CN107688011B - 磁固相微萃取结合碳量子点荧光增敏检测牛奶中氧氟沙星方法 - Google Patents

磁固相微萃取结合碳量子点荧光增敏检测牛奶中氧氟沙星方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种磁固相微萃取结合碳量子点荧光增敏检测牛奶中氧氟沙星的方法，采用聚乙烯亚胺为碳源及氮源，水热法合成氮掺杂荧光碳量子点；采用2‑(5‑溴‑吡碇偶氮)‑5‑二乙氨基苯酚及十二烷基硫酸钠修饰的四氧化三铁磁性纳米粒子为净化牛奶材料，氧氟沙星能增强氮掺杂荧光碳量子点的荧光，其增强的荧光信号强度与氧氟沙星浓度呈一定线性关系，据此建立了检测氧氟沙星的荧光分光光度法；本发明制备的氮掺杂荧光碳量子点对氧氟沙星有显著的荧光增敏作用，且选择性强，磁性纳米粒子有较好的净化作用，消除基体的干扰，方法用于氧氟沙星的荧光测定，具有灵敏度高、特异性的特点。

Description

磁固相微萃取结合碳量子点荧光增敏检测牛奶中氧氟沙星 方法
技术领域
本发明涉及化学分析检测技术领域，具体为一种磁固相微萃取结合碳量子点荧光增敏检测牛奶中氧氟沙星方法。
背景技术
氧氟沙星是一种人工合成喹诺酮类广谱抗生素，在乳制品业被广泛应用于治疗奶牛乳腺炎，其残留会对人类健康产生严重威胁，如过敏反应和体内产生抗药性菌种等。因此我国及其他一些国家对乳制品中氧氟沙星等抗生素残留量制定了严格的控制标准。传统的抗生素残留测定方法如ELISA、色谱等方法，需要对牛奶基质进行复杂的样品前处理。荧光法具有操作简单、快速、灵敏度高的特点，但由于复杂基体带来的干扰不可避免，对测定结果有较大影响。
碳量子点是一类粒径一般小于10nm的新型碳材料。它具有优异的光学性能，可调的激发和发射行为，较高的荧光稳定性，较低的毒性和良好的生物相容性，在越来越多的领域中得到了广泛的应用，逐渐成为纳米碳材料中的一颗新星。目前，人们致力于探索制备高量子产率碳点的方法。碳量子点经过掺杂或者表面钝化后,其荧光量子产率以及光电性能均可以得到明显的提高。最近几年，有很多关于氮元素掺杂碳量子点的文献报道，碳量子点的荧光量子产率均得到了提高，未见与本发明方法相同的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种高灵敏、高选择性的磁固相微萃取结合碳量子点荧光增敏检测牛奶中氧氟沙星的方法。
本发明利用聚乙烯亚胺制备水溶性氮掺杂荧光碳量子点，制备的氮掺杂碳量子点的荧光量子产率高达39%，其对氧氟沙星有显著的荧光增敏作用，用于牛奶中氧氟沙星残留测定时，将合成的2-(5-溴-吡啶偶氮)-5-二乙氨基苯酚及十二烷基硫酸钠修饰的Fe3O4纳米粒子用于磁固相微萃取，对干扰测定的牛奶基体有明显的净化效果，方法利用了氮掺杂碳量子点对氧氟沙星的特异性荧光增敏，同时对基体的净化与常用的固相萃取及柱层析相比，具有成本低、分离速度快、净化效果好的优势。建立了氮掺杂荧光碳量子点作为荧光探针检测微量氧氟沙星的新方法，方法的灵敏度高，检测限可以达到0.5nmol/L，荧光增敏倍数达13倍，同时其他喹诺酮药物没有此作用，方法具有较好的特异性。
本发明磁固相微萃取结合碳量子点荧光增敏检测牛奶中氧氟沙星方法包括如下步骤：
(1)标准工作曲线的绘制：采用柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液配置8个浓度在0.01～10 µmol/L范围内的氧氟沙星标准溶液，每个标准溶液5mL，然后加入水溶性氮掺杂荧光碳量子点溶液，涡旋混匀静置后，于荧光分光光度计上，激发波长为344nm，发射波长为423nm测定荧光强度，以荧光增强强度对其相应浓度作图进行回归分析，即可得到标准工作曲线，由此可得到氧氟沙星的线性回归方程与其相关系数；
