CN107688069A - (1r,2r)‑环己烷‑1,2‑二甲醇的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种 (1R,2R)‑环己烷‑1,2‑二甲醇对映异构体的HPLC的检测方法。本发明采用苯甲酰氯为衍生化试剂与(1R,2R)‑环己烷‑1,2‑二甲醇进行双衍生化反应，然后使用正相 HPLC‑UV 对(1R,2R)‑环己烷‑1,2‑二甲醇的衍生物进行对映体过量率的测定。该方法操作简单、快速、重现性好、灵敏度高、易于标准化操作，可用于工业化生产中(1R,2R)‑环己烷‑1,2‑二甲醇的分离检测和质量控制。

Description

(1R,2R)-环己烷-1,2-二甲醇的检测方法

技术领域

本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种(1R,2R)-环己烷-1,2-二甲醇对映异构体的HPLC检测方法。

背景技术

一种(1R,2R)-环己烷-1,2-二甲醇是盐酸鲁拉西酮的重要中间体。盐酸鲁拉西酮分子结构中，共有6个手性中心，其中有2个手性中心，由中间体(1R,2R)-环己烷-1,2-二甲醇引入，因此(1R,2R)-环己烷-1,2-二甲醇的光学纯度直接决定了盐酸鲁拉西酮的光学纯度和药效。

鲁拉西酮（lurasidone）为一新型非典型抗精神病药，2010年10月28日美国食品药品监督管理局（FDA）批准其上市，商品名为Latuda，用于治疗精神分裂症。

目前，尚未查询到相关文献对(1R,2R)-环己烷-1,2-二甲醇对映异构体进行控制，因此急需开发一种(1R,2R)-环己烷-1,2-二甲醇对映异构体的HPLC的检测方法，控制(1R,2R)-环己烷-1,2-二甲醇的对映体过量率，以保证其纯度。由于(1R,2R)-环己烷-1,2-二甲醇及其手性异构体几乎无紫外吸收，因此采用衍生化方法使之紫外吸收增强从而提高检测灵敏度，再通过高效液相色谱进行分析检测。

发明内容

本发明的目的是提供一种(1R,2R)-环己烷-1,2-二甲醇对映异构体的HPLC的检测方法，利用苯甲酰氯化合物作为衍生化试剂，可以快捷准确的实现定性、定量和对映体过量率分析。

一种(1R,2R)-环己烷-1,2-二甲醇对映异构体的HPLC的检测方法，具体包含如下步骤：

步骤一、衍生化

将 (1R,2R)-环己烷-1,2-二甲醇溶于有机溶剂中，在碱性、低温条件下，以苯甲酰氯为衍生化试剂，控制(1R,2R)-环己烷-1,2-二甲醇和苯甲酰氯的摩尔比，进行双衍生化反应，得到衍生化后的(1R,2R)-环己烷-1,2-二甲醇，反应式见式Ⅰ：

式Ⅰ；

所述的(1R,2R)-环己烷-1,2-二甲醇和苯甲酰氯的摩尔比为1：2.0~1：2.5；

低温条件下指反应温度为-10℃~10℃。

步骤二、分离检测

（1）色谱条件：

色谱柱：Chiralpak IC手性柱，0.46cm×25cm，粒径5µm；

检测波长：210 nm；

流动相：正己烷-醇-三氟乙酸；其中正己烷-醇-三氟乙酸流动相的体积比为95：5：0.1；

流速：1 .0~1 .5mL/min；

运行时间：30 min；

进样量：10~20 µL;

空白溶液：正己烷：乙醇的体积比为70:30~0:100；

（2）供试品溶液的配制：

精密称取衍生化后的(1R,2R)-环己烷-1,2-二甲醇，置于容量瓶中，用空白溶液溶解并稀释至浓度为0.5~1.5 mg/ml。

所述的醇为无水乙醇、异丙醇中的一种或两种。

所述的有机溶剂为二氯甲烷，氯仿，乙酸乙酯中的一种或两种以上的组合。

所述的碱为三乙胺、N，N-二异丙基乙胺中的一种或两种。

本发明的有益效果如下：

本发明利用苯甲酰氯化合物作为衍生化试剂对(1R,2R)-环己烷-1,2-二甲醇进行衍生化，然后采用HPLC进行检测，以面积归一化法计算对映体的含量。本发明检测(1R,2R)-环己烷-1,2-二甲醇中对映异构体的含量，可以快捷准确的实现定性、定量和对映体过量率的分析，对控制盐酸鲁拉西酮原料药的质量、保证用药安全有重要意义。

