CN107779486A - 一种可降低杂质的硫酸庆大霉素制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种可降低杂质的硫酸庆大霉素制备方法，能够明显降低硫酸庆大土霉素产品的杂质，符合《中国药典》（2015版）的要求，且生产工艺简单易操作；本发明与现有技术区别在于以下三点：孢子斜面培养基中添加了0.001%三磷酸腺苷和0.001%甘氨酸；种子培养基中添加了0.001%三磷酸腺苷和0.001%甘氨酸；发酵培养基中添加了0.003%三磷酸腺苷和0.003%甘氨酸；改进前生产的硫酸庆大霉素产品其产品总杂＞4%，西索米星＞1.5%；本发明生产的硫酸庆大霉素产品其产品总杂＜4%，西索米星＜1.5%，小诺霉素（小诺米星）＜3%。

Description

一种可降低杂质的硫酸庆大霉素制备方法
技术领域
本发明涉及抗生素发酵领域，尤其是涉及一种可降低杂质的硫酸庆大霉素制备方法。
背景技术
硫酸庆大霉素为氨基糖苷类抗生素，对各种革兰阴性细菌及革兰阳性细菌都有良好抗菌作用，对各种肠杆菌科细菌如大肠埃希菌、克雷伯菌属、变形杆菌属、沙门菌属、志贺菌属、肠杆菌属、沙雷菌属及铜绿假单胞菌等有良好抗菌作用，奈瑟菌属和流感嗜血杆菌对该品中度敏感。对布鲁菌属、鼠疫杆菌、不动杆菌属、胎儿弯曲菌也有一定作用。对葡萄球菌属（包括金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌）中甲氧西林敏感菌株的约80%有良好抗菌作用，但甲氧西林耐药株则对该品多数耐药。对链球菌属和肺炎链球菌的作用较差，肠球菌属则对该品大多耐药，硫酸庆大霉素与β内酰胺类合用时，多数可获得协同抗菌作用。硫酸庆大霉素的作用机制是与细菌核糖体30S亚单位结合，抑制细菌蛋白质的合成，近年来革兰阴性杆菌对庆大霉素耐药株显著增多。但使用现有庆大霉素生产配方进行发酵生产其产品杂质很高，很难符合《中国药典》2010版的要求。
发明内容
本发明为克服上述情况不足，旨在提供一种能解决上述问题的技术方案。
一种可降低杂质的硫酸庆大霉素制备方法，其具体包括以下步骤：
1）取庆大霉素沙土孢子置于孢子斜面培养基上进行孢子培养，培养温度为36℃，培养时间为10天，得到斜面培养后的庆大霉素孢子；
2）将步骤1）中得到的斜面培养后的庆大霉素孢子进行摇瓶培养，摇瓶培养的孢子接入量为：孢子斜面挖取0.25cm2接入一个摇瓶，培养温度为36℃，培养时间为42小时，得到庆大霉素摇瓶菌丝；
3）将步骤2）得到的庆大霉素摇瓶菌丝置于种子培养基上进行种子培养，种子培养的接入量为：按种子培养基体积的千分之二接入摇瓶种子，培养温度为36℃，培养时间为48小时，得到庆大霉素种子培养物；
4）将步骤3）得到的庆大霉素种子培养物置于繁殖罐中进行扩大培养，扩大培养接入量为扩大培养基体积的20%，培养温度为36℃，培养时间为42小时，得到庆大霉素繁殖培养物；
5）将步骤4）得到的庆大霉素繁殖培养物置于发酵培养基上进行发酵，培养物的接入量为扩大培养基体积的20%，发酵温度为34℃，发酵时间为120小时，得到庆大霉素发酵产物；
6）将步骤5）得到的庆大霉素发酵产物进行酸化处理至pH值为2-3，得到庆大霉素酸化液；
7）将步骤6）得到的庆大霉素酸化液进行中和处理，处理后得到pH值为6.8的庆大霉素溶液；
