CN107875167A - 一种促进骨形成蛋白表达加速骨折愈合的药物的制备方法 - Google Patents

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Abstract

一种促进骨形成蛋白表达加速骨折愈合的药物，它是由海藻酸钠经羧甲基化制备而成。按每100g海藻酸钠加入15g(2mol/L)的氢氧化钠液体混合均匀，35℃下搅拌0.5h；然后按每100g海藻酸钠再加入一氯乙酸20g与氢氧化钠20g的混合物，在70‑80℃条件下搅拌反应3h，得到羧甲基海藻酸钠生成物。也可以在95％的乙醇溶液中，取海藻酸钠、氢氧化钠、一氯乙酸一锅炒的方法制备。按质量∶质量∶体积＝1∶0.35∶0.30取海藻酸钠、氢氧化钠、一氯乙酸，放入2倍体积的体积分数为95％的乙醇溶液中，在醚化温度50℃，醚化时间3h、条件下进行反应。反应产物用95％乙醇洗涤，沉淀24h，生成物干燥，得到羧甲基海藻酸钠生成物。所得到的羧甲基海藻酸钠在促进骨形成蛋白表达，用于治疗和预防骨折、骨不连、股骨头坏死、骨质疏松的药物。

Description

一种促进骨形成蛋白表达加速骨折愈合的药物的制备方法
技术领域
本发明属于医学临床用药，具体说是涉及一种适用于骨折、骨不连、股骨头坏死、骨质疏松的治疗与预防的药物。
背景技术
随着社会的发展，交通运输业的繁荣，各种运动的频繁开展，各种创伤、骨折已经成为临床常见 病及多发病，严重危协人类的健康和影响人们的劳动能力。如何早日促进骨折愈合，是骨伤科领域的重点 课题。
骨折愈合是极其复杂的生物学修复过程。临床上应用了促进骨折愈合的多种方法，但骨折延迟愈 合，不愈合的问题仍未完全解决。近年来，由于基因技术的发展应用，人们对骨折愈合认识已从细胞生物 学向分子生物学水平深入，并随着分子生物学的不断发展，已经认识到骨折愈合与多种生物因子有关，除 内分泌、代谢因子等全身因子外，骨折局部尚有大量的生长因子，对骨折愈合起着重要的调节作用。
骨形成蛋白(bone morphogenetie protein，简称BMP)家族属于转化生长因子(TGF-β)超家族，最初 从牛的骨基质提取出来，在活体内可诱导异位成骨，促进骨折愈合的能力。实验研究发现骨形成蛋白诱导 骨髓基质细胞向成骨细胞分化的作用可能是其促进骨形成、治疗相关骨骼疾病的作用机制之一。
发明内容
本发明的目的本发明的目的在于提供一种羧甲基海藻酸钠的制备方法。是提供一种制备方法简单， 原料来源广泛的治疗和预防骨折的药物。
本发明的优点是制备方法简单，原料来源广。
本发明的目的可通过下述技术措施来实现：
本发明的治疗和预防骨折的药物是海藻酸钠经羧甲基化而制成。其制备方法如下：
1、羧甲基化制备：按每100g海藻酸钠加入15g(2mol/L)的氢氧化钠液体380-400ml混合均匀， 35℃下搅拌0.5h；然后按每100g海藻酸钠再加入一氯乙酸20g与氢氧化钠20g的混合物，在70-80℃条件 下搅拌反应3h，反应产物用95％乙醇洗涤，沉淀24h，得到羧甲基海藻酸钠生成物，生成物干燥。
氢氧化钠与海藻酸钠的质量比为0.35-0.4∶1.0；氯乙酸与海藻酸钠的质量比为0.2∶1.0。
2、一锅炒方法：按质量∶质量∶体积＝1∶0.35∶0.30取海藻酸钠、氢氧化钠、一氯乙酸，放入2倍 体积的体积分数为95％的乙醇溶液中，在醚化温度50℃，醚化时间3h条件下进行反应。反应产物用95％乙 醇洗涤，沉淀24h，生成物干燥，得到羧甲基海藻酸钠生成物。
羧甲基海藻酸钠，其特征在于该羧甲基海藻酸钠的分子结构通式为： [C5H5O4(COONa)(CH2COONa)2]n，其分子结构中，含有羧甲基，n为1-30。
