CN107748266A - 一种β‑人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒及其应用 - Google Patents

一种β‑人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN107748266A
CN107748266A CN201710915572.6A CN201710915572A CN107748266A CN 107748266 A CN107748266 A CN 107748266A CN 201710915572 A CN201710915572 A CN 201710915572A CN 107748266 A CN107748266 A CN 107748266A
Authority
CN
China
Prior art keywords
reagent
human chorionic
content
detection kit
latex
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201710915572.6A
Other languages
English (en)
Inventor
庄庆华
丁先骏
吴泽东
吴铮
张金东
朱雨
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Anhui Iprocom Biotechnology Co Ltd
Original Assignee
Anhui Iprocom Biotechnology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Anhui Iprocom Biotechnology Co Ltd filed Critical Anhui Iprocom Biotechnology Co Ltd
Priority to CN201710915572.6A priority Critical patent/CN107748266A/zh
Publication of CN107748266A publication Critical patent/CN107748266A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
    • G01N33/76—Human chorionic gonadotropin including luteinising hormone, follicle stimulating hormone, thyroid stimulating hormone or their receptors
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/531—Production of immunochemical test materials
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种β‑人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒，包含体积比为3‑4:1的试剂R1和R2；其中，试剂R1包含：MES缓冲液80‑120mM，叠氮钠0.8‑1.2g/L，蔗糖10‑20g/L，Tween‑80 4‑6ml/L，PEG‑8000 5‑15g/L；试剂R2包含：MES缓冲液40‑60mM，NaCl 100‑110mM，叠氮钠0.4‑0.6g/L，牛血清蛋白20‑40g/L，甘油0.5‑1.5ml/L，乳胶包被的β‑人绒毛膜促性腺激素抗体0.5％‑3％。本发明的优点在于：试剂盒为液体，可直接应用于全自动生化分析仪，无需大型仪器即可快速检测；大大提高了试剂盒的灵敏度和线性范围。