(2)样品制备：取5-10mL牛奶，加入10-15mL甲醇-水-甲酸提取液、l-3mL质量浓度的4％三氯乙酸乙腈溶液，涡旋1-3 min，超声5-10min，10000r/min下离心5-10 min，取上清液，避光保存于4℃冰箱待分析测定，其中甲醇-水-甲酸提取液是按体积比28:72:0.1的比例将甲醇、水、甲酸混匀制得；
(3)样品测定：取步骤（2）的上清液，加入磁性纳米材料，涡旋使其充分混匀后，通过外加磁铁进行磁分离，弃去磁性纳米材料，取出上清液，用柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液调pH至6.5-7.5并定容至5mL，加入水溶性氮掺杂荧光碳量子点溶液，涡旋混匀静置后，于荧光分光光度计上，激发波长为344nm，发射波长为423nm测定荧光强度，代入步骤(1)回归方程，计算出样品中氧氟沙星的含量。
所述的水溶性氮掺杂荧光碳量子点的制备方法：称取10.0-15.0g聚乙烯亚胺液体，加入到90mL超纯水中，超声5-10min使其充分混匀，并转移至聚四氟乙烯反应釜，于200-250℃加热5-10h，自然冷却至室温后，先用孔径为0.22μm滤膜过滤，后用截留分子量为3000-3500Da 的透析袋进行透析处理24h，得到水溶性氮掺杂荧光碳量子点。
所述的磁性纳米材料的制备方法如下：
（1）Fe3O4的制备：取2.05-2.50g硫酸亚铁铵和1.41-2.00g三氯化铁，用50mL去离子水溶解后，氮气保护下，水浴加热至75-85℃之后，加入5-7mL体积百分比浓度28%的氨水，继续搅拌反应30min，冷却至室温，用去离子水洗涤3次，在外加磁铁作用下分离，即得磁性Fe3O4；
（2）SiO2包覆的Fe3O4的制备：在磁性Fe3O4中加入无水乙醇120-150mL、去离子水30-50mL，用氨水调pH至9后，加入800-1000µL的正硅酸四乙酯，氮气保护下，室温搅拌5h；产物在外加磁铁作用下分离，并依次用去离子水和乙醇各洗涤3次，即得SiO2包覆的Fe3O4，记为Fe3O4@SiO2；
（3）2-(5-溴-吡啶偶氮)-5-二乙氨基苯酚及十二烷基硫酸钠修饰的Fe3O4的制备：取2.0-3.0g Fe3O4@SiO2加入到50mL浓度为4-5mol/L的HNO3中，酸化5-10min之后，用去离子水冲洗三次，在外加磁铁作用下分离；将1.0-2.0g 十二烷基硫酸钠溶于150mL去离子水中，之后加到上述酸化的磁性材料中，调pH为2.0-3.0，搅拌15-20min；再加入2-(5-溴-吡啶偶氮)-5-二乙氨基苯酚5-8mL，并调pH至8.0，搅拌15-20min；最后，在外加磁铁作用下分离，用去离子水和乙醇各洗涤3次，得到2-(5-溴-吡碇偶氮)-5-二乙氨基苯酚及十二烷基硫酸钠修饰的Fe3O4磁性纳米材料，记为Fe3O4@SiO2@SDS@5-Br-PADAP。
所述柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液pH为6.5-7.5。
所述磁性纳米材料用量为5-10mg。
所述水溶性氮掺杂荧光碳量子点用量为150μL。
所述涡旋混匀静置是指涡旋混匀0.5-2 min，然后静置10-20 min。
本发明的优点在于：
1.本发明采用一步水热法制备了水溶性的、具有高量子产率的荧光氮掺杂碳量子点，制备的氮掺杂碳量子点能高灵敏及特异性强增强氧氟沙星的荧光；
2.制备的2-(5-溴-吡啶偶氮)-5-二乙氨基苯酚及十二烷基硫酸钠修饰的Fe3O4纳米粒子用于干扰测定的牛奶基体有明显的净化效果，结合磁固相微萃取，具有成本低、磁分离速度快、操作简单的优势；
