CN107941955B - 一种同时快速检测椰岛鹿龟酒中9种功能活性成分的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种同时快速检测椰岛鹿龟酒中9种功能活性成分的方法，属于保健酒功能成分研究领域。包括采用液质联用法通过正离子扫描工作模式对椰岛鹿龟酒中的活性成分进行定性分析，然后采用外标法进行定量分析。该方法前处理步骤简单、精密度高，定量限低、稳定性好，能够快速测定椰岛鹿龟酒样品中薯蓣皂苷元、2,3,5,4'‑四羟基二苯乙烯葡萄糖苷、甜菜碱、藁本内酯、东莨菪内酯、白术内酯III、大黄素、大黄素甲醚和党参炔苷的含量，可用于椰岛鹿龟酒及相似配方的中药材混合提取液或配制酒中成分的同时快速测定。

Description

一种同时快速检测椰岛鹿龟酒中9种功能活性成分的方法

技术领域

本发明涉及保健酒功能成分研究领域，且特别涉及一种同时快速检测椰岛鹿龟酒中9种功能活性成分的方法。

背景技术

椰岛鹿龟酒源于古方龟鹿二仙胶和八珍汤的加减方，是宝贵的非物质文化遗产，它结合了二者的优点，并在此基础上进行了配方优化，经功能学动物试验证明具有抗疲劳和免疫调节的保健作用。鹿龟酒组方(动植物)药材多达十几种，具有120种以上的活性化合物，其中薯蓣皂苷元、2,3,5,4-四羟基二苯乙烯葡萄糖苷、甜菜碱、藁本内酯、东莨菪内酯、白术内酯III、大黄素、大黄素甲醚、党参炔苷具有重要的生理活性，共同组建了鹿龟酒强大的保健功能体系。

如薯蓣皂苷元具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化等多种显著的药理功能；2,3,5,4-四羟基二苯乙烯葡萄糖苷具有降血脂、抗衰老、抑制肿瘤等功能；甜菜碱具有抗脂肪肝、降压、抗肿瘤的功能；藁本内酯具有很强的解痉，平喘，镇静作用，能改善微循环，松弛平滑肌，抑菌，提高机体免疫调节功能；东莨菪内酯具有明显抗癌、抗氧化、抗炎等药理作用；白术内酯III具有抗炎、抗肿瘤及调节胃肠道功能和促进营养物质吸收的功能；大黄素具有抗肿瘤活性、抗菌、免疫抑制、解痉、止咳、降压、利尿等作用；大黄素甲醚对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、链球菌和痢疾杆菌等26种细菌均有抑制作用，对人体宫颈癌Hela细胞长生抑制作用较强、泻下等作用；党参炔苷具有保护胃黏膜的作用。

椰岛鹿龟酒中活性成分源于配方中多味中药材，据文献查阅中药标志性成分大多采用高效液相色谱法，且常用到二极管阵列检测器和蒸发光散射检测器，由于各成分的检测波长、极性的不同，通常需要分别建立独立的分离方法，往往耗时耗力。另一方面椰岛鹿龟酒营养价值一直以口碑宣传为主，未曾通过科学手段深入挖掘其功能活性成分。

因此需要建立一种快捷的，精密度高的可同时检测鹿龟酒中多种活性成分的分析方法，让椰岛鹿龟酒的营养价值得以完美诠释与表达。

发明内容

本发明的目的在于提供一种同时快速检测椰岛鹿龟酒中9种功能活性成分的方法，该方法前处理步骤简单、精密度高，定量限低、稳定性好，能够快速测定鹿龟酒样品中薯蓣皂苷元、2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯葡萄糖苷、甜菜碱、藁本内酯、东莨菪内酯、白术内酯III、大黄素、大黄素甲醚和党参炔苷，可用于椰岛鹿龟酒及相似配方的中药材混合提取液或配制酒中成分的同时快速测定。

