CN105067747B

CN105067747B - 一种麝香保心丸中苏合香药味成分指纹图谱的检测方法及其应用

Info

Publication number: CN105067747B
Application number: CN201510477173.7A
Authority: CN
Inventors: 王玲; 李淞明; 詹常森; 陈忠樑; 朱诗竟
Original assignee: HEHUANG PHARMACEUTICAL CO Ltd SHANGHAI
Current assignee: HEHUANG PHARMACEUTICAL CO Ltd SHANGHAI
Priority date: 2015-08-06
Filing date: 2015-08-06
Publication date: 2017-03-01
Anticipated expiration: 2035-08-06
Also published as: CN105067747A

Abstract

本发明提供一种麝香保心丸中苏合香药味成分指纹图谱的检测方法，通过对供试品溶液及对照品溶液的制备、测定并获得供试品溶液和对照品溶液的液相色谱图，经与对照品溶液的液相色谱图比较后，得到供试品溶液中5种苏合香药味成分的指纹图谱。本发明还进一步提供了上述指纹图谱检测方法在麝香保心丸的苏合香药味成分中5种指标成分含量测定中的应用。本发明通过对苏合香药味成分中5种指标成分的指纹图谱和含量分析，能够实现多成分定量控制苏合香质量，提高麝香保心丸中苏合香质控水平，也为其他复方制剂中苏合香质量控制提供一定的参考。

Description

一种麝香保心丸中苏合香药味成分指纹图谱的检测方法及其应用

技术领域

本发明属于中药成分分析检测技术领域，涉及一种麝香保心丸中苏合香药味成分指纹图谱的检测方法及其应用，具体涉及一种麝香保心丸的苏合香中苯甲酸、肉桂酸、苯甲酸苄酯、肉桂酸苄酯和桂酸苯乙酯5种药味成分指纹图谱的检测方法及其在含量测定中应用。

背景技术

麝香保心丸是70年代从宋代的苏合香丸的基础上改良而成，以其疗效肯定、安全经济而成为目前冠心病最常用的治疗药物之一，它缓解症状起效迅速，没有硝酸酯类的禁忌症及耐药性，长期服用可以保护血管，阻止动脉粥样硬化，减少心绞痛发作次数，减少严重心血管事件的发生，其芳香温通，益气强心，临床上用于气滞血瘀所致的胸痹，症见心前区疼痛、固定不移；心肌缺血所致的心绞痛、心肌梗死见上述症候者。因为疗效卓越、安全性高被列为国家中药保密品种，受国家秘密技术保护，且被列名国家基本药物目录，荣获中国中西医结合学会科学技术奖，入选国家十一五科技支撑重点项目等众多荣誉。

麝香保心丸呈黑褐色有光泽的微丸，破碎后断面为棕黄色，味苦、辛凉，有麻舌感。麝香保心丸由人工麝香、人参提取物、苏合香、人工牛黄、肉桂、蟾酥、冰片等7味中药组成。其中，苏合香来源于金缕梅科植物苏合香树Liquidambar orientalis Mill的树干渗出的香树脂，为处方中臣药，目前，在10版《中国药典》一部麝香保心丸项下采用肉桂酸薄层鉴别的方法控制质量，而且苏合香项下仅以肉桂酸为含测指标。虽然有一些文献中针对苏合香以肉桂酸、苯甲酸和苯甲酸苄酯为指标进行含量测定，但是苏合香中成分复杂，还含有一些其它必要成分。因此，有必要建立苏合香中指标成分的指纹图谱，同时建立了基于指纹图谱的指标成分含量测定方法，以一次样品制备、一次进样分析，同时完成定性和定量分析，用于对成方制剂中苏合香进行有效的质量控制。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种麝香保心丸中苏合香药味成分指纹图谱的检测方法及其应用，采用优化条件的高效液相色谱方法首次建立了麝香保心丸中苏合香中5种指标药味成分(苯甲酸、肉桂酸、苯甲酸苄酯、肉桂酸苄酯和桂酸苯乙酯)的指纹图谱，并且同时一次对这5种主要成分进行定量分析。本发明中方法通过指纹图谱和多成分含量测定可以比较全面的反映麝香保心丸中苏合香的主要指标成分，实现多成分定量控制苏合香质量，提高麝香保心丸中苏合香质控水平。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明第一方面提供一种麝香保心丸中苏合香药味成分指纹图谱的检测方法，包括以下步骤：