8）将步骤7）得到的庆大霉素溶液以732树脂进行吸附处理，得到吸附后庆大霉素溶液；
9）将步骤8）得到的吸附后庆大霉素溶液上柱去除Ca2+、Mg2+、Cl-1，得到去除离子的庆大霉素溶液；
10）将步骤9）得到的去除离子的庆大霉素溶液通过饱和树脂后以质量百分含量为4.5%的氨水进行解析，得到庆大霉素解析液；
11）将步骤10）得到的庆大霉素解析液以711树脂进行脱色，得到庆大霉素脱色液；
12）将步骤11）得到的庆大霉素脱色液以薄膜进行浓缩，得到庆大霉素浓缩液；
13）将步骤12）得到的庆大霉素浓缩液加入硫酸后制得硫酸庆大霉素；
14）将步骤13）得到硫酸庆大霉素通过喷雾干燥制得硫酸庆大霉素成品。
作为本发明进一步的方案：上述的硫酸庆大霉素的制备方法，其中步骤1）中庆大霉素沙土孢子的制备方法，其具体包括以下步骤：
a、沙土孢子培养基的配方按重量百分比计为：可溶性淀粉1.0%，氯化钠0.05%，硝酸钾0.1%， 碳酸钙0.1%，磷酸氢二钾0.02%，麸皮 1.8%，硫酸镁0.02%，琼脂 2.0%，三磷酸腺苷0.001%，甘氨酸0.001%；配制好的沙土孢子培养基在每个茄子瓶中分装50ml，经温热灭菌后，斜放，凝固，温热灭菌条件为0.1MPa，30分钟；
b、于超净工作台上，在火焰保护下，用无菌接种棒挑取砂土孢子0.1g于茄子瓶斜面培养基内，先划中线，而后从下而上往两边划线，均匀铺开，塞好棉塞；
c、培养与保存：接种好的斜面包扎好后，37℃恒温室架上培养10天，培养好的孢子斜面，4℃冰箱储存待用。
作为本发明进一步的方案：上述的硫酸庆大霉素的制备方法，所述步骤1）中孢子斜面培养基的配方按重量百分比计为：可溶性淀粉1.0%，氯化钠0.05%，硝酸钾0.1%，碳酸钙0.1%，磷酸氢二钾0.02%，麸皮1.8%，硫酸镁0.02%，琼脂2.0%，三磷酸腺苷0.001%，甘氨酸0.001%，可溶性淀粉1g，氯化钠0.05g，硝酸钾0.1g，碳酸钙0.1g，磷酸氢二钾0.02g，麸皮1.8g，硫酸镁0.02g，琼脂2g，三磷酸腺苷0.001g，甘氨酸0.001g，水94.908g。
作为本发明进一步的方案：上述的硫酸庆大霉素的制备方法，所述步骤2）中摇瓶培养基的配方按重量百分比计为：可溶性淀粉 1.0%，氯化钠0.05%，硝酸钾0.1%，碳酸钙0.1%，磷酸氢二钾0.02%，麸皮1.8%，硫酸镁0.02%，琼脂 2.0%，三磷酸腺苷0.001%，甘氨酸0.001%，可溶性淀粉1g，氯化钠0.05g，硝酸钾0.1g，碳酸钙0.1g，磷酸氢二钾0.02g，麸皮1.8g，硫酸镁0.02g，琼脂2g，三磷酸腺苷0.001g，甘氨酸0.001g，水94.908g。
作为本发明进一步的方案：上述的硫酸庆大霉素的制备方法，所述步骤3）中种子培养基的配方按重量百分比计为：淀粉1.5%，玉米粉1.5%，黄豆饼粉1%，硝酸钾0.05%，蛋白胨0.2%，二氯化钴0.0005%，三磷酸腺苷0.001%，甘氨酸0.001%，淀粉1.5g，玉米粉1.5g，黄豆饼粉1.0g，硝酸钾0.05g，蛋白胨0.2g，二氯化钴（CoCl2）0.0005g，三磷酸腺苷0.001g，甘氨酸0.001g，水为95.7475g。
