CN107703123A

CN107703123A - 一种血清类胰蛋白酶的化学发光定量检测试剂盒及其制备方法和检测方法

Info

Publication number: CN107703123A
Application number: CN201710839516.9A
Authority: CN
Inventors: 李庆春; 何晓静; 钱林; 陶艳茹
Original assignee: Jiangsu Hao Bo Biomedical Ltd By Share Ltd
Current assignee: Jiangsu Hao Bo Biomedical Ltd By Share Ltd
Priority date: 2017-09-15
Filing date: 2017-09-15
Publication date: 2018-02-16

Abstract

本发明涉及一种血清类胰蛋白酶的化学发光定量检测试剂盒，包括如下试剂：浓度为0.1~1 mg/mL的链霉亲和素标记的纳米磁微粒悬浮液；浓度为0.5~5μg/mL的生物素标记的鼠抗人类胰蛋白酶抗体溶液；浓度为0.2~1μg/mL的碱性磷酸酶标记的鼠抗人类胰蛋白酶抗体溶液。本发明通过对试剂盒的组成及各试剂配置工艺等与血清学抗体反应原理相关的各种关键技术的优化，使得本试剂盒的灵敏度和准确性高，最低检测限低（0.54μg/L），精密度高（日内变异系数为2.61~7%，日间变异系数为3.39~8.7%），干扰小，稳定性高。

Description

一种血清类胰蛋白酶的化学发光定量检测试剂盒及其制备方法和检测方法

技术领域

本发明属于医疗器械体外诊断试剂化学发光免疫分析领域，特别是涉及一种血清类胰蛋白酶的化学发光定量检测试剂盒及其制备方法和检测方法。

背景技术

类胰蛋白酶是主要由肥大细胞(MC)分泌的一种炎症介质，具有多重生物活性效应，可启动多种疾病反应的进程，并与其发生和发展有关。在很多肥大细胞相关疾病中，血清类胰蛋白酶都伴随肥大细胞的脱颗粒过程而升高。

类胰蛋白酶在cDNA和蛋白水平被分为三类：α、β、γ，其中β含量最高。每个类胰蛋白酶基因均含有6个外显子和5个内含子，编码30个氨基酸的前导链和245个氨基酸的活性部位。通过氨基酸序列推断，α-类胰蛋白酶和β-类胰蛋白酶有90％的同源性。其主要区别在于β-类胰蛋白酶的-3位和215位氨基酸分别为精氨酸和甘氨酸，而α-类胰蛋白酶则分别为谷氨酰胺和天冬氨酸，两者的结构区别决定了它们活性差异。

MC是机体速发性过敏反应的主要效应细胞，机体致敏时MC释放β-类胰蛋白酶于血液中，其在血液中浓度1h后达到高峰,半衰期为2h。这使得机体致敏数小时后仍能对β-类胰蛋白酶进行检测。通过ELISA法实验检测发现，正常人血液中只能检测到α-类胰蛋白酶，而β-类胰蛋白酶几乎检测不到。但对哮喘病人和过敏性鼻炎病人的支气管灌洗液、过敏性眼炎患者的泪水及风湿病患者的关节滑液及系统性过敏反应患者的血清中进行检测发现β-类胰蛋白酶含量显著升高。检测此类疾病时总类胰蛋白酶血清水平的变化，有望为疾病的临床诊断和治疗提供重要的依据。

化学发光免疫分析是将化学发光系统与免疫反应相结合，用化学发光相关的物质标记抗体或抗原，与待测的抗原或抗体反应后，经过分离游离态的化学发光标记物，加入化学发光系统的其他相关物产生化学发光，进行抗原或抗体的定量或定性检测。化学发光免疫测定是目前世界公认先进的标记免疫测定技术，化学发光免疫分析技术具有高度的准确度和特异性，成为检验方法中最为重要的技术之一。化学发光免疫分析能够检出放射免疫分析和酶联免疫分析等方法无法检出的低丰度物质，对疾病的早期诊断具有十分重要的意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种灵敏度高且最低检测限低的血清类胰蛋白酶的化学发光定量检测试剂盒。

