CN101974096B - 一种提取裙带菜孢子叶多糖的方法 - Google Patents
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Abstract
提取裙带菜孢子叶多糖的方法，水分含量8-10％以下裙带菜孢子叶粉碎成粉末；粉末中加入水并超声波处理；用盐酸调pH加入纤维素酶酶解并干燥成粉；粉中加入乙醇浸提后离心得上清液和沉淀物；上清液蒸发干燥得低分子量多糖；沉淀物加水，用盐酸调pH浸提，离心分离得上清液和沉淀物；浓缩上清液至原重量的1/5-1/3，醇沉得沉淀物；干燥沉淀物得裙带菜高分子量多糖。超声辅助酶解技术更利于糖的提取；连续采用醇提和水提分别提取裙带菜低分子量多糖和高分子量多糖，提取充分，原料利用率高，大大降低裙带菜多糖的提取成本。
Description
技术领域：
本发明涉及一种用裙带菜特别是裙带菜的孢子叶作为原料，采取浸泡提取，分离提取高分子量和低分子量多糖的加工方法。
背景技术：
海洋面积辽阔，海洋植物多糖逐步成为生物多糖的主要来源之一。我国现在裙带菜经过人工养殖，年产量最高达40万吨，位居世界首位。裙带菜制成的各种快餐食品、休闲食品、营养和保健食品如雨后春笋般涌向市场，但其产品远远不能满足人们的需求，所以裙带菜的加工与利用也逐步进入了深层加工时期，这为裙带菜的利用与加工带来了更为广阔的发展空间。
裙带菜含有多种生物活性物质，其主要成分为多糖。目前从裙带菜中发现了3种主要的多糖：褐藻胶、褐藻糖胶、褐藻淀粉。研究表明，裙带菜含有丰富的褐藻酸，具有一定的抗癌作用。它还能增强由无机物、氨基酸和糖类形成的协同风味，保持食品的天然风味。此外，其含有独特的生理调节活性物质，如裙带菜氨酸、高不饱和脂肪酸、多卤多萜类化合物、甾醇类化合物等，既能维持和促进人体健康，又可改善无机物的平衡关系，因此，近年来国内外都很重视对裙带菜食品保健功能的研究。
目前对海洋植物中多糖的提取方法很多，包括水提法、酸提法、碱提法、酶提法、超声波提取法等，但这些方法并不适合对高、低分子量多糖的同时提取；裙带菜制品在此方面的研究多停留在将裙带菜加入到食品中，而对裙带菜多糖等活性物质作为功能食品的应用，以及加入其它食品中的研究尚少，因此，发明一种高效提取高、低分子量多糖的方法已备受关注。
发明内容：
本发明一种高效提取裙带菜孢子叶多糖的方法，其步骤如下：
A.原料及处理：将水份含量8-10％以下的裙带菜孢子叶，粉碎至颗粒粒度为1.0mm以下的粉末作为原料；向粉末中加入40-60倍重量的水，用300-800W超声波处理10-30min；用4-8mol/L盐酸调pH为4-6，加入原料重量0.5-2.0％的纤维素酶，40-60℃下酶解2-4小时；将酶解液置于喷雾干燥器中干燥，得裙带菜孢子叶酶解物干粉；
B.低分子量多糖提取：向酶解物干粉中加入3-5倍重量的无水乙醇，浸提8-14小时，用管式离心机于≥10000×g离心10-20min，得上清液A和沉淀物A；上清液A用旋转蒸发仪在40-60℃下干燥，得裙带菜低分子量多糖，得率为1-5％；
C.高分子量多糖的提取：向沉淀物A中加入20-30倍重量的水，用4-8mol/L盐酸调pH为4-6，于80-100℃下浸提3-10小时，用管式离心机于≥10000×g离心10-20min，得上清液B和沉淀物B；浓缩上清液B至原重量的1/5-1/3，加入3-5倍重量的无水乙醇，醇沉8-12小时，得上清液C和沉淀物C；用真空干燥机干燥沉淀物C，控制真空度0.1-0.2MPa，温度35-85℃，得裙带菜高分子量多糖，得率为5-15％。
也就是本发明的高效提取裙带菜多糖的方法，原料及处理和低分子量多糖、高分子量多糖分步分别提取提取的步骤。
1.原料及处理：将裙带菜孢子叶洗净，晒干使其水分含量达到8-10％以下，并用超微粉碎机反复粉碎至颗粒粒度为1.0mm以下的粉末作为原料；向原料的粉末中加入40-60倍重量的水进行浸提，用300-800W的超声波进行处理10-30min；用4-8mol/L盐酸调pH达到为4-6，再加入纤维素酶，纤维素酶加量为原料质量(重量)的0.5-2.0％，在40-60℃下酶解2-4小时；将酶解得到的液体置于喷雾干燥器中进行干燥，得到裙带菜孢子叶酶解物干粉；
2.低分子量多糖的提取：向裙带菜孢子叶酶解物干粉中加入3-5倍重量的无水乙醇，进行浸提8-14小时，用管式离心机于≥10000×g离心10-20min，分离得到上清液A和沉淀物A；上清液A用旋转蒸发仪在40-60℃下进行干燥，从而得到裙带菜孢子叶低分子量多糖产品，低分子量多糖的得率为原料重量的1-5％；
