CN107677837A - 一种β‑人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒的制备方法 - Google Patents

一种β‑人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种β‑人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括试剂R1和试剂R2的制备；试剂R1的制备包括：向MES缓冲液中添加叠氮钠、蔗糖、Tween‑80和PEG‑8000，制得试剂R1；试剂R2的制备包括：(1)向MES缓冲液中添加NaCl、叠氮钠、牛血清蛋白、甘油，制得乳胶微球溶解试剂；(2)将β‑人绒毛膜促性腺激素抗体包被到乳胶微球中，制得抗体胶乳；(3)将抗体胶乳离心去上清液，然后用乳胶微球溶解试剂溶解沉淀物，超声分散，制得试剂R2。本发明的优点在于：试剂盒中所使用的化学试剂和抗体均可为市售，配制方便，快速、成本低、特异性强、稳定性好、重复性好。

Description

一种β-人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒的制备方法
技术领域
本发明涉及医学检验技术领域，更具体涉及一种β-人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒的制备方法。
背景技术
人绒毛膜促性腺激素(HCG)是由胎盘的滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，它是由α和β二聚体的糖蛋白组成。它的主要功能是维持黄体及降低母体淋巴细胞的活动，防止对胎儿的排斥反应。HCG结构中包括α、β两个亚基，α亚基与LH、FSH、TSH近似，尤其是与LH有较大的免疫交叉反应，β链为其独有，β亚基被用来制备特异性抗体测定血中的HCG，专名为β-HCG。
检测β-人绒毛膜促性腺激素的方法多为酶联免疫吸附法、荧光免疫层析法、放射免疫法等。酶联免疫吸附法操作繁琐，定量检测效果不佳，结果受人为因素影响结果较大；放射免疫法有放射型污染，且所需仪器较昂贵。试剂盒的制备工艺复杂。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于提供了一种制备工艺简单的β-人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒的制备方法。
本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题的：
一种β-人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒的制备方法，包括试剂R1的制备和试剂R2的制备。
试剂R1中各组分及含量为：
所述试剂R1的制备包括以下步骤：
向MES缓冲液中添加叠氮钠、蔗糖、Tween-80和PEG-8000，搅拌均匀，待充分溶解，制得试剂R1。
试剂R2中各组分的含量为：
乳胶包被的β-人绒毛膜促性腺激素抗体(即抗体胶乳)0.5％-3％；
所述乳胶包被的β-人绒毛膜促性腺激素抗体的原料成分为：胶乳微球、β-人绒毛膜促性腺激素抗体和聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物；
所述试剂R2的制备包括如下步骤：
(1)向MES缓冲液中添加NaCl、叠氮钠、牛血清蛋白、甘油，搅拌均匀，待充分溶解，制得乳胶微球溶解试剂；
(2)采用化学偶联法将β-人绒毛膜促性腺激素抗体包被到乳胶微球中，制得乳胶包被的β-人绒毛膜促性腺激素抗体；
(3)将步骤(2)制得的乳胶包被的β-人绒毛膜促性腺激素抗体离心去上清液，然后用步骤(1)制得的乳胶微球溶解试剂溶解沉淀物，使胶聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物在整体试剂R2中的含量为9％-11％，超声分散，制得试剂R2。
优选地，步骤(2)中，抗体胶乳的制备包括如下步骤：
(a1)取胶乳微球溶解于100mM MES缓冲液中，加入50g/L的EDAC溶液混匀后，于37℃环境中孵育混匀1小时，离心去上清液，向沉淀物中加入50g/L的NHS溶液恢复至原体积后，于37℃环境中孵育混匀1小时，离心去上清；
(a2)在37℃条件下，向沉淀物中加入聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物，共聚反应2小时后，离心去上清液，将沉淀物分散于MES缓冲液中，重复离心和分散步骤3次，最后向沉淀物中加入MES缓冲液恢复至原体积；
(a3)加入β-人绒毛膜促性腺激素抗体，于37℃下反应4小时，离心去上清液，将沉淀物分散于原体积的PBS缓冲液中，重复离心和分散步骤3次，最后将沉淀物分散于原体积的NHS缓冲液中，加入牛血清蛋白30g/L，2-8℃封存48小时，即可制得乳胶包被的β-人绒毛膜促性腺激素抗体。
优选地，MES缓冲液的pH为7.2。
优选地，胶乳微球包括粒径为80nm的胶乳微球和粒径120nm的胶乳微球。
优选地，粒径为80nm的胶乳微球的添加量为20g/L，粒径为120nm的胶乳微球的添加量为40g/L。
本发明相比现有技术具有以下优点：试剂盒中所使用的化学试剂和抗体均可从市场采购，配制方便，简单、快速、成本低、特异性强、稳定性好、重复性好。
具体实施方式
下面对本发明的实施例作详细说明，本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
实施例1
一种β-人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒的制备方法，包括试剂R1的制备和试剂R2的制备。
所有原料均为市购原料；所有配比中，对于固体，％表示g/100mL，对于液体，％表示mL/100mL。
试剂R1的组分及含量为：
试剂R1的制备包括以下步骤：