另外，本发明使用苯甲酰氯化合物作为衍生化试剂，成本较低，TLC法监测衍生化过程显示，衍生化反应完全，(1R,2R)-环己烷-1,2-二甲醇及其对映异构体全部转化为相应的衍生物，从而保证了检测结果的准确。

附图说明

图1： 1,2环己烷-二甲醇与苯甲酰氯化合物衍生化物的液相色谱分析图。

在附图1中：10.185 min 为苯甲酰氯与(1R,2R)-环己烷-1,2-二甲醇的衍生物；11.185 min 为苯甲酰氯与(1R,2R)-环己烷-1,2-二甲醇的衍生物；11.978 min 为苯甲酰氯与(1S,2S)-环己烷-1,2-二甲醇的衍生物。

图2：苯甲酰氯与(1R,2R)-环己烷-1,2-二甲醇衍生化物的液相色谱分析图。

具体实施方式

以下结合附图和具体实施例对本发明进行进一步详细的叙述。

实施例1。

1-1 苯甲酰氯与1,2环己烷-二甲醇衍生化物的液相色谱分析。

称取混旋的1,2环己烷-二甲醇0.5 g（0.0035 mol），三乙胺1.05 g，4-二甲氨基吡啶 0.04 g溶于15 mL 二氯甲烷中，在10 ℃下搅拌，缓慢滴加苯甲酰氯1.07g（0.0076mol），升温至室温搅拌4h。TLC监测反应，反应结束后，反应液酸洗，碱洗，干燥，浓缩得到苯甲酰氯与1,2环己烷-二甲醇的衍生物。

将衍生化后的1,2环己烷-二甲醇用正己烷：乙醇=70:30（v/v）溶解后采用高效液相色谱进行检测分析。液相色谱条件为色谱柱：Chiralpak IC手性柱，0.46cm×25cm，粒径5µm；流动相为正己烷：无水乙醇：三氟乙酸=95：5：0.1；检测波长为210 nm；流速为1 .0 mL/min；柱温为30 ℃，进样量为20 µL。其图谱见图1。

1-2 苯甲酰氯与(1R,2R)-环己烷-1,2-二甲醇衍生化物的液相色谱分析。

称取(1R,2R)-环己烷-1,2-二甲醇0.5 g（0.0035 mol），三乙胺1.05 g，4-二甲氨基吡啶 0.04 g溶于15 mL 二氯甲烷中，在10 ℃下搅拌，缓慢滴加苯甲酰氯1.07g（0.0076mol），升温至室温搅拌4h。TLC监测反应，反应结束后，反应液酸洗，碱洗，干燥，浓缩得到苯甲酰氯与1,2环己烷-二甲醇的衍生物。

将衍生化后的1,2环己烷-二甲醇用正己烷：乙醇=70:30（v/v）溶解后采用高效液相色谱进行检测分析。液相色谱条件为色谱柱：Chiralpak IC手性柱，0.46cm×25cm，粒径5µm；流动相为正己烷：无水乙醇：三氟乙酸=95：5：0.1；检测波长为210 nm；流速为1 .0 mL/min；柱温为30 ℃，进样量为20 µL。其图谱见图2。

