CN107926709A - 一种刻节润楠的组培快繁方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种刻节润楠的组培快繁方法。该方法包括如下步骤：(1)无菌苗的获得：将刻节润楠种子包在纱布中，先用水冲洗，接着用酒精溶液浸泡、无菌水冲洗，然后消毒、无菌水冲洗，再用灭菌滤纸吸干种子表面的残留水分，最后接种于装有基本培养基的培养瓶中进行培养，得到外植体丛生芽；(2)增殖培养：将步骤(1)中得到的外植体丛生芽接种于增殖培养基中进行培养，每60d(天)继代一次，得到幼苗；(3)生根培养：将步骤(2)中得到的幼苗切段，再接种于生根培养基中进行生根培养。本发明的方法培养周期短、不受季节影响，并通过炼苗与移栽，提高了苗木的成活率，获得的刻节润楠产量高，促进了刻节润楠的大规模应用。

Description

一种刻节润楠的组培快繁方法
技术领域
本发明属于树木繁殖技术领域，特别涉及一种刻节润楠的组培快繁方法。
背景技术
刻节润楠(Machilus cicatricosa)为樟科(Lauraceae)润楠属(Machilus Nees)常绿乔木，高可达15-20m。刻节润楠树皮灰褐色有显著的鳞片脱落后的疤痕，小枝黑褐色；叶椭圆形，薄革质，叶片背面粉绿色，于近小枝端聚生；侧脈稍纤细，每边12-14条；聚伞花序顶生，果深绿色，长圆形；花期：5-6月；果期：7-10月，是园林绿化的优良乡土树种。但其实生苗在常规育种条件下幼苗变异大，生长速度残差不齐。组织培养繁育技术具有繁殖系数高、繁殖速度快、不受季节影响和易于产业化等优点，为了更好地保护、开发与利用刻节润楠资源，研究刻节润楠的组织培养技术具有重要意义。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种刻节润楠的组培快繁方法。
本发明的目的通过下述技术方案实现：一种刻节润楠的组培快繁方法，包括如下步骤：
(1)无菌苗的获得：将刻节润楠种子包在纱布中，先用水冲洗，接着用酒精溶液浸泡、无菌水冲洗，然后消毒、无菌水冲洗，再用灭菌滤纸吸干种子表面的残留水分，最后接种于装有基本培养基的培养瓶中进行培养，得到外植体丛生芽；
(2)增殖培养：将步骤(1)中得到的外植体丛生芽接种于增殖培养基中进行培养，每60d(天)继代一次，得到幼苗；
(3)生根培养：将步骤(2)中得到的幼苗切段，再接种于生根培养基中进行生根培养。
步骤(1)中所述的刻节润楠种子优选为饱满的刻节润楠种子。
步骤(1)中所述的用水冲洗优选为用自来水进行冲洗。
步骤(1)中所述的冲洗的时间优选为1.5h。
步骤(1)中所述的酒精溶液的浓度优选为体积百分比75％。
步骤(1)中所述的酒精溶液浸泡的时间优选为150s。
步骤(1)中所述的无菌水冲洗的次数优选为5次。
步骤(1)中所述的消毒为采用0.1％升汞加吐温-20进行消毒；优选为采用0.1％升汞加吐温-20消毒90s。
步骤(1)中所述的基本培养基为添加0.7％(w/w)琼脂和25％(w/w)蔗糖，pH为5.8的基本培养基；优选为添加1/4MS、0.7％(w/w)琼脂和25％(w/w)蔗糖，pH为5.8的基本培养基。
步骤(2)中所述的增殖培养基以Read培养基为基本培养基；所述增殖培养基的配方为：Read+1.0mg/L ZT+0.03mg/L IBA+2.5％～3.5％(w/w)蔗糖。
步骤(2)中所述的幼苗切段为将幼苗切成2mm左右。
步骤(3)中所述的生根培养基的配方为：1/2WPM+1.5mg/L IBA；优选为1/2WPM+1.5mg/L IBA+0.1％(w/w)活性炭。
所述的刻节润楠的组培快繁方法，还包括炼苗和移栽的步骤。
所述的炼苗和移栽优选通过如下步骤实现：