Description

一种β-人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒及其应用
技术领域
本发明涉及医学检验技术领域，更具体涉及一种β-人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒及其应用。
背景技术
人绒毛膜促性腺激素(HCG)是由胎盘的滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，它是由α和β二聚体的糖蛋白组成。它的主要功能是维持黄体及降低母体淋巴细胞的活动，防止对胎儿的排斥反应。HCG结构中包括α、β两个亚基，α亚基与LH、FSH、TSH近似，尤其是与LH有较大的免疫交叉反应，β链为其独有，β亚基被用来制备特异性抗体测定血中的HCG，专名为β-HCG。
检测β-人绒毛膜促性腺激素的方法多为酶联免疫吸附法、荧光免疫层析法、放射免疫法等。酶联免疫吸附法操作繁琐，定量检测效果不佳，结果受人为因素影响结果较大；放射免疫法有放射型污染，且所需仪器较昂贵。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于提供了一种检测方便、定量检测效果好的β-人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒及其应用。
本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题的：
一方面，提供一种β-人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒包含体积比为3-4:1的试剂R1和试剂R2；
其中，所述试剂R1的组分及含量为：
所述试剂R2的组分及含量为：
乳胶包被的β-人绒毛膜促性腺激素抗体0.5％-3％；
所述乳胶包被的β-人绒毛膜促性腺激素抗体的原料成分为：胶乳微球、β-人绒毛膜促性腺激素抗体和聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物，其中，聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物在整体试剂R2中的含量为9％-11％。
优选地，β-人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒包含体积比为3-4:1的试剂R1和试剂R2；
其中，所述试剂R1的组分及含量为：
所述试剂R2的组分及含量为：
乳胶包被的β-人绒毛膜促性腺激素抗体2％；
所述乳胶包被的β-人绒毛膜促性腺激素抗体的原料成分为：胶乳微球、β-人绒毛膜促性腺激素抗体和聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物，其中，聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物在整体试剂R2中的含量为10％。
优选地，所述MES缓冲液的pH为7.2。
优选地，所述胶乳微球包含粒径为80nm和120nm的胶乳微球。
优选地，所述粒径为80nm的胶乳微球的添加量为20g/L，所述粒径为120nm的胶乳微球的添加量为40g/L。
另一方面，提供上述的β-人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒在检测样本中β-人绒毛膜促性腺激素的含量中的应用。
优选地，上述应用通过以下步骤实现：
1)向比色杯中加入样本和试剂R1，混匀，37℃孵育5分钟，置入全自动生化分析仪中，读取吸光度A1；
2)再向比色杯中添加试剂R2，混匀，37℃孵育5分钟，置入全自动生化分析仪中，读取吸光度A2；
3)根据校准曲线计算出样本中β-人绒毛膜促性腺激素的含量。
优选地，按体积比计，样本：试剂R1：试剂R2＝1:80-120:20-40，且样本、试剂R1和试剂R2的总体积至少为比色杯总体积的2/3。
本发明相比现有技术具有以下优点：
试剂盒中所使用的化学试剂和抗体均可从市场采购，且无污染，配制方便；试剂盒中试剂R1和试剂R2均为液体，可直接应用于全自动生化分析仪，无需手工操作，无需大型仪器设备即可在一定时间内快速检测，且定量效果好；所形成的抗原抗体复合物，稳定性佳，在特定波长下有一定的吸光度，特异性强；试剂盒中采取了不同粒径的胶乳微球混合使用，大大提高了试剂盒的灵敏度和线性范围。
具体实施方式
下面对本发明的实施例作详细说明，本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
所有原料均为市购原料；所有配比中，对于固体，％表示g/100mL，对于液体，％表示mL/100mL。
实施例1
一种β-人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒包含体积比为3:1的试剂R1和试剂R2；
其中，所述试剂R1的组分及含量为：
所述试剂R2的组分及含量为：
乳胶包被的β-人绒毛膜促性腺激素抗体0.5％；
所述乳胶包被的β-人绒毛膜促性腺激素抗体的原料成分为：胶乳微球、β-人绒毛膜促性腺激素抗体和聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物，其中，聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物在整体试剂R2中的含量为9％。
试剂R1的配制如下：
按照上述配比向MES缓冲液中添加叠氮钠、蔗糖、Tween-80和PEG-8000，搅拌均匀，待充分溶解，制得试剂R1。
试剂R2液的配制如下：
(1)按照上述配比向MES缓冲液中添加NaCl、叠氮钠、牛血清蛋白、甘油，搅拌均匀，待充分溶解，制得乳胶微球溶解试剂；
(2)取粒径为80nm的胶乳微球20g/L和粒径为120nm的胶乳微球40g/L，溶解于100mM MES缓冲液中，加入50g/L的EDAC溶液混匀后，于37℃环境中孵育混匀1小时，离心去上清液，向沉淀物中加入50g/L的NHS溶液恢复至原体积后，于37℃环境中孵育混匀1小时，离心去上清；在37℃条件下，向沉淀物中加入聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物，共聚反应2小时后，离心去上清液，将沉淀物分散于MES缓冲液中，重复离心和分散步骤3次，最后向沉淀物中加入MES缓冲液恢复至原体积；加入β-人绒毛膜促性腺激素抗体，于37℃下反应4小时，离心去上清液，将沉淀物分散于原体积的PBS缓冲液中，重复离心和分散步骤3次，最后将沉淀物分散于原体积的NHS缓冲液中，加入牛血清蛋白30g/L，2-8℃封存48小时，制得乳胶包被的β-人绒毛膜促性腺激素抗体；
(3)将步骤(2)制得的乳胶包被的β-人绒毛膜促性腺激素抗体离心去上清液，然后用步骤(1)制得的乳胶微球溶解试剂溶解沉淀物，使胶聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物在整体试剂R2中的含量为9％，超声分散，制得试剂R2。
上述试剂盒在检测样本中β-人绒毛膜促性腺激素的含量中的应用通过以下步骤实现：