本发明解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的：

本发明提出一种同时快速检测椰岛鹿龟酒中9种功能活性成分的方法，其包括以下步骤：

采用液质联用法通过正离子扫描工作模式对椰岛鹿龟酒中的活性成分进行定性分析，然后采用外标法对活性成分进行定量分析。

液质联用法中的色谱条件为：色谱柱为Procell 120Columns SB-AQ 2.7μm。

流动相包括流动相A和流动相B，其中，流动相A为甲酸水溶液与甲酸铵的混合溶液，流动相B为甲醇。

洗脱时间及洗脱时间内流动相B的体积含量如下：0-1min，0-2％；1-2min，2-40％；2-5min，40-70％；5-9min，70-95％；9-11.5min，95-95％；11.5-12min，95-2％。

液质联用法中的质谱条件为：电喷雾离子源工作模式为正离子扫描；雾化器压力为30-40psi；毛细管电压为3300-3700V；碰撞电压为0V。

优选地，雾化器的压力为35psi；毛细管电压为3500V。

本发明实施例的同时快速检测椰岛鹿龟酒中9种功能活性成分的方法的有益效果是：

1、采用正离子扫描工作模式测定甜菜碱、2,3,5,4-四羟基二苯乙烯葡萄糖苷、东莨菪内酯、党参炔苷、藁本内酯、白术内酯III、大黄素、大黄素甲醚和薯蓣皂苷元，该方法前处理简便、样品无损失、检测限低，并且回收率高、稳定性好；

2、测定的9种成分在线性范围内呈良好线性关系，其相关系数r²均大于0.997，最低定量限为0.05μg/L，加标回收率为86.92％-102.93％；

3、本发明实施例提供的检测方法设计合理，可同时定性、定量测定鹿龟酒中上述9种功能活性成分，为椰岛鹿龟酒的营养成分表达提供科学依据，可用于椰岛鹿龟酒及其他相似配方的中药材混合提取液或相似配方的配制酒中成分的测定。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。

图1至图9分别为本发明实施例1中甜菜碱、2,3,5,4-四羟基二苯乙烯葡萄糖苷、东莨菪内酯、党参炔苷、白术内酯III、藁本内酯、大黄素、大黄素甲醚和薯蓣皂苷元的标准曲线图；

图10为本发明实施例1中甜菜碱、2,3,5,4-四羟基二苯乙烯葡萄糖苷、东莨菪内酯、党参炔苷、白术内酯III、藁本内酯、大黄素、大黄素甲醚和薯蓣皂苷元9种成分标准样品的MRM模式下的总离子流色谱图；

图11至图19分别为本发明实施例1中甜菜碱、2,3,5,4-四羟基二苯乙烯葡萄糖苷、东莨菪内酯、党参炔苷、白术内酯III、藁本内酯、大黄素、大黄素甲醚和薯蓣皂苷元9种成分标准样品的MRM模式下的提取离子色谱图和MRM模式下的提取离子质谱图；

图20至图28分别为本发明实施例1中椰岛鹿龟酒中甜菜碱、2,3,5,4-四羟基二苯乙烯葡萄糖苷、东莨菪内酯、党参炔苷、白术内酯III、藁本内酯、大黄素、大黄素甲醚和薯蓣皂苷元9种成分的MRM模式下的提取离子色谱图。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

下面对本发明实施例的同时快速检测椰岛鹿龟酒中9种功能活性成分的方法进行具体说明。

本发明实施例所提供的椰岛鹿龟酒中9种功能活性成分的检测方法主要是通过液质联用方法通过正离子扫描工作模式对椰岛鹿龟酒中的活性成分进行定性分析，然后采用外标法对上述活性成分进行定量分析。

其中，液相色谱-质谱联用技术(LC-MS)以液相色谱作为分离系统，质谱为检测系统。样品在质谱部分和流动相分离，被离子化后，经质谱的质量分析器将离子碎片按质量数分开，经检测器得到MRM模式下的提取离子色谱图与质谱图。