作为本发明进一步的方案：上述的硫酸庆大霉素的制备方法，所述步骤4）中扩大培养基的配方按重量百分比计为：淀粉1.5%，玉米粉1.5%，黄豆饼粉1%，硝酸钾0.05%，蛋白胨0.2%，二氯化钴0.0005%，三磷酸腺苷0.001%，甘氨酸0.001%，淀粉1.5g，玉米粉1.5g，黄豆饼粉1.0g，硝酸钾0.05g，蛋白胨0.2g，二氯化钴（CoCl2）0.0005g，水为95.7495g。
作为本发明进一步的方案：上述的硫酸庆大霉素的制备方法，所述步骤5）中发酵培养基的配方按重量百分比计为：淀粉4.5%，黄豆饼粉3.5%，玉米粉1.0%，碳酸钙0.7%，蛋白胨0.3%，二氯化钴0.0015%，硝酸钾0.01%，硫酸铵0.1%，泡敌0.01%，三磷酸腺苷0.001%，甘氨酸0.001%，淀粉4.5g，黄豆饼粉3.5g，玉米粉1g，碳酸钙0.7g，蛋白胨0.3g，二氯化钴（CoCl2）0.0015g，硝酸钾0.01g，硫酸铵0.1g，泡敌0.01g，三磷酸腺苷0.003g，甘氨酸0.003g，水89.8725g。
作为本发明进一步的方案：上述的硫酸庆大霉素的制备方法，
所述步骤6）中，酸化处理是以浓度30%的盐酸进行处理，调pH2～3；
所述步骤7）中，中和处理是以浓度40%的氢氧化钠进行处理，调pH6.8；
所述步骤8）中，吸附处理所用的732树脂为001×7强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂；
所述步骤9）中，去除Ca2+、Mg2+、Cl-1的柱子为Φ1m高2m柱；
所述步骤10）中，所述饱和树脂是指每毫升树脂吸附了8万单位庆大霉素得到的树脂；
所述步骤11）中，脱色处理所用的711树脂为强碱性苯乙烯系阴离子交换树脂；
所述步骤12）中，浓缩量为500L/h，浓缩至原来的1/7；
所述步骤13）中，硫酸的浓度为98%，调至pH5.3；
所述步骤14）中，喷雾干燥的条件为进风温度130℃，出风温度85℃，喷速100L/h。
本发明的有益效果：本发明提供的硫酸庆大霉素的制备方法，能够明显降低硫酸庆大土霉素产品的杂质，符合《中国药典》（2015版）的要求，且生产工艺简单易操作；本发明与现有技术区别在于以下三点：孢子斜面培养基中添加了0.001%三磷酸腺苷和0.001%甘氨酸；种子培养基中添加了0.001%三磷酸腺苷和0.001%甘氨酸；发酵培养基中添加了0.003%三磷酸腺苷和0.003%甘氨酸；改进前生产的硫酸庆大霉素产品其产品总杂＞4%，西索米星＞1.5%；本发明生产的硫酸庆大霉素产品其产品总杂＜4%，西索米星＜1.5%，小诺霉素（小诺米星）＜3%。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明实施例1中，一种可降低杂质的硫酸庆大霉素制备方法，其具体包括以下步骤：
1）取庆大霉素沙土孢子置于孢子斜面培养基上进行孢子培养，培养温度为36℃，培养时间为10天，得到斜面培养后的庆大霉素孢子；
上述庆大霉素沙土孢子的制备方法为：
a、沙土孢子培养基的配方按重量百分比计为：可溶性淀粉1.0%，氯化钠（NaCl）0.05%，硝酸钾（KNO3）0.1%， 碳酸钙（CaCO3）0.1%，磷酸氢二钾（K2HPO4）0.02%，麸皮 1.8%，硫酸镁（MgSO4）0.02%，琼脂 2.0%，三磷酸腺苷0.001%，甘氨酸0.001%，可溶性淀粉1.0g，氯化钠（NaCl）0.05g，硝酸钾（KNO3）0.1g， 碳酸钙（CaCO3）0.1g，磷酸氢二钾（K2HPO4）0.02g，麸皮1.8g，硫酸镁（MgSO4）0.02g，琼脂 2.0g，三磷酸腺苷0.001g，甘氨酸0.001g，水94.908g；配制好的沙土孢子培养基在每个茄子瓶中分装50ml，经温热灭菌后，斜放，凝固，温热灭菌条件为0.1MPa，30分钟；