本发明所要解决的另一技术问题是提供上述试剂盒的制备方法。

本发明所要解决的再一技术问题是提供采用上述试剂盒进行检测的检测方法。

为解决以上技术问题，本发明采取如下技术方案：

本发明的一个目的是一种血清类胰蛋白酶的化学发光定量检测试剂盒，包括如下试剂：

浓度为0.1～1mg/mL的链霉亲和素标记的纳米磁微粒悬浮液；

浓度为0.5～5μg/mL的生物素标记的鼠抗人类胰蛋白酶抗体溶液；

浓度为0.2～1μg/mL的碱性磷酸酶标记的鼠抗人类胰蛋白酶抗体溶液。

优选地，所述的鼠抗人类胰蛋白酶抗体与所述的生物素的投料摩尔比为1:5～1:20；进一步优选为1：18～1：20。

优选地，所述的碱性磷酸酶与所述的鼠抗人类胰蛋白酶抗体的投料摩尔比为2:1～10:1；进一步优选为9：1～10：1。

优选地，所述的生物素为Sulfo-NHS-Biotin、NHS-LC-Biotin或NHS-LC-LC-Biotin。

优选地，所述的试剂盒还包括类胰蛋白酶校准品和类胰蛋白酶质控品。

进一步优选地，所述的类胰蛋白酶校准品包括浓度为0.9～1.1μg/L、4.5～5.5μg/L、11.25～13.75μg/L、45～55μg/L、180～220μg/L的类胰蛋白酶溶液；所述的类胰蛋白酶质控品包括浓度为4～6μg/L、40～60μg/L的类胰蛋白酶溶液。

本发明中，所述的类胰蛋白酶校准品除了上述5个浓度以外，根据需要还可以包括多个其他浓度。

本发明的另一个目的是提供一种所述的血清类胰蛋白酶的化学发光定量检测试剂盒的制备方法，

所述的生物素标记的鼠抗人类胰蛋白酶抗体溶液的制备方法为：将鼠抗人类胰蛋白酶抗体加入到溶解有生物素的二甲基亚砜中，15～40℃下混合反应50～70min，再用0.009～0.011mol/L、pH为7.3～7.5的磷酸盐缓冲液进行透析制得所述的生物素标记的鼠抗人类胰蛋白酶抗体溶液；

所述的链霉亲和素标记的纳米磁微粒悬浮液的制备方法为：将链霉亲和素标记的纳米磁微粒经磁分离器沉淀出来后，用0.009～0.011mol/L、pH为7.3～7.5的磷酸盐缓冲液进行多次清洗，然后将清洗后的链霉亲和素标记的纳米磁微粒复溶于0.009～0.011mol/L、pH为7.3～7.5的磷酸盐缓冲液制得所述的链霉亲和素标记的纳米磁微粒悬浮液；

所述的碱性磷酸酶标记的鼠抗人类胰蛋白酶抗体溶液的制备方法为：将浓度为1.0～5.0mg/mL的碱性磷酸酶溶液与鼠抗人类胰蛋白酶抗体按摩尔比为2：1～10：1进行混合后并纯化，得到碱性磷酸酶标记的鼠抗人类胰蛋白酶抗体，再用0.045～0.055mol/L、pH值为5.5～6.5的2-(N-吗啉代)乙磺酸缓冲液对碱性磷酸酶标记的鼠抗人类胰蛋白酶抗体稀释制得所述的碱性磷酸酶标记的鼠抗人类胰蛋白酶抗体溶液。

优选地，所述的碱性磷酸酶溶液的浓度为1.0～1.5mg/mL。

优选地，所述的制备方法还包括类胰蛋白酶校准品的制备和类胰蛋白酶质控品的制备，所述的类胰蛋白酶校准品通过将类胰蛋白酶蛋白与0.09～0.11mol/L、pH为7.3～7.5的三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液进行配置得到，所述的类胰蛋白酶质控品通过将类胰蛋白酶蛋白与0.09～0.11mol/L、pH为7.3～7.5的三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液进行配置得到。

