CN107778362A

CN107778362A - 一种用于抑制口腔鳞状细胞癌迁移和侵袭能力的多肽及其用途

Info

Publication number: CN107778362A
Application number: CN201711176520.8A
Authority: CN
Inventors: 杨宝峰; 白云龙; 吕延杰
Original assignee: Harbin Medical University
Current assignee: Harbin Engineering University; Harbin Medical University
Priority date: 2017-11-22
Filing date: 2017-11-22
Publication date: 2018-03-09
Anticipated expiration: 2037-11-22
Also published as: CN107778362B; RU2705547C1

Abstract

本发明公开了一种用于抑制口腔鳞状细胞癌迁移和侵袭能力的多肽及其用途。所述的多肽具有SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。此外，本发明还公开了一种能够抑制口腔鳞状细胞癌迁移和侵袭能力的药物制剂，其由本发明所述的多肽和药物制剂上接受的辅料组成。所述的药物制剂可为胶囊剂、片剂、注射剂或喷雾剂等。本发明通过细胞增殖实验、划痕实验和Transwell侵袭实验等多种实验技术，证明本发明的新型多肽对口腔鳞状细胞癌迁移和侵袭能力具有抑制作用。本发明的提出对治疗口腔鳞状细胞癌提供了一种有效的技术手段。

Description

一种用于抑制口腔鳞状细胞癌迁移和侵袭能力的多肽及其用途

技术领域

本发明涉及一种多肽及其用途，特别是涉及一种用于抑制口腔鳞状细胞癌迁移和侵袭能力的新型多肽药物。属于生物医药技术领域。

背景技术

肿瘤是机体在各种致瘤因素作用下，局部组织的细胞在基因水平上失去对其生长的正常调控导致异常增生与分化而形成的新生物。口腔癌是主要发生在包括颊黏膜、唇、舌、上下齿龈、硬腭和磨牙后三角区的恶性病变。口腔癌的发生是多因素、多步骤、多阶段共同参与的复杂过程，在这些过程中，涉及众多基因表达的改变，导致细胞正常生理过程及大分子代谢紊乱，信号转导受阻，细胞结构改变及免疫调节紊乱等，结果导致细胞异常增殖，最终形成癌。其中口腔鳞状细胞癌由于其恶度性高，浸润性生长，易转移，占口腔癌的90％以上，居头颈部恶性肿瘤第二位。其晚期患者的5年生存率仅为20％-40％。

目前临床治疗晚期口腔癌的方法主要是借助手术以及术前术后辅助放化疗，但一些晚期患者术后常常局部复发或全身转移从而导致口腔鳞癌患者的不良预后。另一方面，手术切除的方法很有可能会造成口腔功能损伤，因此，研制开发抑制口腔鳞状细胞癌迁移和侵袭能力的新型多肽药物具有必要性。

肽是α－氨基酸以肽键连接在一起而形成的化合物，它也是蛋白质水解的中间产物。多肽是由多个氨基酸通过肽键连接而形成的一类化合物。多肽类药物是21世纪重要的预防、诊断、监测和治疗药物，是一类由若干个氨基酸通过肽键连接而成的化合物，广泛存在于生物体内，在各种细胞中发挥重要的生物活性作用。

多肽药物主要来源于内源性多肽或其他天然多肽，其结构清楚、作用机制明确，质量控制水平接近于传统的小分子化学药物，而活性上接近于蛋白质药物，集合了传统化学药物和蛋白质药物的优点，适用于治疗传统化学药物难治的某些复杂疾病，包括癌症、心血管疾病、免疫代谢类疾病、血液病、传染性疾病，同时对疼痛缓解、记忆力减退、精神失常也有显著疗效。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于抑制口腔鳞状细胞癌迁移和侵袭能力的新型多肽药物。

为了达到上述目的，本发明采用了以下技术手段：

本发明的一种用于抑制口腔鳞状细胞癌迁移和侵袭能力的多肽，其具有SEQ IDNO.1所示的氨基酸序列。

本发明通过细胞增殖实验、划痕实验和Transwell侵袭实验等多种实验技术，验证本发明的新型多肽对口腔鳞状细胞癌迁移和侵袭能力的抑制作用。实验结果表明，本发明的多肽能够有效抑制口腔鳞状细胞癌的迁移和侵袭能力。

因此，进一步的，本发明还提出了所述的多肽在制备治疗口腔鳞状细胞癌药物中的用途。以及所述的多肽在制备抑制口腔鳞状细胞癌迁移和侵袭能力的药物中的用途。

更进一步的，本发明还提出了一种能够抑制口腔鳞状细胞癌迁移和侵袭能力的药物制剂，其由本发明所述的多肽和药物制剂上接受的辅料组成。

其中，优选的，所述的药物制剂为胶囊剂、片剂、贴剂、注射剂或喷雾剂。

相较于现有技术，本发明的有益效果是：本发明提出了一种有效抑制口腔鳞状细胞癌迁移和侵袭能力的多肽及其药物制剂，对治疗口腔鳞状细胞癌提供了一种有效的技术手段。

附图说明

图1是MTT检测细胞活力的试验结果；

^###P<0.001vs空白对照组，^####P<0.0001vs空白对照组；

图2是划痕实验检测细胞迁移能力的试验结果；

其中，图2a为给药培养48h后，不同剂量组细胞迁移的距离。n＝3，^###P<0.001vs空白对照组，^####P<0.0001vs空白对照组；图2b为给药培养48h后，不同剂量组细胞迁移的形态；