b、于超净工作台上，在火焰保护下，用无菌接种棒挑取砂土孢子0.1g于茄子瓶斜面培养基内，先划中线，而后从下而上往两边划线，均匀铺开，塞好棉塞；
c、培养与保存：接种好的斜面包扎好后，37℃恒温室架上培养10天，培养好的孢子斜面，4℃冰箱储存待用；
孢子斜面培养基的配方按重量百分比计为：可溶性淀粉1%，氯化钠0.05%，硝酸钾0.1%，碳酸钙0.1%，磷酸氢二钾0.02%，麸皮1.8%，硫酸镁0.02%，琼脂2%，三磷酸腺苷0.001%，甘氨酸0.001%，可溶性淀粉1g，氯化钠0.05g，硝酸钾0.1g，碳酸钙0.1g，磷酸氢二钾0.02g，麸皮1.8g，硫酸镁0.02g，琼脂2g，三磷酸腺苷0.001g，甘氨酸0.001g，水94.908g；
2）将步骤1）中得到的斜面培养后的庆大霉素孢子进行摇瓶培养，摇瓶培养的孢子接入量为：孢子斜面挖取0.25cm2接入一个摇瓶，培养温度为36℃，培养时间为42小时，得到庆大霉素摇瓶菌丝；
摇瓶培养基的配方按重量百分比计为：可溶性淀粉 1.0%，氯化钠0.05%，硝酸钾0.1%，碳酸钙0.1%，磷酸氢二钾0.02%，麸皮1.8%，硫酸镁0.02%，琼脂 2.0%，三磷酸腺苷0.001%，甘氨酸0.001%，可溶性淀粉1g，氯化钠0.05g，硝酸钾0.1g，碳酸钙0.1g，磷酸氢二钾0.02g，麸皮1.8g，硫酸镁0.02g，琼脂2g，三磷酸腺苷0.001g，甘氨酸0.001g，水94.908g；
3）将步骤2）得到的庆大霉素摇瓶菌丝置于种子培养基上进行种子培养，种子培养的接入量为：庆大霉素摇瓶菌丝按种子培养基体积的千分之二接入摇瓶种子，培养温度为36℃，培养时间为48小时，得到庆大霉素种子培养物；
种子培养基的配方按重量百分比计为：淀粉1.5%，玉米粉1.5%，黄豆饼粉1.0%，硝酸钾0.05%，蛋白胨0.2%，二氯化钴（CoCl2）0.0005%，三磷酸腺苷0.001%，甘氨酸0.001%，淀粉1.5g，玉米粉1.5g，黄豆饼粉1.0g，硝酸钾0.05g，蛋白胨0.2g，二氯化钴（CoCl2）0.0005g，三磷酸腺苷0.001g，甘氨酸0.001g，水为95.7475g；
4）将步骤3）得到的庆大霉素种子培养物置于繁殖罐中进行扩大培养，庆大霉素种子培养物接入量为扩大培养基体积的20%，培养温度为36℃，培养时间为42小时，得到庆大霉素繁殖培养物；
扩大培养基的配方按重量百分比计为：淀粉1.5%，玉米粉1.5%，黄豆饼粉1%，硝酸钾0.05%，蛋白胨0.2%，二氯化钴（CoCl2）0.0005%，淀粉1.5g，玉米粉1.5g，黄豆饼粉1.0g，硝酸钾0.05g，蛋白胨0.2g，二氯化钴（CoCl2）0.0005g，水为95.7495g；
5）将步骤4）得到的庆大霉素繁殖培养物置于发酵培养基上进行发酵，庆大霉素繁殖培养物的接入量为发酵培养基体积的20%，发酵温度为34℃，发酵时间为120小时，得到庆大霉素发酵产物；