本发明的第三个目的是提供一种所述的血清类胰蛋白酶的化学发光定量检测试剂盒的检测方法，包括如下步骤：

步骤(1)、将18～22μL的待测血清样本和类胰蛋白酶质控品分别与所述的生物素标记的鼠抗人类胰蛋白酶抗体溶液、所述的链霉亲和素标记的纳米磁微粒悬浮液在36～38℃下共孵育15～30min得到第一溶液；

步骤(2)、对所述的第一溶液进行多次清洗得到第二溶液，所述的清洗方法为将所述的第一溶液在磁场的作用下静置1～3min，弃去上清液后加入清洗液；

步骤(3)、向所述的第二溶液中加入所述的碱性磷酸酶标记的鼠抗人类胰蛋白酶抗体溶液在36～38℃下孵育15～30min得到第三溶液；

步骤(4)、对所述的第三溶液进行多次清洗得到第四溶液，所述的清洗方法为将所述的第三溶液在磁场的作用下静置1～3min，弃去上清液后加入清洗液；

步骤(5)、向所述的第四溶液中加入酶促化学发光底物并测定发光强度；

步骤(6)、利用类胰蛋白酶校准品绘制发光强度标准曲线，根据步骤(5)测定的发光强度对照所述的发光强度标准曲线，计算出所述的待测血清样本中类胰蛋白酶的含量；其中，所述的待测血清样本或所述的类胰蛋白酶质控品、所述的生物素标记的鼠抗人类胰蛋白酶抗体溶液、所述的链霉亲和素标记的纳米磁微粒悬浮液、所述的碱性磷酸酶标记的鼠抗人类胰蛋白酶抗体溶液、所述的酶促化学发光底物的投料体积比为1：0.9～1.1：2.25～2.75：6～7.5：9～11。

优选地，所述的检测方法在全自动化学发光仪BioCLIA系列上进行，采用所述的全自动化学发光仪BioCLIA系列进行所述的检测的具体步骤为：

步骤(1)、将所述的生物素标记的鼠抗人类胰蛋白酶抗体溶液、所述的链霉亲和素标记的纳米磁微粒悬浮液、所述的碱性磷酸酶标记的鼠抗人类胰蛋白酶抗体溶液放入全自动化学发光仪的试剂仓并进行识别；

步骤(2)、将类胰蛋白酶校准品置于所述的全自动化学发光仪的仪器样本仓，识别所述的类胰蛋白酶校准品信息并分配所述的类胰蛋白酶校准品的位置；

步骤(3)、将类胰蛋白酶质控品或待测样本血清置于所述的全自动化学发光仪的仪器样本仓，编辑检测信息；

步骤(4)、启动运行程序对所述的类胰蛋白酶校准品、所述的类胰蛋白酶质控品和所述的待测样本血清进行处理并得到检测结果。

进一步优选地，所述的全自动化学发光仪BioCLIA系列为BioCLIA 1200和BioCLIA2400。

优选地，所述的检测方法在半自动化学发光仪上进行。

由于以上技术方案的实施，本发明与现有技术相比具有如下优点：

本发明通过对试剂盒的组成及各试剂配置工艺等与血清学抗体反应原理相关的各种关键技术的优化，使得本试剂盒的灵敏度和准确性高，最低检测限低(0.54μg/L)，精密度高(日内变异系数为2.61～7％，日间变异系数为3.39～8.7％)，干扰小，稳定性高。

附图说明

附图1为类胰蛋白酶标准曲线图；

附图2为本发明方法与Phadia UniCAP系统测值结果比对图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步详细的说明，但本发明并不限于以下实施例。实施例中采用的实施条件可以根据具体使用的不同要求做进一步调整，未注明的实施条件为本行业中的常规条件。本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1：

