CN107660465A - 一种石斛兰的组培快繁培养基 - Google Patents

一种石斛兰的组培快繁培养基 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种石斛兰的组培快繁培养基，属于植物组织培养技术领域。本发明的培养基包括诱导培养基、继代培养基、壮苗培养基，各个培养阶段中所使用的培养基中添加了辣木叶汁和黄秋葵汁作为营养剂。其中诱导培养基的配方为：WPM培养基+玉米素0.5mg/L‑0.8mg/L+NAA0.2mg/L‑0.3mg/L+琼脂5.0g/L‑8.0g/L+蔗糖2.0g/L‑4.0g/L+黄秋葵汁5.0g/L‑8.0g/L+辣木叶汁12.0g/L‑15.0g/L，pH值5.2‑5.3。本发明提供的培养基配方可显著提高石斛兰的诱导分化率、外植体增殖系数及生根率，缩短培养周期，提高石斛兰组培苗的质量。

Description

一种石斛兰的组培快繁培养基
【技术领域】
本发明涉及植物组织培养技术领域，具体涉及一种石斛兰的组培快繁培养基。
【背景技术】
石斛(hú)兰，是兰科植物之一，主要分布于亚洲热带和亚热带，澳大利亚和太平洋岛屿，我国大部分分布于西南、华南、台湾等地。石斛兰的主要品种有金钗石斛、密花石斛、鼓槌石斛等。可入药，名为石斛，对人体有驱解虚热，益精强阴等疗效。随着花卉产业的兴起，石斛兰也成为了一种观赏植物。石斛兰的栽培方式一般为盆栽。由于石斛兰具有秉性刚强、祥和可亲的气质，被誉为父亲之花。石斛兰的植株由肉茎构成，粗如中指，叶如竹叶花葶从叶腋抽出，每葶有花七八朵，每花6瓣，四面散开，花瓣边均为紫色，瓣心为白色。
长期以来，石斛兰以分株繁殖为主，但繁殖速度慢。想要在短时间内得到更多的植株，可以利用组织培养的方式繁殖，国内对石斛兰进行组培繁殖的报道很少。目前，也有一些学者研究了采用石斛兰嫩芽做外植体进行组织培养得到石斛兰苗的方法，但由于相关的研究较少，没有找到更适合芽尖分化组织生长的培养基，导致组织培养过程中，培养周期长，培养成效不尽人意。
【发明内容】
本发明的发明目的在于：针对上述存在的问题，提供一种石斛兰的组培快繁培养基，采用本发明提供的培养基配方可显著提高石斛兰的诱导分化率、外植体增殖系数及生根率，缩短培养周期，提高石斛兰组培苗的质量。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一种石斛兰组培快繁培养基，包括诱导培养基、继代培养基、壮苗培养基，各培养基的具体组成如下：
诱导培养基：WPM培养基+玉米素0.5mg/L-0.8mg/L+NAA0.2mg/L-0.3mg/L+琼脂5.0g/L-8.0g/L+蔗糖2.0g/L-4.0g/L+黄秋葵汁5.0g/L-8.0g/L+辣木叶汁12.0g/L-15.0g/L，pH值5.2-5.3；
继代培养基：WPM培养基+活性炭1g/L+赤霉素0.5mg/L-0.8mg/L+萘乙酸2mg/L-3mg/L+琼脂5.0g/L-8.0g/L+黄秋葵汁5.0g/L-8.0g/L+辣木叶汁12.0g/L-15.0g/L+蔗糖2.0g/L-4.0g/L，pH值5.5-5.6；
壮苗培养基：1/2MS+活性炭1g/L+吲哚丁酸0.4mg/L-0.6mg/L+萘乙酸0.5mg/L-0.6mg/L+琼脂5.0g/L-8.0g/L+黄秋葵汁5.0g/L-8.0g/L+辣木叶汁12.0g/L-15.0g/L+蔗糖2.0g/L-4.0g/L，pH值5.5-5.6。