发酵培养基的配方按重量百分比计为：淀粉4.5%，黄豆饼粉3.5%，玉米粉1%，碳酸钙0.7%，蛋白胨0.3%，二氯化钴（CoCl2）0.0015%，硝酸钾0.01%，硫酸铵0.1%，泡敌0.01%，三磷酸腺苷0.003%，甘氨酸0.003%，淀粉4.5g，黄豆饼粉3.5g，玉米粉1g，碳酸钙0.7g，蛋白胨0.3g，二氯化钴（CoCl2）0.0015g，硝酸钾0.01g，硫酸铵0.1g，泡敌0.01g，三磷酸腺苷0.003g，甘氨酸0.003g，水89.8725g；
6）将步骤5）得到的庆大霉素发酵产物进行酸化处理至pH值为2-3，得到庆大霉素酸化液；酸化处理是以浓度30%的盐酸进行处理，调pH2～3；
7）将步骤6）得到的庆大霉素酸化液进行中和处理，处理后得到pH值为6.8的庆大霉素溶液；中和处理是以浓度40%的氢氧化钠进行处理，调pH6.8；
8）将步骤7）得到的庆大霉素溶液以732树脂进行吸附处理，得到吸附后庆大霉素溶液；吸附处理所用的732树脂为001×7强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂；
9）将步骤8）得到的吸附后庆大霉素溶液上柱去除Ca2+、Mg2+、Cl-1，得到去除离子的庆大霉素溶液；去除Ca2+、Mg2+、Cl-1的柱子为Φ1m高2m柱；
10）将步骤9）得到的去除离子的庆大霉素溶液通过饱和树脂后以质量百分含量为4.5%的氨水进行解析，得到庆大霉素解析液；所述饱和树脂是指每毫升树脂吸附了8万单位庆大霉素得到的树脂；
11）将步骤10）得到的庆大霉素解析液以711树脂进行脱色，得到庆大霉素脱色液；脱色处理所用的711树脂为强碱性苯乙烯系阴离子交换树脂；
12）将步骤11）得到的庆大霉素脱色液以薄膜进行浓缩，得到庆大霉素浓缩液；浓缩量为500L/h，浓缩至原来的1/7；
13）将步骤12）得到的庆大霉素浓缩液加入硫酸后制得硫酸庆大霉素；硫酸的浓度为98%，调至pH5.3；
14）将步骤13）得到硫酸庆大霉素通过喷雾干燥制得硫酸庆大霉素成品，喷雾干燥的条件为进风温度130℃，出风温度85℃，喷速100L/h。
本发明与现有技术区别在于以下三点：孢子斜面培养基中添加了0.001%三磷酸腺苷和0.001%甘氨酸；种子培养基中添加了0.001%三磷酸腺苷和0.001%甘氨酸；发酵培养基中添加了0.003%三磷酸腺苷和0.003%甘氨酸；
改进前生产的硫酸庆大霉素产品其产品总杂＞4%，西索米星＞1.5%。
本发明生产的硫酸庆大霉素产品其产品总杂＜4%，西索米星＜1.5%，小诺霉素（小诺米星）＜3%。
具体验证数据如表1和表2所示，表1为改进前生产硫酸庆大霉素的三批大罐的产品数据，表2为本发明生产硫酸庆大霉素的三批大罐的产品数据。
表1
罐1 罐2 罐3 平均
总杂 4.38 4.62 4.56 4.52
西索米星 1.83 1.99 1.79 1.87
表2
罐1 罐2 罐3 平均
总杂 3.51 3.65 3.75 3.64
西索米星 1.34 1.35 1.42 1.37
本发明提供的制备方法生产的硫酸庆大霉素适用于治疗细菌性痢疾或其他细菌性肠道感染，亦可用于结肠手术前准备。
硫酸庆大霉素的适用范围：