优选地，所述苏合香药味成分为苯甲酸、肉桂酸、苯甲酸苄酯、肉桂酸苄酯和桂酸苯乙酯。

1)供试品溶液的制备：称取麝香保心丸粉末，加入无水乙醇，密闭后超声提取，取上清液，过滤，即得供试品溶液；

优选地，所述麝香保心丸粉末加入的重量与所述无水乙醇加入的体积之比为0.2-1：20-100(g/ml)。

更优选地，所述麝香保心丸粉末加入的重量与所述无水乙醇加入的体积之比为0.5：20(g/ml)。

所述麝香保心丸粉末和无水乙醇称取时，应当精密称取。

优选地，所述超声提取时间为20-40min。更优选的，所述超声提取时间为30min。

所述供试品溶液在密闭容器中进行，所述密闭容器为密塞的三角瓶。

优选地，所述过滤的方式为滤膜过滤方式。更优选地，所述滤膜的孔径为0.22μm。

2)对照品溶液的制备：分别称取苯甲酸、肉桂酸、苯甲酸苄酯、肉桂酸苄酯和桂酸苯乙酯对照品，加甲醇溶解并定容，摇匀，得到混合对照品溶液；

优选地，所述对照品溶液中苯甲酸的CAS号为65-85-0；肉桂酸的CAS号为140-10-3；苯甲酸苄酯的CAS号为120-51-4；肉桂酸苄酯的CAS号为103-41-3；桂酸苯乙酯的CAS号为103-53-7。

优选地，所述对照品溶液中各成分的含量范围为：苯甲酸0.01833-1.833mg/mL、肉桂酸0.002038-0.2038mg/mL、苯甲酸苄酯0.05008-5.008mg/mL、肉桂酸苄酯0.01817-1.817mg/mL、桂酸苯乙酯0.001148-0.1148mg/mL。

更优选地，所述对照品溶液中各成分的含量范围为：苯甲酸1.833mg/mL、肉桂酸0.2038mg/mL、苯甲酸苄酯5.008mg/mL、肉桂酸苄酯1.817mg/mL、桂酸苯乙酯0.1148mg/mL。

3)测定：采用相同色谱条件的高效液相色谱法分别测定供试品溶液和对照品溶液，将获得的供试品溶液的液相色谱图，与对照品溶液的液相色谱图进行比较，根据相对保留时间，指认出5个共有特征峰，确认供试品溶液中5种苏合香药味成分的特征峰，从而获得供试品溶液中5种苏合香药味成分的指纹图谱。

优选地，所述高效液相色谱法的色谱条件为：色谱柱：waters C18柱；柱温：20-30℃；检测波长：230-280nm；流速：0.1-1.0ml/min；进样量：2-10μl；流动相：0.01-0.5v/v％磷酸水溶液-乙腈，其中，A相为0.01-0.5v/v％磷酸水溶液，B相为乙腈；分析时间：45min；梯度洗脱。

更优选地，所述高效液相色谱法的色谱条件为：色谱柱：waters XBridge BEH C18柱(2.1×100mm，2.5μm)；柱温：25℃；检测波长：254nm；流速：0.2ml/min；进样量：4μl；流动相：0.03v/v％磷酸水溶液-乙腈，其中，A相为0.03v/v％磷酸水溶液，B相为乙腈；分析时间：45min；梯度洗脱。