本发明中，优选地，所述诱导培养基的组成为：WPM培养基+玉米素0.6mg/L+NAA0.25mg/L+琼脂6.0g/L+蔗糖3.0g/L+黄秋葵汁7.0g/L+辣木叶汁14.0g/L，pH值5.2。
本发明中，优选地，所述继代培养基的组成为：WPM培养基+活性炭1g/L+赤霉素0.6mg/L+萘乙酸2.5mg/L+琼脂6.0g/L+黄秋葵汁7.0g/L+辣木叶汁14.0g/L+蔗糖3.0g/L，pH值5.5。
本发明中，优选地，所述壮苗培养基的组成为：1/2MS+活性炭1g/L+吲哚丁酸0.5mg/L+萘乙酸0.5mg/L+琼脂6.0g/L+黄秋葵汁7.0g/L+辣木叶汁14.0g/L+蔗糖3.0g/L，pH值5.6。
本发明中，优选地，所述辣木叶汁的制备方法是：先洗净原料，然后充分捣碎，再用纱布过滤，所述滤液即为相应的汁。
本发明中，优选地，所述黄秋葵汁是将黄秋葵表皮洗净后，用机器搅打成汁得到的。
综上所述，由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：
本发明的培养基适合以石斛兰的花梗芽做外植体进行组织培养，该培养基中添加了添加了辣木叶汁和黄秋葵汁作为营养物质，辣木叶中含有多种矿物质、维生素、20种氨基酸、46种抗氧素和36种自然防炎体和矿物质，每100克的辣木中含有的维生素C是柑橘的7倍，铁是菠菜的3倍，维生素A是胡萝卜的4倍，钙质是牛奶的4倍，钾是香蕉的3倍，蛋白质是酸奶的2倍。黄秋葵的营养丰富，幼果中含有大量的粘滑汁液，具有特殊的香味；其汁液中混有果胶，牛乳聚糖及阿拉聚糖等；它的果胶为可溶性纤维，在现代保健新观念中极为重视；凡经常食用它有健胃肠，滋补阴阳之功效；据测定每百克嫩果中含蛋白质2.5克、脂肪0.1克、糖类2.7克，纤维素A660国际单位；维生素B1，0.2毫克、维生素B20.06毫克、维生素44毫克、钙81毫克、磷63毫克、铁0.8毫克。这两种物质的联合添加，与生长调节剂、 基础培养基一起作用，可以显著提高石斛兰的诱导分化率、外植体增殖系数及生根率，缩短培养周期，并提高石斛兰组培苗的质量。
【具体实施方式】
为了更清楚地表达本发明，以下通过具体实施例对本发明作进一步说明。
在本发明的实施例中，辣木叶汁、黄秋葵汁的制备方法如下：
辣木叶汁：先洗净叶片然后充分捣碎，再用纱布过滤，所述滤液即为辣木叶汁。
黄秋葵汁：先洗净表皮然后充分捣碎，用机器搅打成汁即得。
本发明的实施例中，以石斛兰的花梗芽做外植体，利用各实施例中的培养基来进行组织培养，具体的培养方法如下：
(1)外植体的消毒：以正在开花、生长健壮、无病虫害的石斛兰作为母本，切取母本花梗上的花梗芽作为外植体，首先用流水冲洗花梗芽，再用体积浓度为75％的酒精浸泡1.5min，随后将花梗芽表面的苞叶剥去，接着在质量浓度为0.1％的次氯酸钠中浸泡8min-15min后继续剥去一层苞叶，随后在质量浓度为0.1％的次氯酸钠继续浸泡8min，用无菌水5次，得消毒后的外植体；
(2)诱导培养：将所述消毒后的外植体接种在诱导培养基内，在温度为25±1℃的条件下暗培养11天，然后移至光照强度为1500LX的室内，每天光照12h的培养35天，得石斛兰原球茎；
(3)继代培养：将步骤(2)中生长得到的石斛兰原球茎转接入继代培养基内，在温度为25±1℃，光照为1500LX，每天光照12h的条件下培养，随着原球茎的生长不断更换培养基，继代培养75天后，分化得到大量不定芽；
(4)壮苗培养：将石斛兰幼株转接到壮苗培养基中培养至根数为3-5条，叶片3-4片，苗高4-8cm，即得到生根试管苗。