3.高分子量多糖的提取：向沉淀物A中加入20-30倍重量的水进行浸提，用4-8mol/L盐酸调pH为4-6，于80-100℃下浸提3-10小时，浸提后用管式离心机于≥10000×g离心分离10-20min，分离得到上清液B和沉淀物B；浓缩上清液B至原重量的1/5-1/3后，再加入浓缩上清液B3-5倍重量的无水乙醇，进行醇沉8-12小时，得到上清液C和沉淀物C；用真空干燥机干燥沉淀物C，控制真空度0.1-0.2MPa，温度35-85℃，得到裙带菜孢子叶的高分子量多糖产品，高分子量多糖的得率为原料重量的5-15％。
本发明与已有技术相比具有如下效果有优点：
1.超细粉碎：采用超微粉碎机对原料多次粉碎，提高组织中多糖的释放量，提高了多糖提取率。
2.超声辅助酶解：超声波能引起空化等一系列的特殊效应，可促进物料中有效成分的溶出，与酶解法结合更利于糖的提取。
3.连续制备：连续采用醇提和水提分别提取裙带菜低分子量多糖和高分子量多糖，多糖提取充分，原料利用率高，低分子量多糖产品得率为1-5％，高分子量多糖产品得率为5-15％。；裙带菜高、低分子量多糖在理化性质、生物活性方面存在较大差异，将其分别制备，拓宽了裙带菜多糖的应用空间。
具体实施方式：
实施例1
将裙带菜孢子叶洗净，晒干(水分含量8％以下)，超微粉碎机反复粉碎至颗粒粒度为1.0mm以下粉末，取1公斤粉末作为原料，加入40倍重量的水，300W超声波处理10min；用6mol/L盐酸调pH为4，加入纤维素酶5g，40℃下酶解2h，将酶解液置于喷雾干燥器中干燥，得裙带菜孢子叶酶解物干粉；
向酶解物干粉中加入3倍重量的无水乙醇，浸提8h，用管式离心机于≥10000×g离心10min，得上清液A和沉淀物A；上清液A用旋转蒸发仪在60℃下干燥，得裙带菜低分子量多糖产品12.4g；
向沉淀物A中加入20倍重量的水，用6mol/L盐酸调pH为5，于80℃下浸提3h，用管式离心机于≥10000×g离心10min，得上清液B和沉淀物B；浓缩上清液B至原重量的1/5，加入3倍重量的无水乙醇，醇沉8h，得上清液C和沉淀物C；用真空干燥机干燥沉淀物C，控制真空度0.1MPa，温度35℃，得裙带菜高分子量多糖产品60.6g。
实施例2
将裙带菜孢子叶洗净，晒干(水分含量8％以下)，超微粉碎机反复粉碎至颗粒粒度为1.0mm以下粉末，取1公斤粉末作为原料，加入40倍重量的水，300W超声波处理20min；用6mol/L盐酸调pH为5，加入纤维素酶12.5g，60℃下酶解2h，将酶解液置于喷雾干燥器中干燥，得裙带菜孢子叶酶解物干粉；
向酶解物干粉中加入3倍重量的无水乙醇，浸提11h，用管式离心机于≥10000×g离心15min，得上清液A和沉淀物A；上清液A用旋转蒸发仪在50℃下干燥，得裙带菜低分子量多糖产品13.9g；
向沉淀物A中加入25倍重量的水，用6mol/L盐酸调pH为6，于80℃下浸提6.5h，用管式离心机于≥10000×g离心20min，得上清液B和沉淀物B；浓缩上清液B至原重量的1/4，加入3倍重量的无水乙醇，醇沉12h，得上清液C和沉淀物C；用真空干燥机干燥沉淀物C，控制真空度0.1MPa，温度60℃，得裙带菜高分子量多糖产品66.5g。
实施例3
将裙带菜孢子叶洗净，晒干(水分含量8％以下)，超微粉碎机反复粉碎至颗粒粒度为1.0mm以下粉末，取1公斤粉末作为原料，加入40倍重量的水，300W超声波处理10min；用6mol/L盐酸调pH为6，加入纤维素酶20g，50℃下酶解3h，将酶解液置于喷雾干燥器中干燥，得裙带菜孢子叶酶解物干粉；
向酶解物干粉中加入3倍重量的无水乙醇，浸提8h，用管式离心机于≥10000×g离心20min，得上清液A和沉淀物A；上清液A用旋转蒸发仪在40℃下干燥，得裙带菜低分子量多糖产品13.8g；
向沉淀物A中加入30倍重量的水，用6mol/L盐酸调pH为4，于90℃下浸提10h，用管式离心机于≥10000×g离心15min，得上清液B和沉淀物B；浓缩上清液B至原重量的1/3，加入3倍重量的无水乙醇，醇沉12h，得上清液C和沉淀物C；用真空干燥机干燥沉淀物C，控制真空度0.1MPa，温度60℃，得裙带菜高分子量多糖产品72.0g。
实施例4
将裙带菜孢子叶洗净，晒干(水分含量8％以下)，超微粉碎机反复粉碎至颗粒粒度为1.0mm以下粉末，取1公斤粉末作为原料，加入40倍重量的水，550W超声波处理20min；用6mol/L盐酸调pH为4，加入纤维素酶5g，40℃下酶解3h，将酶解液置于喷雾干燥器中干燥，得裙带菜孢子叶酶解物干粉；