3.建立了牛奶中氧氟沙星残留的磁固相微萃取-氮掺杂荧光碳量子点荧光探针检测微量氧氟沙星的新方法，方法的灵敏度高，检测限可以达到0.5 nmol/L，荧光增敏倍数达13倍，同时其他喹诺酮药物没有此作用，方法具有较好的特异性。
附图说明
图1为水溶性氮掺杂荧光碳量子点对氧氟沙星的荧光增敏作用结果示意图谱；
图2为共存的其他氟喹诺酮药物对水溶性氮掺杂荧光碳量子点的影响结果；
图3为牛奶样品净化前后测定结果对照图。
具体实施方式
下面将结合具体的实施例对本发明的技术方案作进一步详细地描述说明，但本发明的保护范围并不仅限于此。
实施例1：牛奶中氧氟沙星的含量测定步骤如下：
（1）水溶性氮掺杂荧光碳量子点(N-CQDs)的制备：称取10.0g聚乙烯亚胺液体，加入到90mL超纯水中，超声5min使其充分混匀，并转移至聚四氟乙烯反应釜，于200℃加热5h，自然冷却至室温后，先用孔径为0.22μm滤膜过滤，后用截留分子量为3500Da的透析袋进行透析处理24h，得到水溶性氮掺杂荧光碳量子点；
（2）磁性纳米材料的制备方法包括：
Figure DEST_PATH_IMAGE002
Fe3O4的制备：取2.05g硫酸亚铁铵和1.41g三氯化铁，用50mL去离子水溶解后，氮气保护下，水浴加热至80℃之后，加入5mL体积百分比浓度为28%的氨水，继续搅拌反应30min，冷却至室温，用去离子水洗涤3次，在外加磁铁作用下分离，即得磁性Fe3O4纳米粒子；
Figure DEST_PATH_IMAGE004
SiO2包覆的Fe3O4的制备：在磁性Fe3O4中加入无水乙醇120mL、去离子水30mL，用氨水调pH至9.0后，加入800µL的正硅酸四乙酯，氮气保护下，室温搅拌5h，产物在外加磁铁作用下分离，并用去离子水和乙醇各洗涤3次，即得SiO2包覆的Fe3O4，记为Fe3O4@SiO2；
2-(5-溴-吡啶偶氮)-5-二乙氨基苯酚及十二烷基硫酸钠修饰的Fe3O4的制备：取2.0g Fe3O4@SiO2加入到50mL浓度为4mol/L的HNO3中，酸化5min之后，用200mL去离子水冲洗三次，在外加磁铁作用下分离；将1.0 g十二烷基硫酸钠溶于150mL去离子水，之后加到上述分离后的酸化磁性材料中，调pH为2.0，搅拌15min；再加入2-(5-溴-吡啶偶氮)-5-二乙氨基苯酚5mL，并调pH至8.0，再搅拌15min；最后，在外加磁铁作用下分离，用去离子水和乙醇各洗涤3次，得到2-(5-溴-吡啶偶氮)-5-二乙氨基苯酚及十二烷基硫酸钠修饰的Fe3O4磁性纳米材料，记为Fe3O4@SiO2@SDS@5-Br-PADAP；
(3)标准工作曲线的绘制：采用pH 6.5的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液配置以下浓度的氧氟沙星标准液：0.01、0.05、0.1、0.2、0.5、1、5、10 µmol/L，并定容于5 mL，加入150μL步骤(1)制备的水溶性氮掺杂荧光碳量子点，涡旋混匀0.5min静置10 min后，于荧光分光光度计上，激发波长为344nm，发射波长为423nm测定荧光强度，以荧光猝灭强度对其相应浓度作图进行回归分析，即得到标准工作曲线的线性回归方程△F=1.098C+0.2174，相关系数R2=0.9980；
(4)样品制备：取5 mL牛奶，加入10 mL甲醇-水-甲酸(28：72：0.1，v/v)提取液、lmL质量浓度的4％的三氯乙酸乙腈溶液，涡旋3 min，超声5 min，10000r/min下离心10 min，取上清液，避光保存于4 ℃冰箱待分析测定；