(5)试管苗的移栽：将生根试管苗带瓶盖置于常温条件下炼苗6天，打开瓶盖再炼苗2天，将生根试管苗从培养瓶中轻轻取出，洗去基部残留的培养基，移栽于以苔藓为基质的穴盘，浇水后保持温度25±2℃，空气湿度70-80％。
实施例1
一种石斛兰组培快繁培养基，包括诱导培养基、继代培养基、壮苗培养基，各培养基的具体组成如下：
诱导培养基：WPM培养基+玉米素0.5mg/L+NAA0.2mg/L琼脂5.0g/L+蔗糖2.0g/L+黄秋葵汁5.0g/L+辣木叶汁15.0g/L，pH值5.2；
继代培养基：WPM培养基+活性炭1g/L+赤霉素0.5mg/L+萘乙酸2mg/L+琼脂5.0g/L-8.0g/L+黄秋葵汁5.0g/L+辣木叶汁15.0g/L+蔗糖2.0g/L，pH值5.5；
壮苗培养基：1/2MS+活性炭1g/L+吲哚丁酸0.4mg/L+萘乙酸0.5mg/L+琼脂5.0g/L+黄秋葵汁5.0g/L+辣木叶汁15.0g/L+蔗糖2.0g/L，pH值5.5。
实施例2
一种石斛兰组培快繁培养基，包括诱导培养基、继代培养基、壮苗培养基，各培养基的具体组成如下：
诱导培养基：WPM培养基+玉米素0.6mg/L+NAA0.25mg/L+琼脂6.0g/L+蔗糖3.0g/L+黄秋葵汁7.0g/L+辣木叶汁14.0g/L，pH值5.2；
继代培养基：WPM培养基+活性炭1g/L+赤霉素0.6mg/L+萘乙酸2.5mg/L+琼脂6.0g/L+黄秋葵汁7.0g/L+辣木叶汁14.0g/L+蔗糖3.0g/L，pH值5.5。
壮苗培养基：1/2MS+活性炭1g/L+吲哚丁酸0.5mg/L+萘乙酸0.5mg/L+琼脂6.0g/L+黄秋葵汁7.0g/L+辣木叶汁14.0g/L+蔗糖3.0g/L，pH值5.6。
实施例3
一种石斛兰组培快繁培养基，包括诱导培养基、继代培养基、壮苗培养基，各培养基的具体组成如下：
诱导培养基：WPM培养基+玉米素0.8mg/L+NAA0.3mg/L+琼脂8.0g/L+蔗糖4.0g/L+黄秋葵汁8.0g/L+辣木叶汁12.0g/L，pH值5.3；
继代培养基：WPM培养基+活性炭1g/L+赤霉素0.8mg/L+萘乙酸3mg/L+琼脂8.0g/L+黄秋葵汁8.0g/L+辣木叶汁12.0g/L+蔗糖4.0g/L，pH值5.6；
壮苗培养基：1/2MS+活性炭1g/L+吲哚丁酸0.6mg/L+萘乙酸0.6mg/L+琼脂8.0g/L+黄秋葵汁8.0g/L+辣木叶汁12.0g/L+蔗糖3.0g/L，pH值5.6。
对比例1
采用MS培养基代替诱导培养基和继代培养基中的WPM，具体如下：
诱导培养基：MS培养基+玉米素0.6mg/L+NAA0.25mg/L+琼脂6.0g/L+蔗糖3.0g/L+黄秋葵汁7.0g/L+辣木叶汁14.0g/L，pH值5.2；
继代培养基：MS培养基+活性炭1g/L+赤霉素0.6mg/L+萘乙酸2.5mg/L+琼脂6.0g/L+黄秋葵汁7.0g/L+辣木叶汁14.0g/L+蔗糖3.0g/L，pH值5.5；
壮苗培养基：1/2MS+活性炭1g/L+吲哚丁酸0.5mg/L+萘乙酸0.5mg/L+琼脂6.0g/L+黄秋葵汁7.0g/L+辣木叶汁14.0g/L+蔗糖3.0g/L，pH值5.6。
对比例2
采用VW培养基代替诱导培养基和继代培养基中的WPM，具体如下：
诱导培养基：VW培养基+玉米素0.6mg/L+NAA0.25mg/L+琼脂6.0g/L+蔗糖3.0g/L+黄秋葵汁7.0g/L+辣木叶汁14.0g/L，pH值5.2；
