CN107743394A - 用于培养串珠顶丝藻红藻的细胞的方法、用于获得其生物质的提取物的方法、以及其在化妆品中的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种用于获得小的多细胞大型藻类的细胞的单种藻生物质的方法，该方法包括以下连续步骤：从取自天然环境的微藻样品制备多细胞大型藻类的细胞的单种藻样品的步骤A)；在其中加入至少一种氮源的海水中培养在步骤A)中获得的该多细胞大型藻类的细胞的单种藻样品，以便获得该小的多细胞大型藻类的细胞的单种藻生物质的水性悬浮液的步骤B)；从在步骤B)结束时获得的该水性悬浮液中收获该小的多细胞大型藻类的细胞的单种藻生物质的步骤C)；以及生产在步骤C)中获得的该小的多细胞大型藻类的细胞的单种藻生物质的粉末的步骤D)。本发明还涉及上述生物质的乙醇酸提取物、用于生产所述提取物的方法、其在化妆品和药物中的用途、以及含有所述提取物的组合物。

Description

用于培养串珠顶丝藻红藻的细胞的方法、用于获得其生物质 的提取物的方法、以及其在化妆品中的用途
本发明的主题是一种新颖的小的多细胞大型藻类的细胞的单种藻生物质的提取物，其制备方法以及还有其作为化妆品活性剂的用途，以及包含该提取物的用于局部使用的化妆品、药物和皮肤药物组合物。
由于人体皮肤构成了提供给其他人的第一印象，因此改善其外观通常是人类的关注主题。皮肤是幸福状态的反映，通常与洁净/光泽的皮肤相关，或者相反，是疲劳和/或疏忽的状态的反映，通常与油性/油光的皮肤有关。
油性皮肤与称为高皮脂症或皮脂分泌过多的生物现象有关，定义为由皮肤皮脂腺的异常高的皮脂产生。这种在皮肤表面处流动的皮脂因此使其具有“油光”的难看的特征。这种高皮脂症通常与激素睾酮的过量存在相关，其一旦在皮脂腺中被5-α还原酶转化成二氢睾酮(DHT)，二氢睾酮结合到存在于皮脂细胞中的受体并激活皮脂合成。高皮脂症伴有毛囊角化过度，其特征在于毛囊漏斗中角质形成细胞的数量增加，这导致毛囊通道阻塞并使皮脂流动困难。这导致皮脂的积累，其有益于厌氧细菌痤疮丙酸杆菌的发展。后者会引起炎症现象的出现。所有这些现象都导致特征性临床症状的出现，如粉刺，特征为痤疮皮肤。
因此，油性皮肤是寻常痤疮(通常称为痤疮)现象的前兆状态，其是独有的皮脂腺毛囊的人类慢性炎性皮肤病。这种通常由侵袭性发展的病理病症通常从青春期开始，并在青春期结束时停止。然而，虽然85％的从12至24岁的青少年受到影响，要求特别且适当的处理，但最高达44的岁的12％的女性和3％的男性也患有痤疮，或至少易发痤疮的油性皮肤。
由于皮脂腺附着在毛发上(涉及皮脂腺毛囊)，所以以前描述的现象可能导致油性头皮的状态并且导致形成特征为油性头皮屑的可见临床征状。
因此，“皮肤净化”有效成分可以作用于各种现象：
-通过除其他之外干预DHT的量的试剂的高皮脂症；
-通过除其他之外限制角质形成细胞分化的试剂的毛囊角化过度；
-通过除其他之外具有抗菌/抑菌性质的试剂的痤疮丙酸杆菌的增殖。
在WO 2008/046791 A1号下公开的国际申请披露了使用1,2-癸二醇作为用于降低皮肤上的皮脂浓度的试剂，以及与抗生素如四环素或类视色素如视网膜或视黄酸相比，这种使用用于获得令人满意的皮肤净化或抗痤疮作用的用途的优点。
这些不同的试剂具有以下缺点：对皮肤相当有应力的，引起皮肤反应例如干燥，或者另外不足够有效。
藻类是生活在水中或非常潮湿环境中的光合叶绿素生物体。它们可以在海水、淡水、盐水中，在停滞的、搅动的或湍流环境中发展。藻类可以是单细胞或多细胞的，它们可以是褐色、绿色或红色，并且根据细胞学和生物化学目的特征被分类。这些生物体在全球范围内起着重要的作用，因为它们构成了营养网络的基础，并且它们参与大气中的氧气的生产和二氧化碳的固定。
大型藻类是真核多细胞藻类，通常肉眼可见并且经常被描述为大型植物。它们可以有性或无性繁殖；在某些物种中，这两种繁殖方式在生命周期过程中相互依存。生命周期可以包括一代，或两代或三代的交替。将分别提及单性、二性或三性周期。
根据生命周期的类型，物种可以是呈配子体、孢子体、果孢子体或四孢子体的形式。在一个周期中，这些不同的生命形式可以具有相同的形态并且因此是同态的，或者具有不同的形态并且因此是异态的。
形态上的差异可能非常显著，使得对于不知情的人来说，不可能将两种生命形式附加到同一物种上。这种差异也可能由于藻类的大小而标记，一种生命形式可能是宏观的，而另一种生命形式可能是微观的。例如，裙带菜的孢子体测量接近1米，而该藻类的配子体测量数十微米。
存在大约二千种褐藻物种、七千种红藻物种和一千七百种绿藻物种。
在顶丝藻属藻类的情况下，大型藻类测量数十微米，对于巨藻海带物种为约一百米。
红藻纲，也称为红藻科，属于红藻门植物分支。红藻纲红藻科包含以下目：顶丝藻目(Acrochaetiales)、Acrosymphytales、伊谷藻目(Ahnfeltiales)、巴尔比亚藻目(Balbianiales)、Balliales、串珠藻目(Batrachospermales)、柏桉藻目(Bonnemaisoniales)、仙菜目(Ceramiales)、Colaconematales、珊瑚藻目(Corallinales)、Entwisleiales、红藻纲目(Florideophyceae incertae sedis)、石花菜目(Gelidiales)、杉藻目(Gigartinales)、江蓠目(Gracilariales)、海膜藻目(Halymeniales)、胭脂藻目(Hildenbrandiales)、海索面目(Nemaliales)、Nemastomatales、藻目(Palmariales)、耳壳藻目(Peyssonneliales)、Pihiellales、海头红目(Plocamiales)、Rhodachlyales、Rhodogorgonales、红皮藻目(Rhodymeniales)、Sebdeniales、Sporolithales和红索藻目(Thoreales)。
红藻含有在其他植物中遇到的颜料，如叶绿素a和类胡萝卜素，但它们的原创性在于藻红蛋白：别藻蓝蛋白(蓝)、藻青蛋白(蓝)和产生红色颜色的藻红蛋白的存在。叶绿体的组织将红藻与灰藻和蓝藻区分开来。
红藻的色素淀积部分取决于到达藻类的光的波长。在深处，红藻积累了大量的藻红蛋白，可以在这个深度吸收光的色素。在表面处，相对于叶绿素和其他藻胆蛋白，红色色素的比率降低，并且它们变得更绿，尽管它们的名称；这被称为色适应。
在CN 102475664 A号下公开的中国专利申请披露了含有用于调节皮脂或孔收缩的藻类纤维的化妆品组合物。
红藻石花菜属和掌形藻属(Palmaria)被最广泛地描述为用作调节油性皮肤状况的试剂。因此，在P2005-47910 A号下公开的日本专利申请披露了在化妆品中、在食品中或作为药物使用因其皮脂分泌抑制特性的各种红藻，例如石花菜、山茶石花菜(Gelidiumjaponica)和掌形藻。在CN 102525864 A号下公开的中国专利申请就其本身而言披露了使用源自海鲜的肽、与来自石花菜的藻类多糖配合、以及还有与作为抗痤疮活性剂的珍珠粉配合。在2007 089309号下公开的韩国专利申请披露了一种用于制备石花菜浓缩物的方法，以获得具有抗微生物、抗氧化和抗癌特性的特定分子尺寸的低聚糖。
然而，石花菜目和藻目的红藻不仅仅因为它们的皮肤净化特性而已知。在101409764 A号下公开的韩国专利申请披露了使用可以在化妆品或营养品中使用的具有已经经历乳酸发酵过程的石花菜提取物作为抗皱成分。在2 911 278号下公开的法国专利申请披露了使用富含糖的掌形藻(Palmaria palmata)提取物作为脱色素化妆品活性剂。
在一万种不同的大型藻类物种中，今天它们中的只有约一百种提供经济优势。因此，某些食品微藻，产生水状胶体的藻类和产生具有生物活性的分子的藻类已成为广泛研究的主题，以便更好地了解其生理、其代谢及其繁殖。
在用于人类消耗的食物中使用的藻类，如裙带菜(Undaria pinnatifida)，更通常称为“裙带菜(Wakame)”，海带(Laminaria japonica)，也称为海带(Kombu)，条斑紫菜(Porphyra yezoensis)，也称为紫菜(Nori)和肠浒苔(Enteromorpha intestinalis)，也称为浒苔(Ao nori)，已经被研究以便掌握其培养。