(I)生根培养15～60d后，将培养瓶转移到室温、自然光照环境下培养4～6d，然后将培养瓶盖子拧松，继续培养8d，得到植株幼苗；
(II)将植株幼苗置于流水下洗去植株根部的培养基(生根培养基)，然后将植株根部浸泡于药剂内2～2.5h，再移栽于基质中进行培养，移栽后的前10d内，遮膜进行保湿，第10d后，逐渐撤膜；其中，所述的药剂为浓度为5ppm的5-氨基乙酰丙酸溶液；
(III)撤膜15d后，浇灌5-氨基乙酰丙酸溶液，每隔15d重复浇灌一次；其中，所述的5-氨基乙酰丙酸溶液的浓度为50～60ppm。
步骤(II)中所述的基质为泥炭土和珍珠岩混合得到的基质；优选为泥炭土和珍珠岩按体积比3:1配比得到的基质。
步骤(II)中所述的培养条件为：相对湿度80～85％。
步骤(III)中所述的5-氨基乙酰丙酸溶液的浓度优选为50ppm。
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
1、本发明针对刻节润楠组培快繁技术的关键环节，开展了基本培养基、蔗糖、生长素、细胞分裂素、炼苗等关键技术筛选研究，建立了一套刻节润楠植物组织培养体系，提供了一种培养周期短、不受季节影响、产量较高的刻节润楠的组培快繁方法，促进刻节润楠的大规模应用。截止目前，用刻节润楠种子作为组织培养的材料进行组织培养的技术尚未见报道，本发明首次报道了适合刻节润楠组织培养快速繁殖的技术体系。
2、本发明提供一种最适合刻节润楠的组织培养快速繁殖方法，依次经过无菌苗的获得、外植体的获得和不定芽诱导分化、增殖培养、生根培养后得到完整植株，并通过炼苗与移栽，提高了苗木的成活率。
3、本发明的有益效果是：(1)建立了一种刻节润楠的组培快繁体系，填补了现有技术中刻节润楠组培技术的空白；(2)筛选出最适增殖培养基为Read+1.0mg/L ZT+0.03mg/LIBA+2.5％-3.5％蔗糖，其增殖倍数达5.0；生根培养基为1/2WPM+1.5mg/L IBA，其生根率可达82.32％；添加活性炭0.1％可促进生根数和根长生长；(3)研究出了合适的刻节润楠炼苗移栽方法。
附图说明
图1为Read培养基处理组的植株生长情况图。
图2为炼苗处理组的植株生长情况图。
图3为不添加细胞生长素处理组的植株生长情况图。
图4为添加细胞生长素处理组的植株生长情况图。
图5为生根处理组的植株生长情况图。
图6为活性炭处理组的植株生长情况图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1
一种刻节润楠的组培快繁方法，具体包括如下步骤：
A、无菌苗的获得：选取饱满的刻节润楠种子包在纱布中，先置于自来水下冲洗1.5h，用75％(v/v)酒精浸泡150s，无菌水冲洗5遍，再用质量百分比0.1％升汞加吐温(吐温20)2滴消毒90s，无菌水冲洗5次，用灭菌滤纸吸干种子表面的残留水分，将灭菌后的种子接种于含有添加了1/4MS、0.7％(w/w)琼脂和25％(w/w)蔗糖，pH为5.8的基本培养基的培养瓶中进行培养24h。
B、增殖培养：将上述培养得到的外植体丛生芽接种于以Read培养基为基本培养基的增殖培养基中，增殖培养基的配方为：Read+1.0mg/L ZT(玉米素)+0.03mg/L IBA+2.5％～3.5％(w/w)蔗糖；每60d继代一次，增殖倍数达5.0。
C、生根培养：将增殖培养得到的健壮幼苗切段(每个切段约2mm)，接种于为1/2WPM+1.5mg/L IBA的生根培养基中，其生根率可达82.32％，添加活性炭0.1％(w/w)可促进生根数和根长生长。
D、炼苗与移栽：生根培养15d后，将培养瓶移至室温环境、自然光照环境下培养4～6d后，将培养瓶盖子拧松，8d后移苗；在流水下洗去植株根部培养基，将洗净的植株根部浸泡于浓度为5ppm的5-氨基乙酰丙酸溶液内2～2.5h，以泥炭土和珍珠岩体积比3：1为移栽基质，移栽于32穴的穴盘中，移栽后的前10d内，遮膜保湿，控制相对湿度80％-85％，第10d后，逐渐撤膜；撤膜15d后，浇灌浓度为50ppm的5-氨基乙酰丙酸的溶液，此后，每隔15d重复浇灌一次，直至下次换盆移苗。
