CN107752029A - 一种海滨锦葵块根酶解产物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种海滨锦葵块根酶解产物及其制备方法。采集海滨锦葵新鲜块根，洗净、切片、干燥后粉碎，加入水提取，后加入中温α‑淀粉酶和纤维素酶进行酶解反应得到酶解产物，经浓缩、干燥后制得海滨锦葵块根酶解产物。本发明所述的海滨锦葵块根酶解产物产率高，水溶性好，其中总多糖＞30％；总皂苷＞5.0％；总黄酮＞1.0％，可以广泛制成各类提高免疫力功能产品。
Description
技术领域
本发明属于可食用原料加工技术领域，具体涉及一种海滨锦葵块根酶解产物及其制备方法和应用。
背景技术
海滨锦葵(Kosteletzkya virginica)是锦葵科多年生宿根盐生植物，天然分布于美国东部沿海盐沼海岸带。1993年由南京大学盐生植物实验室引种至中国。有文献报道，海滨锦葵的花、叶、根部均可食用。尤其是根部可生食、可烹炸、可做茶饮，焙干碾碎可用作糖果和口香糖原料，以增加胶粘度。根部浸出液可浓缩至蛋清状替代蛋清使用。
海滨锦葵块根富含三大类活性成分:多糖、皂苷和黄酮。多次试验证明，海滨锦葵根粉具有很好的增强免疫和抗肿瘤作用。如以海滨锦葵根粉为原料开发的锦葵露酒和锦葵片剂均具有免疫增强和抗疲劳和降低人体血尿酸水平的作用。现有技术下，人们从海滨锦葵块根提取活性物质。文献《海滨锦葵块根皂苷及多糖的分离、纯化及对细胞增殖活性的影响》(天然产物研究与开发，2013，25：87-91)报道了海滨锦葵块根中皂苷及多糖的分离、纯化方法，采用超声波法对块根中的皂苷和多糖进行粗提；通过大孔树脂柱层析法对得到的皂苷粗提取物进行纯化；皂苷经酸解得到皂苷元部分；采用DEAE-纤维素柱层析对粗多糖溶液进行提纯。结果表明海滨锦葵块根皂苷提取率为0.089％，粗多糖提取率为5.10％。文献《海滨锦葵块根总黄酮的提取鉴别及其对体外细胞增殖活性的影响》(天然产物研究与开发，2014，26：486-489，530)报道了海滨锦葵块根中总黄酮的提取、纯化、鉴别方法，以及总黄酮对小鼠免疫和肿瘤细胞的体外增殖活性的影响。采用超声波法对海滨锦葵块根总黄酮进行粗提，再通过D101型大孔树脂柱层析法对所得黄酮粗提物进行纯化；通过分光光度法测定了其中的总黄酮含量，结果表明，所得干物质中的总黄酮含量为12.5％。上述方法中，活性物质的提取效率不高，不适合产业化。人们也开发了以海滨锦葵块根粉为主要原料的产品。如申请号CN201510266410.5的中国专利申请公开了一种海滨锦葵块根粉的加工方法及用途。将清洗、切片、晾晒的海滨锦葵块根再经烘干、粉碎成干粉，得率约1/5，经Co-60辐照灭菌后，总多糖＞25％，总皂苷＞2.5％，总黄酮＞0.25％。如申请号CN201510298992.5的中国专利申请公开了一种植物原料海滨锦葵根粉及其精提物的使用方法和用途。经由特殊工艺得到的高于120目的超细精粉；所述海滨锦葵根粉主要成分为海滨锦葵源的黄酮(≥3.5‰)、皂苷(≥1.0％)和多糖(≥3.3％)。虽然，直接以海滨锦葵块根粉作为原料能够尽可能多的保留活性成分，但是海滨锦葵块根中含有大量不可溶的淀粉、纤维素、半纤维素以及木质素，海滨锦葵块根粉不溶于水，不利于进一步深加工。
发明内容
本发明针对现有技术不足，提供了一种可溶于水的高活性成分的海滨锦葵块根酶解产物。
本发明具体技术方案如下：
一种海滨锦葵块根酶解产物的制备方法，包括如下步骤：
(1)采集海滨锦葵新鲜块根，洗净、切片、干燥、粉碎，过筛，加入水，匀浆，提取；
(2)向步骤(1)的提取液中加入中温α-淀粉酶，进行酶解反应；
(3)调节步骤(2)得到的酶解液至酸性，加入纤维素酶，进行酶解反应；
(4)向酶解液中加入水稀释，离心，取上清，得到海滨锦葵块根酶解产物。
优选的，步骤(1)包括：a.采集海滨锦葵新鲜块根，洗净、切片、晒干或烘干，粉碎，过200目筛；b.块根粉匀浆：取上述海滨锦葵块根干粉，按比例1:10加入蒸馏水，用匀浆机把块根粉混匀；c.超声提取：用超声仪加温超声提取，超声条件为功率200瓦，温度80℃，超声1小时。