最优选地，所述梯度洗脱的具体程序为：

0-9min，A相：B相体积比为95：5-75：25；

9-14min，A相：B相体积比为75：25-42：58；

14-40min，A相：B相体积比为42：58-0：100；

40-45min，A相：B相体积比为0：100-0：100。

本发明第二方面提供一种麝香保心丸中苏合香药味成分指纹图谱的检测方法在麝香保心丸的苏合香中5种指标药味成分含量测定中的应用。

本发明第三方面提供一种麝香保心丸的苏合香中5种指标药味成分含量的测定方法，包括以下步骤：

A)供试品溶液的制备：与麝香保心丸中苏合香药味成分指纹图谱的检测方法的步骤1)相同；

B)对照品溶液的制备：与麝香保心丸中苏合香药味成分指纹图谱的检测方法的步骤2)相同；

C)测定：采用高效液相色谱法在相同色谱条件下分别测定供试品溶液和对照品溶液，并采用外标法计算供试品溶液中苏合香中5种指标药味成分的含量。

最优选地，所述梯度洗脱的具体程序为：

0-9min，A相：B相体积比为95：5-75：25；

9-14min，A相：B相体积比为75：25-42：58；

14-40min，A相：B相体积比为42：58-0：100；

40-45min，A相：B相体积比为0：100-0：100。

所述外标法是指：分别移取一系列不同体积的步骤B)所述混合对照品溶液，配成一系列不同浓度的混合对照品标准溶液，采用高效液相色谱仪进样分析，获得混合对照品标准溶液中麝香保心丸的苏合香中5种指标药味成分含量与峰面积的线性关系，以每一种指标药味成分色谱峰面积对应其相应的含量，绘制相应的标准工作曲线，计算得到各标准工作曲线的回归方程。再将供试品溶液采用高效液相色谱仪检测，将获得的供试品溶液中苏合香中5种指标药味成分的色谱峰面积，分别代入所述各标准工作曲线的回归方程中，可得到相应苏合香中5种指标药味成分的含量。

如上所述，本发明的一种麝香保心丸中苏合香药味成分指纹图谱的检测方法及其应用，采用优化反应条件的高效液相方法建立了麝香保心丸中苏合香药味成分的指纹图谱，同时此方法又可以对苏合香中5种指标药味成分进行定量分析，实现一次样品分析，同时完成定性和定量分析。其中，本发明采用流动相：0.01-0.5v/v％磷酸水溶液-乙腈系统，这种流动相系统在梯度洗脱条件下能使被分离化合物保持较好的分离度和峰形。同时，本发明通过对苏合香中5种指标药味成分的定量分析，定量分析结果中5种指标药味成分的回归方程的相关系数r均大于0.99980，线性关系良好。能保持供试品溶液在24h内稳定，稳定性和重复性试验的峰面积和保留时间RSD值均小于3％，稳定性、重复性良好。并且，高、中、低三个浓度加样回收率均在95～105％之间，RSD值在3.89％以内。因此，本发明中方法测定苏合香中各指标药味成分结果可靠，样品测定方法简便易行，可作为麝香保心丸中苏合香药味的质控方法，实现多成分定量控制苏合香质量，提高麝香保心丸中苏合香质控水平，也为其他复方制剂中苏合香质量控制提供一定的参考。

附图说明

图1显示为本发明的麝香保心丸中苏合香的5种药味成分的混合样品液相色谱图，其中，1：苯甲酸、2：肉桂酸、3：苯甲酸苄酯、4：肉桂酸苄酯、5：桂酸苯乙酯。

图2显示为本发明的麝香保心丸中苏合香的5种药味成分的对照品液相色谱图，其中，1：苯甲酸、2：肉桂酸、3：苯甲酸苄酯、4：肉桂酸苄酯、5：桂酸苯乙酯。

具体实施方式

下面结合具体实施例进一步阐述本发明，应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的保护范围。

以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。

以下实施例使用的试剂和仪器如下：

1、试剂

麝香保心丸(市售，批号：140214，上海和黄药业有限公司)；苯甲酸(100419-201302，纯度100％，中国药品生物制品检定所)；肉桂酸(110786-200503，纯度100％，中国药品生物制品检定所)；苯甲酸苄酯(MKBL3192V，纯度99％，SIGMA-ALDRTCH公司)；肉桂酸苄酯(BJ140122，纯度98％，安耐倍化学公司)；桂酸苯乙酯(A1329037，纯度96％，阿拉丁)；乙腈(色谱纯，美国Fisher公司)；乙醇、甲醇(分析纯，美国Fisher公司)；磷酸(分析纯，美国Fisher公司)；超纯水(Millipore超纯水仪自制)。

2、仪器

Agilent1260高效液相色谱仪(美国Agilent公司)；十万分之一电子天平(Sartorius公司)；TP-300超声波仪(宁波新芝生物有限公司)；Waters XBridge BEH C18柱(美国Waters公司)