为了进一步的验证本发明成品制剂的疗效，我们将上述具体制备方法1-3中制备的 药物进行了相应的动物试验，现将结果报告如下。
试剂：骨形态发生蛋白-2(BMP-2)抗体购于北京博奥森生物技术有限公司
动物：昆明小鼠30只，体重18-22g，雄性。
方法：把30只体重20～30g，2～3月龄昆明小白鼠股骨骨制成骨折动物模型，分成A，B两组。 A组每只每天羧甲基海藻酸钠0.1g灌胃，B组每只每天0.1g葡萄糖灌胃，每组小鼠分别于7\14\28d各 处死5只。取小白鼠股骨制病理切片。标本经10％甲醛固定后脱钙，免疫组化染色。结果两组差异显著， A组3-4周即可形成连续性骨痴，临床愈合，最短14天即可形成连续骨痴。
结果：BMP-2蛋白的免疫阳性产物表达于骨基质内和骨母细胞胞质内，呈棕黄色。采用半定量 法判断BMP-2蛋白的表达情况：选10个高倍视野，显色的阳性反应细胞数＜25％为+，25～50％ 为++，＞75％为+++，无明显阳性反应细胞为-。计数资料的统计学分析采用卡方检验。检验标 准α＝0.05。
表1术后7d，15d，21d两组BMP-2蛋白的表达情况比较(n＝15)
。
附图说明
图1：术后7d治疗组BMP-2蛋白表达高于空白组(p＜0.01)；7d治疗组BMP-2蛋白的表达情况 (sp，400×)。
图2：术后7d空白组BMP-2蛋白表达低于空白组(p＜0.01)；7d空白组BMP-2蛋白的表达情况 (sp，400×)。
图3：术后14d治疗组BMP-2蛋白表达高于空白组(p＜0.01)；14d治疗组BMP-2蛋白的表达情 况(sp，400×)。
图4：术后14d空白组BMP-2蛋白表达低于于空白组(p＜0.01)；14d空白组BMP-2蛋白的表达情 况(sp，400×)。
图5：术后21d治疗组BMP-2蛋白表达高于空白组(p＜0.01)；21d治疗组BMP-2蛋白的表达情 况(sp，400×)。
图6：术后21d空白组BMP-2蛋白表达低于于空白组(p＜0.01)，21d空白组BMP-2蛋白的表达情 况(sp，400×)。
具体实施方式
以下是本发明内容的具体实施例，用于阐述本申请文件中所要解决技术问题的技术方案。
实施例1
羧甲基化制备：按每100g海藻酸钠加入15g(2mol/L)的氢氧化钠液体380-400ml混合均匀，35℃ 下搅拌0.5h；然后按每100g海藻酸钠再加入一氯乙酸20g与氢氧化钠20g的混合物，在70-80℃条件下搅 拌反应3h，反应产物用95％乙醇洗涤，沉淀24h，得到羧甲基海藻酸钠生成物，生成物干燥。
氢氧化钠与海藻酸钠的质量比为0.35-0.4∶1.0；氯乙酸与海藻酸钠的质量比为0.2∶1.0。
实施例2
一锅炒方法：按质量∶质量∶体积＝1∶0.35∶0.30取海藻酸钠、氢氧化钠、一氯乙酸，放入2倍体积 的体积分数为95％的乙醇溶液中，在醚化温度50℃，醚化时间3h条件下进行反应。反应产物用95％乙醇洗 涤，沉淀24h，生成物干燥，得到羧甲基海藻酸钠生成物。

Claims (1)

1.羧甲基海藻酸钠在制备促进骨形成蛋白表达，治疗和预防骨折、骨不连、股骨头坏死、骨质疏松的药物中的应用，其特征在于：羧甲基海藻酸钠的制备方法如下：按每100g海藻酸钠加入15g(2mol/L)氢氧化钠液体混合均匀，35℃下搅拌0.5h；然后按每100g海藻酸钠再加入一氯乙酸20g与氢氧化钠20g的混合物，在70-80℃条件下搅拌反应3h，反应产物用95％乙醇洗涤，沉淀24h，得到羧甲基海藻酸钠生成物，生成物干燥，氢氧化钠与海藻酸钠的质量比为0.35-0.4∶1.0；氯乙酸与海藻酸钠的质量比为0.2∶1.0。
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