1)向全自动生化分析仪的比色杯中加入5μL样本和150μL试剂R1，混匀，37℃孵育5分钟，置入全自动生化分析仪中，读取吸光度A1；
2)再向比色杯中添加50μL试剂R2，混匀，37℃孵育5分钟，置入全自动生化分析仪中，读取吸光度A2；
3)根据校准曲线计算出样本中β-人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)的含量。
样本中β-HCG含量(pg/mL)＝CS×ΔAT/ΔAS(pg/mL)
式中：ΔAT以空白管吸光度作对照的样品管吸光度值
ΔAS以空白管吸光度作对照的校准管吸光度值
CS校准液中β-HCG的浓度。
实施例2
一种β-人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒包含体积比为4:1的试剂R1和试剂R2；
其中，所述试剂R1的组分及含量为：
所述试剂R2的组分及含量为：
乳胶包被的β-人绒毛膜促性腺激素抗体3％；
所述乳胶包被的β-人绒毛膜促性腺激素抗体的原料成分为：胶乳微球、β-人绒毛膜促性腺激素抗体和聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物，其中，聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物在整体试剂R2中的含量为11％。
按照实施例1的方法制备上述试剂盒并将上述试剂盒应用于检测样本中β-人绒毛膜促性腺激素的含量，其中区别在于样本、试剂R1和试剂R2的添加量分别为2μL、240μL和60μL。
实施例3
一种β-人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒包含体积比为3:1的试剂R1和试剂R2；
其中，所述试剂R1的组分及含量为：
所述试剂R2的组分及含量为：
乳胶包被的β-人绒毛膜促性腺激素抗体2％；
所述乳胶包被的β-人绒毛膜促性腺激素抗体的原料成分为：胶乳微球、β-人绒毛膜促性腺激素抗体和聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物，其中，聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物在整体试剂R2中的含量为10％。
按照实施例1的方法制备上述试剂盒并将上述试剂盒应用于检测样本中β-人绒毛膜促性腺激素的含量，其中区别在于样本、试剂R1和试剂R2的添加量分别为6μL、210μL和70μL。
试剂盒中所使用的化学试剂和抗体均可从市场采购，且无污染，配制方便；试剂盒中试剂R1和试剂R2均为液体，可直接应用于全自动生化分析仪，无需手工操作，无需大型仪器设备即可在一定时间内快速检测，且定量效果好；所形成的抗原抗体复合物，稳定性佳，在特定波长下有一定的吸光度，特异性强；试剂盒中采取了不同粒径的胶乳微球混合使用，大大提高了试剂盒的灵敏度和线性范围。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种β-人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒，其特征在于，包含体积比为3-4:1的试剂R1和试剂R2；
其中，所述试剂R1的组分及含量为：
所述试剂R2的组分及含量为：
所述乳胶包被的β-人绒毛膜促性腺激素抗体的原料成分为：胶乳微球、β-人绒毛膜促性腺激素抗体和聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物，其中，聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物在整体试剂R2中的含量为9％-11％。
2.根据权利要求1所述的β-人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒，其特征在于，包含体积比为3-4:1的试剂R1和试剂R2；
其中，所述试剂R1的组分及含量为：
所述试剂R2的组分及含量为：
所述乳胶包被的β-人绒毛膜促性腺激素抗体的原料成分为：胶乳微球、β-人绒毛膜促性腺激素抗体和聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物，其中，聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物在整体试剂R2中的含量为10％。
3.根据权利要求1或2所述的β-人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒，其特征在于，所述MES缓冲液的pH为7.2。
4.根据权利要求1或2所述的β-人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒，其特征在于，所述胶乳微球包含粒径为80nm和120nm的胶乳微球。
5.根据权利要求4所述的β-人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒，其特征在于，所述粒径为80nm的胶乳微球的添加量为20g/L，所述粒径为120nm的胶乳微球的添加量为40g/L。
6.权利要求1至5中任一项所述的β-人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒在检测样本中β-人绒毛膜促性腺激素的含量中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：
1)向比色杯中加入样本和试剂R1，混匀，37℃孵育5分钟，置入全自动生化分析仪中，读取吸光度A1；
2)再向比色杯中添加试剂R2，混匀，37℃孵育5分钟，置入全自动生化分析仪中，读取吸光度A2；
3)根据校准曲线计算出样本中β-人绒毛膜促性腺激素的含量。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，按体积比计，样本：试剂R1：试剂R2＝1:80-120:20-40，且样本、试剂R1和试剂R2的总体积至少为比色杯总体积的2/3。
CN201710915572.6A 2017-09-30 2017-09-30 一种β‑人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒及其应用 Pending CN107748266A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710915572.6A CN107748266A (zh) 2017-09-30 2017-09-30 一种β‑人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710915572.6A CN107748266A (zh) 2017-09-30 2017-09-30 一种β‑人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒及其应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN107748266A true CN107748266A (zh) 2018-03-02