向酶解物干粉中加入3倍重量的无水乙醇，浸提11h，用管式离心机于≥10000×g离心10min，得上清液A和沉淀物A；上清液A用旋转蒸发仪在60℃下干燥，得裙带菜低分子量多糖产品19.7g；
向沉淀物A中加入25倍重量的水，用6mol/L盐酸调pH为5，于80℃下浸提3h，用管式离心机于≥10000×g离心10min，得上清液B和沉淀物B；浓缩上清液B至原重量的1/5，加入3倍重量的无水乙醇，醇沉8h，得上清液C和沉淀物C；用真空干燥机干燥沉淀物C，控制真空度0.1MPa，温度85℃，得裙带菜高分子量多糖产品67.7g。
实施例5
将裙带菜孢子叶洗净，晒干(水分含量8％以下)，超微粉碎机反复粉碎至颗粒粒度为1.0mm以下粉末，取1公斤粉末作为原料，加入40倍重量的水，550W超声波处理20min；用6mol/L盐酸调pH为5，加入纤维素酶12.5g，50℃下酶解3h，将酶解液置于喷雾干燥器中干燥，得裙带菜孢子叶酶解物干粉；
向酶解物干粉中加入3倍重量的无水乙醇，浸提14h，用管式离心机于≥10000×g离心15min，得上清液A和沉淀物A；上清液A用旋转蒸发仪在50℃下干燥，得裙带菜低分子量多糖产品20.5g；
向沉淀物A中加入30倍重量的水，用6mol/L盐酸调pH为6，于90℃下浸提6.5h，用管式离心机于≥10000×g离心20min，得上清液B和沉淀物B；浓缩上清液B至原重量的1/4，加入3倍重量的无水乙醇，醇沉10h，得上清液C和沉淀物C；用真空干燥机干燥沉淀物C，控制真空度0.1MPa，温度35℃，得裙带菜高分子量多糖产品77.1g。
实施例6
将裙带菜孢子叶洗净，晒干(水分含量8％以下)，超微粉碎机反复粉碎至颗粒粒度为1.0mm以下粉末，取1公斤粉末作为原料，加入40倍重量的水，550W超声波处理30min；用6mol/L盐酸调pH为6，加入纤维素酶20g，40℃下酶解3h，将酶解液置于喷雾干燥器中干燥，得裙带菜孢子叶酶解物干粉；
向酶解物干粉中加入3倍重量的无水乙醇，浸提14h，用管式离心机于≥10000×g离心20min，得上清液A和沉淀物A；上清液A用旋转蒸发仪在40℃下干燥，得裙带菜低分子量多糖产品15.8g；
向沉淀物A中加入20倍重量的水，用6mol/L盐酸调pH为4，于90℃下浸提3h，用管式离心机于≥10000×g离心15min，得上清液B和沉淀物B；浓缩上清液B至原重量的1/3，加入3倍重量的无水乙醇，醇沉8h，得上清液C和沉淀物C；用真空干燥机干燥沉淀物C，控制真空度0.1MPa，温度35℃，得裙带菜高分子量多糖产品67.3g。
实施例7
将裙带菜孢子叶洗净，晒干(水分含量8％以下)，超微粉碎机反复粉碎至颗粒粒度为1.0mm以下粉末，取1公斤粉末作为原料，加入40倍重量的水，800W超声波处理10min；用6mol/L盐酸调pH为4，加入纤维素酶5g，40℃下酶解4h，将酶解液置于喷雾干燥器中干燥，得裙带菜孢子叶酶解物干粉；
向酶解物干粉中加入3倍重量的无水乙醇，浸提8h，用管式离心机于≥10000×g离心10min，得上清液A和沉淀物A；上清液A用旋转蒸发仪在60℃下干燥，得裙带菜低分子量多糖产品17.9g；
向沉淀物A中加入25倍重量的水，用6mol/L盐酸调pH为5，于80℃下浸提6.5h，用管式离心机于≥10000×g离心10min，得上清液B和沉淀物B；浓缩上清液B至原重量的1/5，加入3倍重量的无水乙醇，醇沉10h，得上清液C和沉淀物C；用真空干燥机干燥沉淀物C，控制真空度0.1MPa，温度60℃，得裙带菜高分子量多糖产品90.3g。
实施例8
将裙带菜孢子叶洗净，晒干(水分含量8％以下)，超微粉碎机反复粉碎至颗粒粒度为1.0mm以下粉末，取1公斤粉末作为原料，加入40倍重量的水，800W超声波处理10min；用6mol/L盐酸调pH为5，加入纤维素酶12.5g，60℃下酶解3h，将酶解液置于喷雾干燥器中干燥，得裙带菜孢子叶酶解物干粉；
向酶解物干粉中加入3倍重量的无水乙醇，浸提8h，用管式离心机于≥10000×g离心15min，得上清液A和沉淀物A；上清液A用旋转蒸发仪在50℃下干燥，得裙带菜低分子量多糖产品25.2g；
