1min-10min，然后再用紫外照射器照射3min进行二次交联，脱模后用75％的乙醇溶液消毒洗涤2h，最后再用清水洗涤3-5次；最后将凝胶灌装于注射器中，10kGy电子束灭菌后即得注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶。
实施例7
本实施例的注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶的制备方法与实施例4相比，其区别在于：将PEG400替换为PEG200。本实施例制备方法的具体步骤如下：
将透明质酸溶解于纯化水中，制备得到透明质酸溶液(质量浓度1％)，然后加入半胱胺盐酸盐(在溶液中质量浓度0.8％)，搅拌均匀后，加入EDC(在溶液中质量浓度2.0％)和NHS(在溶液中质量浓度0.5％)进行交联，在30℃水浴中持续搅拌交联16h，将体系pH控制在7.0左右，获得透明质酸凝胶，然后将透明质酸凝胶转移到透析袋中，在水和乙醇的混合液中透析1d，在氯化钠溶液中透析1d，最后在纯化水中透析2d，最后将透析纯化后的透明质酸凝胶冻干，得到巯基化的透明质酸，4-8℃低温保存，备用。
将聚谷氨酸溶解于纯化水中，制备得到聚谷氨酸溶液(质量浓度1％)，然后加入酪胺盐酸盐(在溶液中质量浓度0.5％)，搅拌均匀后，加入EDC(在溶液中质量浓度2.0％)和1.0％的NHS(在溶液中质量浓度1.0％)进行引发交联，在30℃水浴中持续搅拌交联16h，将体系pH控制在4.0-6.0左右，获得聚谷氨酸凝胶，然后将聚谷氨酸凝胶转移到透析袋中，在水和乙醇的混合液中透析1d，在氯化钠溶液中透析1d，最后在纯化水中透析2d，最后将透析纯化后的聚谷氨酸凝胶冻干，得到酰胺化的聚谷氨酸，4-8℃低温保存，备用。
将巯基化的透明质酸溶解于纯化水中配成质量浓度3％的巯基化的透明质酸溶液，然后加入PEG200配制成HA-PEG混合液，PEG200在HA-PEG混合液中的质量浓度为10％，然后快速搅拌混合1min；将酰胺化的聚谷氨酸溶解于纯化水中，配成质量浓度3％的酰胺化的聚谷氨酸水溶液；向HA-PEG混合液中加入酰胺化的聚谷氨酸水溶液混合均匀，HA-PEG混合液与酰胺化的聚谷氨酸水溶液的体积比1:3，然后置于含有光引发剂I2959的PBS水溶液(光引发剂I2959在HA-PEG与聚谷氨酸混合溶液中的质量体积浓度为0.25％)中混匀，倒入圆柱型模具后，于室温下交联1min-10min，然后再用紫外照射器照射3min进行二次交联，脱模后用75％的乙醇溶液消毒洗涤2h，最后再用清水洗涤3-5次；最后将凝胶灌装于注射器中，10kGy电子束灭菌后即得注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶。
实施例8
本实施例的注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶的制备方法与实施例4相比，其区别在于：将PEG400替换为PEG800。本实施例制备方法的具体步骤如下：
将透明质酸溶解于纯化水中，制备得到透明质酸溶液(质量浓度1％)，然后加入半胱胺盐酸盐(在溶液中质量浓度0.8％)，搅拌均匀后，加入EDC(在溶液中质量浓度2.0％)和NHS(在溶液中质量浓度0.5％)进行交联，在30℃水浴中持续搅拌交联16h，将体系pH控制在7.0左右，获得透明质酸凝胶，然后将透明质酸凝胶转移到透析袋中，在水和乙醇的混合液中透析1d，在氯化钠溶液中透析1d，最后在纯化水中透析2d，最后将透析纯化后的透明质酸凝胶冻干，得到巯基化的透明质酸，4-8℃低温保存，备用。
将聚谷氨酸溶解于纯化水中，制备得到聚谷氨酸溶液(质量浓度1％)，然后加入酪胺盐酸盐(在溶液中质量浓度0.5％)，搅拌均匀后，加入EDC(在溶液中质量浓度2.0％)和1.0％的NHS(在溶液中质量浓度1.0％)进行引发交联，在30℃水浴中持续搅拌交联16h，将体系pH控制在4.0-6.0左右，获得聚谷氨酸凝胶，然后将聚谷氨酸凝胶转移到透析袋中，在水和乙醇的混合液中透析1d，在氯化钠溶液中透析1d，最后在纯化水中透析2d，最后将透析纯化后的聚谷氨酸凝胶冻干，得到酰胺化的聚谷氨酸，4-8℃低温保存，备用。
将巯基化的透明质酸溶解于纯化水中配成质量浓度3％的巯基化的透明质酸溶液，然后加入PEG800配制成HA-PEG混合液，PEG800在HA-PEG混合液中的质量浓度为10％，然后快速搅拌混合1min；将酰胺化的聚谷氨酸溶解于纯化水中，配成质量浓度3％的酰胺化的聚谷氨酸水溶液；向HA-PEG混合液中加入酰胺化的聚谷氨酸水溶液混合均匀，HA-PEG混合液与酰胺化的聚谷氨酸水溶液的体积比1:3，然后置于含有光引发剂I2959的PBS水溶液(光引发剂I2959在HA-PEG与聚谷氨酸混合溶液中的质量体积浓度为0.25％)中混匀，倒入圆柱型模具后，于室温下交联1min-10min，然后再用紫外照射器照射3min进行二次交联，脱模后用75％的乙醇溶液消毒洗涤2h，最后再用清水洗涤3-5次；最后将凝胶灌装于注射器中，10kGy电子束灭菌后即得注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶。
实施例9
本实施例的注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶的制备方法与实施例8相比，其区别在于：PEG800在HA-PEG混合液中的质量浓度为20％。本实施例制备方法的具体步骤如下：
将透明质酸溶解于纯化水中，制备得到透明质酸溶液(质量浓度1％)，然后加入半胱胺盐酸盐(在溶液中质量浓度0.8％)，搅拌均匀后，加入EDC(在溶液中质量浓度2.0％)和NHS(在溶液中质量浓度0.5％)进行交联，在30℃水浴中持续搅拌交联16h，将体系pH控制在7.0左右，获得透明质酸凝胶，然后将透明质酸凝胶转移到透析袋中，在水和乙醇的混合液中透析1d，在氯化钠溶液中透析1d，最后在纯化水中透析2d，最后将透析纯化后的透明质酸凝胶冻干，得到巯基化的透明质酸，4-8℃低温保存，备用。