实施例1

1、实验部分

1.1样品前处理

供试品溶液的制备：精密称取麝香保心丸粉末0.5g，置于具塞三角瓶中，精密加入无水乙醇20ml，密塞封闭后超声提取30min，取上清液，用孔径为0.22μm的滤膜过滤，即得供试品溶液。

对照品溶液的制备：分别精密称取对照品苯甲酸、肉桂酸、苯甲酸苄酯、肉桂酸苄酯和桂酸苯乙酯适量，加甲醇溶解并定容，摇匀，得到混合对照品溶液。具体来说，将精密称取的苯甲酸、肉桂酸、苯甲酸苄酯、肉桂酸苄酯和桂酸苯乙酯置于5mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。再精密量取上述容量瓶中的溶液1mL，置于10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配成混合对照品溶液。对照品溶液中各成分的含量范围为：苯甲酸1.833mg/mL、肉桂酸0.2038mg/mL、苯甲酸苄酯5.008mg/mL、肉桂酸苄酯1.817mg/mL、桂酸苯乙酯0.1148mg/mL。

1.2色谱条件

高效液相色谱法的色谱条件为：色谱柱：waters XBridge BEH C18柱(2.1×100mm，2.5μm)；柱温：25℃；检测波长：254nm；流速：0.2ml/min；进样量：4μl；流动相：0.03v/v％磷酸水溶液-乙腈，其中，A相为0.03v/v％磷酸水溶液，B相为乙腈；分析时间：45min；梯度洗脱。

梯度洗脱的具体程序为：

0-9min，A相：B相体积比为95：5-75：25；

9-14min，A相：B相体积比为75：25-42：58；

14-40min，A相：B相体积比为42：58-0：100；

40-45min，A相：B相体积比为0：100-0：100。

1.3测定

采用外标法，将制备的混合对照品溶液和供试品溶液，采用高效液相色谱仪进样分析，将获得的供试品溶液的液相色谱图，与对照品溶液的液相色谱图进行比较，指认共有特征峰，从而获得供试品溶液中5种苏合香药味成分的指纹图谱。

2、指纹图谱

2.1精密度试验

精密吸取上述1.1中制备的同一供试品溶液，在上述1.2确认的HPLC优化条件下连续进样分析6次，测定并计算苯甲酸、肉桂酸、苯甲酸苄酯、肉桂酸苄酯和桂酸苯乙酯的保留时间及峰面积，精密度具体结果见表1、2。结果表明，5个共有峰面积的相对保留时间RSD小于0.40％，相对峰面积RSD小于2.61％，说明该方法的精密度良好。

表1苏合香药味成分指纹图谱精密度考察结果(相对保留时间)

表2苏合香药味成分指纹图谱精密度考察结果(相对峰面积)

2.2重复性试验

取同一批麝香保心丸粉末6份，按上述1.1进行供试品溶液前处理，并在上述1.2的色谱条件下连续进样分析6次，测定并计算苯甲酸、肉桂酸、苯甲酸苄酯、肉桂酸苄酯和桂酸苯乙酯的保留时间及峰面积，重复性具体结果见表3、4。结果表明，5个共有峰面积的相对保留时间RSD小于0.50％，相对峰面积RSD小于2.77％，说明该方法重复性良好。

表3苏合香药味成分指纹图谱重复性考察结果(相对保留时间)

表4苏合香药味成分指纹图谱重复性考察结果(相对峰面积)

2.3稳定性试验

精密吸取上述1.1中制备的同一供试品溶液，按上述1.2的色谱条件，分别于0h、6h、12h、18h、24h进样测定，测定并计算苯甲酸、肉桂酸、苯甲酸苄酯、肉桂酸苄酯和桂酸苯乙酯的保留时间及峰面积，具体结果见表5、6。稳定性考察结果表明，5个共有峰面积的相对保留时间RSD小于1.63％，相对峰面积RSD小于1.45％，说明该方法在24h内稳定性良好。

表5苏合香药味成分指纹图谱稳定性考察结果(相对保留时间)

表6苏合香药味成分指纹图谱稳定性考察结果(相对峰面积)

2.4苏合香中5种指标药味成分的指纹图谱

采用上述1.1的前处理方法和上述1.2的HPLC检测条件，我们建立了麝香保心丸的苏合香中5种指标药味成分的指纹图谱，麝香保心丸的苏合香中5种指标药味成分及5个混合对照品成分的色谱图见图1、2，各成分的保留时间和峰面积见表7。