提供一种纳米磁微粒化学发光法定量检测血清类胰蛋白酶的试剂盒，包括如下试剂：

(1)生物素标记的鼠抗人类胰蛋白酶抗体溶液，浓度为0.5ug/mL；

(2)链霉亲和素标记的纳米磁微粒悬浮液，浓度为0.5mg/mL；

(3)碱性磷酸酶标记的鼠抗人类胰蛋白酶抗体溶液，浓度为0.2ug/mL；

(4)5个不同浓度水平的类胰蛋白酶校准品：1ug/L、5ug/L、12.5ug/L、50ug/L、200ug/L；

(5)2个浓度水平的类胰蛋白酶质控品：5ug/L，50ug/L。

实施例2：

本发明提供的一种纳米磁微粒全自动化学发光法定量检测血清类胰蛋白酶试剂盒的制备，包括如下步骤：

(1)配制缓冲液：

配制0.01M、pH值为7.4的磷酸盐缓冲液，0.1M、pH值为7.4的Tris(三羟甲基氨基甲烷)-HCl缓冲液，0.05M、pH值为6.0的MES(2-(N-吗啉代)乙磺酸)缓冲液。

①0.01M、pH值为7.4的磷酸盐缓冲液的配制：取容量1L的烧杯，加入800mL去离子水，称取2.56g Na₂HPO₄·12H₂O、0.44g NaH₂PO₄·2H₂O和9g NaCl，加入到烧杯中，搅拌使其充分溶解，用HCl或NaOH调节pH值至7.4±0.05，加入2％(V/V)的甘露醇、1％(V/V)的甘油，搅拌0.5h至完全溶解，加去离子水定容至1L。

②0.1M、pH值为7.4的Tris-HCl缓冲液的配制：取容量1L的烧杯，加入800mL去离子水，称取12.11g Tris(三羟甲基氨基甲烷)加入到烧杯中，搅拌使其充分溶解，用HCl调节pH值至7.4±0.05，加入2％(V/V)的BSA、1‰(V/V)的Proclin 300，搅拌0.5h至完全溶解，加去离子水定容至1L。

③0.05M、pH值为6.0的MES缓冲液的配制：取容量1L的烧杯，加入800mL去离子水，称取9.76g MES(2-(N-吗啉代)乙磺酸)、9g NaCl加入到烧杯中，搅拌使其充分溶液，用HCl或NaOH调节pH值至6.0±0.05，加入1％(V/V)的BSA、1‰(V/V)的Tween-20，搅拌0.5h至完全溶解，加去离子水定容至1L。

(2)制备生物素标记的鼠抗人类胰蛋白酶抗体溶液

按鼠抗人类胰蛋白酶抗体与生物素的摩尔比为1：20的比例将鼠抗人类胰蛋白酶抗体加入到溶解有生物素Sulfo-NHS-Biotin的二甲基亚砜溶液中，室温条件下充分混合反应60分钟，反应后的溶液用0.01M、pH值为7.4的磷酸盐缓冲液透析。BCA法测定生物素标记的鼠抗人类胰蛋白酶抗体溶液的浓度，并用0.01M、pH值为7.4的磷酸盐缓冲液调整其浓度到0.5ug/mL。

(3)制备链霉亲和素标记的纳米磁微粒悬浮液

将链霉亲和素标记的纳米磁微粒用磁分离器沉淀出来，用0.01M、pH值为7.4的磷酸盐缓冲液重悬，充分混匀15分钟后磁分离沉出，弃去上清，再用0.01M、pH值为7.4的磷酸盐缓冲液重悬，如此重复清洗5次，清洗后的纳米磁微粒复溶于0.01M、pH值为7.4的磷酸盐缓冲液，浓度为0.5mg/mL。