将聚谷氨酸溶解于纯化水中，制备得到聚谷氨酸溶液(质量浓度1％)，然后加入酪胺盐酸盐(在溶液中质量浓度0.5％)，搅拌均匀后，加入EDC(在溶液中质量浓度2.0％)和1.0％的NHS(在溶液中质量浓度1.0％)进行引发交联，在30℃水浴中持续搅拌交联16h，将体系pH控制在4.0-6.0左右，获得聚谷氨酸凝胶，然后将聚谷氨酸凝胶转移到透析袋中，在水和乙醇的混合液中透析1d，在氯化钠溶液中透析1d，最后在纯化水中透析2d，最后将透析纯化后的聚谷氨酸凝胶冻干，得到酰胺化的聚谷氨酸，4-8℃低温保存，备用。
将巯基化的透明质酸溶解于纯化水中配成质量浓度3％的巯基化的透明质酸溶液，然后加入PEG800配制成HA-PEG混合液，PEG800在HA-PEG混合液中的质量浓度为20％，然后快速搅拌混合1min；将酰胺化的聚谷氨酸溶解于纯化水中，配成质量浓度3％的酰胺化的聚谷氨酸水溶液；向HA-PEG混合液中加入酰胺化的聚谷氨酸水溶液混合均匀，HA-PEG混合液与酰胺化的聚谷氨酸水溶液的体积比1:3，然后置于含有光引发剂I2959的PBS水溶液(光引发剂I2959在HA-PEG与聚谷氨酸混合溶液中的质量体积浓度为0.25％)中混匀，倒入圆柱型模具后，于室温下交联1min-10min，然后再用紫外照射器照射3min进行二次交联，脱模后用75％的乙醇溶液消毒洗涤2h，最后再用清水洗涤3-5次；最后将凝胶灌装于注射器中，10kGy电子束灭菌后即得注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶。
实施例10
本实施例的注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶的制备方法与实施例8相比，其区别在于：将PEG800替换为PEG1200。本实施例制备方法的具体步骤如下：
将透明质酸溶解于纯化水中，制备得到透明质酸溶液(质量浓度1％)，然后加入半胱胺盐酸盐(在溶液中质量浓度0.8％)，搅拌均匀后，加入EDC(在溶液中质量浓度2.0％)和NHS(在溶液中质量浓度0.5％)进行交联，在30℃水浴中持续搅拌交联16h，将体系pH控制在7.0左右，获得透明质酸凝胶，然后将透明质酸凝胶转移到透析袋中，在水和乙醇的混合液中透析1d，在氯化钠溶液中透析1d，最后在纯化水中透析2d，最后将透析纯化后的透明质酸凝胶冻干，得到巯基化的透明质酸，4-8℃低温保存，备用。
将聚谷氨酸溶解于纯化水中，制备得到聚谷氨酸溶液(质量浓度1％)，然后加入酪胺盐酸盐(在溶液中质量浓度0.5％)，搅拌均匀后，加入EDC(在溶液中质量浓度2.0％)和1.0％的NHS(在溶液中质量浓度1.0％)进行引发交联，在30℃水浴中持续搅拌交联16h，将体系pH控制在4.0-6.0左右，获得聚谷氨酸凝胶，然后将聚谷氨酸凝胶转移到透析袋中，在水和乙醇的混合液中透析1d，在氯化钠溶液中透析1d，最后在纯化水中透析2d，最后将透析纯化后的聚谷氨酸凝胶冻干，得到酰胺化的聚谷氨酸，4-8℃低温保存，备用。
将巯基化的透明质酸溶解于纯化水中配成质量浓度3％的巯基化的透明质酸溶液，然后加入PEG1200配制成HA-PEG混合液，PEG1200在HA-PEG混合液中的质量浓度为20％，然后快速搅拌混合1min；将酰胺化的聚谷氨酸溶解于纯化水中，配成质量浓度3％的酰胺化的聚谷氨酸水溶液；向HA-PEG混合液中加入酰胺化的聚谷氨酸水溶液混合均匀，HA-PEG混合液与酰胺化的聚谷氨酸水溶液的体积比1:3，然后置于含有光引发剂I2959的PBS水溶液(光引发剂I2959在HA-PEG与聚谷氨酸混合溶液中的质量体积浓度为0.25％)中混匀，倒入圆柱型模具后，于室温下交联1min-10min，然后再用紫外照射器照射3min进行二次交联，脱模后用75％的乙醇溶液消毒洗涤2h，最后再用清水洗涤3-5次；最后将凝胶灌装于注射器中，10kGy电子束灭菌后即得注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶。
实施例11：
本实施例的注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶的制备方法与实施例4相比，其区别在于：不包括酰胺化的聚谷氨酸的制备步骤。本实施例制备方法的具体步骤如下：
将透明质酸溶解于纯化水中，制备得到透明质酸溶液(质量浓度1％)，然后加入半胱胺盐酸盐(在溶液中质量浓度0.8％)，搅拌均匀后，加入EDC(在溶液中质量浓度2.0％)和NHS(在溶液中质量浓度0.5％)进行交联，在30℃水浴中持续搅拌交联16h，将体系pH控制在7.0左右，获得透明质酸凝胶，然后将透明质酸凝胶转移到透析袋中，在水和乙醇的混合液中透析1d，在氯化钠溶液中透析1d，最后在纯化水中透析2d，最后将透析纯化后的透明质酸凝胶冻干，得到巯基化的透明质酸，4-8℃低温保存，备用。
将巯基化的透明质酸溶解于纯化水中配成质量浓度3％的巯基化的透明质酸溶液，然后加入PEG400配制成HA-PEG混合液，PEG400在HA-PEG混合液中的质量浓度为10％，然后快速搅拌混合1min；然后置于含有光引发剂I2959的PBS水溶液(光引发剂I2959在HA-PEG与聚谷氨酸混合溶液中的质量体积浓度为0.25％)中混匀，倒入圆柱型模具后，于室温下交联1min-10min，然后再用紫外照射器照射3min进行二次交联，脱模后用75％的乙醇溶液消毒洗涤2h，最后再用清水洗涤3-5次；最后将凝胶灌装于注射器中，10kGy电子束灭菌后即得注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶。
实施例12
本实施例的注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶的制备方法与实施例1相比，其区别在于：不包括酰胺化的聚谷氨酸的制备步骤。本实施例制备方法的具体步骤如下：
将透明质酸溶解于纯化水中，制备得到透明质酸溶液(质量浓度1％)，然后加入半胱胺盐酸盐(在溶液中质量浓度0.8％)，搅拌均匀后，加入EDC(在溶液中质量浓度2.0％)和NHS(在溶液中质量浓度0.5％)进行交联，在30℃水浴中持续搅拌交联16h，将体系pH控制在7.0左右，获得透明质酸凝胶，然后将透明质酸凝胶转移到透析袋中，在水和乙醇的混合液中透析1d，在氯化钠溶液中透析1d，最后在纯化水中透析2d，最后将透析纯化后的透明质酸凝胶冻干，得到巯基化的透明质酸，4-8℃低温保存，备用。