本实施例通过采用液质联用方法，将色谱和质谱所具有的优势互补，将色谱对复杂样品具有高分离能力，与质谱具有高选择性、高灵敏度及能够提供相对分子质量与结构信息充分结合起来，从而实现对鹿龟酒中甜菜碱、2,3,5,4-四羟基二苯乙烯葡萄糖苷、东莨菪内酯、党参炔苷、藁本内酯、白术内酯III、大黄素、大黄素甲醚和薯蓣皂苷元9种活性成分进行有效的定性定量分析。

具体地，本发明实施例中液质联用法所采用的液质联用仪为Triple quad LC/MS(Agilent，美国)；工作站为MassHunter工作站(Agilent，美国)；数据库软件为PCDL个人数据库软件(Agilent，美国)。

色谱条件可如下所示：

色谱柱为Procell 120Columns SB-AQ 2.7μm(Agilent，美国)。

流动相包括流动相A和流动相B，其中，流动相A为甲酸水溶液与甲酸铵的混合溶液，流动相B为甲醇。值得说明的是，本发明实施例中选择甲酸水溶液与甲酸铵的混合溶液以及甲醇作为流动相是根据所需测定的9种活性成分的化学性质所特定选择的，以该两种物质作为流动相可使鹿龟酒中上述9种活性成分在以下洗脱条件下同时得以充分分离。

洗脱时间及洗脱时间内流动相B(甲醇)的体积含量如下：

洗脱时间(min)	流动相A(％)	流动相B(％)
			1	98	2
2	60	40
			5	30	70
9	5	95
			11.5	5	95
12	98	2

较佳地，检测过程中，流动相A和流动相B的流速相同，可均为0.3-0.5mL/min，优选为0.4mL/min。流动相A中甲酸铵的浓度可以为4-6mmoL/L，优选为5mmoL/L。甲酸水溶液中甲酸的体积浓度可以为0.05-0.15vt％，优选为0.1vt％。

较佳地，检测过程中，柱温可以为38-42℃，优选维持在40℃(恒温)，以使各活性成分在色谱图中的保留时间更加准确。此外，本发明实施例中椰岛鹿龟酒样品的进样量例如可以为1.5-2.5μL，优选为2μL。值得说明的是，根据椰岛鹿龟酒中以上9种成分的浓度大小，在实际检测中，可对待测样品稀释(如5-50倍)后再进样。

在上述色谱条件下，本发明实施例所涉及的鹿龟酒中9种活性成分分离结果较好，分离度高，无拖尾现象。

进一步地，质谱条件可如下所示：电喷雾离子源工作模式为正离子扫描；雾化器压力为30-40psi；毛细管电压为3300-3700V；碰撞电压为0V。优选地，雾化器压力为35psi；毛细管电压为3500V。

检测过程中，干燥气的温度例如可以为140-160℃，干燥气的流速为13-17L/min，优选地，干燥气的温度和流速分别为150℃和15L/min。鞘气的温度例如可以为330-370℃，鞘气的流速为10-12L/min，优选地，鞘气的温度和流速分别为350℃和11L/min。

因酒品中可能含有其它非纯液体物质或杂质，故在进样前，可对其进行过滤操作，一方面可避免上述非纯液体物质或杂质对色谱柱造成影响导致待测成分出峰不准，另一方面可较大程度延长色谱柱的使用期限。过滤可以将椰岛鹿龟酒样品过滤径为0.45μm的滤膜。

外标法测活性成分的含量主要是用待测成分对应的标准样品绘制工作曲线，即通过不同浓度下各标准样品(标准工作溶液)在色谱图中对应的峰高或峰面积绘制出标准曲线。然后再将相同条件下待测样品MRM模式下的提取离子色谱图中各成分所对应的峰高或峰面积代入标准曲线中，即可得到椰岛鹿龟酒中各待测组分的实际浓度。