表7苏合香中5种指标药味成分的指纹图谱

色谱峰编号	保留时间(min)	峰面积
			1号峰	6.003-8.003	56-1148
2号峰	15.982-16.982	170-3109
			3号峰	22.841-24.841	229-3610
4号峰	24.003-26.003	498-8732
			5号峰	26.210-28.210	56-1538

由表7、图1-2可知，获得的供试品溶液的液相色谱图，与对照品溶液的液相色谱图根据保留时间和峰面积进行比较后，指认了5个主要共有峰，其中，1号峰为苯甲酸，2号峰为肉桂酸，3号峰为苯甲酸苄酯，4号峰为肉桂酸苄酯，5号峰为桂酸苯乙酯。

实施例2

1、实验部分

1.1样品前处理

供试品溶液的制备：精密称取麝香保心丸粉末0.2-1g，置于具塞三角瓶中，精密加入无水乙醇20-100ml，密塞封闭后超声提取20-40min，取上清液，用孔径为0.22μm的滤膜过滤，即得供试品溶液。

对照品溶液的制备：分别精密称取对照品苯甲酸、肉桂酸、苯甲酸苄酯、肉桂酸苄酯和桂酸苯乙酯适量，加甲醇溶解并定容，摇匀，得到混合对照品溶液。具体来说，将精密称取的苯甲酸、肉桂酸、苯甲酸苄酯、肉桂酸苄酯和桂酸苯乙酯置于5mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。再精密量取上述容量瓶中的溶液1mL，置于10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配成混合对照品溶液。对照品溶液中各成分的含量范围为：苯甲酸0.01833-1.833mg/mL、肉桂酸0.002038-0.2038mg/mL、苯甲酸苄酯0.05008-5.008mg/mL、肉桂酸苄酯0.01817-1.817mg/mL、桂酸苯乙酯0.001148-0.1148mg/mL。

1.2色谱条件

高效液相色谱法的色谱条件为：色谱柱：waters C18柱；柱温：20-30℃；检测波长：230-280nm；流速：0.1-1.0ml/min；进样量：2-10μl；流动相：0.01-0.5v/v％磷酸水溶液-乙腈，其中，A相为0.01-0.5v/v％磷酸水溶液，B相为乙腈；分析时间：45min；梯度洗脱。

梯度洗脱的具体程序为：

0-9min，A相：B相体积比为95：5-75：25；

9-14min，A相：B相体积比为75：25-42：58；

14-40min，A相：B相体积比为42：58-0：100；

40-45min，A相：B相体积比为0：100-0：100。

1.3测定

2、指纹图谱

采用上述1.1的前处理方法和上述1.2的HPLC检测条件，我们建立了麝香保心丸的苏合香中5种指标药味成分的指纹图谱，麝香保心丸的苏合香中5种指标药味成分及5个混合对照品成分的色谱图见图1、2，各成分的保留时间和峰面积见表8。由表8、图1-2可知，获得的供试品溶液的液相色谱图，与对照品溶液的液相色谱图根据相对保留时间进行比较后，指认了5个主要共有峰，其中，1号峰为苯甲酸，2号峰为肉桂酸，3号峰为苯甲酸苄酯，4号峰为肉桂酸苄酯，5号峰为桂酸苯乙酯。该指纹图谱的精密度、重复性、稳定性良好。

表8苏合香中5种指标药味成分的指纹图谱

实施例3

1、实验部分

1.1样品前处理

1.2色谱条件

梯度洗脱的具体程序为：

0-9min，A相：B相体积比为95：5-75：25；

9-14min，A相：B相体积比为75：25-42：58；

14-40min，A相：B相体积比为42：58-0：100；

40-45min，A相：B相体积比为0：100-0：100。

1.3测定

采用外标法，将制备的混合对照品溶液配成一系列不同浓度的混合对照品标准溶液，采用高效液相色谱仪进样分析，绘制标准工作曲线。再将获得的供试品溶液，采用高效液相色谱仪进样分析，并将分析结果代入标准工作曲线，即得供试品溶液中的苏合香中5种指标药味成分的含量。