(4)制备碱性磷酸酶标记的鼠抗人类胰蛋白酶抗体溶液；

将浓度为1.0mg/mL的碱性磷酸酶溶液与鼠抗人类胰蛋白酶抗体按摩尔比为10：1进行混合后并纯化，得到碱性磷酸酶标记的鼠抗人类胰蛋白酶抗体，再用0.05M、pH值为6.0的MES缓冲液将碱性磷酸酶标记的鼠抗人类胰蛋白酶抗体稀释到0.2ug/mL。

(5)制备类胰蛋白酶校准品

取类胰蛋白酶蛋白，用0.1M、pH值为7.4的Tris-HCl缓冲液配制成1ug/L、5ug/L、12.5ug/L、50ug/L、200ug/L的校准品。

(6)制备类胰蛋白酶质控品；

取类胰蛋白酶蛋白，用0.1M、pH值为7.4的Tris-HCl缓冲液配制成5ug/L、50ug/L的质控品。

(7)试剂盒组装

将生物素标记的鼠抗人类胰蛋白酶抗体溶液、链霉亲和素标记的纳米磁微粒悬浮液、碱性磷酸酶标记的鼠抗人类胰蛋白酶抗体溶液、类胰蛋白酶校准品和质控品组装成试剂盒。

实施例3：

(一)本发明提供了一种纳米磁微粒全自动化学发光法定量检测血清类胰蛋白酶试剂盒的检测方法，检测在全自动化学发光仪BioCLIA 1200上进行，具体仪器操作步骤如下：

(1)将试剂盒放入全自动化学发光分析/测定仪试剂仓相应位置，试剂盒信息通过条形码扫描仪输入仪器系统，也可通过仪器配套软件设定。

(2)将校准品置于仪器样本仓。通过条形码扫描仪识别校准品信息，并在仪器系统中分配校准品位置。

(3)将质控物/待测样本置于仪器样本仓，通过仪器配套软件编辑相应检测信息。

(4)启动运行程序，所有校准品/质控物/待检样本处理步骤将自动执行。

(二)、本发明提供的一种纳米磁微粒全自动化学发光定量检测血清类胰蛋白酶试剂盒还可以在半自动化学发光仪上实现，具体的样本检测步骤如下：

(1)在检测管中依次加入20uL待测血清或类胰蛋白酶质控品20uL生物素标记的鼠抗人类胰蛋白酶抗体、50uL链霉亲和素标记的纳米磁微粒，混匀后，在37℃下共孵育30分钟，样本中类胰蛋白酶抗体被捕获，并固着在纳米磁微粒表面。

(2)外加磁场作用下，磁微粒沉降下来，去除上清，加入500uL含2％吐温的Tris缓冲清洗液，去除磁场后，震荡使磁微粒重悬；重复此清洗步骤3次以除去未结合的生物素标记的鼠抗人类胰蛋白酶抗体。

(3)加入135uL碱性磷酸酶标记的鼠抗人类胰蛋白酶抗体溶液(二抗)，混匀，37℃下孵育15分钟，形成抗类胰蛋白酶抗体-类胰蛋白酶-抗类胰蛋白酶二抗的双抗夹心结构。

(4)外加磁场作用下，磁微粒沉降下来，去除上清，加入500uL清洗液，去除磁场后，震荡使磁微粒重悬；重复此清洗步骤3次以除去未结合的酶标抗体及其它杂质。

(5)加入200uL酶促化学发光底物，去除磁场，充分混匀后，测定发光值。

(6)以实施例二中制备的一系列已知浓度的类胰蛋白酶校准品进行检测，得各浓度校准品的发光值如表1所示，用四参数拟合方式绘制类胰蛋白酶标准曲线，具体参阅图1。

表1

校准品	S1	S2	S3	S4	S5
						浓度(ug/L)	1	5	12.5	50	200
发光值(RLU)	37506	141258	354694	1572179	3751348