向沉淀物A中加入30倍重量的水，用6mol/L盐酸调pH为6，于100℃下浸提6.5h，用管式离心机于≥10000×g离心20min，得上清液B和沉淀物B；浓缩上清液B至原重量的1/4，加入3倍重量的无水乙醇，醇沉10h，得上清液C和沉淀物C；用真空干燥机干燥沉淀物C，控制真空度0.1MPa，温度85℃，得裙带菜高分子量多糖产品89.7g。
实施例9
将裙带菜孢子叶洗净，晒干(水分含量8％以下)，超微粉碎机反复粉碎至颗粒粒度为1.0mm以下粉末，取1公斤粉末作为原料，加入40倍重量的水，800W超声波处理20min；用6mol/L盐酸调pH为6，加入纤维素酶20g，40℃下酶解4h，将酶解液置于喷雾干燥器中干燥，得裙带菜孢子叶酶解物干粉；
向酶解物干粉中加入3倍重量的无水乙醇，浸提11h，用管式离心机于≥10000×g离心20min，得上清液A和沉淀物A；上清液A用旋转蒸发仪在40℃下干燥，得裙带菜低分子量多糖产品25.4g；
向沉淀物A中加入20倍重量的水，用6mol/L盐酸调pH为4，于100℃下浸提10h，用管式离心机于≥10000×g离心15min，得上清液B和沉淀物B；浓缩上清液B至原重量的1/3，加入3倍重量的无水乙醇，醇沉8h，得上清液C和沉淀物C；用真空干燥机干燥沉淀物C，控制真空度0.1MPa，温度35℃，得裙带菜高分子量多糖产品79.0g。
实施例10
将裙带菜孢子叶洗净，晒干(水分含量8％以下)，超微粉碎机反复粉碎至颗粒粒度为1.0mm以下粉末，取1公斤粉末作为原料，加入40倍重量的水，800W超声波处理30min；用6mol/L盐酸调pH为4，加入纤维素酶5g，40℃下酶解4h，将酶解液置于喷雾干燥器中干燥，得裙带菜孢子叶酶解物干粉；
向酶解物干粉中加入3倍重量的无水乙醇，浸提14h，用管式离心机于≥10000×g离心10min，得上清液A和沉淀物A；上清液A用旋转蒸发仪在60℃下干燥，得裙带菜低分子量多糖产品34.6g；
向沉淀物A中加入20倍重量的水，用6mol/L盐酸调pH为5，于100℃下浸提10h，用管式离心机于≥10000×g离心20min，得上清液B和沉淀物B；浓缩上清液B至原重量的1/5，加入3倍重量的无水乙醇，醇沉8h，得上清液C和沉淀物C；用真空干燥机干燥沉淀物C，控制真空度0.1MPa，温度60℃，得裙带菜高分子量多糖产品121.2g。
实施例11
将裙带菜孢子叶洗净，晒干(水分含量8％以下)，超微粉碎机反复粉碎至颗粒粒度为1.0mm以下粉末，取1公斤粉末作为原料，加入40倍重量的水，800W超声波处理30min；用6mol/L盐酸调pH为5，加入纤维素酶12.5g，50℃下酶解4h，将酶解液置于喷雾干燥器中干燥，得裙带菜孢子叶酶解物干粉；
向酶解物干粉中加入3倍重量的无水乙醇，浸提14h，用管式离心机于≥10000×g离心15min，得上清液A和沉淀物A；上清液A用旋转蒸发仪在50℃下干燥，得裙带菜低分子量多糖产品33.7g；
向沉淀物A中加入25倍重量的水，用6mol/L盐酸调pH为6，于100℃下浸提10h，用管式离心机于≥10000×g离心10min，得上清液B和沉淀物B；浓缩上清液B至原重量的1/4，加入3倍重量的无水乙醇，醇沉8h，得上清液C和沉淀物C；用真空干燥机干燥沉淀物C，控制真空度0.2MPa，温度85℃，得裙带菜高分子量多糖产品129.6g。
实施例12
将裙带菜孢子叶洗净，晒干(水分含量8％以下)，超微粉碎机反复粉碎至颗粒粒度为1.0mm以下粉末，取1公斤粉末作为原料，加入50倍重量的水，300W超声波处理10min；用6mol/L盐酸调pH为6，加入纤维素酶20g，50℃下酶解2h，将酶解液置于喷雾干燥器中干燥，得裙带菜孢子叶酶解物干粉；
向酶解物干粉中加入3倍重量的无水乙醇，浸提8h，用管式离心机于≥10000×g离心20min，得上清液A和沉淀物A；上清液A用旋转蒸发仪在40℃下干燥，得裙带菜低分子量多糖产品29.2g；
向沉淀物A中加入25倍重量的水，用6mol/L盐酸调pH为4，于80℃下浸提3h，用管式离心机于≥10000×g离心20min，得上清液B和沉淀物B；浓缩上清液B至原重量的1/3，加入3倍重量的无水乙醇，醇沉8h，得上清液C和沉淀物C；用真空干燥机干燥沉淀物C，控制真空度0.2MPa，温度35℃，得裙带菜高分子量多糖产品117.7g。
实施例13
将裙带菜孢子叶洗净，晒干(水分含量8％以下)，超微粉碎机反复粉碎至颗粒粒度为1.0mm以下粉末，取1公斤粉末作为原料，加入50倍重量的水，300W超声波处理20min；用4mol/L盐酸调pH为4，加入纤维素酶5g，50℃下酶解2h，将酶解液置于喷雾干燥器中干燥，得裙带菜孢子叶酶解物干粉；