将巯基化的透明质酸溶解于纯化水中配成质量浓度5％的巯基化的透明质酸溶液，然后加入PEG800配制成HA-PEG混合液，PEG800在HA-PEG混合液中的质量浓度为20％，然后快速搅拌混合1min；然后置于含有光引发剂I2959的PBS水溶液(光引发剂I2959在HA-PEG与聚谷氨酸混合溶液中的质量体积浓度为0.25％)中混匀，倒入圆柱型模具后，于室温下交联1min-10min，然后再用紫外照射器照射3min进行二次交联，脱模后用75％的乙醇溶液消毒洗涤2h，最后再用清水洗涤3-5次；最后将凝胶灌装于注射器中，10kGy电子束灭菌后即得注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶。
实施例13：
本实施例的注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶的制备方法与实施例4相比，其区别在于：不包括巯基化的透明质酸的制备步骤。本实施例制备方法的具体步骤如下：
将聚谷氨酸溶解于纯化水中，制备得到聚谷氨酸溶液(质量浓度1％)，然后加入酪胺盐酸盐(在溶液中质量浓度0.5％)，搅拌均匀后，加入EDC(在溶液中质量浓度2.0％)和1.0％的NHS(在溶液中质量浓度1.0％)进行引发交联，在30℃水浴中持续搅拌交联16h，将体系pH控制在4.0-6.0左右，获得聚谷氨酸凝胶，然后将聚谷氨酸凝胶转移到透析袋中，在水和乙醇的混合液中透析1d，在氯化钠溶液中透析1d，最后在纯化水中透析2d，最后将透析纯化后的聚谷氨酸凝胶冻干，得到酰胺化的聚谷氨酸，4-8℃低温保存，备用。
将酰胺化的聚谷氨酸溶解于纯化水中，配成质量浓度3％的酰胺化的聚谷氨酸水溶液；再加入PEG400(在溶液中的质量浓度为10％)，快速搅拌混合1min；然后置于含有光引发剂I2959的PBS水溶液(光引发剂I2959在HA-PEG与聚谷氨酸混合溶液中的质量体积浓度为0.25％)中混匀，倒入圆柱型模具后，于室温下交联1min-10min，然后再用紫外照射器照射3min进行二次交联，脱模后用75％的乙醇溶液消毒洗涤2h，再用清水洗涤3-5次；最后将凝胶灌装于注射器中，10kGy电子束灭菌后即得注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶。
实施例14
本实施例的注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶的制备方法与实施例1相比，其区别在于：不包括巯基化的透明质酸的制备步骤。本实施例制备方法的具体步骤如下：
将聚谷氨酸溶解于纯化水中，制备得到聚谷氨酸溶液(质量浓度1％)，然后加入酪胺盐酸盐(在溶液中质量浓度0.5％)，搅拌均匀后，加入EDC(在溶液中质量浓度2.0％)和1.0％的NHS(在溶液中质量浓度1.0％)进行引发交联，在30℃水浴中持续搅拌交联16h，将体系pH控制在4.0-6.0左右，获得聚谷氨酸凝胶，然后将聚谷氨酸凝胶转移到透析袋中，在水和乙醇的混合液中透析1d，在氯化钠溶液中透析1d，最后在纯化水中透析2d，最后将透析纯化后的聚谷氨酸凝胶冻干，得到酰胺化的聚谷氨酸，4-8℃低温保存，备用。
将酰胺化的聚谷氨酸溶解于纯化水中，配成质量浓度5％的酰胺化的聚谷氨酸水溶液；再加入PEG800(在溶液中的质量浓度为20％)，然后快速搅拌混合1min；然后置于含有光引发剂I2959的PBS水溶液(光引发剂I2959在HA-PEG与聚谷氨酸混合溶液中的质量体积浓度为0.25％)中混匀，倒入圆柱型模具后，于室温下交联1min-10min，然后再用紫外照射器照射3min进行二次交联，脱模后用75％的乙醇溶液消毒洗涤2h，最后再用清水洗涤3-5次；最后将凝胶灌装于注射器中，10kGy电子束灭菌后即得注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶。
实施例15
本实施例的注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶的制备方法与实施例1相比，其区别在于：将PEG800替换为PEG100。本实施例制备方法的具体步骤如下：
将透明质酸溶解于纯化水中，制备得到透明质酸溶液(质量浓度1％)，然后加入半胱胺盐酸盐(在溶液中质量浓度0.8％)，搅拌均匀后，加入EDC(在溶液中质量浓度2.0％)和NHS(在溶液中质量浓度0.5％)进行交联，在30℃水浴中持续搅拌交联16h，将体系pH控制在7.0左右，获得透明质酸凝胶，然后将透明质酸凝胶转移到透析袋中，在水和乙醇的混合液中透析1d，在氯化钠溶液中透析1d，最后在纯化水中透析2d，最后将透析纯化后的透明质酸凝胶冻干，得到巯基化的透明质酸，4-8℃低温保存，备用。
将聚谷氨酸溶解于纯化水中，制备得到聚谷氨酸溶液(质量浓度1％)，然后加入酪胺盐酸盐(在溶液中质量浓度0.5％)，搅拌均匀后，加入EDC(在溶液中质量浓度2.0％)和1.0％的NHS(在溶液中质量浓度1.0％)进行引发交联，在30℃水浴中持续搅拌交联16h，将体系pH控制在4.0-6.0左右，获得聚谷氨酸凝胶，然后将聚谷氨酸凝胶转移到透析袋中，在水和乙醇的混合液中透析1d，在氯化钠溶液中透析1d，最后在纯化水中透析2d，最后将透析纯化后的聚谷氨酸凝胶冻干，得到酰胺化的聚谷氨酸，4-8℃低温保存，备用。
将巯基化的透明质酸溶解于纯化水中配成质量浓度5％的巯基化的透明质酸溶液，然后加入PEG100配制成HA-PEG混合液，PEG100在HA-PEG混合液中的质量浓度为20％，然后快速搅拌混合1min；将酰胺化的聚谷氨酸溶解于纯化水中，配成质量浓度5％的酰胺化的聚谷氨酸水溶液；向HA-PEG混合液中加入酰胺化的聚谷氨酸水溶液混合均匀，HA-PEG混合液与酰胺化的聚谷氨酸水溶液的体积比1：1，然后置于含有光引发剂I2959的PBS水溶液(光引发剂I2959在HA-PEG与聚谷氨酸混合溶液中的质量体积浓度为0.25％)中混匀，倒入圆柱型模具后，于室温下交联1min-10min，然后再用紫外照射器照射3min进行二次交联，脱模后用75％的乙醇溶液消毒洗涤2h，最后再用清水洗涤3-5次；最后将凝胶灌装于注射器中，10kGy电子束灭菌后即得注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶。