(7)对于待测样本的发光值，对照图1中的类胰蛋白酶标准曲线计算得样本中类胰蛋白酶含量。

本发明的工作原理：待测血清样本与生物素标记的鼠抗人类胰蛋白酶抗体、链霉亲和素标记的纳米磁微粒共孵育，待测血清样本中类胰蛋白酶抗体与生物素标记的鼠抗人类胰蛋白酶抗体特异性结合，同时借助生物素-链霉亲和素放大体系，血清样本中总类胰蛋白酶结合到固相载体纳米磁微粒上；外加磁场作用下，磁分离洗涤去除多余的生物素标记的鼠抗人类胰蛋白酶抗体；加入碱性磷酸酶标记的鼠抗人类胰蛋白酶二抗，形成抗类胰蛋白酶抗体-类胰蛋白酶-抗类胰蛋白酶二抗的双抗夹心结构；外加磁场作用下，多次磁分离洗涤去除未结合的酶标抗体及其它杂质；加入酶促化学发光底物，测定发光强度；使用已知浓度的校准品标准曲线，根据发光强度对照标准曲线，计算得出待测样本中总类胰蛋白酶的含量。

对比例:将二抗更换为碱性磷酸酶标记的兔抗人类胰蛋白酶抗体,以实施例2中制备的一系列已知浓度的类胰蛋白酶校准品进行检测，得各浓度校准品的发光值如表2所示。

表2

校准品	S1	S2	S3	S4	S5
						浓度(ug/L)	1	5	12.5	50	200
发光值(RLU)	49005	72384	103345	152384	203978

与碱性磷酸酶标记的鼠抗人类胰蛋白酶抗体作为二抗相比，所得校准曲线的发光值偏低，各校准点间的分辨度低。

实施例4：

本发明所制备的试剂盒的性能检测：

(1)、最低检测限(LOD)

测试方法：以校准品稀释液为样本(A点)进行检测，重复测定20次，得出20次测量结果的发光值(RLU)，计算其平均值(M)和标准差(SD)，得出M+2SD，根据校准曲线拟合四参数方程，将M+2SD的RLU值代入上述方程中，求出对应的浓度值，即为最低检测限。下表3为A点测试得到的发光值。

表3

请参阅图1，校准曲线拟合曲线如图1所示，将A点的M+2SD代入拟合得到的曲线中，得该试剂盒的最低检测限LOD＝0.54ug/L。

(2)、精密度

测试方法：用正常人血清配制成高、中、低三个待测样本，在同一次实验中测定类胰蛋白酶含量，每个样本重复测定10次，计算日内变异系数(CV)；不同天测定类胰蛋白酶含量，每次实验每个样本重复测定10次，共完成8次测试，得到80个数据，计算日间变异系数(CV)。本发明试剂盒测得的样本批内和批间精密度如下表4所示。

表4

(3)、干扰

测试方法：选取高、中、低三份血清样本，分别对每份血清样本进行不同比例的胆红素、血红蛋白、甘油三脂添加，测定添加前后样本测值的偏差。结果表明：当样本中添加的胆红素≤20mg/dL，血红蛋白≤500mg/dL，甘油三酯≤700mg/dL时，对测定结果无影响。

(4)、方法学比对

测试方法：选取100份血清样本，分别用本发明制备得到的试剂盒和PhadiaUniCAP测定系统进行测定，对两类系统的测定结果进行比对。以本发明方法测得的血清类胰蛋白酶浓度为横坐标，以Phadia UniCAP测定系统测得的结果为纵坐标，对所得的100个坐标点进行线性回归分析，如图2所示，得相关方程y＝0.9906x+1.0506，相关系数为0.9936。此结果表明，本发明方法与Phadia UniCAP系统测定结果具有很好的一致性。

本发明与现有技术相比，有如下优点：

本发明采用酶促化学发光技术，采用碱性磷酸酶-AMPPD发光体系，以碱性磷酸酶为发光标记物，不含致癌物质，无放射污染，试剂有效期长；以AMPPD为发光底物，产生连续稳定的发光，试剂线性范围极广，避免了采用传统发光标记物因发光不稳定导致的结果不稳定的缺陷。