(5)样品测定：取步骤（4）上清液，加入10 mg步骤（2）磁性纳米材料（Fe3O4@SiO2@SDS@5-Br-PADAP），涡旋混合2 min，通过外加磁铁进行磁分离，弃去磁性纳米材料，取出上清液1mL，用柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液调pH至6.5并定容至5mL，加入150μL步骤（1）制备的水溶性氮掺杂荧光碳量子点溶液，涡旋混合2 min，静置10min后，于荧光分光光度计上，激发波长为344nm，发射波长为423nm测定荧光强度，代入步骤(3)回归方程，计算得出氧氟沙星的含量为0.45µmol/L，相对标准偏差为1.5%（图1、2、3）。
由图1结果可知：本实施例制备对水溶性氮掺杂荧光碳量子点对氧氟沙星有较强的荧光增敏作用；图2结果表明，共存的其他氟喹诺酮药物对氧氟沙星的测定没有干扰，方法具有较好的特异性；图3结果表明，经磁固相萃取净化后的牛奶样品大大减少了基体对测定的干扰。
实施例2：牛奶中氧氟沙星的含量测定步骤如下：
(1)水溶性氮掺杂荧光碳量子点的制备：称取12.0g聚乙烯亚胺液体，加入到90mL超纯水中，超声10min使其充分混匀，并转移至聚四氟乙烯反应釜，于250℃加热6h，自然冷却至室温后，先用孔径为0.22μm滤膜过滤，后用截留分子量为3000Da 的透析袋进行透析处理24h，得到水溶性氮掺杂荧光碳量子点；
(2)磁性纳米材料的制备方法包括：
Figure 706875DEST_PATH_IMAGE002
Fe3O4的制备：取2.20g硫酸亚铁铵和1.65g三氯化铁，用50mL去离子水溶解后，氮气保护下，水浴加热至75℃之后，加入6mL体积百分比浓度为28%的氨水，继续搅拌反应30min，冷却至室温，用去离子水洗涤3次，在外加磁铁作用下分离，即得磁性Fe3O4纳米粒子；
Figure 358436DEST_PATH_IMAGE004
SiO2包覆的Fe3O4的制备：在磁性Fe3O4中加入无水乙醇130mL、去离子水40mL，用氨水调pH至9.0后，加入900µL的正硅酸四乙酯，氮气保护下，室温搅拌5h，产物在外加磁铁作用下分离，并用去离子水和乙醇各洗涤3次，即得SiO2包覆的Fe3O4，记为Fe3O4@SiO2；
2-(5-溴-吡啶偶氮)-5-二乙氨基苯酚及十二烷基硫酸钠修饰的Fe3O4的制备：取3.0g Fe3O4@SiO2加入到50mL浓度为5mol/L的HNO3中，酸化8min之后，用200mL去离子水冲洗三次，在外加磁铁作用下分离；将2.0 g十二烷基硫酸钠溶于150mL去离子水，之后加到上述分离后的酸化磁性材料中，调pH为3.0，搅拌20min；再加入2-(5-溴-吡啶偶氮)-5-二乙氨基苯酚6mL，并调pH至8.0，再搅拌18min；最后，在外加磁铁作用下分离，用去离子水和乙醇各洗涤3次，得到2-(5-溴-吡啶偶氮)-5-二乙氨基苯酚及十二烷基硫酸钠修饰的Fe3O4磁性纳米材料，记为Fe3O4@SiO2@SDS@5-Br-PADAP；
(3)标准工作曲线的绘制：同实施例1步骤(3)；
(4)牛奶样品制备：取10mL牛奶，加入15mL甲醇-水-甲酸提取液、2mL质量浓度4％的三氯乙酸乙腈溶液，涡旋2 min，超声8min，10000r/min下离心8 min，取上清液，避光保存于4℃冰箱待分析测定，其中甲醇-水-甲酸提取液是按体积比28:72:0.1的比例将甲醇、水、甲酸混匀制得；