由藻类如角叉菜、珊瑚藻属和麒麟菜生产的水状胶体主要用作食品和化妆品中的增稠剂和胶凝剂。生产这些聚合物的生物质具有确定的经济利益[Ronelie C.等人在：“Non-enzymatic isolation of somatic cells from Kappaphycus spp.and Eucheumadenticulatum(Solieriaceae,Rhodophyta)[来自珊瑚藻属和麒麟菜(红翎菜科，红藻植物门)的体细胞的非酶促分离]”；Eur.J.Phycol.[欧洲生物学杂志](2014),49(4):486-492]。在这方面，Clinton J.Dawes等人披露了一种用于获得红藻麒麟菜和长心卡帕藻的细胞的单种藻生物质的方法；从取自天然环境的样品及其用于收获生物质的培养物[ClintonJ.Dawes等人在：“Branch,micropropagule and tissue culture of the red algaeEucheuma denticulatum and Kappaphycus alvarezii farmed in the Philippines[在菲律宾养殖的红藻麒麟菜和长心卡帕藻的分支、微型繁殖体和组织培养]”，Journal ofapplied Phycology[应用藻类学杂志]3:247-257,1991]。同样如此的是Myounghoon等人在红藻(red alga)红藻(Galdieria sulphuraria)的情况下[Myounghoon等人在：“Isolationand characterization of thermostable phycocyanin from Galdieria sulphuraria[来自红藻的热稳定的藻青蛋白的分离和表征]”，Korean J.Chem.Eng.[韩国化学工程杂志],31(3),490-495]。
已经研究了绿藻Acrosiphonia coalita、褐藻阔叶巨藻(Laminaria saccharina)和红藻温带红藻(Agardhiella subulata)、热带红藻(Ochtodes secundiramea)和松香藻(Portieria hornemannii)的生物反应器中的培养，目的是合成具有生物活性的分子[Gregory L.Rorrer等人Production of bioactive metabolites by cell and tissuecultures of marine macroalgae in bioreactor systems[通过生物反应器系统中的海洋大型藻类的细胞和组织培养生产生物活性代谢物].Fu等人编辑的Plant Cell andTissue Culture for the Production of Food Ingredients[用于食品成分的生产的植物细胞和组织培养]克鲁维尔学术出版社/普莱南出版社(Kluwer Academic/PlenumPublishers)，纽约，1999]。
其中一些是基于知识以及基于对大型藻类的生殖循环的控制。例如，在海带目中，可以观察到发育成菌体的宏观二倍体孢子体与微观单倍体雄性和雌性配子体之间的交替。成熟的能生育的孢子体产生游离的孢子，其变得沉积在固体基质上并产生配子体。他们的生命周期的研究，如裙带菜(Undaria pinnatifida)，更通常称为“裙带菜(Wakame)”，海带(Laminaria japonica)，也称为海带(Kombu)的生命周期的研究，使得有可能发展配子体的培养，这些藻类的微观生命形式，用于接种支持物，在其上发展可以在用于人类消耗的食物中利用的宏观孢子体。这些藻类的培养首先在用于培养微观生命形式的实验室中进行，并且然后在用于产生可被消耗的宏观生命形式的自然环境中进行。
20世纪80年代，海带目的褐藻(诸如裙带菜)的孢子体的培养的发展导致被称为“自由生活”的配子体培养技术的发展，其包括收获成熟孢子体，引起孢子形成，捕获孢子，形成配子体并且然后培养它们，目的是创造在受精后会引起新的孢子体的配子(R.Perez等人，1984)。
阔叶巨藻孢子体的培养的发展也需要开发一种培养其配子体的方法，其方式类似于裙带菜培养物(Undaria pinnatifida culture)[C.Zhi,G.L.Rorrer.Photolithotrophic cultivation of Laminaria saccharina gametophytecells in a bubble-column bioreactor[在气泡塔生物反应器中的阔叶巨藻配子体细胞的光自养培养].Enzyme and Microbial Technology[酶和微生物技术].第18卷，第4期，1996年3月，第291-299页]。
同样，为了实验研究的目的，H.Stegenga等人通过培养串珠顶丝藻属(Chromastrum moniliforme样品)，分离这些藻类的隔离的配子体和四孢子体[H.Stegenga等人在：“Remarks on the Audouinella microscopicaWoekerling complex,witha brief survey of the genus chromastrum papenfuss(Rhodophyta,Nemaliales)(关于斑点旋体藻Woekerling复合物的评论，其中简单调查了顶丝藻属(红藻植物门，海索面目))”,Acta Bot.Neerl.[植物生物学]28(4/5)，1979年8月，第289-311页]。
在CN 103858745 A号下公开的中国专利申请披露了通过以下方式发展萱藻的人工培养：控制藻类的种质的分化步骤，以便产生成熟的单胞孢子囊，然后引起其孢子形成，目的是接种培养支持物，为了在海洋中产生宏观萱藻的生物质的目的。
在CN 103931482 A号下公开的中国专利申请披露了一种用于获得红藻条斑紫菜的配子体的菌体的方法，其用于人类消耗、特别是玛基(maki)的食物中，首先涉及藻类的丝状体阶段的体外培养以产生将附着于培养支持物上从而使菌体在海洋中生长的壳孢子。
其他方法涉及从红藻的外植体诱导愈伤组织，所述愈伤组织导致然后在生物反应器中培养的小植株的发育。在此上下文中，可以提及的是Ronélie等人的研究[Ronelie C.等人Non-enzymatic isolation of somatic cells from Kappaphycus spp.andEucheuma denticulatum(Solieriaceae,Rhodophyta),Eur.J.Phycol.(2014),49(4):486-492]；J.Munoz的那些[J.Munoz.Use of plant growth regulators in micropropagationof Kappaphycus alvarezii(Doty)in airlift bioreactors[在气升式生物反应器中在长心卡帕藻(Doty)的微体繁殖中使用植物生长调节剂].J Appl Phycol[应用藻类学杂志](2006)18:209-218]或Maliakal等人的那些[S.Maliakal,D.Cheney.Halogenatedmonoterpenes production in regenerated plantlet cultures of Ochtodessecundiramea.[在热带红藻的再生植株培养物中的卤代单萜生产]J.Phycol.[藻类学杂志]37,1010-1019(2001)]。
其他方法涉及从菌体生产原生质体，目的是如Rusig等人提出的，在肠浒苔的情况下，使用用于人类消耗的食物和动物饲料中的藻类，使得能够消化藻类菌体细胞的壁的来自雨虎属的含有纤维素和酶的酶促混合物，重新形成新的菌体。其壁被消化的培养物称为原生质体[A Rusig&J.Cosson,Plant regeneration from protoplasts of Enteromorphaintestinalis(Chlorophyta,Ulvophyceae)as seedstock for macroagal culture[从作为大型藻类培养物的种子储备的肠浒苔(绿藻门，石莼纲)的原生质体的植物再生].Journal of Applied Phycology 13:103-108,2001]。
由于小的多细胞藻类在自然界中不足够丰富以使得能够从环境中进行收获，并且它们的小尺寸使得难以鉴定所希望物种并且还特定地收获给定物种，诸位发明人已经努力开发一种新颖的方法，该方法使得能够获得小的多细胞大型藻类的细胞的单种藻生物质，以便能够从其中提取可用于化妆品中的有效成分。
他们已经开发了一种可用于生物反应器中的方法，该方法不需要具有无菌外植体并且不涉及植物激素或酶。
根据第一方面，本发明的主题是一种用于获得小的多细胞大型藻类的细胞的单种藻生物质的方法，该方法包括以下连续步骤：
-从获自天然环境的大型藻类样品制备多细胞大型藻类的细胞的单种藻样品的步 骤A)；
-在其中加入至少一种氮源的海水中培养在步骤A)中获得的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻样品，以便获得小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质的水性悬浮液的步骤B)；