向MES缓冲液中添加叠氮钠、蔗糖、Tween-80和PEG-8000，搅拌均匀，待充分溶解，制得试剂R1。
试剂R2的组分及含量为：
乳胶包被的β-人绒毛膜促性腺激素抗体0.5％-3％；
所述乳胶包被的β-人绒毛膜促性腺激素抗体的原料成分为：胶乳微球、β-人绒毛膜促性腺激素抗体和聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物。
试剂R2的制备包括如下步骤：
(1)向MES缓冲液中添加NaCl、叠氮钠、牛血清蛋白、甘油和聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物，搅拌均匀，待充分溶解，制得乳胶微球溶解试剂；
(2)采用化学偶联法将β-人绒毛膜促性腺激素抗体包被到乳胶微球中，制得乳胶包被的β-人绒毛膜促性腺激素抗体，乳胶包被的β-人绒毛膜促性腺激素抗体的制备包括如下步骤：
(a1)取粒径为80nm的胶乳微球20g/L和粒径为120nm的胶乳微球40g/L溶解于100mM MES缓冲液中，加入50g/L的EDAC溶液混匀后，于37℃环境中孵育混匀1小时，离心去上清液，向沉淀物中加入50g/L的NHS溶液恢复至原体积后，于37℃环境中孵育混匀1小时，离心去上清；
(a2)在37℃条件下，向沉淀物中加入聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物，共聚反应2小时后，离心去上清液，将沉淀物分散于MES缓冲液中，重复离心和分散步骤3次，最后向沉淀物中加入MES缓冲液恢复至原体积；
(a3)加入β-人绒毛膜促性腺激素抗体，于37℃下反应4小时，离心去上清液，将沉淀物分散于原体积的PBS缓冲液中，重复离心和分散步骤3次，最后将沉淀物分散于原体积的NHS缓冲液中，加入牛血清蛋白30g/L，2-8℃封存48小时，即可制得乳胶包被的β-人绒毛膜促性腺激素抗体；
(3)将步骤(2)制得的乳胶包被的β-人绒毛膜促性腺激素抗体离心去上清液，然后用步骤(1)制得的乳胶微球溶解试剂溶解沉淀物，使胶聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物在整体试剂R2中的含量为9％-11％，超声分散，制得试剂R2。
在使用上述试剂盒测定β-人绒毛膜促性腺激素的含量时，试剂R1和试剂R2的体积比为3-4:1。
试剂盒中所使用的化学试剂和抗体均可从市场采购，配制方便，简单、快速、成本低、特异性强、稳定性好、重复性好。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种β-人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括试剂R1的制备和试剂R2的制备；
其中，试剂R1中各组分及含量为：
所述试剂R1的制备包括以下步骤：
向MES缓冲液中添加叠氮钠、蔗糖、Tween-80和PEG-8000，搅拌均匀，待充分溶解，制得试剂R1；
试剂R2中各组分及含量为：
乳胶包被的β-人绒毛膜促性腺激素抗体0.5％-3％；
所述乳胶包被的β-人绒毛膜促性腺激素抗体的原料成分为：胶乳微球、β-人绒毛膜促性腺激素抗体和聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物；
所述试剂R2的制备包括如下步骤：
(1)向MES缓冲液中添加NaCl、叠氮钠、牛血清蛋白、甘油，搅拌均匀，待充分溶解，制得乳胶微球溶解试剂；
(2)采用化学偶联法将β-人绒毛膜促性腺激素抗体包被到乳胶微球中，制得乳胶包被的β-人绒毛膜促性腺激素抗体；
(3)将步骤(2)制得的乳胶包被的β-人绒毛膜促性腺激素抗体离心去上清液，然后用步骤(1)制得的乳胶微球溶解试剂溶解沉淀物，使胶聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物在整体试剂R2中的含量为9％-11％，超声分散，制得试剂R2。
2.根据权利要求1所述的β-人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，乳胶包被的β-人绒毛膜促性腺激素抗体的制备包括如下步骤：
(a1)取胶乳微球溶解于100mM MES缓冲液中，加入50g/L的EDAC溶液混匀后，于37℃环境中孵育混匀1小时，离心去上清液，向沉淀物中加入50g/L的NHS溶液恢复至原体积后，于37℃环境中孵育混匀1小时，离心去上清；
(a2)在37℃条件下，向沉淀物中加入聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物，共聚反应2小时后，离心去上清液，将沉淀物分散于MES缓冲液中，重复离心和分散步骤3次，最后向沉淀物中加入MES缓冲液恢复至原体积；
(a3)加入β-人绒毛膜促性腺激素抗体，于37℃下反应4小时，离心去上清液，将沉淀物分散于原体积的PBS缓冲液中，重复离心和分散步骤3次，最后将沉淀物分散于原体积的NHS缓冲液中，加入牛血清蛋白30g/L，2-8℃封存48小时，即可制得乳胶包被的β-人绒毛膜促性腺激素抗体。
3.根据权利要求1或2所述的β-人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述MES缓冲液的pH为7.2。
4.根据权利要求1或2所述的β-人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述胶乳微球包括粒径为80nm的胶乳微球和粒径120nm的胶乳微球。
5.根据权利要求4所述的β-人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒的制备方法，所述粒径为80nm的胶乳微球的添加量为20g/L，所述粒径为120nm的胶乳微球的添加量为40g/L。
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