实施例16
本实施例的注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶的制备方法与实施例1相比，其区别在于：将PEG800替换为PEG4000。本实施例制备方法的具体步骤如下：
将透明质酸溶解于纯化水中，制备得到透明质酸溶液(质量浓度1％)，然后加入半胱胺盐酸盐(在溶液中质量浓度0.8％)，搅拌均匀后，加入EDC(在溶液中质量浓度2.0％)和NHS(在溶液中质量浓度0.5％)进行交联，在30℃水浴中持续搅拌交联16h，将体系pH控制在7.0左右，获得透明质酸凝胶，然后将透明质酸凝胶转移到透析袋中，在水和乙醇的混合液中透析1d，在氯化钠溶液中透析1d，最后在纯化水中透析2d，最后将透析纯化后的透明质酸凝胶冻干，得到巯基化的透明质酸，4-8℃低温保存，备用。
将聚谷氨酸溶解于纯化水中，制备得到聚谷氨酸溶液(质量浓度1％)，然后加入酪胺盐酸盐(在溶液中质量浓度0.5％)，搅拌均匀后，加入EDC(在溶液中质量浓度2.0％)和1.0％的NHS(在溶液中质量浓度1.0％)进行引发交联，在30℃水浴中持续搅拌交联16h，将体系pH控制在4.0-6.0左右，获得聚谷氨酸凝胶，然后将聚谷氨酸凝胶转移到透析袋中，在水和乙醇的混合液中透析1d，在氯化钠溶液中透析1d，最后在纯化水中透析2d，最后将透析纯化后的聚谷氨酸凝胶冻干，得到酰胺化的聚谷氨酸，4-8℃低温保存，备用。
将巯基化的透明质酸溶解于纯化水中配成质量浓度5％的巯基化的透明质酸溶液，然后加入PEG4000配制成HA-PEG混合液，PEG4000在HA-PEG混合液中的质量浓度为20％，然后快速搅拌混合1min；将酰胺化的聚谷氨酸溶解于纯化水中，配成质量浓度5％的酰胺化的聚谷氨酸水溶液；向HA-PEG混合液中加入酰胺化的聚谷氨酸水溶液混合均匀，HA-PEG混合液与酰胺化的聚谷氨酸水溶液的体积比1：1，然后置于含有光引发剂I2959的PBS水溶液(光引发剂I2959在HA-PEG与聚谷氨酸混合溶液中的质量体积浓度为0.25％)中混匀，倒入圆柱型模具后，于室温下交联1min-10min，然后再用紫外照射器照射3min进行二次交联，脱模后用75％的乙醇溶液消毒洗涤2h，最后再用清水洗涤3-5次；最后将凝胶灌装于注射器中，10kGy电子束灭菌后即得注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶。
实施例17
本实施例的注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶的制备方法与实施例1相比，其区别在于：将PEG800在HA-PEG混合液中的质量浓度20％替换为2％。本实施例制备方法的具体步骤如下：
将透明质酸溶解于纯化水中，制备得到透明质酸溶液(质量浓度1％)，然后加入半胱胺盐酸盐(在溶液中质量浓度0.8％)，搅拌均匀后，加入EDC(在溶液中质量浓度2.0％)和NHS(在溶液中质量浓度0.5％)进行交联，在30℃水浴中持续搅拌交联16h，将体系pH控制在7.0左右，获得透明质酸凝胶，然后将透明质酸凝胶转移到透析袋中，在水和乙醇的混合液中透析1d，在氯化钠溶液中透析1d，最后在纯化水中透析2d，最后将透析纯化后的透明质酸凝胶冻干，得到巯基化的透明质酸，4-8℃低温保存，备用。
将聚谷氨酸溶解于纯化水中，制备得到聚谷氨酸溶液(质量浓度1％)，然后加入酪胺盐酸盐(在溶液中质量浓度0.5％)，搅拌均匀后，加入EDC(在溶液中质量浓度2.0％)和1.0％的NHS(在溶液中质量浓度1.0％)进行引发交联，在30℃水浴中持续搅拌交联16h，将体系pH控制在4.0-6.0左右，获得聚谷氨酸凝胶，然后将聚谷氨酸凝胶转移到透析袋中，在水和乙醇的混合液中透析1d，在氯化钠溶液中透析1d，最后在纯化水中透析2d，最后将透析纯化后的聚谷氨酸凝胶冻干，得到酰胺化的聚谷氨酸，4-8℃低温保存，备用。
将巯基化的透明质酸溶解于纯化水中配成质量浓度5％的巯基化的透明质酸溶液，然后加入PEG800配制成HA-PEG混合液，PEG800在HA-PEG混合液中的质量浓度为2％，然后快速搅拌混合1min；将酰胺化的聚谷氨酸溶解于纯化水中，配成质量浓度5％的酰胺化的聚谷氨酸水溶液；向HA-PEG混合液中加入酰胺化的聚谷氨酸水溶液混合均匀，HA-PEG混合液与酰胺化的聚谷氨酸水溶液的体积比1：1，然后置于含有光引发剂I2959的PBS水溶液(光引发剂I2959在HA-PEG与聚谷氨酸混合溶液中的质量体积浓度为0.25％)中混匀，倒入圆柱型模具后，于室温下交联1min-10min，然后再用紫外照射器照射3min进行二次交联，脱模后用75％的乙醇溶液消毒洗涤2h，最后再用清水洗涤3-5次；最后将凝胶灌装于注射器中，10kGy电子束灭菌后即得注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶。
实施例18
本实施例的注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶的制备方法与实施例1比，其区别在于：将PEG800在HA-PEG混合液中的质量浓度20％替换为60％。本实施例制备方法的具体步骤如下：
将透明质酸溶解于纯化水中，制备得到透明质酸溶液(质量浓度1％)，然后加入半胱胺盐酸盐(在溶液中质量浓度0.8％)，搅拌均匀后，加入EDC(在溶液中质量浓度2.0％)和NHS(在溶液中质量浓度0.5％)进行交联，在30℃水浴中持续搅拌交联16h，将体系pH控制在7.0左右，获得透明质酸凝胶，然后将透明质酸凝胶转移到透析袋中，在水和乙醇的混合液中透析1d，在氯化钠溶液中透析1d，最后在纯化水中透析2d，最后将透析纯化后的透明质酸凝胶冻干，得到巯基化的透明质酸，4-8℃低温保存，备用。
将聚谷氨酸溶解于纯化水中，制备得到聚谷氨酸溶液(质量浓度1％)，然后加入酪胺盐酸盐(在溶液中质量浓度0.5％)，搅拌均匀后，加入EDC(在溶液中质量浓度2.0％)和1.0％的NHS(在溶液中质量浓度1.0％)进行引发交联，在30℃水浴中持续搅拌交联16h，将体系pH控制在4.0-6.0左右，获得聚谷氨酸凝胶，然后将聚谷氨酸凝胶转移到透析袋中，在水和乙醇的混合液中透析1d，在氯化钠溶液中透析1d，最后在纯化水中透析2d，最后将透析纯化后的聚谷氨酸凝胶冻干，得到酰胺化的聚谷氨酸，4-8℃低温保存，备用。