因本发明实施例所测的椰岛鹿龟酒中的活性成分为甜菜碱、2,3,5,4-四羟基二苯乙烯葡萄糖苷、东莨菪内酯、党参炔苷、藁本内酯、白术内酯III、大黄素、大黄素甲醚和薯蓣皂苷元，故相应地，外标法中的标准工作溶液包括甜菜碱溶液、2,3,5,4-四羟基二苯乙烯葡萄糖苷、东莨菪内酯溶液、党参炔苷溶液、藁本内酯溶液、白术内酯III溶液、大黄素溶液、大黄素甲醚溶液和薯蓣皂苷元溶液。

可选地，上述标准工作溶液均由乙醇水溶液溶解，乙醇水溶液中乙醇的浓度为45-55vt％，优选为50vt％，此条件下上述9种标准样品在该溶剂中的溶解度均达到最佳。具体地，实际操作中可移取目标化合物的相应体积(mL)至10mL或25mL容量瓶中，经万分之一天平称重后，用50vt％乙醇和50vt％的水溶液定容至100mL，配制成母液，再逐步稀释，配制成不同浓度范围的工作液分析检测，建立标准工作曲线。

以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。

实施例1

取椰岛鹿龟酒过0.45μm的滤膜，然后采用以下液质联用方法进行检测，得到椰岛鹿龟酒的MRM模式下的提取离子色谱图。

色谱条件：色谱柱为Procell 120Columns SB-AQ 2.7μm；流动相A为浓度为甲酸水溶液与甲酸铵的混合溶液，混合溶液中甲酸铵的浓度为5mmoL/L且甲酸水溶液中甲酸的体积浓度为0.1vt％，流动相B为甲醇；洗脱时间及洗脱时间内甲醇的体积含量如下：0-1min，0-2％；1-2min，2-40％；2-5min，40-70％；5-9min，70-95％；9-11.5min，95-95％；11.5-12min，95-2％；进样量为2μL；流动相的流速为0.4mL/min；柱温为40℃。

质谱条件：电喷雾离子源工作模式为正离子扫描；雾化器压力为35psi；毛细管电压为3500V；碰撞电压为0V；干燥气的温度和流速分别为150℃和15L/min；鞘气的温度和流速分别为350℃和11L/min。

取甜菜碱标准品、2,3,5,4-四羟基二苯乙烯葡萄糖苷标准品、东莨菪内酯标准品、党参炔苷标准品、藁本内酯标准品、白术内酯III标准品、大黄素标准品、大黄素甲醚标准品和薯蓣皂苷元标准品分别溶于50vt％的乙醇水溶液中，并分别将上述9种标准品分别配置成多个梯度浓度的标准溶液。采用液质联用方法进行检测，得到不同浓度的标准工作溶液的MRM模式下的提取离子色谱图，分别绘制上述9种标准品的标准曲线。

根据所得的椰岛鹿龟酒的MRM模式下的提取离子色谱图以及上述9种标准品的标准曲线，采用外标法计算出椰岛鹿龟酒中甜菜碱、2,3,5,4-四羟基二苯乙烯葡萄糖苷、东莨菪内酯、党参炔苷、藁本内酯、白术内酯III、大黄素、大黄素甲醚和薯蓣皂苷元的实际含量。

实施例2

取椰岛鹿龟酒过0.45μm的滤膜，然后采用以下液质联用方法进行检测，得到椰岛鹿龟酒的MRM模式下的提取离子色谱图。

色谱条件：色谱柱为Procell 120Columns SB-AQ 2.7μm；流动相A为浓度为甲酸水溶液与甲酸铵的混合溶液，混合溶液中甲酸铵的浓度为4mmoL/L且甲酸水溶液中甲酸的体积浓度为0.05vt％，流动相B为甲醇；洗脱时间及洗脱时间内甲醇的体积含量如下：0-1min，0-2％；1-2min，2-40％；2-5min，40-70％；5-9min，70-95％；9-11.5min，95-95％；11.5-12min，95-2％；进样量为1.5μL；流动相的流速为0.3mL/min；柱温为38℃。

质谱条件：电喷雾离子源工作模式为正离子扫描；雾化器压力为30psi；毛细管电压为3300V；碰撞电压为0V；干燥气的温度和流速分别为140℃和13L/min；鞘气的温度和流速分别为330℃和10L/min。