Family

ID=61255252

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710915572.6A Pending CN107748266A (zh) 2017-09-30 2017-09-30 一种β‑人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107748266A (zh)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103134926A (zh) * 2013-02-27 2013-06-05 上海交通大学 一种磁性微球载体及其制备方法
CN104155458A (zh) * 2013-11-27 2014-11-19 新昌县美迪生物科技有限公司 人绒毛膜促性腺激素定量检测试剂盒及其用途
CN106932588A (zh) * 2015-12-30 2017-07-07 上海复星长征医学科学有限公司 检测α1-微球蛋白的试剂盒及其制备方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103134926A (zh) * 2013-02-27 2013-06-05 上海交通大学 一种磁性微球载体及其制备方法
CN104155458A (zh) * 2013-11-27 2014-11-19 新昌县美迪生物科技有限公司 人绒毛膜促性腺激素定量检测试剂盒及其用途
CN106932588A (zh) * 2015-12-30 2017-07-07 上海复星长征医学科学有限公司 检测α1-微球蛋白的试剂盒及其制备方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR20160014007A (ko) 면역 응집 측정법
CN102901812A (zh) 一种人甲状腺球蛋白抗体（TGAb）的磁微粒化学发光免疫分析试剂盒及其检测方法
CN103293323B (zh) 一种促黄体生成素纳米磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法
CN102998467A (zh) β人绒毛膜促性腺激素磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法
CN105181680A (zh) 一种三聚氰胺的磁珠分离化学发光免疫检测方法
CN106546750A (zh) 一种微量白蛋白快速定量检测试纸条的制备及检测方法
CN103344634A (zh) 一种人甲胎蛋白（afp）的磁微粒化学发光免疫分析试剂盒及其检测方法
CN105891463A (zh) 一种基于纳米磁微粒时间分辨荧光的β-HCG定量检测试剂盒
CN105353139A (zh) 一种甲状旁腺素定量检测试剂盒
CN103336115A (zh) 一种人甲状腺过氧化物酶抗体（TPOAb）的磁微粒化学发光免疫分析试剂盒及其检测方法
CN109459570A (zh) 一种快速检测人体血液中铅离子的胶体金免疫试纸条制备方法
CN109142753A (zh) 鳞状上皮细胞癌抗原化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法
Wang et al. Development of an immunochromatographic test to detect white spot syndrome virus of shrimp
CN103344774A (zh) 一种人雌二醇（e2）的磁微粒化学发光免疫分析试剂盒及其检测方法
CN106645756A (zh) 一种检测nmp22的试剂盒及其制备方法
TW201920958A (zh) 有機著色微粒子、診斷藥套組及體外診斷方法
CN109061198A (zh) 抑制素a检测试剂盒及其制备方法
CN105467137A (zh) 游离人绒毛膜性腺激素β亚单位测试试剂盒及其测试方法
CN103267866B (zh) 一种促卵泡生成素纳米磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法
Wu et al. Ultra sensitive detection of influenza A virus based on Cdse/Zns quantum dots immunoassay
CN104155458A (zh) 人绒毛膜促性腺激素定量检测试剂盒及其用途
CN102004146B (zh) 一种混合标记物质和标记方法及其应用
CN107741494A (zh) 一种铜蓝蛋白检测试剂盒的制备方法
KR20110134445A (ko) 검사 시약 및 그것을 사용한 피검 시료 중의 피측정물의 측정 방법
CN104215778B (zh) 一种c肽单克隆抗体交联磁微粒及其制备方法和包括其的检测试剂盒

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20180302

RJ01 Rejection of invention patent application after publication