将巯基化的透明质酸溶解于纯化水中配成质量浓度5％的巯基化的透明质酸溶液，然后加入PEG800配制成HA-PEG混合液，PEG800在HA-PEG混合液中的质量浓度为60％，然后快速搅拌混合1min；将酰胺化的聚谷氨酸溶解于纯化水中，配成质量浓度5％的酰胺化的聚谷氨酸水溶液；向HA-PEG混合液中加入酰胺化的聚谷氨酸水溶液混合均匀，HA-PEG混合液与酰胺化的聚谷氨酸水溶液的体积比1：1，然后置于含有光引发剂I2959的PBS水溶液(光引发剂I2959在HA-PEG与聚谷氨酸混合溶液中的质量体积浓度为0.25％)中混匀，倒入圆柱型模具后，于室温下交联1min-10min，然后再用紫外照射器照射3min进行二次交联，脱模后用75％的乙醇溶液消毒洗涤2h，最后再用清水洗涤3-5次；最后将凝胶灌装于注射器中，10kGy电子束灭菌后即得注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶。
实施例19
本实施例的注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶的制备方法与实施例1比，其区别在于：HA-PEG混合液与酰胺化的聚谷氨酸水溶液的体积比1:1替换为0.05：1。本实施例制备方法的具体步骤如下：
将透明质酸溶解于纯化水中，制备得到透明质酸溶液(质量浓度1％)，然后加入半胱胺盐酸盐(在溶液中质量浓度0.8％)，搅拌均匀后，加入EDC(在溶液中质量浓度2.0％)和NHS(在溶液中质量浓度0.5％)进行交联，在30℃水浴中持续搅拌交联16h，将体系pH控制在7.0左右，获得透明质酸凝胶，然后将透明质酸凝胶转移到透析袋中，在水和乙醇的混合液中透析1d，在氯化钠溶液中透析1d，最后在纯化水中透析2d，最后将透析纯化后的透明质酸凝胶冻干，得到巯基化的透明质酸，4-8℃低温保存，备用。
将聚谷氨酸溶解于纯化水中，制备得到聚谷氨酸溶液(质量浓度1％)，然后加入酪胺盐酸盐(在溶液中质量浓度0.5％)，搅拌均匀后，加入EDC(在溶液中质量浓度2.0％)和1.0％的NHS(在溶液中质量浓度1.0％)进行引发交联，在30℃水浴中持续搅拌交联16h，将体系pH控制在4.0-6.0左右，获得聚谷氨酸凝胶，然后将聚谷氨酸凝胶转移到透析袋中，在水和乙醇的混合液中透析1d，在氯化钠溶液中透析1d，最后在纯化水中透析2d，最后将透析纯化后的聚谷氨酸凝胶冻干，得到酰胺化的聚谷氨酸，4-8℃低温保存，备用。
将巯基化的透明质酸溶解于纯化水中配成质量浓度5％的巯基化的透明质酸溶液，然后加入PEG800配制成HA-PEG混合液，PEG800在HA-PEG混合液中的质量浓度为20％，然后快速搅拌混合1min；将酰胺化的聚谷氨酸溶解于纯化水中，配成质量浓度5％的酰胺化的聚谷氨酸水溶液；向HA-PEG混合液中加入酰胺化的聚谷氨酸水溶液混合均匀，HA-PEG混合液与酰胺化的聚谷氨酸水溶液的体积比0.05：1，然后置于含有光引发剂I2959的PBS水溶液(光引发剂I2959在HA-PEG与聚谷氨酸混合溶液中的质量体积浓度为0.25％)中混匀，倒入圆柱型模具后，于室温下交联1min-10min，然后再用紫外照射器照射3min进行二次交联，脱模后用75％的乙醇溶液消毒洗涤2h，最后再用清水洗涤3-5次；最后将凝胶灌装于注射器中，10kGy电子束灭菌后即得注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶。
实施例20
本实施例的注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶的制备方法与实施例1比，其区别在于：HA-PEG混合液与酰胺化的聚谷氨酸水溶液的体积比1:1替换为20：1。本实施例制备方法的具体步骤如下：
将透明质酸溶解于纯化水中，制备得到透明质酸溶液(质量浓度1％)，然后加入半胱胺盐酸盐(在溶液中质量浓度0.8％)，搅拌均匀后，加入EDC(在溶液中质量浓度2.0％)和NHS(在溶液中质量浓度0.5％)进行交联，在30℃水浴中持续搅拌交联16h，将体系pH控制在7.0左右，获得透明质酸凝胶，然后将透明质酸凝胶转移到透析袋中，在水和乙醇的混合液中透析1d，在氯化钠溶液中透析1d，最后在纯化水中透析2d，最后将透析纯化后的透明质酸凝胶冻干，得到巯基化的透明质酸，4-8℃低温保存，备用。
将聚谷氨酸溶解于纯化水中，制备得到聚谷氨酸溶液(质量浓度1％)，然后加入酪胺盐酸盐(在溶液中质量浓度0.5％)，搅拌均匀后，加入EDC(在溶液中质量浓度2.0％)和1.0％的NHS(在溶液中质量浓度1.0％)进行引发交联，在30℃水浴中持续搅拌交联16h，将体系pH控制在4.0-6.0左右，获得聚谷氨酸凝胶，然后将聚谷氨酸凝胶转移到透析袋中，在水和乙醇的混合液中透析1d，在氯化钠溶液中透析1d，最后在纯化水中透析2d，最后将透析纯化后的聚谷氨酸凝胶冻干，得到酰胺化的聚谷氨酸，4-8℃低温保存，备用。
将巯基化的透明质酸溶解于纯化水中配成质量浓度5％的巯基化的透明质酸溶液，然后加入PEG800配制成HA-PEG混合液，PEG800在HA-PEG混合液中的质量浓度为20％，然后快速搅拌混合1min；将酰胺化的聚谷氨酸溶解于纯化水中，配成质量浓度5％的酰胺化的聚谷氨酸水溶液；向HA-PEG混合液中加入酰胺化的聚谷氨酸水溶液混合均匀，HA-PEG混合液与酰胺化的聚谷氨酸水溶液的体积比20：1，然后置于含有光引发剂I2959的PBS水溶液(光引发剂I2959在HA-PEG与聚谷氨酸混合溶液中的质量体积浓度为0.25％)中混匀，倒入圆柱型模具后，于室温下交联1min-10min，然后再用紫外照射器照射3min进行二次交联，脱模后用75％的乙醇溶液消毒洗涤2h，最后再用清水洗涤3-5次；最后将凝胶灌装于注射器中，10kGy电子束灭菌后即得注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶。
实施例21
本实施例的注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶的制备方法与实施例1相比，其区别在于：实施例中所用到的数值比例均有所不同。本实施例制备方法的具体步骤如下：