(5) 样品测定：取步骤（4）的上清液，加入5 mg步骤（2）磁性纳米材料（Fe3O4@SiO2@SDS@5-Br-PADAP），涡旋混合0.5 min，通过外加磁铁进行磁分离，弃去磁性纳米材料，取出上清液2mL，用柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液调pH至7.0并定容至5mL，加入150μL步骤（1）水溶性氮掺杂荧光碳量子点溶液，涡旋混合1 min静置15min后，于荧光分光光度计上，激发波长为344nm，发射波长为423nm测定荧光强度，代入步骤(3)回归方程，计算得出氧氟沙星的含量为1.02µmol/L，相对标准偏差为0.8%。
实施例3：牛奶中氧氟沙星的含量测定步骤如下：
(1) 称取15.0g聚乙烯亚胺液体，加入到90mL超纯水中，超声8min使其充分混匀，并转移至聚四氟乙烯反应釜，于220℃加热10h，自然冷却至室温后，先用孔径为0.22μm滤膜过滤，后用截留分子量为3200Da 的透析袋进行透析处理24h，得到水溶性氮掺杂荧光碳量子点；
(2)磁性纳米材料的制备方法包括：
Figure 595700DEST_PATH_IMAGE002
Fe3O4的制备：取2.50g硫酸亚铁铵和2.00g三氯化铁，用50mL去离子水溶解后，氮气保护下，水浴加热至85℃之后，加入7mL体积百分比浓度为28%的氨水，继续搅拌反应30min，冷却至室温，用去离子水洗涤3次，在外加磁铁作用下分离，即得磁性Fe3O4纳米粒子；
Figure 878913DEST_PATH_IMAGE004
SiO2包覆的Fe3O4的制备：在磁性Fe3O4中加入无水乙醇150mL、去离子水50mL，用氨水调pH至9.0后，加入1000µL的正硅酸四乙酯，氮气保护下，室温搅拌5h，产物在外加磁铁作用下分离，并用去离子水和乙醇各洗涤3次，即得SiO2包覆的Fe3O4，记为Fe3O4@SiO2；
Figure 544119DEST_PATH_IMAGE006
2-(5-溴-吡啶偶氮)-5-二乙氨基苯酚及十二烷基硫酸钠修饰的Fe3O4的制备：取2.5g Fe3O4@SiO2加入到50mL浓度为4.5mol/L的HNO3中，酸化10min之后，用200mL去离子水冲洗三次，在外加磁铁作用下分离；将1.5g十二烷基硫酸钠溶于150mL去离子水，之后加到上述分离后的酸化磁性材料中，调pH2.5，搅拌18min；再加入2-(5-溴-吡啶偶氮)-5-二乙氨基苯酚8mL，并调pH至8.0，再搅拌20min；最后，在外加磁铁作用下分离，用去离子水和乙醇各洗涤3次，得到2-(5-溴-吡啶偶氮)-5-二乙氨基苯酚及十二烷基硫酸钠修饰的Fe3O4磁性纳米材料，记为Fe3O4@SiO2@SDS@5-Br-PADAP；
(3)标准工作曲线的绘制：同实施例1步骤(3)；
(4)牛奶样品制备：取7mL牛奶，加入12mL甲醇-水-甲酸提取液、3mL质量浓度4％的三氯乙酸乙腈溶液，涡旋3 min，超声10min，10000r/min下离心10 min，取上清液，避光保存于4℃冰箱待分析测定，其中甲醇-水-甲酸提取液是按体积比28:72:0.1的比例将甲醇、水、甲酸混匀制得；
(5) 样品测定：取步骤（4）上清液，加入8 mg步骤（2）磁性纳米材料（Fe3O4@SiO2@SDS@5-Br-PADAP），涡旋混合1min，通过外加磁铁进行磁分离，弃去磁性纳米材料，取出上清液1mL，用柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液调pH至7.5并定容至5mL，加入150μL步骤（1）水溶性氮掺杂荧光碳量子点溶液，涡旋混合2 min静置20min后，于荧光分光光度计上，激发波长为344nm，发射波长为423nm测定荧光强度，代入步骤(3)回归方程，计算得出氧氟沙星的含量为6.98µmol/L，相对标准偏差为0.5%。
实施例4：牛奶中氧氟沙星的含量测定步骤如下：