优选的，步骤(2)中温淀粉酶的加入量为块根粉重量的0.01-1％，优选0.1％。酶解反应条件为60-80℃，酶解0.5-2小时，优选70℃，酶解1小时。
优选的，步骤(3)纤维素酶的加入量为块根粉重量的0.01-1％，优选0.1％。酶解液pH为4.5-5，优选调节酶解液pH4.8，反应条件为50-60℃，酶解0.5-2小时，优选55℃，酶解1小时。
上述制备方法，还包括进一步将步骤(4)得到的海滨锦葵块根酶解产物浓缩干燥。优选的，向酶解液中加入5倍的蒸馏水稀释离心，取上清。将上清液经浓缩到一定程度，喷雾干燥，包装，储存。
本发明的另一目的在于提供一种海滨锦葵块根酶解产物，采用本发明所述的制备方法制得。应用上述方法制得的海滨锦葵块根酶解产物得率＞40％，约60％的残渣部分含有大量水不溶的木质素、半纤维素，可进一步做食用菌培养基。经检测，海滨锦葵块根酶解产物可全溶于水，其主要活性成分含量分别为：总多糖＞30％；总皂苷＞5.0％；总黄酮＞1.0％本发明的另一目的在于提供上述海滨锦葵块根酶解产物在制备提高免疫力功能产品中的应用。所述功能产品为食品、保健品或者药物。
本发明优点：
1.本发明采用超声提取和控温酶解方法，用海滨锦葵块根制取的酶解产物，得率约为40％，提高了海滨锦葵块根的利用效率。
2.本发明所述海滨锦葵块根酶解产物能够完全溶于水，不仅利于活性物质的吸收，也便于产品的深加工。
3.本发明所述海滨锦葵块根酶解产物具有更高含量的活性物质，具有更高的商业价值。
4.本发明制备方法操作简便，成本低，利于工业化生产。
具体实施方式
以下通过实施例说明本发明的具体步骤，但不受实施例限制。
在本发明中所使用的术语，除非另有说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。
下面结合具体实施例并参照数据进一步详细描述本发明。应理解，这些实施例只是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。
在以下实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。
实施例1海滨锦葵块根酶解产物的制备
方案一
1、采取5公斤左右的海滨锦葵块根，用自来水清洗干净，用切片机切片，厚度为0.5cm，放入烘箱60℃烘干，用粉碎机粉碎，过200目筛网。
2、取块根粉100g放入匀浆机，加入1000ml蒸馏水，匀浆，倒入2000ml烧杯。
3、把烧杯放入超声波容器中，80℃超声1小时。
4、加入0.10g中温α-淀粉酶，温度70℃酶解1小时；用50％的盐酸调pH至4.8，加入0.10g纤维素酶，55℃酶解1小时。
5、把酶解好的液体加5倍蒸馏水稀释，离心3000rpm/min，10min，取上清。
6、上清液用旋转蒸发仪浓缩，待浓缩至膏状以后，转移至烘盘，60℃烘箱烘干，然后用粉碎机粉碎，过筛，包装，称重得41.4克。
方案二；
1、取海滨锦葵块根粉100克放入匀浆机中，加入1000ml蒸馏水匀浆，倒入2000ml烧杯中。
2、把烧杯放入超声波容器中，80℃超声1小时。
3、加入0.10g高温淀粉酶，温度90℃酶解1小时；用50％的盐酸调pH至4.8，加入0.10g纤维素酶，55℃酶解1小时。
4、把酶解好的液体加5倍蒸馏水稀释，离心3000rpm/min，10min，取上清。
5、上清液用旋转蒸发仪浓缩，待浓缩至膏状以后，转移至烘盘，60℃烘箱烘干，然后用粉碎机粉碎，过筛，包装，称重得33.2克。
方案三
1、取海滨锦葵块根粉200克放入匀浆机中，加入2000ml蒸馏水匀浆，倒入3000ml烧杯中。
2、把烧杯放入超声波容器中，80℃超声1小时。
3、加入0.20g中温α-淀粉酶，温度70℃酶解1小时；用50％的盐酸调pH至4.8，加入0.20g纤维素酶，55℃酶解1小时。
4、把酶解好的液体加5倍蒸馏水稀释，离心3000rpm/min，10min，取上清。
5、上清液用旋转蒸发仪浓缩，转移至PW400型实验室用喷雾干燥器，根据设备要求设备自动调节相应指标进行喷雾干燥，出料后称重得82.3克。
实施例2海滨锦葵块根酶解产物活性物质的测定