-从在步骤B)结束时获得的所述水性悬浮液中收获小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质的步骤C)；
-制备在步骤C)中获得的小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质的粉末的步骤D)。
术语“小的多细胞大型藻类”表示，在如上定义的方法中，测量在30μm与3cm之间并以细胞团组织的多细胞大型藻类。这个小的多细胞大型藻类不同于大的多细胞大型藻类，因为后者测量在5cm与20cm之间并以组织样的方式组织。
作为在如上定义的方法的步骤A)中使用的取自天然环境的大型藻类的样品，特别表示的是取自海水的样品，无论它是海水样品，在固体基质例如岩石、砂、贝壳或沉积物的表面处取得的样品，或另外人造支持物如船体、驳船或海堤；它也可以是在其他植物(附生植物或内生植物)例如藻类或海洋植物的表面处或从内部取得的样品，或在动物(附生真菌或内生真菌)例如海绵、刺细胞动物、原索动物(prochordate)、棘皮动物、软体动物、节肢动物、环节动物或海洋脊椎动物的表面处或在内部取得的样品。
在如上定义的方法的步骤A)中使用的取自天然环境的大型藻类的样品通常在生物多样性上非常丰富并且包含生物体的大量选择，例如小动物、原生动物、原核微藻、真核微藻和多细胞大型藻类。
术语“多细胞大型藻类的细胞的单种藻样品”意指在如上定义的方法中含有仅一种多细胞藻类物种的培养物。
根据如上定义的方法的步骤A)，通过将目标大型藻类与其他生物体目标藻类分离获得小的多细胞大型藻类的细胞的单种藻样品。为此目的，可以实施物理分离手段和/或化学分离手段。
作为物理分离手段，有例如通过使用毛细管末端的玻璃移液管进行的分离，以在显微镜下或在双目放大镜下视觉控制操作的同时分割目标的小的多细胞大型藻类的一些细胞。还有通过从天然样品中连续稀释目标物种的细胞的分离。
作为化学分离手段，有例如使用抗生素来消除蓝藻细菌类型的微藻或二氧化锗的微藻以消除硅藻类型的微藻。
将各种分离手段组合以获得最佳隔离结果。所有的物理和化学隔离方法都是在半透明的容器中进行的，这些容器允许光通过，含有无菌海水，含有浓度为在50mg/dm3与250mg/dm3之间、优选150mg/dm3的至少一种氮源如硝酸钠(NaNO3)，和浓度为在5mg/dm3与75mg/dm3之间，优选50mg/dm3的磷源如磷酸二氢钠(NaH2PO4)。还可以通过添加例如以所希望比例的营养培养基，例如具有以下组成的Provasoli培养基，将另外的矿物元素添加到海水中：
如上定义的方法的步骤B)的实施是在光生物反应器中进行的，该光生物反应器含有海水，含有浓度为在50mg/dm3与250mg/dm3之间、优选150mg/dm3的至少一种氮源如硝酸钠(NaNO3)，和浓度为在5mg/dm3与75mg/dm3之间，优选50mg/dm3的磷源如磷酸二氢钠(NaH2PO4)。
还可以通过添加例如以所希望比例的Provasoli培养基，将另外的矿物元素添加到海水中。
培养在具有任选地富含二氧化碳的空气的鼓泡的半透明培养箱中进行。
培养通常在恒定照度下在10℃与25℃之间、优选17℃下进行。
培养在十五天的周期内以从第一培养步骤的500cm3到工业生物质生产步骤的最高达20cm3的体积进行。然而，当在十五天的第一周期结束时进行的在双目放大镜下和/或在显微镜下的观察证明除了在步骤A)结束时目标生长之外的藻类的生长，这构成了步骤A)的结果不令人满意的迹象。因此重复如上定义的方法的此步骤A)，直到获得质量令人满意的小的多细胞大型藻类的细胞的单种藻样品。
-如上定义的方法的步骤C)通常使用截止阈值在25μm与100μm之间的滤布来进行，这取决于放置在培养物中的小的多细胞大型藻类的尺寸。过滤小的多细胞大型藻类的细胞的单种藻生物质的培养物，海水通过布，并且生物质残留在其表面处。然后压制由生物质构成的滞留物以除去仍然存在的游离水。
如上定义的方法的步骤D)通过本领域技术人员已知的方法进行。例如，可以干燥如上定义的方法的步骤C)中获得的小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质，并且然后将其研磨并将其筛分以获得具有所希望的平均直径的粉末。
根据如上定义的方法的一个特定方面，其主题是一种用于从真红藻纲、海索面亚纲、顶丝藻目、顶丝藻属和串珠顶丝藻种(species Acrochaetium moniliforme)获得红藻的细胞的单种藻生物质的方法。
根据一个特定的方面，在如上定义的方法的步骤D)期间，将在步骤C)中获得的小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质冷冻、冻干并且然后研磨以获得所希望的粉末。
本发明的主题还是一种用于制备通过如上定义的方法获得的小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质的乙醇酸提取物的方法，其特征在于，该方法包括以下连续步骤：
-步骤E)，在该步骤期间将在步骤C)或步骤D)中获得的小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质在搅拌下以基于按重量计100％的分散体按重量计1％至按重量计20％的生物质的比例分散在水-二醇混合物中；
-步骤F)，在该步骤期间将以上步骤E)中获得的该分散体分离成其不混溶相，以获得预期的乙醇酸提取物。
作为在如上定义的方法中使用的二醇，特别是丁二醇或1,4-丁二醇、1,3-丁二醇、1,2-丁二醇、1,2-戊二醇、1,5-戊二醇、1,2-己二醇或1,6-己二醇。
根据如上定义的方法的一个特定方面，所使用的二醇是丁二醇。
在如上定义的方法中使用的按水/二醇混合物的体积计的水与二醇的比率通常小于或等于1/1且大于或等于1/9并且更特别地小于或等于1/2且大于或等于1/6。如果需要或者如果希望，在步骤E)结束时将该按体积计的比率调整到上述范围内。
根据如上定义的方法的一个特定方面，其主题是一种用于从真红藻纲、海索面亚纲、顶丝藻目、顶丝藻属和串珠顶丝藻种制备红藻的细胞的单种藻生物质(通过如上定义的方法获得的)的乙醇酸提取物的方法，其特征在于，该方法包括以下连续步骤：
-步骤E)，在该步骤期间将在步骤D)中获得的来自真红藻纲、海索面亚纲、顶丝藻目、顶丝藻属和串珠顶丝藻种的红藻的细胞的所述单种藻生物质的粉末在搅拌下分散在水-丁二醇混合物中，按该水-丁二醇混合物的重量计该丁二醇含量(丁二醇的重量与丁二醇和水的总重量的比率)是基于按重量计100％的分散体按重量计在50％与75％之间、以按重量计2％至按重量计10％的生物质的比例；该搅拌保持1至2小时，并且然后如果需要或如果希望，通过加入水将丁二醇的按重量计的含量调节至40％；
-步骤F)，在该步骤期间将以上步骤E)中获得的该分散体分离成其不混溶相，以获得预期的乙醇酸提取物。
在如上定义的方法的步骤F)期间，不混溶相的分离通过在重力下倾析或通过离心进行。
如果需要或者如果希望，通过具有0.2μm的截止阈值的过滤器过滤所获得的氢化乙醇酸提取物，以除去悬浮液中的任何颗粒并使得可以获得澄清溶液。
因此，本发明的主题是一种通过该方法获得的小的多细胞大型藻类的细胞的单种藻生物质的乙醇酸提取物，该方法包括以下步骤：
-从取自天然环境的大型藻类样品制备小的多细胞大型藻类的细胞的单种藻样品的步骤A)；
-在其中加入至少一种氮源的海水中培养在步骤A)中获得的小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻样品，以便获得小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质的水性悬浮液的步骤B)；
-从在步骤B)结束时获得的所述水性悬浮液中收获小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质的步骤C)；
-任选地，制备在步骤C)中获得的小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质的粉末的步骤D)；
-步骤E)，在该步骤期间将在步骤C)或步骤D)中获得的小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质在搅拌下以基于按重量计100％的分散体按重量计1％至按重量计20％的生物质的比例分散在水-二醇混合物中；
-步骤F)，在该步骤期间将以上步骤E)中获得的该分散体分离成其不混溶相。
根据本发明的一个特定方面，其主题是如上定义的乙醇酸提取物，其中所使用的二醇是丁二醇。
根据本发明的另一个特定方面，其主题是如上定义的乙醇酸提取物，其特征在于，在其制备方法的步骤E)中使用的小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质的粉末是来自真红藻纲、海索面亚纲、顶丝藻目、顶丝藻属和串珠顶丝藻种的红藻的细胞的所述单种藻生物质的粉末。