将透明质酸溶解于纯化水中，制备得到透明质酸溶液(质量浓度0.5％)，然后加入半胱胺盐酸盐(在溶液中质量浓度1.0％)，搅拌均匀后，加入EDC(在溶液中质量浓度1.5％)和NHS(在溶液中质量浓度0.5％)进行交联，在30℃水浴中持续搅拌交联16h，将体系pH控制在7.0左右，获得透明质酸凝胶，然后将透明质酸凝胶转移到透析袋中，在水和乙醇的混合液中透析1d，在氯化钠溶液中透析1d，最后在纯化水中透析2d，最后将透析纯化后的透明质酸凝胶冻干，得到巯基化的透明质酸，4-8℃低温保存，备用。
将聚谷氨酸溶解于纯化水中，制备得到聚谷氨酸溶液(质量浓度0.5％)，然后加入酪胺盐酸盐(在溶液中质量浓度1.0％)，搅拌均匀后，加入EDC(在溶液中质量浓度1.0％)和1.0％的NHS(在溶液中质量浓度1.0％)进行引发交联，在30℃水浴中持续搅拌交联16h，将体系pH控制在4.0-6.0左右，获得聚谷氨酸凝胶，然后将聚谷氨酸凝胶转移到透析袋中，在水和乙醇的混合液中透析1d，在氯化钠溶液中透析1d，最后在纯化水中透析2d，最后将透析纯化后的聚谷氨酸凝胶冻干，得到酰胺化的聚谷氨酸，4-8℃低温保存，备用。
将巯基化的透明质酸溶解于纯化水中配成质量浓度2％的巯基化的透明质酸溶液，然后加入PEG800配制成HA-PEG混合液，PEG800在HA-PEG混合液中的质量浓度为5％，然后快速搅拌混合1min；将酰胺化的聚谷氨酸溶解于纯化水中，配成质量浓度2％的酰胺化的聚谷氨酸水溶液；向HA-PEG混合液中加入酰胺化的聚谷氨酸水溶液混合均匀，HA-PEG混合液与酰胺化的聚谷氨酸水溶液的体积比0.1：1，然后置于含有光引发剂I2959的PBS水溶液(光引发剂I2959在HA-PEG与聚谷氨酸混合溶液中的质量体积浓度为0.25％)中混匀，倒入圆柱型模具后，于室温下交联5min-10min，然后再用紫外照射器照射3min进行二次交联，脱模后用75％的乙醇溶液消毒洗涤2h，最后再用清水洗涤3-5次；最后将凝胶灌装于注射器中，10kGy电子束灭菌后即得注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶。
实施例22
本实施例的注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶的制备方法与实施例1相比，其区别在于：实施例中所用到的数值比例均有所不同。本实施例制备方法的具体步骤如下：
将透明质酸溶解于纯化水中，制备得到透明质酸溶液(质量浓度5.0％)，然后加入半胱胺盐酸盐(在溶液中质量浓度1.0％)，搅拌均匀后，加入EDC(在溶液中质量浓度1.5％)和NHS(在溶液中质量浓度1.5％)进行交联，在30℃水浴中持续搅拌交联16h，将体系pH控制在7.0左右，获得透明质酸凝胶，然后将透明质酸凝胶转移到透析袋中，在水和乙醇的混合液中透析1d，在氯化钠溶液中透析1d，最后在纯化水中透析2d，最后将透析纯化后的透明质酸凝胶冻干，得到巯基化的透明质酸，4-8℃低温保存，备用。
将聚谷氨酸溶解于纯化水中，制备得到聚谷氨酸溶液(质量浓度5.0％)，然后加入酪胺盐酸盐(在溶液中质量浓度1.0％)，搅拌均匀后，加入EDC(在溶液中质量浓度1.0％)和1.0％的NHS(在溶液中质量浓度1.0％)进行引发交联，在30℃水浴中持续搅拌交联16h，将体系pH控制在4.0-6.0左右，获得聚谷氨酸凝胶，然后将聚谷氨酸凝胶转移到透析袋中，在水和乙醇的混合液中透析1d，在氯化钠溶液中透析1d，最后在纯化水中透析2d，最后将透析纯化后的聚谷氨酸凝胶冻干，得到酰胺化的聚谷氨酸，4-8℃低温保存，备用。
将巯基化的透明质酸溶解于纯化水中配成质量浓度20％的巯基化的透明质酸溶液，然后加入PEG800配制成HA-PEG混合液，PEG800在HA-PEG混合液中的质量浓度为40％，然后快速搅拌混合1min；将酰胺化的聚谷氨酸溶解于纯化水中，配成质量浓度20％的酰胺化的聚谷氨酸水溶液；向HA-PEG混合液中加入酰胺化的聚谷氨酸水溶液混合均匀，HA-PEG混合液与酰胺化的聚谷氨酸水溶液的体积比10：1，然后置于含有光引发剂I2959的PBS水溶液(光引发剂I2959在HA-PEG与聚谷氨酸混合溶液中的质量体积浓度为0.25％)中混匀，倒入圆柱型模具后，于室温下交联1min-3min，然后再用紫外照射器照射3min进行二次交联，脱模后用75％的乙醇溶液消毒洗涤2h，最后再用清水洗涤3-5次；最后将凝胶灌装于注射器中，10kGy电子束灭菌后即得注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶。
性能测试—溶胀度测试
将实施例1-10的制备而成的注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶样品准确称量(M0)后浸没于纯水中，使其充分吸收并达到平衡状态，过夜放置后，擦去样品表面游离水，精确称量样品湿重(M1)，按照下列公式计算样品的溶胀度，每个样品平行测试3次，求其平均值，溶胀度＝(M1-M0)/M0，测试结果如图1所示。
实施例2-6的测试结果显示，随着巯基化的透明质酸溶液与酰胺化的聚谷氨酸溶液的体积比例的调整，溶胀度呈现出先降低后增加的趋势，表明随着酰胺化的聚谷氨酸溶液比例的增加，形成的凝胶内部结构协同作用逐渐增强，凝胶的溶胀度降低，混合比例超过1：1后，结构逐渐变得疏松，凝胶内部有更多的空间结合自由水，溶胀度随之增加。但是观察实施例1-10的测试结果可以看出，随着聚乙二醇PEG分子量的增加及组分浓度的增加，溶胀度表现出降低的趋势，这是由于聚乙二醇PEG上的双键可以使凝胶具有更强的网络协同作用，制备出的凝胶交联度增加，内部结构更加致密，因此溶胀度较低。
性能测试—压缩性能测试
将实施例11、实施例13、实施例4、实施例12、实施例14、实施例1、实施例15、实施例16、实施例17、实施例18、实施例19、实施例20制备而成的注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶样品于室温下使用万能材料测试机，用模具制备称高5mm，直径为10mm的圆柱形样品，设置压缩速率为20mm/min，每个样品平行测试3次，求其平均值，获得压缩强度，测试结果如图2所示。