本发明以纳米磁微粒为固相载体，反应过程中纳米磁微粒上的抗人类胰蛋白酶抗体与待测样本中的类胰蛋白酶抗体结合，之后在外加磁场作用下，不需离心分离，即可将待测样本中的类胰蛋白酶抗体与其它物质充分分离，大大缩短了反应过程，加快了检测速度。

本发明在具有高比表面积的纳米磁微粒基础上还采用了链霉亲和素-生物素放大系统，极大提高了纳米磁微粒上待测物类胰蛋白酶抗体的结合量，降低了试剂的使用量，提高反应的灵敏度，研究表明本发明所涉及试剂盒检测仅需试剂量为20uL，同时试剂盒最低检测限可低至0.54ug/L。

本发明所涉及试剂盒可在半自动化学发光平台检测，也可在全自动化学发光平台检测。借助于全自动化学发光平台BioCLIA，可实现样本自动连续加载，加样、反应、清洗等步骤紧密衔接，缩短反应过程的同时最大限度降低人为操作不稳定带来的检测可靠性低等缺陷。

以上对本发明做了详尽的描述，其目的在于让熟悉此领域技术的人士能够了解本发明的内容并加以实施，并不能以此限制本发明的保护范围，凡根据本发明的精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围内。

Claims

1.一种血清类胰蛋白酶的化学发光定量检测试剂盒，其特征在于：包括如下试剂：

浓度为0.1~1 mg/mL的链霉亲和素标记的纳米磁微粒悬浮液；

浓度为0.5~5μg/mL的生物素标记的鼠抗人类胰蛋白酶抗体溶液；

浓度为0.2~1μg/mL的碱性磷酸酶标记的鼠抗人类胰蛋白酶抗体溶液。

2.根据权利要求1所述的血清类胰蛋白酶的化学发光定量检测试剂盒，其特征在于：所述的鼠抗人类胰蛋白酶抗体与所述的生物素的投料摩尔比为1:5~1:20；所述的碱性磷酸酶与所述的鼠抗人类胰蛋白酶抗体的投料摩尔比为2:1~10:1。

3.根据权利要求1所述的血清类胰蛋白酶的化学发光定量检测试剂盒，其特征在于：所述的生物素为Sulfo-NHS-Biotin、NHS-LC-Biotin或NHS-LC-LC-Biotin。

4.根据权利要求1所述的血清类胰蛋白酶的化学发光定量检测试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒还包括类胰蛋白酶校准品和类胰蛋白酶质控品。

5.根据权利要求4所述的血清类胰蛋白酶的化学发光定量检测试剂盒，其特征在于：所述的类胰蛋白酶校准品包括浓度为0.9~1.1μg/L、4.5~5.5μg/L、11.25~13.75μg/L、45~55μg/L、180~220μg/L的类胰蛋白酶溶液；所述的类胰蛋白酶质控品包括浓度为4~6μg/L、40~60μg/L的类胰蛋白酶溶液。

6.一种如权利要求1至5中任一项所述的血清类胰蛋白酶的化学发光定量检测试剂盒的制备方法，其特征在于：

所述的生物素标记的鼠抗人类胰蛋白酶抗体溶液的制备方法为：将鼠抗人类胰蛋白酶抗体加入到溶解有生物素的二甲基亚砜中，15~40℃下混合反应50~70min，再用0.009~0.011mol/L、pH为7.3~7.5的磷酸盐缓冲液进行透析制得所述的生物素标记的鼠抗人类胰蛋白酶抗体溶液；

所述的链霉亲和素标记的纳米磁微粒悬浮液的制备方法为：将链霉亲和素标记的纳米磁微粒经磁分离器沉淀出来后，用0.009~0.011mol/L、pH为7.3~7.5的磷酸盐缓冲液进行多次清洗，然后将清洗后的链霉亲和素标记的纳米磁微粒复溶于0.009~0.011mol/L、pH为7.3~7.5的磷酸盐缓冲液制得所述的链霉亲和素标记的纳米磁微粒悬浮液；