根据本发明的一个更特定的方面，其主题是如上定义的乙醇酸提取物，其特征在于，在其制备方法的步骤E)期间：
-所使用的水-二醇混合物是水-丁二醇混合物，按该水-丁二醇混合物的重量计该丁二醇含量(丁二醇的重量与丁二醇和水的总重量的比率)是在50％与75％之间，
-所述水-二醇混合物中的该分散以基于按重量计100％的分散体按重量计2％至按重量计10％的生物质的比例进行；并且
-将该搅拌保持1至2小时，并且然后如果需要，或者如果希望，
-通过加入水将该丁二醇按重量计的含量调节至40％。
本发明的主题还是如上定义的小的多细胞大型藻类的细胞的单种藻生物质的乙醇酸提取物的用途，其目的是减少人体皮肤和/或头皮产生的皮脂的量，所述用途是在化妆品组合物中，并且更具体地是如上定义的用途，其中小的多细胞大型藻类的细胞的单种藻生物质的乙醇酸提取物是来自真红藻纲、海索面亚纲、顶丝藻目、顶丝藻属和串珠顶丝藻种的红藻的细胞的单种藻生物质的乙醇酸提取物，如上所定义。
本发明的主题还是一种为了减少人体皮肤和/或头皮产生的皮脂的量的目的的方法，该方法包括向所述人体皮肤和/或所述头皮施用用于局部使用的化妆品组合物(C1)的至少一个步骤，该化妆品组合物包含至少一种化妆品上可接受的赋形剂和有效量的如上定义的小的多细胞大型藻类的细胞的单种藻生物质的乙醇酸提取物；并且更具体地是如上定义的方法，其中包含在所述组合物(C1)中的小的多细胞大型藻类的细胞的单种藻生物质的乙醇酸提取物是来自真红藻纲、海索面亚纲、顶丝藻目、顶丝藻属和串珠顶丝藻种的红藻的细胞的单种藻生物质的乙醇酸提取物，如上所定义。
由于减少人体皮肤和/或头皮产生的皮脂的量的能力，包含如上定义的红藻的所述乙醇酸提取物的化妆品组合物使得可以处理称为油性皮肤的状况相关的皮肤改变，或称为多油脂的头发的条件相关的头发改变，从而改善美学。
本发明的主题还是一种用于局部使用的化妆品组合物(C1)，包含至少一种化妆品上可接受的赋形剂和有效量的如上定义的小的多细胞大型藻类的细胞的单种藻生物质的乙醇酸提取物。并且更具体地是如上定义的组合物(C1)，其中该小的多细胞大型藻类的细胞的单种藻生物质的乙醇酸提取物是来自真红藻纲、海索面亚纲、顶丝藻目、顶丝藻属和串珠顶丝藻种的红藻的细胞的单种藻生物质的乙醇酸提取物，如上所定义。
在如上定义的方法中，所述组合物(C1)通常铺展在待处理的皮肤的表面上，并且然后将皮肤按摩一会儿。
在作为本发明的主题的组合物(C1)的定义中所使用的表述“用于局部使用”意思是所述组合物(C1)是通过施加在皮肤上使用的，无论其是直接施加或间接施加(当根据本发明的所述组合物(C1)被浸渍在旨在与皮肤接触的载体(纸、擦拭物、纺织品、经皮肤的装置等)上时)。
在作为本发明的主题的组合物(C1)的定义中使用的表述“化妆品上可接受的”意思是，根据通过1993年6月14日的指令号93/35/CEE修订的1976年7月27日的欧洲经济共同体理事会指令号76/768/EEC，该组合物包含任何旨在与人体的各部分(表皮、体毛和头发系统、指甲、嘴唇和生殖器)、或者与牙齿和口腔粘膜(着眼于专有并且主要地清洗它们、使它们变香、改变它们的外观和/或矫正体臭和/或保护它们或保持它们处于良好状态)接触的物质或制剂。
如上定义的术语“有效量的小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质的乙醇提取物”旨在是指，对于所述组合物(C1)的重量的100％，按小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质的所述乙醇提取物的重量计的按重量计在0.1％与5％之间、更特别地按重量计在0.1％与3％之间、并且甚至更特别地按重量计在0.5％与2％之间的量。
作为本发明的主题的组合物(C1)总体上是处于水溶液或水-醇溶液或水-二醇溶液的形式，或处于悬浮液、乳液、微乳液或纳米乳液的形式，无论它具有油包水、水包油、水包油包水或油包水包油的类型，或者处于粉末形式。
作为本发明的主题的组合物(C1)可以包装在瓶中、在泵“分配器瓶”型的装置中、以加压形式在气溶胶装置中、在具有穿孔壁的装置中(如格栅)、或者在具有球涂抹器的装置(称为“滚抹式”装置)中。
总体上，作为本发明的主题的小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质的乙醇酸提取物与通常用于在用于局部使用的配制品的领域中的化学添加剂组合，这些化学添加剂如发泡和/或洗涤剂表面活性剂、增稠和/或胶凝表面活性剂、增稠剂和/或胶凝剂、稳定剂、成膜化合物、溶剂和共溶剂、水溶助剂、泉水或矿泉水、增塑剂、乳化剂和助乳化剂、遮光剂、珠光剂、加脂剂、螯合剂、络合剂、油、蜡、抗氧化剂、香料、精油、防腐剂、调节剂、除臭剂、旨在用于漂白身体毛发和皮肤的增白剂、旨在用于提供对皮肤或毛发的处理和/或保护作用的活性成分、防晒剂、矿物填充剂或颜料、提供视觉效果或旨在用于包封活性剂的颗粒、去角质颗粒、质地剂、光学增白剂、或驱虫剂。
作为可以与组合物(C1)中的小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质的乙醇酸提取物组合的发泡和/或洗涤剂表面活性剂的实例，可以提及阴离子、阳离子、两性或非离子的发泡和/或洗涤剂表面活性剂。
在阴离子发泡和/或洗涤剂表面活性剂中，可以提及碱金属盐、碱土金属盐、铵盐、胺或氨基醇盐、烷基醚硫酸盐、烷基硫酸盐、烷基酰胺基醚硫酸盐、烷基芳基聚醚硫酸盐、单甘油酯硫酸盐、α-烯烃磺酸盐、石蜡磺酸盐、烷基磷酸盐、烷基醚磷酸盐、烷基磺酸盐、烷基酰胺磺酸盐、烷基芳基磺酸盐、烷基羧酸盐、烷基磺基琥珀酸盐、烷基醚磺基琥珀酸盐、烷基酰胺磺基琥珀酸盐、烷基磺基乙酸盐、烷基肌氨酸盐、酰基羟乙基磺酸盐、N-酰基牛磺酸盐、酰基乳酸盐、N-酰化氨基酸衍生物、N-酰化肽衍生物、N-酰化蛋白质衍生物、和N-酰化脂肪酸衍生物。
在两性发泡和/或洗涤剂表面活性剂中，可以提及烷基甜菜碱、烷基酰胺基甜菜碱、磺基甜菜碱、烷基酰胺基烷基磺基甜菜碱、咪唑啉衍生物、磷酸酯甜菜碱、两性多乙酸盐和两性丙酸盐。
在阳离子发泡和/或洗涤剂表面活性剂中，特别可以提及季铵衍生物。
在非离子发泡和/或洗涤剂表面活性剂中，可以更特别地提及包含直链或支链、饱和或不饱和的脂肪族基团并且包含从8至16个碳原子的烷基聚糖苷，例如辛基聚葡萄糖苷、癸基聚葡萄糖苷、十一烷基聚葡萄糖苷、十二烷基聚葡萄糖苷、十四烷基聚葡萄糖苷、十六烷基聚葡萄糖苷或1,12-十二烷二基聚葡萄糖苷；乙氧基化的氢化蓖麻油衍生物，如在INCI名称“Peg-40氢化蓖麻油”下出售的产品；聚山梨醇酯，如聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯70、聚山梨醇酯80或聚山梨醇酯85；椰子酰胺；N-烷基胺。
作为可与组合物(C1)中的小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质的乙醇酸提取物组合的增稠和/或胶凝表面活性剂的实例，任选地可以提及烷氧基化的烷基聚糖苷脂肪酸酯，例如乙氧基化的甲基聚葡萄糖苷酯，如分别在名称GlucamateTM LT和GlumateTM DOE120下出售的PEG 120甲基葡萄糖三油酸酯和PEG 120甲基葡萄糖二油酸酯；烷氧基化的脂肪酸酯，如在名称CrothixTM DS53下出售的PEG 150季戊四醇四硬脂酸酯，在名称AntilTM 141下出售的PEG 55丙二醇油酸酯；脂肪链聚亚烷基二醇氨基甲酸酯，例如在名称ElfacosTM T211下出售的PPG-14月桂醇聚醚异佛尔基二氨基甲酸酯或在名称ElfacosTM GT2125下出售的PPG 14棕榈油醇聚醚60己基二氨基甲酸酯。
作为可与组合物(C1)中的小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质的乙醇酸提取物组合的增稠剂和/或胶凝剂的实例，可以提及直链或支链或交联的聚电解质型聚合物，例如部分或完全成盐的丙烯酸均聚物，部分或完全成盐的甲基丙烯酸均聚物，部分或完全成盐的2-甲基-[(1-氧代-2-丙烯基)氨基]-1-丙磺酸(AMPS)均聚物，丙烯酸和AMPS的共聚物，丙烯酰胺和AMPS的共聚物，乙烯基吡咯烷酮和AMPS的共聚物，AMPS和(2-羟乙基)丙烯酸酯的共聚物，AMPS和(2-羟乙基)甲基丙烯酸酯的共聚物，AMPS和羟乙基丙烯酰胺的共聚物，AMPS和N,N-二甲基丙烯酰胺的共聚物，AMPS和三(羟甲基)丙烯酰胺基甲烷(THAM)的共聚物，丙烯酸或甲基丙烯酸和(2-羟乙基)丙烯酸酯的共聚物，丙烯酸或甲基丙烯酸和(2-羟乙基)甲基丙烯酸酯的共聚物，丙烯酸或甲基丙烯酸和羟乙基丙烯酰胺的共聚物，丙烯酸或甲基丙烯酸和THAM的共聚物，丙烯酸或甲基丙烯酸和N,N-二甲基丙烯酰胺的共聚物，丙烯酸或甲基丙烯酸、AMPS和(2-羟乙基)丙烯酸酯的三元共聚物，丙烯酸或甲基丙烯酸、AMPS和(2-羟乙基)甲基丙烯酸酯的三元共聚物，丙烯酸或甲基丙烯酸、AMPS和THAM的三元共聚物，丙烯酸或甲基丙烯酸、AMPS和N,N-二甲基丙烯酰胺的三元共聚物，丙烯酸或甲基丙烯酸、AMPS和丙烯酰胺的三元共聚物，丙烯酸或甲基丙烯酸和丙烯酸烷基酯的共聚物(其中碳基链包含在四个与三十个之间的碳原子并且更特别地在十个与三十个之间的碳原子)，AMPS和丙烯酸烷基酯的共聚物(其中碳基链包含在四个与三十个之间的碳原子并且更特别地在十个与三十个之间的碳原子)，至少一种具有为游离的、部分成盐或完全成盐的强酸官能团的单体与至少一种中性单体和至少一种具有式(VIII)的单体的直链、支链或交联的三元共聚物：