性能测试—拉伸强度测试
将实施例11、实施例13、实施例4、实施例12、实施例14、实施例1制备而成的注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶样品裁剪成长15mm，宽3mm，厚2mm的哑铃型试样，测试速率为5mm/min。每个样品平行测试3次，求其平均值，获得拉伸强度，测试结果如图3所示。
从图2和图3的测试结果中可以看出，采用单组分(无论是透明质酸还是聚谷氨酸)制备的凝胶机械强度要显著低于双组分的凝胶强度，这是由于双组分凝胶可以形成网络结构，增强了凝胶的力学强度，而且随着聚二乙醇PEG分子量和浓度的增加，凝胶的网络结构更加致密，协同作用进一步增强，这也就是实施例1的压缩强度和拉伸强度高于实施例4的原因。
性能测试—体外酶解试验
将实施例11、实施例4和实施例1的制备而成的注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶样品精确称量(M0)后，浸泡于37℃下含有的透明质酸酶(0.01mg/ml)和木瓜蛋白酶(0.2mg/ml)的PBS溶液中震荡，PBS为pH7.4的0.01M水溶液，分别在2、4、8、24h进行取样，取出后用纯化水洗涤擦去表面游离水，进行冻干，精确称量(M1)，体外降解的速率按照下列公式计算样品的溶胀度，每个样品平行测试3次，求其平均值，体外降解速率＝(M1-M0)/M0×100％，测试结果如图4所示。
从图4测试结果中可以看出，实施例11的降解较实施例1和实施例4的快，这是由于聚谷氨酸的引入使得凝胶的网络结构更加致密；实施例1的降解率小于实施例4，分析可能是由于实施例1的凝胶结构比实施例4的结构更加致密，实施例4的结构相对疏松，可以结合更多的自由水，接触更多的酶溶液，因此降解的速率更快。
性能测试—SEM照片观测
为了观察实施例4和实施例1制备而成的注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶样品内部的微观形貌及结构，将两种水凝胶冻干后用SEM扫描电镜进行观测。图5为实施例4制备而成的注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶样品的SEM图，图6为实施例1制备而成的注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶样品的SEM图。
从图5-6中可以看出，实施例4和1制备出的凝胶均具有多孔结构，且孔之间具有良好的贯穿性。其中实施例1的孔径要小于实施例4，这是由于实施例4中组分含量较低的原因。由此可以说明，随着组分含量的增加，形成的网络结构更加致密，根据此可以控制组分含量，从而制备出孔径结构不同形态的凝胶。
性能测试—体外细胞毒性测试
首先，在96孔板中接种成纤维细胞L929，细胞密度为2.5×105细胞/孔，使用含有抗生素和10％血清的MEM培养基，在37℃、5％CO2条件下培养24h。设置阴性对照组和阳性对照组。
然后弃去原培养液，阴性对照组加入培养基，阳性对照组加入10％二甲基亚砜，实验组将各样品的浸提液，加入到有细胞的培养板中，继续培养24h，然后将孔中的细胞液吸出，向每个孔中加入100uL的培养基和10uL的MTT溶液，继续孵化培养4h。
培养结束后，弃去孔内液体，加入150ul二甲基亚砜，置振荡器上震荡10min，用酶标仪检测每个样品在570nm下的吸光度。计算细胞存活率，公式如下：
细胞增殖率＝(实验组吸光度的平均值/控制组吸光度的平均值)×100％
在倒置显微镜下观察各组的细胞形态，结果如图7-10所示。图7为阴性对照组的体外细胞毒性测试结果，图8为实施例1制备而成的注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶样品的体外细胞毒性测试结果，图9为实施例4制备而成的注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶样品的体外细胞毒性测试结果，图10为阳性对照组的体外细胞毒性测试结果。
从图7-10测试结果显示，实施例4、实施例1、阴性对照组、阳性对照组的细胞增殖率分别为98％、101％、102％和20％；阴性对照与实施例1的细胞形态相似，无细胞溶解、无细胞增殖下降情况，综合细胞增殖率和细胞形态，可判定本发明所制备的水凝胶敷料无细胞毒性。
性能测试—皮内刺激测试
以无菌生理盐水为极性浸提介质，植物油为非极性浸提介质，按3cm2/mL的浸提比例，37℃±1℃下浸提72h±2h，制备浸提液。取浸提液，按GB/T 16886.10刺激与超敏试验中附录B中规定的皮内反应试验方法进行测定，该项试验的目的是为了确认实施例1的浸提液进行皮内注射给药后，是否会引起家兔局部皮内刺激反应。检测结果如表1所示：
表1实施例1制备而成的注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶的皮内刺激测试结果
Figure BDA0003813247640000231
由表1测试结果可知，实施例1作为试验样品在两种溶剂浸提条件下，刺激指数均为0，说明该产品不会引起刺激反应。
性能测试—皮肤刺激测试
以无菌生理盐水为浸提介质，按3cm2/mL的浸提比例，37℃±1℃下浸提72h±2h，制备浸提液。取浸提液，根据GB/T16886.10《医疗器械生物学评价第10部分：刺激与迟发型超敏反应试验》中推荐的皮肤致敏的要求对浸提物进行评价。该项试验的目的是为了确认实施例1的浸提液作为试验组对豚鼠进行皮肤致敏之后，是否会引起豚鼠皮肤致敏反应。以巯基苯并噻唑为阳性对照，以生理盐水为阴性对照。检测结果如表2所示：
表2实施例1制备而成的注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶的皮肤刺激测试结果
Figure BDA0003813247640000241
由表2测试结果可知，在本实验条件下试验组的被检品对豚鼠皮肤致敏率为0，按照Magnusson和Kligman分级标准为0级，表明被检材料不会引起致敏反应。
综上所述，本发明向透明质酸中引入不同分子量的聚乙二醇，通过控制聚乙二醇的分子量及其浓度提高单纯水凝胶的抗压缩性能和抗拉性能；再然后通过调节巯基化的透明质酸与酰胺化的聚谷氨酸的体积比，可进一步提高复合凝胶的力学性能。