表一苯甲酰氯与1,2环己烷-二甲醇衍生化物定性分析

实施例	(R) 构型%	(S) 构型%	e.e.%
				1-1	47.08	48.31	-1.29
1-2	100	0	100

实施例2 苯甲酰氯与1,2环己烷-二甲醇的衍生化条件考察。

2-1 苯甲酰氯与1,2环己烷-二甲醇衍生化物的液相色谱分析。

称取混旋的1,2环己烷-二甲醇0.5 g（0.0035 mol），N，N-二异丙基乙胺1.34 g，4-二甲氨基吡啶 0.04 g溶于15 mL 二氯甲烷中，在10 ℃下搅拌，缓慢滴加苯甲酰氯1.07g（0.0076 mol），升温至室温搅拌4h。TLC监测反应，反应结束后，反应液酸洗，碱洗，干燥，浓缩得到苯甲酰氯与1,2环己烷-二甲醇的衍生物。

将衍生化后的1,2环己烷-二甲醇用正己烷：乙醇=70:30（v/v）溶解后采用高效液相色谱进行检测分析。液相色谱条件同实施例1-1。保留时间和手性e.e.%值同实施例1-1。

2-2苯甲酰氯与1,2环己烷-二甲醇衍生化物的液相色谱分析。

称取混旋的1,2环己烷-二甲醇0.5 g（0.0035 mol），N，N-二异丙基乙胺1.34 g，4-二甲氨基吡啶 0.04 g溶于15 mL 二氯甲烷中，在10 ℃下搅拌，缓慢滴加苯甲酰氯98 g（0.0070 mol），升温至室温搅拌4h。TLC监测反应，反应结束后，反应液酸洗，碱洗，干燥，浓缩得到苯甲酰氯与1,2环己烷-二甲醇的衍生物。

将衍生化后的1,2环己烷-二甲醇用正己烷：乙醇=70:30（v/v）溶解后采用高效液相色谱进行检测分析。液相色谱条件同实施例1-1。保留时间和手性e.e.%值同实施例1-1。

2-3 苯甲酰氯与1,2环己烷-二甲醇衍生化物的液相色谱分析。

称取混旋的1,2环己烷-二甲醇0.5 g（0.0035 mol），N，N-二异丙基乙胺1.34 g，4-二甲氨基吡啶 0.04 g溶于15 mL 氯仿中，在-10 ℃下搅拌，缓慢滴加苯甲酰氯98 g（0.0076 mol），升温至室温搅拌4h。TLC监测反应，反应结束后，反应液酸洗，碱洗，干燥，浓缩得到苯甲酰氯与1,2环己烷-二甲醇的衍生物。

将衍生化后的1,2环己烷-二甲醇用正己烷：乙醇=70:30（v/v）溶解后采用高效液相色谱进行检测分析。液相色谱条件同实施例1-1。结果表明，保留时间和手性e.e.%值同实施例1-1。

2-4 苯甲酰氯与(1R,2R)-环己烷-1,2-二甲醇衍生化物的液相色谱分析。

称取(1R,2R)-环己烷-1,2-二甲醇0.5 g（0.0035 mol），三乙胺1.05 g，4-二甲氨基吡啶 0.04 g溶于15 mL 乙酸乙酯中，在0 ℃下搅拌，缓慢滴加苯甲酰氯1.07g（0.0076mol），升温至室温搅拌4h。TLC监测反应，反应结束后，反应液酸洗，碱洗，干燥，浓缩得到苯甲酰氯与1,2环己烷-二甲醇的衍生物。

将衍生化后的1,2环己烷-二甲醇用正己烷：乙醇=70:30（v/v）溶解后采用高效液相色谱进行检测分析。液相色谱条件同实施例1-1。保留时间和手性e.e.%值同实施例1-2。

2-5 苯甲酰氯与(1R,2R)-环己烷-1,2-二甲醇衍生化物的液相色谱分析。

称取(1R,2R)-环己烷-1,2-二甲醇0.5 g（0.0035 mol），N，N-二异丙基乙胺1.34g，4-二甲氨基吡啶 0.04 g溶于15 mL 乙酸乙酯中，在0 ℃下搅拌，缓慢滴加苯甲酰氯1.23g（0.0088 mol），升温至室温搅拌4h。TLC监测反应，反应结束后，反应液酸洗，碱洗，干燥，浓缩得到苯甲酰氯与1,2环己烷-二甲醇的衍生物。