CH2＝C(R’3)-C(＝O)-[CH2-CH2-O]n-R’4 (VIII)
其中R’3表示氢原子或甲基基团，R’4表示包含从八至三十个碳原子的直链或支链的烷基基团，并且n表示大于或等于一且小于或等于五十的数。
可与组合物(C1)中的小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质的乙醇酸提取物组合的直链或支链或交联的聚电解质型聚合物可以是处于溶液、水性悬浮液、油包水乳液、水包油乳液、或粉末的形式。可与组合物(C1)中的小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质的乙醇酸提取物组合的直链或支链或交联的聚电解质型聚合物可以选自在名称SimulgelTM EG、SimulgelTMEPG、SepigelTM 305、SimulgelTM 600、SimulgelTM NS、SimulgelTM INS 100、SimulgelTM FL、SimulgelTM A、SimulgelTM SMS 88、SepinovTMEMT 10、SepiplusTM400、SepiplusTM265、SepiplusTMS、SepimaxTMZen、AristoflexTMAVC、AristoflexTMAVS、NovemerTMEC-1、NovemerTMEC 2、AristoflexTMHMB、CosmediaTMSP、FlocareTMET 25、FlocareTMET 75、FlocareTMET 26、FlocareTMET 30、FlocareTMET 58、FlocareTMPSD 30、ViscolamTMAT 64、ViscolamTMAT 100下出售的产品。
作为可与组合物(C1)中的小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质的乙醇酸提取物组合的增稠和/或胶凝剂的实例，可以提及仅由单糖组成的多糖，例如葡聚糖或葡萄糖的均聚物、葡甘露聚糖葡聚糖(glucomannoglucans)、木葡聚糖(xyloglycans)、以及半乳甘露聚糖，其中主D-甘露糖链上的D-半乳糖单元的取代度(DS)是在0与1之间、并且更特别地在1与0.25之间，如来源于肉桂胶(DS＝1/5)、刺槐豆胶(DS＝1/4)、塔拉胶(DS＝1/3)、瓜尔豆胶(DS＝1/2)或葫芦巴胶(DS＝1)的半乳甘露聚糖。
作为可与组合物(C1)中的小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质的乙醇酸提取物组合的增稠和/或胶凝剂的实例，可以提及由单糖衍生物组成的多糖，例如硫酸化的半乳聚糖以及更具体地角叉菜胶和琼脂，乌龙糖(uronans)并且更具体地褐藻胶、海藻酸盐和果胶，单糖和糖醛酸的杂聚物，并且更特别地黄原胶、结冷胶、阿拉伯胶渗出液和刺梧桐树胶渗出液、或葡糖胺聚糖。
作为可与组合物(C1)中的小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质的乙醇酸提取物组合的增稠和/或胶凝剂的实例，可以提及纤维素，纤维素衍生物如甲基纤维素、乙基纤维素或羟丙基纤维素，硅酸盐，淀粉，亲水淀粉衍生物和聚氨酯。
作为可与组合物(C1)中的小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质的乙醇酸提取物组合的稳定剂的实例，可以提及微晶蜡，并且更特别地地蜡，矿物盐如氯化钠或氯化镁，以及硅酮聚合物如聚硅氧烷聚烷基聚醚共聚物。
作为可与组合物(C1)中的小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质的乙醇酸提取物组合的溶剂的实例，可以提及水，有机溶剂，如甘油、双甘油、甘油低聚物、乙二醇、丙二醇、丁二醇、1,3-丙二醇、1,2-丙二醇、己二醇、二甘醇、木糖醇、赤藓醇、山梨醇，水溶性醇，如乙醇、异丙醇或丁醇，以及水和所述有机溶剂的混合物。
作为可与组合物(C1)中的小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质的乙醇酸提取物组合的泉水或矿泉水的实例，可以提及具有至少300mg/l的矿化的泉水或矿泉水，特别地雅漾(Avene)水、维泰尔(Vittel)水、维希盆地(Vichy basin)水、依泉(Uriage)水、理肤泉(La Roche Posay)水、拉布尔布尔(La Bourboule)水、安亘湖(Enghien-les-Bains)水、圣泉薇莱班(Saint-Gervais-les-Bains)水、内里莱班(Neris-les-bains)水、阿勒瓦尔莱班(Allevard-les-Bains)水、迪涅(Digne)水、迈济耶尔(Maizieres)水、Neyrac-les-Bains水、隆勒索涅(Lons le Saunier)水、罗什福尔(Rochefort)水、Saint Christau水、Les Fumades水和罗什福尔(Tercis-les-Bains)水。
作为可与组合物(C1)中的小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质的乙醇酸提取物组合的水助溶剂的实例，可以提及二甲苯磺酸盐、枯烯磺酸盐、己基聚葡萄糖苷、(2-乙基己基)聚葡萄糖苷或正庚基聚葡萄糖苷。
作为可与组合物(C1)中的小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质的乙醇酸提取物组合的乳化表面活性剂的实例，可以提及非离子表面活性剂、阴离子表面活性剂和阳离子表面活性剂。
作为可与组合物(C1)中的小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质的乙醇酸提取物组合的乳化非离子表面活性剂的实例，可以提及山梨糖醇的脂肪酸酯，例如在名称MontaneTM40、MontaneTM60、MontaneTM70、MontaneTM80和MontaneTM85下出售的产品；包含硬脂酸甘油酯和在5mol与150mol之间的环氧乙烷的乙氧基化的硬脂酸的组合物，例如包含具有135mol环氧乙烷的乙氧基化的硬脂酸和硬脂酸甘油酯的组合物(在名称SimulsolTM165下出售的)；脱水甘露醇酯；乙氧基化的脱水甘露醇酯；蔗糖酯；甲基聚葡萄糖苷酯；包含直链或支链、饱和或不饱和脂肪族基团并且包含从14或36个碳原子的烷基聚糖苷，如十四烷基聚葡萄糖苷、十六烷基聚葡萄糖苷、十八烷基聚葡萄糖苷、十六烷基聚木糖苷、十八烷基聚木糖苷、二十烷基聚葡萄糖苷、十二烷基(dodecosyl)聚葡萄糖苷、2-辛基十二烷基聚木糖苷、(12-羟基硬脂基)聚葡萄糖苷；包含从14至36个碳原子的直链或支链、饱和或不饱和脂肪醇和如上所述的烷基聚糖苷的组合物，例如在商品名MontanovTM68、MontanovTM14、MontanovTM82、MontanovTM202、MontanovTMS、MontanovTMWO18、MontanovTML、FluidanovTM20X和EasynovTM下出售的组合物。
作为可与组合物(C1)中的小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质的乙醇酸提取物组合的阴离子表面活性剂的实例，可以提及硬脂酸柠檬酸甘油酯、硫酸鲸蜡硬脂酯、肥皂如硬脂酸钠或硬脂酸三乙醇铵、成盐的N-酰化氨基酸衍生物(例如硬脂酰谷氨酸盐)。
作为可与组合物(C1)中的小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质的乙醇酸提取物组合的乳化阳离子表面活性剂的实例，可以提及氧化胺、季铵盐-82和在专利申请WO 96/00719中描述的表面活性剂，并且主要是其中脂肪链包括至少16个碳原子的那些。