(1)水溶性氮掺杂荧光碳量子点的制备：称取13.0g聚乙烯亚胺液体，加入到90mL超纯水中，超声7min使其充分混匀，并转移至聚四氟乙烯反应釜，于230℃加热9h，自然冷却至室温后，先用孔径为0.22μm滤膜过滤，后用截留分子量为3400Da 的透析袋进行透析处理24h，得到水溶性氮掺杂荧光碳量子点；
(2)磁性纳米材料的制备方法包括：
Figure 279994DEST_PATH_IMAGE002
Fe3O4的制备：取2.2g硫酸亚铁铵和1.6g三氯化铁，用50mL去离子水溶解后，氮气保护下，水浴加热至80℃之后，加入5mL体积百分比浓度为28%的氨水，继续搅拌反应30min，冷却至室温，用去离子水洗涤3次，在外加磁铁作用下分离，即得磁性Fe3O4纳米粒子；
Figure 72369DEST_PATH_IMAGE004
SiO2包覆的Fe3O4的制备：在磁性Fe3O4中加入无水乙醇140mL、去离子水30mL，用氨水调pH至9.0后，加入800µL的正硅酸四乙酯，氮气保护下，室温搅拌5h，产物在外加磁铁作用下分离，并用去离子水和乙醇各洗涤3次，即得SiO2包覆的Fe3O4，记为Fe3O4@SiO2；
Figure 210089DEST_PATH_IMAGE006
2-(5-溴-吡啶偶氮)-5-二乙氨基苯酚及十二烷基硫酸钠修饰的Fe3O4的制备：取2.0g Fe3O4@SiO2加入到50mL浓度为5mol/L的HNO3中，酸化5min之后，用200mL去离子水冲洗三次，在外加磁铁作用下分离；将1.0g十二烷基硫酸钠溶于150mL去离子水，之后加到上述分离后的酸化磁性材料中，调pH2.0，搅拌16min；再加入2-(5-溴-吡啶偶氮)-5-二乙氨基苯酚6mL，并调pH至8.0，再搅拌20min；最后，在外加磁铁作用下分离，用去离子水和乙醇各洗涤3次，得到2-(5-溴-吡啶偶氮)-5-二乙氨基苯酚及十二烷基硫酸钠修饰的Fe3O4磁性纳米材料，记为Fe3O4@SiO2@SDS@5-Br-PADAP；
(3)标准工作曲线的绘制：同实施例1步骤(3)；
(4)牛奶样品制备：取5mL牛奶，加入10mL甲醇-水-甲酸提取液、2mL质量浓度4％的三氯乙酸乙腈溶液，涡旋1min，超声10min，10000r/min下离心10 min，取上清液，避光保存于4℃冰箱待分析测定，其中甲醇-水-甲酸提取液是按体积比28:72:0.1的比例将甲醇、水、甲酸混匀制得；
(5) 样品测定：取步骤（4）制备的上清液，加入8mg步骤（2）制备的磁性纳米材料，涡旋混合1.5 min，通过外加磁铁进行磁分离，弃去磁性纳米材料，取出上清液2mL，用柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液调pH至7.0并定容至5mL，加入150μL步骤（1）制备的水溶性氮掺杂荧光碳量子点溶液，涡旋混合1 min静置13min后，于荧光分光光度计上，激发波长为344nm，发射波长为423nm测定荧光强度，代入步骤(3)回归方程，计算得出氧氟沙星的含量为0.78µmol/L，相对标准偏差为1.2%。

Claims (5)

1.一种磁固相微萃取结合碳量子点荧光增敏检测牛奶中氧氟沙星的方法，其特征在于，具体步骤如下：
(1)标准工作曲线的绘制：采用柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液配置8个浓度在0.01～10 µmol/L范围内的氧氟沙星标准溶液，每个标准溶液5mL，然后加入水溶性氮掺杂荧光碳量子点溶液，涡旋混匀静置后，于荧光分光光度计上，激发波长为344nm，发射波长为423nm测定荧光强度，以荧光增强强度对其相应浓度作图进行回归分析，即得标准工作曲线，由此得到氧氟沙星的线性回归方程；