1、适用于治疗敏感革兰阴性杆菌，如大肠埃希菌、克雷伯菌属、肠杆菌属、变形杆菌属、沙雷菌属、铜绿假单胞菌以及葡萄球菌甲氧西林敏感株所致的严重感染，如败血症、下呼吸道感染、肠道感染、盆腔感染、腹腔感染、皮肤软组织感染、复杂性尿路感染等。治疗腹腔感染及盆腔感染时应与抗厌氧菌药物合用，临床上多采用庆大霉素与其他抗菌药联合应用。与青霉素(或氨苄西林)合用可治疗肠球菌属感染；
2．用于敏感细菌所致中枢神经系统感染，如脑膜炎、脑室炎时，可同时用本品鞘内注射作为辅助治疗。
本发明的工作原理是：本发明与现有技术区别在于以下三点：孢子斜面培养基中添加了0.001%三磷酸腺苷和0.001%甘氨酸；种子培养基中添加了0.001%三磷酸腺苷和0.001%甘氨酸；发酵培养基中添加了0.003%三磷酸腺苷和0.003%甘氨酸；
改进前生产的硫酸庆大霉素产品其产品总杂＞4%，西索米星＞1.5%。
本发明生产的硫酸庆大霉素产品其产品总杂＜4%，西索米星＜1.5%，小诺霉素（小诺米星）＜3%。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。

Claims (8)

1.硫酸庆大霉素的制备方法，其特征在于，其具体包括以下步骤：
1）取庆大霉素沙土孢子置于孢子斜面培养基上进行孢子培养，培养温度为36℃，培养时间为10天，得到斜面培养后的庆大霉素孢子；
2）将步骤1）中得到的斜面培养后的庆大霉素孢子进行摇瓶培养，摇瓶培养的孢子接入量为：孢子斜面挖取0.25cm2接入一个摇瓶，培养温度为36℃，培养时间为42小时，得到庆大霉素摇瓶菌丝；
3）将步骤2）得到的庆大霉素摇瓶菌丝置于种子培养基上进行种子培养，种子培养的接入量为：庆大霉素摇瓶菌丝按种子培养基体积的千分之二接入摇瓶种子，培养温度为36℃，培养时间为48小时，得到庆大霉素种子培养物；
4）将步骤3）得到的庆大霉素种子培养物置于繁殖罐中进行扩大培养，庆大霉素种子培养物接入量为扩大培养基体积的20%，培养温度为36℃，培养时间为42小时，得到庆大霉素繁殖培养物；
5）将步骤4）得到的庆大霉素繁殖培养物置于发酵培养基上进行发酵，庆大霉素繁殖培养物的接入量为发酵培养基体积的20%，发酵温度为34℃，发酵时间为120小时，得到庆大霉素发酵产物；
6）将步骤5）得到的庆大霉素发酵产物进行酸化处理至pH值为2-3，得到庆大霉素酸化液；
7）将步骤6）得到的庆大霉素酸化液进行中和处理，处理后得到pH值为6.8的庆大霉素溶液；
8）将步骤7）得到的庆大霉素溶液以732树脂进行吸附处理，得到吸附后庆大霉素溶液；
9）将步骤8）得到的吸附后庆大霉素溶液上柱去除Ca2+、Mg2+、Cl-1，得到去除离子的庆大霉素溶液；
10）将步骤9）得到的去除离子的庆大霉素溶液通过饱和树脂后以质量百分含量为4.5%的氨水进行解析，得到庆大霉素解析液；
11）将步骤10）得到的庆大霉素解析液以711树脂进行脱色，得到庆大霉素脱色液；
12）将步骤11）得到的庆大霉素脱色液以薄膜进行浓缩，得到庆大霉素浓缩液；
13）将步骤12）得到的庆大霉素浓缩液加入硫酸后制得硫酸庆大霉素；
14）将步骤13）得到硫酸庆大霉素通过喷雾干燥制得硫酸庆大霉素成品。
2.根据权利要求1所述的硫酸庆大霉素的制备方法，其特征在于，所述步骤1）中庆大霉素沙土孢子的制备方法为：