向酶解物干粉中加入3倍重量的无水乙醇，浸提11h，用管式离心机于≥10000×g离心10min，得上清液A和沉淀物A；上清液A用旋转蒸发仪在60℃下干燥，得裙带菜低分子量多糖产品26.2g；
向沉淀物A中加入30倍重量的水，用4mol/L盐酸调pH为5，于90℃下浸提10h，用管式离心机于≥10000×g离心15mi n，得上清液B和沉淀物B；浓缩上清液B至原重量的1/5，加入3倍重量的无水乙醇，醇沉12h，得上清液C和沉淀物C；用真空干燥机干燥沉淀物C，控制真空度0.2MPa，温度60℃，得裙带菜高分子量多糖产品109.1g。
实施例14
将裙带菜孢子叶洗净，晒干(水分含量8％以下)，超微粉碎机反复粉碎至颗粒粒度为1.0mm以下粉末，取1公斤粉末作为原料，加入50倍重量的水，300W超声波处理30min；用4mol/L盐酸调pH为5，加入纤维素酶12.5g，50℃下酶解4h，将酶解液置于喷雾干燥器中干燥，得裙带菜孢子叶酶解物干粉；
向酶解物干粉中加入3倍重量的无水乙醇，浸提14h，用管式离心机于≥10000×g离心15min，得上清液A和沉淀物A；上清液A用旋转蒸发仪在50℃下干燥，得裙带菜低分子量多糖产品36.4g；
向沉淀物A中加入20倍重量的水，用4mol/L盐酸调pH为6，于80℃下浸提3h，用管式离心机于≥10000×g离心10min，得上清液B和沉淀物B；浓缩上清液B至原重量的1/4，加入3倍重量的无水乙醇，醇沉10h，得上清液C和沉淀物C；用真空干燥机干燥沉淀物C，控制真空度0.2MPa，温度85℃，得裙带菜高分子量多糖产品122.8g。
实施例15
将裙带菜孢子叶洗净，晒干(水分含量8％以下)，超微粉碎机反复粉碎至颗粒粒度为1.0mm以下粉末，取1公斤粉末作为原料，加入50倍重量的水，300W超声波处理30min；用4mol/L盐酸调pH为6，加入纤维素酶20g，50℃下酶解2h，将酶解液置于喷雾干燥器中干燥，得裙带菜孢子叶酶解物干粉；
向酶解物干粉中加入3倍重量的无水乙醇，浸提14h，用管式离心机于≥10000×g离心20min，得上清液A和沉淀物A；上清液A用旋转蒸发仪在40℃下干燥，得裙带菜低分子量多糖产品42.3g；
向沉淀物A中加入25倍重量的水，用4mol/L盐酸调pH为4，于80℃下浸提6.5h，用管式离心机于≥10000×g离心20min，得上清液B和沉淀物B；浓缩上清液B至原重量的1/3，加入3倍重量的无水乙醇，醇沉12h，得上清液C和沉淀物C；用真空干燥机干燥沉淀物C，控制真空度0.2MPa，温度35℃，得裙带菜高分子量多糖产品136.8g。
实施例16
将裙带菜孢子叶洗净，晒干(水分含量8％以下)，超微粉碎机反复粉碎至颗粒粒度为1.0mm以下粉末，取1公斤粉末作为原料，加入50倍重量的水，550W超声波处理10min；用4mol/L盐酸调pH为4，加入纤维素酶5g，60℃下酶解3h，将酶解液置于喷雾干燥器中干燥，得裙带菜孢子叶酶解物干粉；
向酶解物干粉中加入3倍重量的无水乙醇，浸提8h，用管式离心机于≥10000×g离心10min，得上清液A和沉淀物A；上清液A用旋转蒸发仪在60℃下干燥，得裙带菜低分子量多糖产品42.6g；
向沉淀物A中加入20倍重量的水，用4mol/L盐酸调pH为5，于80℃下浸提6.5h，用管式离心机于≥10000×g离心15min，得上清液B和沉淀物B；浓缩上清液B至原重量的1/5，加入3倍重量的无水乙醇，醇沉10h，得上清液C和沉淀物C；用真空干燥机干燥沉淀物C，控制真空度0.2MPa，温度60℃，得裙带菜高分子量多糖产品128.3g。
实施例17
将裙带菜孢子叶洗净，晒干(水分含量8％以下)，超微粉碎机反复粉碎至颗粒粒度为1.0mm以下粉末，取1公斤粉末作为原料，加入50倍重量的水，550W超声波处理20min；用8mol/L盐酸调pH为5，加入纤维素酶12.5g，50℃下酶解3h，将酶解液置于喷雾干燥器中干燥，得裙带菜孢子叶酶解物干粉；
向酶解物干粉中加入3倍重量的无水乙醇，浸提11h，用管式离心机于≥10000×g离心15min，得上清液A和沉淀物A；上清液A用旋转蒸发仪在50℃下干燥，得裙带菜低分子量多糖产品37.1g；
向沉淀物A中加入25倍重量的水，用8mol/L盐酸调pH为6，于90℃下浸提6.5h，用管式离心机于≥10000×g离心10min，得上清液B和沉淀物B；浓缩上清液B至原重量的1/4，加入3倍重量的无水乙醇，醇沉12h，得上清液C和沉淀物C；用真空干燥机干燥沉淀物C，控制真空度0.2MPa，温度60℃，得裙带菜高分子量多糖产品128.5g。