图3是Transwell侵袭实验检测结果。

其中，图3a为给药培养48h后，不同剂量组侵袭的细胞数。n＝3，^###P<0.001vs空白对照组，^####P<0.0001vs空白对照组；图3b为给药培养48h后，不同剂量组细胞侵袭形态。

具体实施方式

下面结合具体实施例和附图来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。

下列实例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或生产厂家所建议的条件进行操作。

实验所用的样品为本发明的多肽药物，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

所选用的细胞系为人舌鳞癌细胞系CAL-27。

剂量选择：随机分为五组，即对照组，空白对照组，多肽药物低剂量50μg/ml组，多肽药物中剂量100μg/ml组，多肽药物高剂量200μg/ml组。

依次对五组细胞进行细胞增殖实验、划痕实验、Transwell侵袭实验。

实施例1：细胞增殖实验

1、胰酶消化对数期CAL-27细胞，消化终止后离心收集，制成细胞悬液，细胞计数调整其浓度至1×10⁴/200μl铺于96孔板，并于37℃，5％CO₂孵箱中培养过夜。

2、24h后，将原培养基弃去，每孔加入含10％FBS和1％双抗的培养液，对照组加入5％葡萄糖溶液，给药组加入不同浓度的本发明多肽，每组设6个复孔，于37℃，5％CO₂孵箱中培养48h。

3、48h后，弃去原培养基，向每孔中分别加入MTT溶液(5mg/ml)，并设置调零孔，于37℃，5％CO₂孵箱中避光培养4h。

4、4h后，弃去原培养基，每孔中加入200μl DMSO以溶解晶体。

5、结晶充分溶解后，酶标仪于490nm处检测各孔吸光度值，每个实验重复三次。

6、结果

MTT检测结果显示，与空白对照组相比，给药组(50μg/ml，100μg/ml，200μg/ml)活细胞数明显减少，且呈现剂量依赖性，n＝3，^###P<0.001vs空白对照组，^####P<0.0001vs空白对照组(图1)。

实施例2：划痕实验

1、胰酶消化对数期CAL-27细胞后，细胞计数调整其细胞浓度，每孔约5×10⁵个细胞。

2、单层细胞密度为100％时，利用直尺和枪头进行划痕实验。

3、用PBS清洗细胞3次，洗去脱落细胞，加入细胞培养基，并分别给予不同剂量的多肽药物溶液。

4、放入37℃，5％CO₂培养箱培养。按0h和48h取样，利用显微镜于40倍镜下拍照。

5、结果

划痕实验结果显示，与空白对照组相比，给药组能明显抑制CAL-27细胞系的迁移，并呈现剂量依赖性，n＝3，^###P<0.001vs空白对照组，^####P<0.0001vs空白对照组(图2a，图2b)。

实施例3：Transwell侵袭实验

1、6孔板培养细胞至细胞密度为70-80％。

2、弃去培养基，用PBS清洗细胞2次，每次1ml，并准备含有不同浓度药物的培养基，继续孵育细胞48h。

3、转移细胞到Transwell小室：用PBS清洗6孔板中细胞2次，每次1ml，之后用胰酶消化细胞，用1ml含有10％FBS的培养基终止消化，并将消化下来的细胞转移至15ml离心管中，1000rpm，离心5min，弃去上清液，用高糖DMEM培养基重悬细胞，并进行细胞计数，调整细胞数目至2×10⁵/l。

4、向24孔板中加入37℃含10％FBS的DMEM培养基750μl。

5、弃去上室中液体，将小室移至含有750μl DMEM培养基的孔中，向小室中加入400μl含有细胞悬液的高糖DMEM，并将24孔板放入37℃,95％CO₂孵箱孵育。

6、48h后，将小室取出，弃去上室培养基，用棉签轻拭小室底部，用PBS清洗2次，每次1ml，用4％多聚甲醛固定后，再用0.1％结晶紫染色，PBS清洗后，于20倍显微镜下拍照。

7、计算经过小室的细胞数目，并与阴性对照组和空白对照组比较分析。

8、结果

Transwell侵袭实验结果显示，与空白对照组相比，给药组能明显抑制CAL-27细胞系的侵袭能力，并呈现剂量依赖性，n＝3，^###P<0.001vs空白对照组，^####P<0.0001vs空白对照组(图3a，图3b)。

序列表

<110> 哈尔滨医科大学

<120> 一种用于抑制口腔鳞状细胞癌迁移和侵袭能力的多肽及其用途

<130> KLPI170880

<160> 1

<170> PatentIn 3.5

<210> 1

<211> 30

<212> PRT

<213> artificial sequence

<400> 1

Arg Gly Asp Arg Gly Asp Met His Ser His Arg Asp Phe Gln Pro Val Leu His Leu Val 20

Ala Leu Asn Ser Pro Leu Ser Gly Gly Met 30

Claims

1.一种用于抑制口腔鳞状细胞癌迁移和侵袭能力的多肽，其特征在于所述的多肽具有SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。

2.权利要求1所述的多肽在制备治疗口腔鳞状细胞癌药物中的用途。

3.权利要求1所述的多肽在制备抑制口腔鳞状细胞癌迁移和侵袭能力药物中的用途。

4.一种能够抑制口腔鳞状细胞癌迁移和侵袭能力的药物制剂，其特征在于，由权利要求1所述的多肽和药物制剂上接受的辅料组成。

5.如权利要求4所述的药物制剂，其特征在于，所述的药物制剂为胶囊剂、片剂、贴剂、注射剂或喷雾剂。