作为可与组合物(C1)中的小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质的乙醇酸提取物组合的遮光剂和/或珠光剂的实例，可以提及棕榈酸钠、硬脂酸钠、羟基硬脂酸钠、棕榈酸镁、硬脂酸镁、羟基硬脂酸镁、乙二醇单硬脂酸酯、乙二醇二硬脂酸酯、聚乙二醇单硬脂酸酯、聚乙二醇二硬脂酸酯、以及包含从12至22个碳原子的脂肪醇。
作为可与组合物(C1)中的小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质的乙醇酸提取物组合的质地剂的实例，可以提及N-酰化氨基酸衍生物，如在名称AminohopeTM LL下出售的月桂酰赖氨酸、在名称DryfloTM下出售的辛烯基淀粉琥珀酸盐、在名称MontanovTM14下出售的肉豆蔻基聚葡萄糖苷、纤维素纤维、棉纤维、壳聚糖纤维、滑石、绢云母和云母。
作为可与组合物(C1)中的小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质的乙醇提取物组合的除臭剂的实例，可以提及碱金属硅酸盐，锌盐如硫酸锌、葡萄糖酸锌、氯化锌或乳酸锌；季铵盐，如十六烷基三甲基铵盐、或十六烷基吡啶盐；甘油衍生物，如甘油癸酸酯、甘油辛酸酯或聚甘油癸酸酯；1,2-癸二醇；1,3-丙二醇；水杨酸；碳酸氢钠；环糊精；金属沸石；TriclosanTM；氢溴酸铝，氢氯酸铝，氯化铝，硫酸铝，氢氯酸铝锆，三氢氯酸铝锆，四氢氯酸铝锆，五氢氯酸铝锆，八氢氯酸铝锆(aluminum zirconium octohydrochloride)，硫酸铝，乳酸钠铝，氢氯酸铝和丙三醇的络合物如氢氯酸铝和丙二醇的络合物、二氢氯酸铝和丙二醇的络合物，倍半氢氯酸铝和丙二醇的络合物，氢氯酸铝和聚乙二醇的络合物，二氢氯酸铝和聚乙二醇的络合物，或倍半氢氯酸铝和聚乙二醇的络合物。
作为可与组合物(C1)中的小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质的乙醇酸提取物组合的油的实例，可以提及矿物油，例如液体石蜡，液体凡士林，异链烷烃或白色矿物油；动物来源的油，如角鲨烯或角鲨烷；植物油，如角鲨烷、甜杏仁油、椰子油、蓖麻油、霍霍巴油、橄榄油、菜籽油、花生油、向日葵油、小麦胚芽油、玉米胚芽油、大豆油、棉籽油、苜蓿油、罂粟油、南瓜油、月见草油、小米油、大麦油、黑麦油、红花油、桐树油、西番莲油、榛子油、棕榈油、乳木果油、杏仁油、横经席叶油、大蒜芥油(sysymbrium oil)、鳄梨油、金盏花油，衍生自花或植物的油，乙氧基化的植物油；合成油，例如脂肪酸酯，如肉豆蔻酸丁酯、肉豆蔻酸丙酯、肉豆蔻酸异丙酯、肉豆蔻酸鲸蜡酯、棕榈酸异丙酯、棕榈酸辛酯、硬脂酸丁酯、硬脂酸十六烷酯、硬脂酸异丙酯、硬脂酸辛酯、硬脂酸异鲸蜡酯、油酸十二烷基酯、月桂酸己酯、二辛酸丙二醇酯、羊毛脂酸基酯类(如羊毛脂酸异丙酯、羊毛脂酸异鲸蜡酯)、脂肪酸甘油单酯、甘油二酸酯和甘油三酯(例如三庚酸甘油酯)、苯甲酸烷基酯、氢化油、聚(α-烯烃)、聚烯烃(如聚(异异丁烷))、合成的异烷烃(如异十六烷、异十二烷)、全氟油；硅酮油，如二甲基聚硅氧烷、甲基苯基聚硅氧烷、用胺改性的硅酮、用脂肪酸改性的硅酮、用醇改性的硅酮、用醇和脂肪酸改性的硅酮、用聚醚基团改性的硅酮、改性的环氧硅酮、用氟基团改性的硅酮、环状硅酮以及用烷基基团改性的硅酮。术语“油”在本申请中旨在是指不溶于水并且在25℃的温度下具有液体外观的化合物和/或化合物的混合物。
作为可与组合物(C1)中的小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质的乙醇酸提取物组合的蜡的实例，可以提及蜂蜡、巴西棕榈蜡、小烛树蜡、小冠巴西棕蜡、日本蜡、软木纤维蜡、甘蔗蜡、石蜡、褐煤蜡、微晶蜡、羊毛脂蜡；地蜡；聚乙烯蜡；硅酮蜡；植物蜡；在环境温度下是固体的脂肪醇和脂肪酸；在环境温度下是固体的甘油酯。在本申请中，术语“蜡”旨在是指不溶于水并且在大于或等于45℃的温度下具有固体外观的化合物和/或化合物的混合物。
作为可与组合物(C1)中的小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质的乙醇酸提取物组合的有效成分的实例，可以提及维生素和其衍生物，特别是其酯(如视黄醇(维生素A))和其酯(例如棕榈酸视黄酯)，抗坏血酸(维生素C)及其酯，抗坏血酸的糖衍生物(如抗坏血酸葡萄糖苷)，生育酚(维生素E)及其酯(如生育酚乙酸酯)，维生素B3或B10(烟酰胺及其衍生物)；在皮肤上显示美白或脱色素作用的化合物，如在名称SepiwhiteTM MSH、SepicalmTM VG下出售的ω-十一碳烯酰基苯丙氨酸，ω-十一碳烯酰基苯丙氨酸的甘油单酯和/或二酯，ω-十一碳烯酰基二肽，熊果苷，曲酸，氢醌；显示光滑作用的化合物，特别是SepicalmTM S、尿囊素和红没药醇；抗炎药；显示保湿作用的化合物，例如尿素、羟基脲、甘油、聚甘油、甘油葡萄糖苷、二甘油葡萄糖苷、聚甘油糖苷、木糖醇葡萄糖苷，在商品名AquaxylTM下出售的组合物，在商品名Pro-xylaneTM下出售的组合物，C-葡糖苷衍生物并且更特别地C-葡糖苷和C-木糖苷衍生物；富含多酚的植物提取物，如葡萄提取物、松树提取物、葡萄酒提取物、橄榄提取物；显示减肥或解脂作用的化合物，如咖啡因或其衍生物、AdiposlimTM、AdipolessTM、墨角藻黄素；N-酰化蛋白质；N-酰化肽如MatrixilTM；N-酰化氨基酸；N-酰化蛋白质的部分水解产物；氨基酸；肽；总蛋白质水解物；大豆提取物，例如RaffermineTM；小麦提取物，例如TensineTM或GliadineTM；植物提取物，如富含丹宁酸的植物提取物、富含异黄酮的植物提取物或富含萜的植物提取物；淡水或海水藻类提取物；海洋植物提取物；海洋提取物总体上例如珊瑚；精华蜡(essential wax)；细菌提取物；脑酰胺；磷脂；显示抗菌作用或纯化作用的化合物，如LipacideTM C8G、LipacideTM UG、SepicontrolTMA5、FluidipureTM 8G；OctopiroxTM或SensivaTM SC50；显示激励或刺激特性的化合物，如PhysiogenylTM、泛醇以及其衍生物如SepicapTM MP；抗老化活性剂，如SepiliftTM DPHP、LipacideTM PVB、SepivinolTM、SepivitalTM、ManolivaTM、Phyto-AgeTM、TimecodeTM；SurvicodeTM；抗光老化活性剂；用于保护表皮交界处的完整性的活性剂；用于增加细胞外基质组分的合成的活性剂，如胶原、弹性蛋白、糖胺聚糖；在化学细胞通信上顺利地作用的活性剂，如细胞因子，或在物理细胞通信上顺利地作用的活性剂，如整合素；在皮肤上产生“加热”感觉的活性剂，如皮肤微循环的活化剂(如烟酸衍生物)或在皮肤上产生“凉爽”感觉的产品(如薄荷醇和衍生物)；改进皮肤微循环的活性剂，例如veinotonics；排水活性剂；用于减轻充血目的的活性剂，例如银杏、常春藤、马栗树、竹、假叶树(ruscus)、假叶树(butcher’s broom)、积雪草、岩藻、迷迭香、柳树的提取物；晒黑或致黑皮肤的试剂，如二羟基丙酮(DHA)、赤藓酮糖、内消旋酒石醛、戊二醛、甘油醛、阿脲、茚三酮、植物提取物，例如紫檀属和杂色豆属(小叶紫檀(Pterocarpus santalinus)、非洲紫檀(Pterocarpus osun)、非洲紫檀(Pterocarpus soyauxii)、刺猬紫檀(Pterocarpus erinaceus)、印度紫檀(Pterocarpusindicus)或另外非洲小叶紫檀(Baphia nitida))的红木提取物，如在欧洲专利申请中描述的那些EP 0 971 683；以其在促进和/或加速人体皮肤的晒黑或致黑中的作用和/或以其在着色人体皮肤中的作用已知的试剂，例如类胡萝卜素(并且更特别地β-胡萝卜素和γ-胡萝卜素))，由Provital在名称“胡萝卜油”(INCI名称：胡萝卜(Daucus Carota)，向日葵葵花子油)下出售的产品，其含有类胡萝卜素、维生素E和维生素K；酪氨酸和/或其衍生物，以其在与暴露于紫外线辐射结合对加速人体皮肤的晒黑中的作用已知，例如由Provital在商品名“SunTan AcceleratorTM”下出售的产品，其含有酪氨酸和核黄素(维生素B)，由Zymo Line在商品名“Zymo Tan Complex”下出售的酪氨酸和酪氨酸酶的络合物，由Mibelle在商品名MelanoBronzeTM(INCI名称：乙酰酪氨酸，Monk's胡椒提取物(Vitex agnus-castus))下出售的产品，其含有乙酰酪氨酸，由UNIPEX在商品名Unipertan