该组培技术体系提供了一套适合刻节润楠快速繁殖，解决刻节润楠实生苗生长缓慢、繁殖周期长，幼苗生长状态较差等问题，可大规模培养出健壮的苗木。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种刻节润楠的组培快繁方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)无菌苗的获得：将刻节润楠种子包在纱布中，先用水冲洗，接着用酒精溶液浸泡、无菌水冲洗，然后消毒、无菌水冲洗，再用灭菌滤纸吸干种子表面的残留水分，最后接种于装有基本培养基的培养瓶中进行培养，得到外植体丛生芽；
(2)增殖培养：将步骤(1)中得到的外植体丛生芽接种于增殖培养基中进行培养，每60d(天)继代一次，得到幼苗；
(3)生根培养：将步骤(2)中得到的幼苗切段，再接种于生根培养基中进行生根培养。
2.根据权利要求1所述的刻节润楠的组培快繁方法，其特征在于：
步骤(1)中所述的基本培养基为添加0.7％(w/w)琼脂和25％(w/w)蔗糖，pH为5.8的基本培养基；
步骤(2)中所述的增殖培养基为：Read+1.0mg/L ZT+0.03mg/L IBA+2.5％～3.5％(w/w)蔗糖；
步骤(3)中所述的生根培养基的配方为：1/2WPM+1.5mg/L IBA。
3.根据权利要求1所述的刻节润楠的组培快繁方法，其特征在于：
步骤(1)中所述的基本培养基为添加1/4MS、0.7％(w/w)琼脂和25％(w/w)蔗糖，pH为5.8的基本培养基；
步骤(3)中所述的生根培养基的配方为：1/2WPM+1.5mg/L IBA+0.1％(w/w)活性炭。
4.根据权利要求1所述的刻节润楠的组培快繁方法，其特征在于：
步骤(1)中所述的酒精溶液的浓度为体积百分比75％。
5.根据权利要求1所述的刻节润楠的组培快繁方法，其特征在于：
步骤(1)中所述的消毒为采用0.1％升汞加吐温-20消毒90s。
6.根据权利要求1所述的刻节润楠的组培快繁方法，其特征在于：
步骤(1)中所述的用水冲洗的时间为1.5h；
步骤(1)中所述的酒精溶液浸泡的时间为150s；
步骤(1)中所述的无菌水冲洗的次数为5次。
7.根据权利要求1～6任一项所述的刻节润楠的组培快繁方法，其特征在于：还包括炼苗和移栽的步骤。
8.根据权利要求7所述的刻节润楠的组培快繁方法，其特征在于，所述的炼苗和移栽通过如下步骤实现：
(I)生根培养15～60d后，将培养瓶转移到室温、自然光照环境下培养4～6d，然后将培养瓶盖子拧松，继续培养8d，得到植株幼苗；
(II)将植株幼苗置于流水下洗去植株根部的培养基(生根培养基)，然后将植株根部浸泡于药剂内2～2.5h，再移栽于基质中进行培养，移栽后的前10d内，遮膜进行保湿，第10d后，逐渐撤膜；其中，所述的药剂为浓度为5ppm的5-氨基乙酰丙酸溶液；
(III)撤膜15d后，浇灌5-氨基乙酰丙酸溶液，每隔15d重复浇灌一次；其中，所述的5-氨基乙酰丙酸溶液的浓度为50～60ppm。
9.根据权利要求8所述的刻节润楠的组培快繁方法，其特征在于：
步骤(III)中所述的5-氨基乙酰丙酸溶液的浓度为50ppm。
10.根据权利要求8所述的刻节润楠的组培快繁方法，其特征在于：
步骤(II)中所述的基质为泥炭土和珍珠岩按体积比3:1配比得到的基质；
步骤(II)中所述的培养条件为：相对湿度80～85％。
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