所述的碱性磷酸酶标记的鼠抗人类胰蛋白酶抗体溶液的制备方法为：将浓度为1.0~5.0mg/mL的碱性磷酸酶溶液与鼠抗人类胰蛋白酶抗体按摩尔比为2：1~10：1进行混合后并纯化，得到碱性磷酸酶标记的鼠抗人类胰蛋白酶抗体，再用0.045~0.055 mol/L、pH值为5.5~6.5的2-(N-吗啉代)乙磺酸缓冲液对碱性磷酸酶标记的鼠抗人类胰蛋白酶抗体稀释制得所述的碱性磷酸酶标记的鼠抗人类胰蛋白酶抗体溶液。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于：所述的制备方法还包括类胰蛋白酶校准品的制备和类胰蛋白酶质控品的制备，所述的类胰蛋白酶校准品通过将类胰蛋白酶蛋白与0.09~0.11mol/L、pH为7.3~7.5的三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液进行配置得到，所述的类胰蛋白酶质控品通过将类胰蛋白酶蛋白与0.09~0.11mol/L、pH为7.3~7.5的三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液进行配置得到。

8.一种如权利要求1至5中任一项所述的血清类胰蛋白酶的化学发光定量检测试剂盒的检测方法，其特征在于：包括如下步骤：

步骤（1）、将18~22μL的待测血清样本和类胰蛋白酶质控品分别与所述的生物素标记的鼠抗人类胰蛋白酶抗体溶液、所述的链霉亲和素标记的纳米磁微粒悬浮液在36~38℃下共孵育15~30min得到第一溶液；

步骤（２）、对所述的第一溶液进行多次清洗得到第二溶液，所述的清洗方法为将所述的第一溶液在磁场的作用下静置1~3min，弃去上清液后加入清洗液；

步骤（3）、向所述的第二溶液中加入所述的碱性磷酸酶标记的鼠抗人类胰蛋白酶抗体溶液在36~38℃下孵育15~30min得到第三溶液；

步骤（４）、对所述的第三溶液进行多次清洗得到第四溶液，所述的清洗方法为将所述的第三溶液在磁场的作用下静置1~3min，弃去上清液后加入清洗液；

步骤（５）、向所述的第四溶液中加入酶促化学发光底物并测定发光强度；

步骤（6）、利用类胰蛋白酶校准品绘制发光强度标准曲线，根据步骤（5）测定的发光强度对照所述的发光强度标准曲线，计算出所述的待测血清样本中类胰蛋白酶的含量；其中，所述的待测血清样本或所述的类胰蛋白酶质控品、所述的生物素标记的鼠抗人类胰蛋白酶抗体溶液、所述的链霉亲和素标记的纳米磁微粒悬浮液、所述的碱性磷酸酶标记的鼠抗人类胰蛋白酶抗体溶液、所述的酶促化学发光底物的投料体积比为1：0.9~1.1：2.25~2.75：6~7.5：9~11。

9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于：所述的检测方法在全自动化学发光仪BioCLIA系列上进行，采用所述的全自动化学发光仪BioCLIA系列进行所述的检测的具体步骤为：

步骤（1）、将所述的生物素标记的鼠抗人类胰蛋白酶抗体溶液、所述的链霉亲和素标记的纳米磁微粒悬浮液、所述的碱性磷酸酶标记的鼠抗人类胰蛋白酶抗体溶液放入全自动化学发光仪的试剂仓并进行识别；

步骤（2）、将类胰蛋白酶校准品置于所述的全自动化学发光仪的仪器样本仓，识别所述的类胰蛋白酶校准品信息并分配所述的类胰蛋白酶校准品的位置；

步骤（3）、将类胰蛋白酶质控品或待测样本血清置于所述的全自动化学发光仪的仪器样本仓，编辑检测信息；

步骤（4）、启动运行程序对所述的类胰蛋白酶校准品、所述的类胰蛋白酶质控品和所述的待测样本血清进行处理并得到检测结果。

10.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于：所述的检测方法在半自动化学发光仪上进行。