VEG-24/242/2002(INCI名称：丁二醇和乙酰基酪氨酸和水解的植物蛋白质和三磷酸腺苷)下出售的产品，由Sederma在商品名“Try-ExcellTM”(INCI名称：油酰基酪氨酸和丝瓜萃取液(种子油和油酸)下出售的产品，其含有西葫芦种子(或丝瓜油)的提取物，由Alban Muller在商品名“ActibronzeTM”(INCI名称：水解的小麦蛋白质和乙酰酪氨酸和葡萄糖酸铜)下出售的产品，由Synerga在商品名TyrostanTM(INCI名称：己酰基酪氨酸钾)下出售的产品，由Synerga在商品名Tyrosinol(INCI名称：脱水山梨糖醇异硬脂酸酯、油酸甘油酯、己酰基酪氨酸)下出售的产品，由AlbanMuller出售的在商品名InstaBronzeTM(INCI名称：二羟基丙酮和乙酰基酪氨酸和葡萄糖酸铜)下出售的产品，由Exymol在商品名Tyrosilane(INCI名称：甲基硅烷醇和乙酰酪氨酸)下出售的产品；以其黑素原生成激活作用已知的肽，例如由Infinitec Activos在商品名Bronzing SF肽粉(INCI名称：葡聚糖和八肽-5)下出售的产品，以其α-MSH激动剂作用已知的包含乙酰六肽-1的在商品名Melitane(INCI名称：甘油和水和葡聚糖和乙酰六肽-1)下出售的产品，由LIPOTEC在商品名Melatimes SolutionsTM(INCI名称：丁二醇、棕榈酰基三肽-40)下出售的产品，糖和糖衍生物，例如由Provital在商品名TanositolTM(INCI名称：肌醇)下出售的产品，由CODIF国际公司(CODIF international)在商品名ThalitanTM(或PhycosaccharideTM AG)下出售的产品(INCI名称：水和水解的藻胶(掌状海带)和硫酸镁和硫酸锰)，其含有海洋来源的低聚糖(与镁和锰离子螯合的古洛糖醛酸和甘露糖醛酸)，由Alban Muller在商品名MelactivaTM(INCI名称：麦芽糊精，刺毛黧豆种子提取物)下出售的产品，富含类黄酮的化合物，例如由Silab在商品名“Biotanning”(INCI名称：水解的甜橙水果提取物)下出售并且已知富含柠檬类黄酮(橙皮苷类型)的产品；旨在用于处理头发和/或体毛的试剂，例如保护毛囊黑色素细胞的试剂，旨在保护所述黑色素细胞免受是所述黑色素细胞的衰老和/或凋亡的原因的细胞毒素剂，如多巴色酶互变异构酶活性的模拟，选自在EP 1 515 688 A2号下公开的欧洲专利申请中所描述的那些，合成的SOD模拟分子，例如锰络合物，抗氧化剂化合物，例如环糊精衍生物，衍生自抗坏血酸、赖氨酸或精氨酸吡咯烷酮羧酸盐的硅酸化合物，肉桂酸和维生素C的单酯和二酯的组合，以及更一般地是在EP 1 515688 A2号下公开的欧洲专利申请中提到的那些。
作为可与组合物(C1)中的小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质的乙醇酸提取物组合的抗氧化剂的实例，可以提及EDTA和其盐、柠檬酸、酒石酸、草酸、BHA(丁基羟基苯甲醚)、BHT(丁基羟基甲苯)、生育酚衍生物如生育酚乙酸酯、抗氧化剂化合物的混合物(如由阿克苏诺贝尔(Akzo Nobel)公司在INCI名称下出售的DissolvineTM GL 47S：谷氨酸二乙酸四钠)。
作为可与组合物(C1)中的小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质的乙醇酸提取物组合的防晒剂的实例，可以提及在修改的化妆品指令76/768/EEC，附件VII中包括的所有那些。
可与组合物(C1)中的小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质的乙醇酸提取物组合的有机防晒剂中，可以提及苯甲酸衍生物的家族，例如对-氨基苯甲酸(PABA)，尤其PABA的单甘油酯、N,N-丙氧基PABA的乙基酯、N,N-二乙氧基PABA的乙基酯、N,N-二甲基PABA的乙基酯、N,N-二甲基PABA的甲基酯、N,N-二甲基PABA的丁基酯；邻氨基苯甲酸衍生物的家族，例如均薄荷基(homomenthyl-)-N-乙酰基邻氨基苯甲酸酯；水杨酸衍生物的家族，例如水杨酸戊酯、水杨酸高孟酯(homomenthyl salicylate)、水杨酸乙基己酯、水杨酸苯酯、水杨酸苄酯或水杨酸对-异丙醇苯基酯；肉桂酸衍生物的家族，如肉桂酸乙基己酯、4-异丙基肉桂酸乙酯、2,5-二异丙基肉桂酸甲酯、对甲氧基肉桂酸丙酯、对甲氧基肉桂酸异丙酯、对甲氧基肉桂酸异戊酯、对甲氧基肉桂酸辛酯、对甲氧基肉桂酸2-乙基己酯、对甲氧基肉桂酸2-乙氧基乙酯、对甲氧基肉桂酸环己酯、α-氰基-β-苯基肉桂酸乙酯、α-氰基-β-苯基肉桂酸2-乙基己酯、单(2-乙基己酰基)甘油基二(对甲氧基肉桂酸酯)；二苯甲酮衍生物的家族，例如2,4-二羟基二苯甲酮、2,2'-二羟基-4-甲氧基二苯甲酮、2,2',4,4'-四羟基二苯甲酮、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮、2-羟基-4-甲氧基-4'-甲基二苯甲酮、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮-5-磺酸酯、4-苯基二苯甲酮、2-乙基己基-4'-苯基二苯甲酮-2-羧酸酯、2-羟基-4-正辛氧基二苯甲酮、4-羟基-3-羧基二苯甲酮；3-(4'-甲基亚苄基)-d,l-樟脑、3-(亚苄基)-d,l-樟脑、樟脑苯扎铵甲基硫酸酯；尿刊酸、尿刊酸乙酯；磺酸衍生物的家族，例如2-苯基苯并咪唑-5-磺酸及其盐；三嗪衍生物的家族，例如羟基苯基三嗪、乙基己氧基羟基苯基-4-甲氧基苯基三嗪、2,4,6-三苯胺基-(对-羰基(carbo)-2'-乙基己基-1'-氧基)-1,3,5-三嗪、苯甲酸4,4-((6-(((1,1-二甲基乙基)氨基)羰基)苯基)氨基)-1,3,5-三嗪-2,4-二基二亚氨基)双(2-乙基己基)酯、2-苯基-5-甲基苯并噁唑、2,2'-羟基-5-甲基苯基苯并三唑、2-(2'-羟基-5'-叔辛基苯基)苯并三唑、2-(2'-羟基-5'-甲基苯基)苯并三唑；二异氮杂茚(dibenzazine)；二对甲氧苯甲酰基甲烷、4-甲氧基-4”-叔丁基苯甲酰基甲烷；5-(3,3-二甲基-2-降冰片烯)-3-戊-2-酮(5-(3,3-dimethyl-2-norbornylidene)-3-pentan-2-one)；丙烯酸二苯酯衍生物的家族，例如2-乙基己基-2-氰基-3,3-二苯基-2-丙烯酸酯，乙基-2-氰基-3,3-二苯基-2-丙烯酸酯；聚硅氧烷的家族，例如亚苄基硅氧烷丙二酸酯。
可与组合物(C1)中的小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质的乙醇酸提取物组合的无机防晒剂(也称为“矿物防晒剂”)之中，可以提及氧化钛，氧化锌，氧化铈，氧化锆，黄色、红色或黑色的氧化铁，以及氧化铬。这些矿物防晒剂可以或可以不进行微粉化，可以或可以不经历表面处理并且可以任选地以水性或油性预分散体的形式存在。
本发明的主题还是如上定义的小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质的乙醇酸提取物，其在旨在减少人体皮肤和/或头皮产生的皮脂的量的治疗处理方法中的用途，并且更具体地说，如上定义的来自真红藻纲、海索面亚纲、顶丝藻目、顶丝藻属和串珠顶丝藻种的红藻的细胞的单种藻生物质的乙醇酸提取物，其在旨在减少由人体皮肤和/或头皮产生的皮脂的量的治疗处理方法中的用途。
以下实例展示了本发明，但并不限制本发明。
测试为显示技术效果的样品
提取物A：通过根据本发明的方法获得的藻类顶丝藻属的培养物的乙醇酸提取物(在丁二醇中)
提取物B：从所述藻类的生物质的冻干物获得的藻类红叶藻属的乙醇酸提取物(在丁二醇中)
提取物C：从所述藻类的生物质的冻干物获得的藻类掌形藻属的乙醇酸提取物(在丁二醇中)
提取物D：从所述藻类的生物质的冻干物获得的藻类石花菜属的乙醇酸提取物(在丁二醇中)。
生物功效
选择模型和相关性：
选择用于证明我们产品的技术效果的模型是用于研究二氢睾酮(DHT)的生产的模型，揭示了5-α-还原酶的活性，该酶是高度靶向的以确定化妆品成分的皮肤净化特性。该模型是细胞模型，比纯化酶模型更稳健。
方案：
在特定生长培养基的存在下将真皮毛囊乳头(男，22岁)的人成纤维细胞接种到胶原包被的培养板中。三天后，将它们用阳性参照[在2μM和1μM下的非那雄胺(F)]和待测试的藻类提取物的每一种预处理24小时(表2)。然后将成纤维细胞在经历后处理持续24小时之前用在0.5μM下的睾酮进行刺激。每个测试都是一式六份进行的。
产品 测试的浓度
提取物A 0.5％和0.1％
提取物B 0.5％和0.1％
提取物C 0.5％和0.1％
提取物D 0.5％和0.1％
表2
效果的评价：