方法参见“NY/T 1676-2008食用菌中粗多糖含量的测定”、“GB/T 22464-2008大豆皂苷含量测定”和“GB/T 16771-1997橙、柑、桔汁及其饮料－总黄酮的测定－分光光度法”，利用上述检测方法检测，海滨锦葵块根酶解产物主要活性成分含量分别为：总多糖＞30％；总皂苷＞5.0％；总黄酮＞1.0％。
实施例3海滨锦葵块根酶解产物活性检测
3.1实验材料
动物：C57小鼠，22-25克，雄性
阳性对照物：黄芪多糖(市售产品68％纯度)
培养基：配制20％FCS的高糖DMEM：80％高糖DMEM(液体)，20％胎牛血清(FCS)样品液制备：分别称取实施例一方案一制备的海滨锦葵酶解产物和市售黄芪多糖各2mg，配制成浓度为1mg/ml的海滨锦葵块根酶解产物和黄芪多糖样品母液各2ml。分别吸取5μl、10μl、20μl、40μl、80μl、160μl和320μl的两种母液，全部稀释成1ml，则得到5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml、160μg/ml和320μg/ml的7种浓度的样品液各1ml，冷藏备用。
3.2实验方法
取小鼠胸腺和脾脏，各自做成细胞悬液：胸腺细胞用含20％FCS的高糖DMEM配制成1×107/ml浓度；脾脏细胞配制成2×107浓度，接种96孔板100μl/孔，另加样品100μl/孔，混匀后培养48h，待培养结束前加10μl/孔MTT，继续培养4小时，再加40μl/孔20％SDS，培养过夜，在酶标仪上测定OD值。
表1两种材料对脾淋巴细胞培养(48h)后的增殖影响
注：*与对照比差异显著；**与对照比差异很显著；***与对照比差异非常显著。
表2两种材料对胸腺淋巴细胞培养(48h)后的增殖影响
注：*与对照比差异显著；**与对照比差异很显著；***与对照比差异非常显著。
从表1和表2的结果可看出，在低浓度(5μg/ml、10μg/ml)时，海滨锦葵块根酶解产物比黄芪多糖具有更好的生物活性。
Claims (10)
1.一种海滨锦葵块根酶解产物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)采集海滨锦葵新鲜块根，洗净、切片、干燥、粉碎，过筛，加入水，匀浆，提取；
(2)向步骤(1)的提取液中加入中温α-淀粉酶，进行酶解反应；
(3)调节步骤(2)得到的酶解液至酸性，加入纤维素酶，进行酶解反应；
(4)向酶解液中加入水稀释，离心，取上清，得到海滨锦葵块根酶解产物。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤(2)中温淀粉酶的加入量为块根粉重量的0.1-0.2％。
3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤(2)酶解反应条件为60-80℃，酶解1-1.5小时。
4.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于步骤(3)纤维素酶的加入量为块根粉重量的0.1-0.2％。
5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤(3)酶解液pH为4.5-5.0。
6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤(3)反应条件为50-60℃，酶解1-1.5小时。
7.如权利要求1-6任一项所述的制备方法，其特征在于还包括进一步将步骤(4)得到的海滨锦葵块根酶解产物浓缩干燥。
8.一种海滨锦葵块根酶解产物，其特征在于采用权利要求1-7任一项所述的制备方法制得。
9.权利要求8所述海滨锦葵块根酶解产物在制备提高免疫力功能产品中的应用。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于所述功能产品为食品、保健品或者药物。
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