将衍生化后的1,2环己烷-二甲醇用正己烷：乙醇=70:30（v/v）溶解后采用高效液相色谱进行检测分析。液相色谱条件同实施例1-1。保留时间和手性e.e.%值同实施例1-2。

实施例3 色谱条件考察实验。

取实施例1-1的衍生物，采取不同的色谱条件进行分离检测。

3-1 将衍生物用无水乙醇溶解后，采用高效液相色谱进行检测分析。液相色谱条件为色谱柱：Chiralpak IC手性柱，0.46cm×25cm，粒径5µm；流动相为正己烷：异丙醇：三氟乙酸=95：5：0.1；检测波长为210 nm；流速为1 .0 mL/min；柱温为30 ℃，进样量为20 µL。手性e.e.%值同实施例1-1。

3-2 将衍生物用无水乙醇溶解后，采用高效液相色谱进行检测分析。液相色谱条件为色谱柱：Chiralpak IC手性柱，0.46cm×25cm，粒径5µm；流动相为正己烷：无水乙醇：三氟乙酸=95：5：0.1；检测波长为210 nm；流速为0.8 mL/min；柱温为30 ℃，进样量为20 µL。手性e.e.%值同实施例1-1。

3-3 将衍生物用正己烷：乙醇=90：10溶解后，采用高效液相色谱进行检测分析。液相色谱条件为色谱柱：Chiralpak IC手性柱，0.46cm×25cm，粒径5µm；流动相为正己烷：异丙醇：三氟乙酸=95：5：0.1；检测波长为210 nm；流速为1.2 mL/min；柱温为30 ℃，进样量为20 µL。手性e.e.%值同实施例1-1。

以上所述实施方式仅为本发明的优选实施例，而并非本发明可行实施的穷举。对于本领域一般技术人员而言，在不背离本发明原理和精神的前提下对其所作出的任何显而易见的改动，都应当被认为包含在本发明的权利要求保护范围之内。

Claims (4)

1.一种(1R,2R)-环己烷-1,2-二甲醇对映异构体的HPLC的检测方法，其特征在于，具体包含如下步骤：

步骤一、衍生化

将 (1R,2R)-环己烷-1,2-二甲醇溶于有机溶剂中，在碱性、低温条件下，以苯甲酰氯为衍生化试剂，控制(1R,2R)-环己烷-1,2-二甲醇和苯甲酰氯的摩尔比，进行双衍生化反应，得到衍生化后的(1R,2R)-环己烷-1,2-二甲醇，反应式见式Ⅰ：

式Ⅰ；

所述的(1R,2R)-环己烷-1,2-二甲醇和苯甲酰氯的摩尔比为1：2.0~1：2.5；

低温条件下指反应温度为-10℃~10℃；

步骤二、分离检测

（1）色谱条件：

色谱柱：Chiralpak IC手性柱，0.46cm×25cm，粒径5µm；

检测波长：210 nm；

流动相：正己烷-醇-三氟乙酸；其中正己烷-醇-三氟乙酸流动相的体积比为95：5：0.1；

流速：1 .0~1 .5mL/min；

运行时间：30 min；

进样量：10~20 µL;

空白溶液：正己烷：乙醇的体积比为70:30~0:100；

（2）供试品溶液的配制：

精密称取衍生化后的(1R,2R)-环己烷-1,2-二甲醇，置于容量瓶中，用空白溶液溶解并稀释至浓度为0.5~1.5 mg/ml。

2.根据权利要求1所述的一种(1R,2R)-环己烷-1,2-二甲醇对映异构体的HPLC的检测方法, 其特征在于，所述的醇为无水乙醇、异丙醇中的一种或两种。

3.根据权利要求1所述的一种(1R,2R)-环己烷-1,2-二甲醇对映异构体的HPLC的检测方法, 其特征在于，所述的有机溶剂为二氯甲烷，氯仿，乙酸乙酯中的一种或两种以上的组合。

4.根据权利要求1所述的一种(1R,2R)-环己烷-1,2-二甲醇对映异构体的HPLC的检测方法, 其特征在于，所述的碱为三乙胺、N，N-二异丙基乙胺中的一种或两种。