除此之外，本发明制备的方法首先是通过席夫碱反应第一次交联，快速在原位形成水凝胶，再然后通过光照发生聚合反应进行二次交联，再次调控水凝胶的交联度，因此通过本发明制备的水凝胶可实现交联度分级可控。
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到各种等效的修改或替换，这些修改或替换都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以权利要求的保护范围为准。

Claims (10)

1.一种注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
在巯基化的透明质酸水溶液中加入分子量为200-1200的聚二乙醇混合配制成HA-PEG混合液；向HA-PEG混合液中加入酰胺化的聚谷氨酸水溶液混合均匀，然后置于含有光引发剂的缓冲液中进行一次交联；再用紫外光照射进行二次交联，洗涤后得到注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶；
所述巯基化的透明质酸水溶液的质量浓度为2％-20％；所述的HA-PEG混合液中，聚二乙醇的质量浓度为5％-40％；所述酰胺化的聚谷氨酸水溶液的质量浓度为2％-20％；所述HA-PEG混合液与酰胺化的聚谷氨酸水溶液的体积比(0.1-10)：1。
2.根据权利要求1所述的注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶的制备方法，其特征在于，所述的光引发剂选自2-羟基-4-(2-羟乙氧基)-2-甲基苯丙酮、六氯苯、氯菌酸酐、二苯甲酮、4-氯二苯甲酮中的至少一种。
3.根据权利要求2所述的注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶的制备方法，其特征在于，所述缓冲液的pH为7.0-7.8。
4.根据权利要求1所述的注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶的制备方法，其特征在于，所述的一次交联、二次交联的时间为1-10min。
5.根据权利要求1所述的注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶的制备方法，其特征在于，所述巯基化的透明质酸的制备方法如下：
往透明质酸溶液中加入含有二硫键化合物，搅拌均匀后加入交联剂进行交联，获得透明质酸凝胶；将透明质酸凝胶透析纯化后，冻干得到巯基化的透明质酸。
6.根据权利要求5所述的注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶的制备方法，其特征在于，所述透明质酸溶液的质量浓度为0.5-5％；所述含有二硫键化合物与透明质酸的质量比为(0.2-2)：1；所述交联剂与透明质酸的质量比为(0.3-3)：1。
7.根据权利要求6所述的注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶的制备方法，其特征在于，所述的含有二硫键化合物选自半胱胺盐酸盐、二硫代二酰胺、二硫代二丙酰胺、二硫代二丁酰胺、二硫代二乙酰肼、二硫代二丙酰肼、二硫代二丁酰肼中的至少一种；所述的交联剂选自聚乙二醇缩水甘油醚、1,4-丁二醇二缩水甘油醚、碳二亚胺盐酸盐、N-羟基琥珀酰亚胺、己二酸二酰肼中的至少一种。
8.根据权利要求1所述的注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶的制备方法，其特征在于，所述酰胺化的聚谷氨酸的制备方法如下：
往聚谷氨酸溶液或聚谷氨酸盐溶液中加入酪胺盐酸盐，混合均匀后加入交联剂进行交联，获得聚谷氨酸凝胶；将聚谷氨酸凝胶透析纯化后，冻干得到酰胺化的聚谷氨酸。
9.根据权利要求8所述的注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶的制备方法，其特征在于，所述聚谷氨酸溶液或聚谷氨酸盐溶液中，质量浓度为0.5-5％；所述聚谷氨酸溶液或聚谷氨酸盐溶液中，聚谷氨酸与酪胺盐酸盐的质量比为1：(0.5-5)，聚谷氨酸与交联剂的质量比为1：(0.5-5)。
10.根据权利要求9所述的注射用透明质酸-聚谷氨酸凝胶的制备方法，其特征在于，所述的聚谷氨酸盐选自聚谷氨酸钠、聚谷氨酸钾、聚谷氨酸镁、聚谷氨酸钙、聚谷氨酸锌中的至少一种；所述的交联剂选自聚乙二醇缩水甘油醚、1,4-丁二醇二缩水甘油醚、碳二亚胺盐酸盐、N-羟基琥珀酰亚胺、己二酸二酰肼中的至少一种。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116354710A (zh) * 2023-02-21 2023-06-30 郑州大学 一种聚-γ-谷氨酸凝胶浇注制备陶瓷的方法
CN116903884A (zh) * 2023-06-06 2023-10-20 山东丰金美业科技有限公司 一种透明质酸-聚谷氨酸水凝胶及其制备方法
CN117357700A (zh) * 2023-12-06 2024-01-09 上海威高医疗技术发展有限公司 一种透明质酸凝胶及其制备方法和应用

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116354710A (zh) * 2023-02-21 2023-06-30 郑州大学 一种聚-γ-谷氨酸凝胶浇注制备陶瓷的方法
CN116903884A (zh) * 2023-06-06 2023-10-20 山东丰金美业科技有限公司 一种透明质酸-聚谷氨酸水凝胶及其制备方法
CN117357700A (zh) * 2023-12-06 2024-01-09 上海威高医疗技术发展有限公司 一种透明质酸凝胶及其制备方法和应用
CN117357700B (zh) * 2023-12-06 2024-03-22 上海威高医疗技术发展有限公司 一种透明质酸凝胶及其制备方法和应用

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