取甜菜碱标准品、2,3,5,4-四羟基二苯乙烯葡萄糖苷标准品、东莨菪内酯标准品、党参炔苷标准品、藁本内酯标准品、白术内酯III标准品、大黄素标准品、大黄素甲醚标准品和薯蓣皂苷元标准品分别溶于45vt％的乙醇水溶液中，并分别将上述9种标准品分别配制成多个梯度浓度的标准溶液。采用液质联用方法进行检测，得到不同浓度的标准工作溶液的MRM模式下的提取离子色谱图，分别绘制上述9种标准品的标准曲线。

根据所得的椰岛鹿龟酒的MRM模式下的提取离子色谱图以及上述9种标准品的标准曲线，采用外标法计算出椰岛鹿龟酒中甜菜碱、2,3,5,4-四羟基二苯乙烯葡萄糖苷、东莨菪内酯、党参炔苷、藁本内酯、白术内酯III、大黄素、大黄素甲醚和薯蓣皂苷元的实际含量。

实施例3

取椰岛鹿龟酒过0.45μm的滤膜，然后采用以下液质联用方法进行检测，得到椰岛鹿龟酒的MRM模式下的提取离子色谱图。

色谱条件：色谱柱为Procell 120Columns SB-AQ 2.7μm；流动相A为浓度为甲酸水溶液与甲酸铵的混合溶液，混合溶液中甲酸铵的浓度为6mmoL/L且甲酸水溶液中甲酸的体积浓度为0.15vt％，流动相B为甲醇；洗脱时间及洗脱时间内甲醇的体积含量如下：0-1min，0-2％；1-2min，2-40％；2-5min，40-70％；5-9min，70-95％；9-11.5min，95-95％；11.5-12min，95-2％；进样量为2.5μL；流动相的流速为0.5mL/min；柱温为42℃。

质谱条件：电喷雾离子源工作模式为正离子扫描；雾化器压力为40psi；毛细管电压为3700V；碰撞电压为0V；干燥气的温度和流速分别为160℃和17L/min；鞘气的温度和流速分别为370℃和12L/min。

取甜菜碱标准品、2,3,5,4-四羟基二苯乙烯葡萄糖苷标准品、东莨菪内酯标准品、党参炔苷标准品、藁本内酯标准品、白术内酯III标准品、大黄素标准品、大黄素甲醚标准品和薯蓣皂苷元标准品分别溶于55vt％的乙醇水溶液中，并分别将上述9种标准品分别配制成多个梯度浓度的标准溶液。采用液质联用方法进行检测，得到不同浓度的标准工作溶液的MRM模式下的提取离子色谱图，分别绘制上述9种标准品的标准曲线。

根据所得的椰岛鹿龟酒的MRM模式下的提取离子色谱图以及上述9种标准品的标准曲线，采用外标法计算出椰岛鹿龟酒中甜菜碱、2,3,5,4-四羟基二苯乙烯葡萄糖苷、东莨菪内酯、党参炔苷、藁本内酯、白术内酯III、大黄素、大黄素甲醚和薯蓣皂苷元的实际含量。

以实施例1为例，9种活性成分的部分定性定量参数如表1所示。液质联用检测结果如表2-4和图1-28所示。

表1定性定量参数

表2 9种活性成分的化学名称及结构信息

表3标准工作溶液系列浓度

表4甜菜碱、2,3,5,4-四羟基二苯乙烯葡萄糖苷、东莨菪内酯、党参炔苷、藁本内酯、白术内酯III、大黄素、大黄素甲醚和薯蓣皂苷元的回归方程、精密度、回收率及定量限

由表4可以看出，本发明实施例提供的测定方法的9种成分在线性范围内呈良好线性关系，其相关系数r²均大于0.997，最低定量限为0.05μg/L，加标回收率为86.92％-102.93％，说明本发明实施例提供的检测方法准确率较高。