a、庆大霉素沙土孢子培养基的配方按重量百分比计为：可溶性淀粉1.0%，氯化钠0.05%，硝酸钾0.1%， 碳酸钙0.1%，磷酸氢二钾0.02%，麸皮 1.8%，硫酸镁0.02%，琼脂 2.0%，三磷酸腺苷0.001%，甘氨酸0.001%；配制好的庆大霉素沙土孢子培养基在每个茄子瓶中分装50ml，经温热灭菌后，斜放，凝固，温热灭菌条件为0.1MPa，30分钟；
b、于超净工作台上，在火焰保护下，用无菌接种棒挑取砂土孢子0.1g于茄子瓶斜面培养基内，先划中线，而后从下而上往两边划线，均匀铺开，塞好棉塞；
c、培养与保存：接种好的斜面包扎好后，37℃恒温室架上培养10天，培养好的孢子斜面，4℃冰箱储存待用。
3.根据权利要求1所述的硫酸庆大霉素的制备方法，其特征在于，所述步骤1）中，孢子斜面培养基的配方按重量百分比计为：可溶性淀粉1.0%，氯化钠0.05%，硝酸钾0.1%，碳酸钙0.1%，磷酸氢二钾0.02%，麸皮1.8%，硫酸镁0.02%，琼脂2.0%，三磷酸腺苷0.001%，甘氨酸0.001%，余量为水。
4.根据权利要求1所述的硫酸庆大霉素的制备方法，其特征在于，所述步骤2）中，摇瓶培养基的配方按重量百分比计为：可溶性淀粉 1.0%，氯化钠0.05%，硝酸钾0.1%，碳酸钙0.1%，磷酸氢二钾0.02%，麸皮1.8%，硫酸镁0.02%，琼脂 2.0%，三磷酸腺苷0.001%，甘氨酸0.001%，余量为水。
5.根据权利要求1所述的硫酸庆大霉素的制备方法，其特征在于，所述步骤3）中，种子培养基的配方按重量百分比计为：淀粉1.5%，玉米粉1.5%，黄豆饼粉1.0%，硝酸钾0.05%，蛋白胨0.2%，二氯化钴0.0005%，三磷酸腺苷0.001%，甘氨酸0.001%，余量为水。
6.根据权利要求1所述的硫酸庆大霉素的制备方法，其特征在于，所述步骤4）中，扩大培养基的配方按重量百分比计为：淀粉1.5%，玉米粉1.5%，黄豆饼粉1.0%，硝酸钾0.05%，蛋白胨0.2%，二氯化钴0.0005%，三磷酸腺苷0.001%，甘氨酸0.001%，余量为水。
7.根据权利要求1所述的硫酸庆大霉素的制备方法，其特征在于，所述步骤5）中，发酵培养基的配方按重量百分比计为：淀粉4.5%，黄豆饼粉3.5%，玉米粉1.0%，碳酸钙0.7%，蛋白胨0.3%，二氯化钴0.0015%，硝酸钾0.01%，硫酸铵0.1%，泡敌0.01%，三磷酸腺苷0.003%，甘氨酸0.003%，余量为水。
8.根据权利要求1所述的硫酸庆大霉素的制备方法，其特征在于，
所述步骤6）中，酸化处理是以浓度30%的盐酸进行处理，调pH2～3；
所述步骤7）中，中和处理是以浓度40%的氢氧化钠进行处理，调pH6.8；
所述步骤8）中，吸附处理所用的732树脂为001×7强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂；
所述步骤9）中，去除Ca2+、Mg2+、Cl-1的柱子为Φ1m高2m柱；
所述步骤10）中，所述饱和树脂是指每毫升树脂吸附了8万单位庆大霉素得到的树脂；
所述步骤11）中，脱色处理所用的711树脂为强碱性苯乙烯系阴离子交换树脂；
所述步骤12）中，浓缩量为500L/h，浓缩至原来的1/7；
所述步骤13）中，硫酸的浓度为98%，调至pH5.3；
所述步骤14）中，喷雾干燥的条件为进风温度130℃，出风温度85℃，喷速100L/h。
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