实施例18
将裙带菜孢子叶洗净，晒干(水分含量8％以下)，超微粉碎机反复粉碎至颗粒粒度为1.0mm以下粉末，取1公斤粉末作为原料，加入50倍重量的水，800W超声波处理10min；用8mol/L盐酸调pH为6，加入纤维素酶20g，50℃下酶解4h，将酶解液置于喷雾干燥器中干燥，得裙带菜孢子叶酶解物干粉；
向酶解物干粉中加入3倍重量的无水乙醇，浸提8h，用管式离心机于≥10000×g离心20min，得上清液A和沉淀物A；上清液A用旋转蒸发仪在40℃下干燥，得裙带菜低分子量多糖产品38.9g；
向沉淀物A中加入25倍重量的水，用8mol/L盐酸调pH为4，于100℃下浸提3h，用管式离心机于≥10000×g离心20min，得上清液B和沉淀物B；浓缩上清液B至原重量的1/3，加入3倍重量的无水乙醇，醇沉10h，得上清液C和沉淀物C；用真空干燥机干燥沉淀物C，控制真空度0.2MPa，温度85℃，得裙带菜高分子量多糖产品128.3g。
实施例19
将裙带菜孢子叶洗净，晒干(水分含量8％以下)，超微粉碎机反复粉碎至颗粒粒度为1.0mm以下粉末，取1公斤粉末作为原料，加入50倍重量的水，800W超声波处理20min；用8mol/L盐酸调pH为4，加入纤维素酶5g，40℃下酶解4h，将酶解液置于喷雾干燥器中干燥，得裙带菜孢子叶酶解物干粉；
向酶解物干粉中加入3倍重量的无水乙醇，浸提11h，用管式离心机于≥10000×g离心10min，得上清液A和沉淀物A；上清液A用旋转蒸发仪在60℃下干燥，得裙带菜低分子量多糖产品34.0g；
向沉淀物A中加入25倍重量的水，用8mol/L盐酸调pH为5，于100℃下浸提10h，用管式离心机于≥10000×g离心15min，得上清液B和沉淀物B；浓缩上清液B至原重量的1/5，加入3倍重量的无水乙醇，醇沉8h，得上清液C和沉淀物C；用真空干燥机干燥沉淀物C，控制真空度0.2MPa，温度35℃，得裙带菜高分子量多糖产品126.4g。
实施例20
将裙带菜孢子叶洗净，晒干(水分含量8％以下)，超微粉碎机反复粉碎至颗粒粒度为1.0mm以下粉末，取1公斤粉末作为原料，加入50倍重量的水，800W超声波处理30min；用8mol/L盐酸调pH为5，加入纤维素酶12.5g，40℃下酶解3h，将酶解液置于喷雾干燥器中干燥，得裙带菜孢子叶酶解物干粉；
向酶解物干粉中加入3倍重量的无水乙醇，浸提8h，用管式离心机于≥10000×g离心15min，得上清液A和沉淀物A；上清液A用旋转蒸发仪在50℃下干燥，得裙带菜低分子量多糖产品28.1g；
向沉淀物A中加入20倍重量的水，用8mol/L盐酸调pH为6，于100℃下浸提10h，用管式离心机于≥10000×g离心10min，得上清液B和沉淀物B；浓缩上清液B至原重量的1/4，加入3倍重量的无水乙醇，醇沉10h，得上清液C和沉淀物C；用真空干燥机干燥沉淀物C，控制真空度0.2MPa，温度35℃，得裙带菜高分子量多糖产品119.4g。
实施例21
将裙带菜孢子叶洗净，晒干(水分含量8％以下)，超微粉碎机反复粉碎至颗粒粒度为1.0mm以下粉末，取1公斤粉末作为原料，加入60倍重量的水，300W超声波处理10min；用8mol/L盐酸调pH为6，加入纤维素酶20g，60℃下酶解2h，将酶解液置于喷雾干燥器中干燥，得裙带菜孢子叶酶解物干粉；
向酶解物干粉中加入3倍重量的无水乙醇，浸提11h，用管式离心机于≥10000×g离心20min，得上清液A和沉淀物A；上清液A用旋转蒸发仪在40℃下干燥，得裙带菜低分子量多糖产品44.0g；
向沉淀物A中加入25倍重量的水，用8mol/L盐酸调pH为4，于80℃下浸提3h，用管式离心机于≥10000×g离心20min，得上清液B和沉淀物B；浓缩上清液B至原重量的1/3，加入3倍重量的无水乙醇，醇沉8h，得上清液C和沉淀物C；用真空干燥机干燥沉淀物C，控制真空度0.15MPa，温度60℃，得裙带菜高分子量多糖产品137.5g。
实施例22
将裙带菜孢子叶洗净，晒干(水分含量8％以下)，超微粉碎机反复粉碎至颗粒粒度为1.0mm以下粉末，取1公斤粉末作为原料，加入60倍重量的水，300W超声波处理20min；用6mol/L盐酸调pH为4，加入纤维素酶5g，40℃下酶解2h，将酶解液置于喷雾干燥器中干燥，得裙带菜孢子叶酶解物干粉；