取5个不同批次的椰岛鹿龟酒，按照实施例1的检测方法进行重复试验，每个批次的椰岛鹿龟酒测定3次，结果见表5(表5中的值为3次测定的平均值)。

表5椰岛鹿龟酒中甜菜碱、2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯葡萄糖苷、东莨菪内酯、党参炔苷、藁本内酯、白术内酯III、大黄素、大黄素甲醚和薯蓣皂苷元的含量(n＝3，单位为mg/L)

由表5可以看出，椰岛鹿龟酒中甜菜碱、2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯葡萄糖苷、东莨菪内酯、党参炔苷、藁本内酯、白术内酯III、大黄素、大黄素甲醚和薯蓣皂苷元9种活性成分中白术内酯含量最高，随后依次是大黄素、党参炔苷、大黄素甲醚、2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯葡萄糖苷、藁本内酯、甜菜碱、薯蓣皂苷元和东莨菪内酯。

综上所述，本发明实施例的检测方法前处理步骤简单、精密度高，定量限低、稳定性好，能够快速测定椰岛鹿龟酒样品中甜菜碱、2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯葡萄糖苷、东莨菪内酯、党参炔苷、藁本内酯、白术内酯III、大黄素、大黄素甲醚和薯蓣皂苷元的含量，可用于椰岛鹿龟酒及相似配方的中药材混合提取液或配制酒中成分的同时快速测定。

以上所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

Claims (17)

1.一种同时快速检测椰岛鹿龟酒中9种功能活性成分的方法，其特征在于，包括以下步骤：首先采用液质联用法通过正离子扫描工作模式对椰岛鹿龟酒中的活性成分进行定性分析，然后采用外标法对所述活性成分进行定量分析；

所述液质联用法中的色谱条件为：色谱柱为Procell 120Columns SB-AQ 2.7μm；流动相包括流动相A和流动相B，其中，所述流动相A为甲酸水溶液与甲酸铵的混合溶液，所述流动相B为甲醇；洗脱时间及所述洗脱时间内所述流动相B的体积含量如下：0-1min，0-2％；1-2min，2-40％；2-5min，40-70％；5-9min，70-95％；9-11.5min，95％；11.5-12min，95-2％；

所述液质联用法中的质谱条件为：电喷雾离子源工作模式为正离子扫描；雾化器压力为30-40psi；毛细管电压为3300-3700V；碰撞电压为0V；

所述外标法中的标准工作溶液包括甜菜碱溶液、2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯葡萄糖苷、东莨菪内酯溶液、党参炔苷溶液、藁本内酯溶液、白术内酯III溶液、大黄素溶液、大黄素甲醚溶液和薯蓣皂苷元溶液。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述雾化器的压力为35psi；所述毛细管电压为3500V。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述混合溶液中甲酸铵的浓度为4-6mmoL/L且所述甲酸水溶液中甲酸的体积浓度为0.05-0.15vt％。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述混合溶液中甲酸铵的浓度为5mmoL/L且所述甲酸水溶液中甲酸的体积浓度为0.1vt％。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，检测过程中所述流动相的流速为0.3-0.5mL/min。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述流动相的流速为0.4mL/min。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，检测过程中的柱温为38-42℃。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述柱温为40℃。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，检测过程中所述椰岛鹿龟酒的进样量为1.5-2.5μL。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述进样量为2μL。

11.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，检测过程中干燥气的温度为140-160℃，干燥气的流速为13-17L/min。

12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，所述干燥气的温度为150℃，所述干燥气的流速为15L/min。

13.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，检测过程中鞘气的温度为330-370℃，鞘气的流速为10-12L/min。

14.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，所述鞘气的温度为350℃，所述鞘气的流速为11L/min。

15.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述椰岛鹿龟酒在进样前，经滤膜过滤。

16.根据权利要求15所述的方法，其特征在于，所述滤膜的滤径为0.45μm。

17.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述标准工作溶液均由乙醇水溶液溶解，所述乙醇水溶液中乙醇的浓度为45-55vt％。