(2)样品制备：取5-10mL牛奶，加入10-15mL甲醇-水-甲酸提取液、l-3mL质量浓度4％的三氯乙酸乙腈溶液，涡旋1-3 min，超声5-10min，10000r/min下离心5-10 min，取上清液，避光保存于4℃冰箱待分析测定，其中甲醇-水-甲酸提取液是按体积比28:72:0.1的比例将甲醇、水、甲酸混匀制得；
(3)样品测定：取步骤（2）的上清液，加入磁性纳米材料，涡旋使其充分混匀后，通过外加磁铁进行磁分离，弃去磁性纳米材料，取出上清液1-2mL，用柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液调pH至6.5-7.5并定容至5mL，加入水溶性氮掺杂荧光碳量子点溶液，涡旋混匀静置后，于荧光分光光度计上，激发波长为344nm，发射波长为423nm测定荧光强度，代入步骤(1)回归方程，计算出样品中氧氟沙星的含量；
所述水溶性氮掺杂荧光碳量子点的制备方法为称取10.0-15.0g聚乙烯亚胺液体，加入到90mL超纯水中，超声5-10min使其充分混匀，并转移至聚四氟乙烯反应釜，于200-250℃加热5-10h，自然冷却至室温后，先用孔径为0.22μm滤膜过滤，后用截留分子量为3000-3500Da的透析袋进行透析处理24h，得到水溶性氮掺杂荧光碳量子点；
所述磁性纳米材料的制备方法如下：
（1）取2.05-2.50g硫酸亚铁铵和1.41-2.00g三氯化铁，用50mL去离子水溶解后，氮气保护下，水浴加热至75-85℃之后，加入5-7mL体积百分比浓度28%的氨水，继续搅拌反应30min，冷却至室温，用去离子水洗涤3次，在外加磁铁作用下分离，即得磁性Fe3O4；
（2）在磁性Fe3O4中加入无水乙醇120-150mL、去离子水30-50mL，用氨水调pH至9后，加入800-1000µL的正硅酸四乙酯，氮气保护下，室温搅拌5h；产物在外加磁铁作用下分离，并依次用去离子水和乙醇各洗涤3次，即得SiO2包覆的Fe3O4，记为Fe3O4@SiO2；
（3）取2.0-3.0g Fe3O4@SiO2加入到50mL浓度为4-5mol/L的HNO3中，酸化5-10min之后，用去离子水冲洗三次，在外加磁铁作用下分离；将1.0-2.0g 十二烷基硫酸钠溶于150mL去离子水中，之后加到上述分离后的酸化磁性材料中，调pH为2.0-3.0，搅拌15-20min；再加入2-(5-溴-吡啶偶氮)-5-二乙氨基苯酚5-8mL，并调pH至8.0，搅拌15-20min；最后，在外加磁铁作用下分离，用去离子水和乙醇各洗涤3次，得到2-(5-溴-吡啶偶氮)-5-二乙氨基苯酚及十二烷基硫酸钠修饰的Fe3O4磁性纳米材料。
2.根据权利要求书1所述的磁固相微萃取结合碳量子点荧光增敏检测牛奶中氧氟沙星的方法，其特征在于：柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液pH为6.5-7.5。
3.根据权利要求书1所述的磁固相微萃取结合碳量子点荧光增敏检测牛奶中氧氟沙星的方法，其特征在于：磁性纳米材料用量为5-10mg。
4.根据权利要求书1所述的磁固相微萃取结合碳量子点荧光增敏检测牛奶中氧氟沙星的方法，其特征在于：水溶性氮掺杂荧光碳量子点用量为150μL。
5.根据权利要求书1所述的磁固相微萃取结合碳量子点荧光增敏检测牛奶中氧氟沙星的方法，其特征在于：涡旋混匀静置是指涡旋混匀0.5-2 min，然后静置10-20 min。
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