2、结果与讨论

2.1苏合香中5种指标药味成分含量测定方法的线性关系

精密称取上述1.1的混合对照品溶液适量，分别用甲醇稀释1倍、5倍、10倍、25倍、50倍、100倍，制成一系列浓度的混合标准品溶液，采用1.2的HPLC检测条件，进行高效液相色谱仪分析，测定并计算获得苏合香中5种指标药味成分的标准回归方程、相关系数和线性范围。具体结果见表9。

表9线性回归方程

	回归方程	r	浓度范围/(mg·mL^-1)
				苯甲酸	A＝6932.93670X+45.46968	0.99995	0.01833～1.833
肉桂酸	A＝73945.16642X+38.81050	0.99998	0.002038～0.2038
				苯甲酸苄酯	A＝5322.14333X+161.31362	0.99989	0.05008～5.008
肉桂酸苄酯	A＝42684.46715X+489.39497	0.99980	0.01817～1.817
				桂酸苯乙酯	A＝44298.29799X-6.43950	0.99998	0.001148～0.1148

注：A为峰面积，X为浓度

根据表9可知，标准回归方程以色谱峰面积为纵坐标(A)，成分浓度为横坐标(X)，同时，5种成分在一定浓度的线性范围内均呈良好的线性关系，其标准回归方程的相关系数均大于0.9998。

2.2回收率

精密称取上述1.1的混合对照品溶液适量，分别准确加入一定含量的5种对照品溶液，具体按照样品含量的0.8、1、1.2倍加入，每个浓度3份。并按1.1进行前处理，依1.2的色谱条件进样测定，结果见表10。由表10可知，高、中、低三个浓度加样平均回收率在98-101％之间，RSD值在3.89％以内，符合要求，其测定结果的回收率良好。

表10加样回收率结果

2.3精密度

精密吸取上述1.1中制备的同一供试品溶液，在上述1.2确认的HPLC条件下连续进样分析6次，测定并计算苯甲酸、肉桂酸、苯甲酸苄酯、肉桂酸苄酯和桂酸苯乙酯的保留时间及峰面积，精密度具体结果见表11、12。

结果表明，5个共有峰面积的相对保留时间RSD小于0.40％，相对峰面积RSD小于2.61％，说明该方法的精密度良好。

表11苏合香中5种指标药味成分含量测定的精密度考察结果(相对保留时间)

表12苏合香中5种指标药味成分含量测定的精密度考察结果(相对峰面积)

2.4重复性

取同一批麝香保心丸粉末6份，按上述1.1进行供试品溶液前处理，并在上述1.2的色谱条件下连续进样分析6次，测定并计算苯甲酸、肉桂酸、苯甲酸苄酯、肉桂酸苄酯和桂酸苯乙酯的保留时间及峰面积，重复性具体结果见表13、14。结果表明，5个共有峰面积的相对保留时间RSD小于0.50％，相对峰面积RSD小于2.77％，说明该方法重复性良好。

表13苏合香中5种指标药味成分含量测定的重复性考察结果(相对保留时间)

表14苏合香中5种指标药味成分含量测定的重复性考察结果(相对峰面积)

2.5稳定性

精密吸取上述1.1中制备的同一供试品溶液，按上述1.2的色谱条件，分别于0h、6h、12h、18h、24h进样测定，测定并计算苯甲酸、肉桂酸、苯甲酸苄酯、肉桂酸苄酯和桂酸苯乙酯的保留时间及峰面积，具体结果见表15、16。如表15、16可知，5个共有峰面积的相对保留时间RSD小于1.63％，相对峰面积RSD小于1.45％，说明该方法在24h内稳定性良好。

表15苏合香中5种指标药味成分含量测定的稳定性考察结果(相对保留时间)

表16苏合香中5种指标药味成分含量测定的稳定性考察结果(相对峰面积)