向酶解物干粉中加入3倍重量的无水乙醇，浸提11h，用管式离心机于≥10000×g离心10min，得上清液A和沉淀物A；上清液A用旋转蒸发仪在60℃下干燥，得裙带菜低分子量多糖产品40.7g；
向沉淀物A中加入30倍重量的水，用6mol/L盐酸调pH为5，于90℃下浸提3h，用管式离心机于≥10000×g离心15mi n，得上清液B和沉淀物B；浓缩上清液B至原重量的1/5，加入3倍重量的无水乙醇，醇沉12h，得上清液C和沉淀物C；用真空干燥机干燥沉淀物C，控制真空度0.15MPa，温度85℃，得裙带菜高分子量多糖产品133.2g。
实施例23
将裙带菜孢子叶洗净，晒干(水分含量8％以下)，超微粉碎机反复粉碎至颗粒粒度为1.0mm以下粉末，取1公斤粉末作为原料，加入60倍重量的水，300W超声波处理30min；用6mol/L盐酸调pH为5，加入纤维素酶12.5g，60℃下酶解2h，将酶解液置于喷雾干燥器中干燥，得裙带菜孢子叶酶解物干粉；
向酶解物干粉中加入3倍重量的无水乙醇，浸提14h，用管式离心机于≥10000×g离心15min，得上清液A和沉淀物A；上清液A用旋转蒸发仪在50℃下干燥，得裙带菜低分子量多糖产品44.5g；
向沉淀物A中加入30倍重量的水，用6mo l/L盐酸调pH为6，于80℃下浸提6.5h，用管式离心机于≥10000×g离心10min，得上清液B和沉淀物B；浓缩上清液B至原重量的1/4，加入3倍重量的无水乙醇，醇沉10h，得上清液C和沉淀物C；用真空干燥机干燥沉淀物C，控制真空度0.15MPa，温度35℃，得裙带菜高分子量多糖产品140.2g。
实施例24
将裙带菜孢子叶洗净，晒干(水分含量8％以下)，超微粉碎机反复粉碎至颗粒粒度为1.0mm以下粉末，取1公斤粉末作为原料，加入60倍重量的水，550W超声波处理10min；用6mol/L盐酸调pH为6，加入纤维素酶20g，60℃下酶解3h，将酶解液置于喷雾干燥器中干燥，得裙带菜孢子叶酶解物干粉；
向酶解物干粉中加入3倍重量的无水乙醇，浸提8h，用管式离心机于≥10000×g离心20min，得上清液A和沉淀物A；上清液A用旋转蒸发仪在40℃下干燥，得裙带菜低分子量多糖产品38.6g；
向沉淀物A中加入30倍重量的水，用6mol/L盐酸调pH为4，于90℃下浸提3h，用管式离心机于≥10000×g离心20min，得上清液B和沉淀物B；浓缩上清液B至原重量的1/3，加入3倍重量的无水乙醇，醇沉12h，得上清液C和沉淀物C；用真空干燥机干燥沉淀物C，控制真空度0.15MPa，温度60℃，得裙带菜高分子量多糖产品130.5g。
实施例25
将裙带菜孢子叶洗净，晒干(水分含量8％以下)，超微粉碎机反复粉碎至颗粒粒度为1.0mm以下粉末，取1公斤粉末作为原料，加入60倍重量的水，550W超声波处理20min；用6mol/L盐酸调pH为4，加入纤维素酶5g，40℃下酶解4h，将酶解液置于喷雾干燥器中干燥，得裙带菜孢子叶酶解物干粉；
向酶解物干粉中加入3倍重量的无水乙醇，浸提11h，用管式离心机于≥10000×g离心10min，得上清液A和沉淀物A；上清液A用旋转蒸发仪在50℃下干燥，得裙带菜低分子量多糖产品40.6g；
向沉淀物A中加入25倍重量的水，用6mol/L盐酸调pH为5，于90℃下浸提10h，用管式离心机于≥10000×g离心15min，得上清液B和沉淀物B；浓缩上清液B至原重量的1/5，加入3倍重量的无水乙醇，醇沉12h，得上清液C和沉淀物C；用真空干燥机干燥沉淀物C，控制真空度0.15MPa，温度85℃，得裙带菜高分子量多糖产品126.2g。
实施例26
将裙带菜孢子叶洗净，晒干(水分含量8％以下)，超微粉碎机反复粉碎至颗粒粒度为1.0mm以下粉末，取1公斤粉末作为原料，加入60倍重量的水，550W超声波处理30min；用6mol/L盐酸调pH为5，加入纤维素酶12.5g，60℃下酶解3h，将酶解液置于喷雾干燥器中干燥，得裙带菜孢子叶酶解物干粉；
向酶解物干粉中加入3倍重量的无水乙醇，浸提14h，用管式离心机于≥10000×g离心15min，得上清液A和沉淀物A；上清液A用旋转蒸发仪在40℃下干燥，得裙带菜低分子量多糖产品44.3g；
向沉淀物A中加入20倍重量的水，用6mol/L盐酸调pH为6，于100℃下浸提3h，用管式离心机于≥10000×g离心10min，得上清液B和沉淀物B；浓缩上清液B至原重量的1/4，加入3倍重量的无水乙醇，醇沉8h，得上清液C和沉淀物C；用真空干燥机干燥沉淀物C，控制真空度0.15MPa，温度35℃，得裙带菜高分子量多糖产品143.6g。