使用WST-8试剂测量活力，并且然后通过测量(DHT)的细胞内浓度来评价睾酮的转化。活力相对于没有睾酮的对照(对照T0)表达。将(DHT)的量相对于活力结果标准化并且然后与具有睾酮(0.5μM)对照(T1)的对照条件相关以便计算百分比效应，并且还与没有睾酮的对照条件相关以便计算百分比保护。
结果：
DHT产生结果呈现在下表3中。
表3：关于DHT产生的结果
(a)、(b)和(c)：实验组
*：统计学显著的结果(学生检验，p<0.05)
LS：接近统计学意义的结果(学生检验，0.05<p<0.1)
提取物A(根据本发明的方法获得的顶丝藻属生物质的提取物)显示对接近基底层的DHT产生的限制影响。这些影响证实了皮脂产生调节活性并且从而证明了以“皮肤净化”为特征的化妆品活性。
化合物B(红叶藻属的常规提取物)、C(掌形藻属的常规提取物)和D(石花菜属的常规提取物)没有显示出对DHT产生的任何显著影响(除了化合物B在最高浓度下的轻微影响)。
本发明的方法使得可以获得具有比其他红藻更有利/分化的皮肤净化作用的提取物，其皮肤净化特性已经进行描述。
配制品
在以下实例中，比例以重量百分比表达。
皮肤净化水包油乳液
抗皮脂水包油乳液
舒缓液
SolagumTMAX：用作乳化剂并且由SEPPIC公司出售的金合欢胶和黄原胶的混合物；
MontanovTM202(INCI名称：花生醇和山萮醇和花生基葡糖苷)：由SEPPIC公司出售的乳化剂；
LanolTM99：由SEPPIC公司出售的异壬酸异壬酯；
CetiolTMOE(INCI名称：二辛酰醚)：由巴斯夫公司出售的脂肪相；
LanolTMP：由SEPPIC公司出售的二醇棕榈酸酯；
SepiplusTM400(INCI名称：聚丙烯酸酯13和聚异丁烯和聚山梨醇酯20)：由SEPPIC公司出售的聚合增稠剂；
EuxylTMPE9010(INCI名称：苯氧基乙醇和乙基己基甘油)：由德国舒美公司(Schülcke&Mayr)出售的防腐剂；
SensivaTMPA40(INCI名称：苯乙醇(和)乙基己基甘油)：由德国舒美公司出售的抗微生物剂；
MontanovTM14(INCI名称：肉豆蔻醇和肉豆蔻基葡萄糖苷)：由SEPPIC公司出售的乳化剂；
由凤凰化工公司(Phoenix Chemical)出售的PelemolTMBB/山嵛酸山嵛酯；
SolagumTMTara：用作乳化剂并且由SEPPIC公司出售的塔拉胶；
SepimaxTMZen(INCI名称：聚丙烯酸酯交联聚合物-6)：增稠、乳化和稳定剂；
AquaxylTM(INCI名称：木糖醇葡萄糖苷和脱水木糖醇和木糖醇)：由SEPPIC公司出售的保湿组合物；
MontanoxTM 20(INCI名称：聚山梨醇酯20)：由SEPPIC公司出售的水包油型的乳化剂。

Claims (13)

1.一种用于获得小的多细胞大型藻类的细胞的单种藻生物质的方法，该方法包括以下连续步骤：
-从获自天然环境的大型藻类样品制备小的多细胞大型藻类的细胞的单种藻样品的步 骤A)；
-在其中已经加入至少一种氮源的海水中培养在步骤A)中获得的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻样品，以便获得小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质的水性悬浮液的步骤B)；
-从在步骤B)结束时获得的所述水性悬浮液中收获小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质的步骤C)；
-制备在步骤C)中获得的小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质的粉末的步 骤D)。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，该小的多细胞大型藻类是来自真红藻纲、海索面亚纲、顶丝藻目、顶丝藻属和串珠顶丝藻种的红藻。
3.如权利要求1和2中任一项所述的方法，其特征在于，在步骤D)期间，将在步骤C)中获得的小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质冷冻、冻干并且然后研磨以获得所希望的粉末。
4.一种用于制备小的多细胞大型藻类的细胞的单种藻生物质的乙醇酸提取物的方法，其特征在于，该方法包括以下连续步骤：
-步骤E)，在该步骤期间将如权利要求1至3之一所述的方法的步骤C)或步骤D)中获得的小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质的粉末以基于按重量计100％的分散体按重量计1％至按重量计20％的生物质的比例在搅拌下分散在水-二醇混合物中；
-步骤F)，在该步骤期间将以上步骤E)中获得的该分散体分离成其不混溶相，以获得预期的乙醇酸提取物。
5.如权利要求4所述的方法，其中所使用的二醇是丁二醇。
6.如权利要求4和5中任一项所述的方法，其特征在于，在步骤E)中使用的小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质的粉末是来自真红藻纲、海索面亚纲、顶丝藻目、顶丝藻属和串珠顶丝藻种的红藻的细胞的所述单种藻生物质的粉末。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，在步骤E)期间：
-所使用的水-二醇混合物是水-丁二醇混合物，按该水-丁二醇混合物的重量计该丁二醇含量(丁二醇的重量与丁二醇和水的总重量的比率)是在50％与75％之间，
-所述水-二醇混合物中的该分散以基于按重量计100％的分散体按重量计2％至按重量计10％的生物质的比例进行；并且
-将该搅拌保持1至2小时，并且然后如果需要，或者如果希望，
-通过加入水将该丁二醇按重量计的含量调节至40％。
8.一种通过以下方法获得的小的多细胞大型藻类的细胞的单种藻生物质的乙醇酸提取物，该方法包括以下连续步骤：
-从取自天然环境的大型藻类样品制备多细胞大型藻类的细胞的单种藻样品的步骤 A)；
-在其中加入至少一种氮源的海水中培养在步骤A)中获得的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻样品，以便获得小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质的水性悬浮液的步骤B)；
-从在步骤B)结束时获得的所述水性悬浮液中收获小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质的步骤C)；
-任选地，制备在步骤C)中获得的小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质的粉末的步骤D)；
-步骤E)，在该步骤期间将在步骤C)或步骤D)中获得的小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质在搅拌下以基于按重量计100％的分散体按重量计1％至按重量计20％的生物质的比例分散在水-二醇混合物中；
-步骤F)，在该步骤期间将以上步骤E)中获得的分散体分离成其不混溶相。
9.如权利要求8所述的乙醇酸提取物，其中所使用的二醇是丁二醇。
10.如权利要求8和9中任一项所述的乙醇酸提取物，其特征在于，在其制备方法的步骤E)中使用的小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质的粉末是来自真红藻纲、海索面亚纲、顶丝藻目、顶丝藻属和串珠顶丝藻种的红藻的细胞的所述单种藻生物质的粉末。
11.如权利要求10所定义的乙醇酸提取物，其特征在于，在其制备方法的步骤E)期间，
-所使用的水-二醇混合物是水-丁二醇混合物，按该水-丁二醇混合物的重量计该丁二醇含量(丁二醇的重量与丁二醇和水的总重量的比率)是在50％与75％之间，
-所述水-二醇混合物中的该分散以基于按重量计100％的分散体按重量计2％至按重量计10％的生物质的比例进行；并且
-将该搅拌保持1至2小时，并且然后如果需要，或者如果希望，
-将该丁二醇按重量计的含量调节至40％。
12.一种用于局部使用的化妆品组合物(C1)，包含至少一种化妆品上可接受的赋形剂和有效量的如权利要求8至11中任一项所述的小的多细胞大型藻类的细胞的单种藻生物质的乙醇酸提取物。
13.如权利要求8至11中任一项所述的小的多细胞大型藻类的细胞的所述单种藻生物质的乙醇酸提取物，其用于旨在减少由人体皮肤和/或头皮产生的皮脂的量的治疗处理方法中的用途。
CN201680028349.3A 2015-04-10 2016-04-08 用于培养串珠顶丝藻红藻的细胞的方法、用于获得其生物质的提取物的方法、以及其在化妆品中的用途 Pending CN107743394A (zh)

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