2.6实际样品中苏合香的5种指标药味成分含量的测定

取麝香保心丸样品按上述1.1和1.2的条件处理并测定，具体结果见表17。

表17麝香保心丸样品中苏合香的5种指标药味成分含量

实施例4

1、实验部分

1.1样品前处理

1.2色谱条件

梯度洗脱的具体程序为：

0-9min，A相：B相体积比为95：5-75：25；

9-14min，A相：B相体积比为75：25-42：58；

14-40min，A相：B相体积比为42：58-0：100；

40-45min，A相：B相体积比为0：100-0：100。

1.3测定

2、结果与讨论

按上述1.1制备的混合对照品溶液，配成一系列不同浓度的混合对照品标准溶液，根据1.2的高效液相色谱条件进行测定，采用高效液相色谱仪进样分析，绘制标准工作曲线，该标准工作曲线的线性良好。同时，进行混合对照品溶液的加样回收率试验，其测定结果的回收率良好，符合要求。

按上述1.1制备的供试品溶液，在上述1.2确认的HPLC条件进行测定其精密度、重复性、稳定性试验，测定结果的精密度、重复性良好，并能在24h内保持稳定。

取麝香保心丸实际样品按上述1.1和1.2的条件处理并测定，能够测定出麝香保心丸样品中苏合香的5种指标药味成分的含量。

所以，本发明有效克服了现有技术中的种种缺点而具高度产业利用价值。

上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。

Claims

1.一种麝香保心丸中苏合香药味成分指纹图谱的检测方法，包括以下步骤：

3)测定：采用相同色谱条件的高效液相色谱法分别测定供试品溶液和对照品溶液，将获得的供试品溶液的液相色谱图，与对照品溶液的液相色谱图进行比较，根据相对保留时间，指认出5个共有特征峰，确认供试品溶液中5种苏合香药味成分的特征峰，从而获得供试品溶液中5种苏合香药味成分的指纹图谱；

所述苏合香药味成分为苯甲酸、肉桂酸、苯甲酸苄酯、肉桂酸苄酯和桂酸苯乙酯；

所述步骤3)中，所述高效液相色谱法的色谱条件为：色谱柱：waters C18柱；柱温：20-30℃；检测波长：230-280nm；流速：0.1-1.0ml/min；进样量：2-10μl；流动相：0.01-0.5v/v％磷酸水溶液-乙腈，其中，A相为0.01-0.5v/v％磷酸水溶液，B相为乙腈；分析时间：45min；梯度洗脱；

所述梯度洗脱的具体程序为：0-9min，A相：B相体积比为95：5-75：25；9-14min，A相：B相体积比为75：25-42：58；14-40min，A相：B相体积比为42：58-0：100；40-45min，A相：B相体积比为0：100-0：100。

2.根据权利要求1所述的麝香保心丸中苏合香药味成分指纹图谱的检测方法，其特征在于，所述步骤1)中，所述麝香保心丸粉末加入的重量与所述无水乙醇加入的体积之比为0.2-1g：20-100ml。

3.根据权利要求1所述的麝香保心丸中苏合香药味成分指纹图谱的检测方法，其特征在于，所述步骤1)中，所述超声提取时间为20-40min。

4.根据权利要求1所述的麝香保心丸中苏合香药味成分指纹图谱的检测方法，其特征在于，所述步骤2)中，所述对照品溶液中各成分的含量范围为：苯甲酸0.01833-1.833mg/mL、肉桂酸0.002038-0.2038mg/mL、苯甲酸苄酯0.05008-5.008mg/mL、肉桂酸苄酯0.01817-1.817mg/mL、桂酸苯乙酯0.001148-0.1148mg/mL。

5.根据权利要求1-4任一所述的麝香保心丸中苏合香药味成分指纹图谱的检测方法在麝香保心丸的苏合香中5种指标药味成分含量测定中的应用。

6.一种麝香保心丸的苏合香中5种指标药味成分含量的测定方法，包括以下步骤：

A)供试品溶液的制备：采用权利要求1-4任一权利要求所述麝香保心丸中苏合香药味成分指纹图谱的检测方法的步骤1)制备；

B)对照品溶液的制备：采用权利要求1-4任一权利要求所述麝香保心丸中苏合香药味成分指纹图谱的检测方法的步骤2)制备；

C)测定：采用高效液相色谱法在相同色谱条件下分别测定供试品溶液和对照品溶液，并采用外标法计算供试品溶液中苏合香中5种指标药味成分的含量；

所述高效液相色谱法的色谱条件采用权利要求1-4任一权利要求所述麝香保心丸中苏合香药味成分指纹图谱的检测方法的色谱条件。