实施例27
将裙带菜孢子叶洗净，晒干(水分含量8％以下)，超微粉碎机反复粉碎至颗粒粒度为1.0mm以下粉末，取1公斤粉末作为原料，加入60倍重量的水，800W超声波处理30min；用6mol/L盐酸调pH为6，加入纤维素酶20g，40℃下酶解4h，将酶解液置于喷雾干燥器中干燥，得裙带菜孢子叶酶解物干粉；
向酶解物干粉中加入3倍重量的无水乙醇，浸提8h，用管式离心机于≥10000×g离心20min，得上清液A和沉淀物A；上清液A用旋转蒸发仪在60℃下干燥，得裙带菜低分子量多糖产品39.1g；
向沉淀物A中加入30倍重量的水，用6mol/L盐酸调pH为4，于100℃下浸提10h，用管式离心机于≥10000×g离心20min，得上清液B和沉淀物B；浓缩上清液B至原重量的1/3，加入3倍重量的无水乙醇，醇沉8h，得上清液C和沉淀物C；用真空干燥机干燥沉淀物C，控制真空度0.15MPa，温度60℃，得裙带菜高分子量多糖产品131.0g。
实施例28
将裙带菜孢子叶洗净，晒干(水分含量8％以下)，超微粉碎机反复粉碎至颗粒粒度为1.0mm以下粉末，取1公斤粉末作为原料，加入60倍重量的水，800W超声波处理30min；用6mol/L盐酸调pH为4，加入纤维素酶5g，60℃下酶解4h，将酶解液置于喷雾干燥器中干燥，得裙带菜孢子叶酶解物干粉；
向酶解物干粉中加入3倍重量的无水乙醇，浸提14h，用管式离心机于≥10000×g离心10min，得上清液A和沉淀物A；上清液A用旋转蒸发仪在50℃下干燥，得裙带菜低分子量多糖产品39.8g；
向沉淀物A中加入30倍重量的水，用6mol/L盐酸调pH为5，于100℃下浸提10h，用管式离心机于≥10000×g离心15min，得上清液B和沉淀物B；浓缩上清液B至原重量的1/5，加入3倍重量的无水乙醇，醇沉12h，得上清液C和沉淀物C；用真空干燥机干燥沉淀物C，控制真空度0.15MPa，温度85℃，得裙带菜高分子量多糖产品135.4g。
实施例29
将裙带菜孢子叶洗净，晒干(水分含量8％以下)，超微粉碎机反复粉碎至颗粒粒度为1.0mm以下粉末，取1公斤粉末作为原料，加入60倍重量的水，800W超声波处理30min；用6mol/L盐酸调pH为5，加入纤维素酶12.5g，60℃下酶解4h，将酶解液置于喷雾干燥器中干燥，得裙带菜孢子叶酶解物干粉；
向酶解物干粉中加入3倍重量的无水乙醇，浸提14h，用管式离心机于≥10000×g离心15min，得上清液A和沉淀物A；上清液A用旋转蒸发仪在40℃下干燥，得裙带菜低分子量多糖产品41.2g；
向沉淀物A中加入20倍重量的水，用6mol/L盐酸调pH为6，于90℃下浸提6.5h，用管式离心机于≥10000×g离心10min，得上清液B和沉淀物B；浓缩上清液B至原重量的1/4，加入3倍重量的无水乙醇，醇沉10h，得上清液C和沉淀物C；用真空干燥机干燥沉淀物C，控制真空度0.15MPa，温度35℃，得裙带菜高分子量多糖产品129.2g。
Claims (1)
1.一种提取裙带菜孢子叶多糖的方法，其步骤如下：
A.原料及处理：将水分含量8-10％以下裙带菜孢子叶，粉碎至颗粒粒度为1.0mm以下的粉末作为原料；向粉末中加入40-60倍重量的水，用300-800W超声波处理10-30min；用4-8mol/L盐酸调pH为4-6，加入原料重量0.5-2.0％的纤维素酶，40-60℃下酶解2-4小时；将酶解液置于喷雾干燥器中干燥，得裙带菜孢子叶酶解物干粉；
B.低分子量多糖提取：向酶解物干粉中加入3-5倍重量的无水乙醇，浸提8-14小时，用管式离心机于≥10000×g离心10-20min，得上清液A和沉淀物A；上清液A用旋转蒸发仪在40-60℃下干燥，得裙带菜孢子叶低分子量多糖；
C.高分子量多糖的提取：向沉淀物A中加入20-30倍重量的水，用4-8mol/L盐酸调pH为4-6，于80-100℃下浸提3-10小时，用管式离心机于≥10000×g离心10-20min，得上清液B和沉淀物B；浓缩上清液B至原体积的1/5-1/3，加入3-5倍重量的无水乙醇，醇沉8-12小时，得上清液C和沉淀物C；用真空干燥机干燥沉淀物C，控制真空度0.1-0.2MPa，温度35-85℃，得裙带菜孢子叶高分子量多糖。
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