继代培养基：VW培养基+活性炭1g/L+赤霉素0.6mg/L+萘乙酸2.5mg/L+琼脂6.0g/L+黄秋葵汁7.0g/L+辣木叶汁14.0g/L+蔗糖3.0g/L，pH值5.5；
壮苗培养基：1/2MS+活性炭1g/L+吲哚丁酸0.5mg/L+萘乙酸0.5mg/L+琼脂6.0g/L+黄秋葵汁7.0g/L+辣木叶汁14.0g/L+蔗糖3.0g/L，pH值5.6。
对比例3
采用椰汁代替辣木汁和黄秋葵汁，其他条件与实施例2相同，具体如下：
诱导培养基：WPM培养基+玉米素0.6mg/L+NAA0.5mg/L+琼脂6.0g/L+蔗糖3.0g/L+椰汁100.0g/L，pH值5.2；
继代培养基：WPM培养基+活性炭1g/L+赤霉素0.6mg/L+萘乙酸2.5mg/L+琼脂6.0g/L+椰汁100.0g/L+蔗糖3.0g/L，pH值5.5；
壮苗培养基：1/2MS+活性炭1g/L+吲哚丁酸0.5mg/L+萘乙酸0.55mg/L+琼脂6.0g/L+椰汁100.0g/L+蔗糖3.0g/L，pH值5.5；
对比例4
采用现有技术中所使用的培养基，具体组成如下：
诱导培养基：MS+活性炭1g/L+6-BA 1.0mg/L+NAA0.5mg/L+琼脂6g/L+蔗糖30g/L；
继代培养基：1/2MS+活性炭1g/L+6-BA 0.8mg/L+NAA0.5mg/L+琼脂6g/L+蔗糖30g/L；
壮苗培养基：1/2MS+活性炭1g/L+6-BA 1.0mg/L+NAA0.5mg/L+琼脂6g/L+蔗糖30g/L。
组培试验方法及结果：
每组取200个外植体样本，将石斛兰的外植体诱导培养60天后，统计各组外植体的分化增殖情况，将诱导培养的原球茎继代培养50天后，统计平均芽分化率和平均生根率；继续壮苗培养30天后统计平均根长，各组的结果如表1所示。
表1 组培生长情况结果
实施例2 实施例1 实施例3 对比例1 对比例2 对比例3 对比例4
平均茎长(cm) 2.6 2.5 2.7 2.3 2.4 2.3 1.8
增值系数 5.2 5.1 5.4 4.1 4.0 3.5 3.2
平均芽分化率(％) 60.1 60.8 61.0 52.6 50.5 51.9 52.2
平均生根率(％) 80.9 80.9 81.0 68.5 70.5 50.2 52.4
平均根长 1.83 1.82 1.89 1.78 1.79 1.30 1.54
从表1的结果可以看出，相对于对比例3、4，实施例1-3的平均茎长、增殖系数平均芽分化率、平均生根率、平均根长均明显较好，说明相较添加椰汁，采用辣木叶汁和黄秋葵汁相配合作为营养剂，使培养基的组成更适合多花兰外植体的生长。相对于对比例1和2，实施例1-3因为采用的基础培养基不同，各个阶段的生长情况也明显较好。

Claims (7)

1.一种石斛兰组培快繁培养基，包括诱导培养基、继代培养基、壮苗培养基，其特征在于各培养基的具体组成如下：
诱导培养基：WPM培养基+玉米素0.5mg/L-0.8mg/L+NAA0.2mg/L-0.3mg/L+琼脂5.0g/L-8.0g/L+蔗糖2.0g/L-4.0g/L+黄秋葵汁5.0g/L-8.0g/L+辣木叶汁12.0g/L-15.0g/L，pH值5.2-5.3；
继代培养基：WPM培养基+活性炭1g/L+赤霉素0.5mg/L-0.8mg/L+萘乙酸2mg/L-3mg/L+琼脂5.0g/L-8.0g/L+黄秋葵汁5.0g/L-8.0g/L+辣木叶汁12.0g/L-15.0g/L+蔗糖2.0g/L-4.0g/L，pH值5.5-5.6；
壮苗培养基：1/2MS+活性炭1g/L+吲哚丁酸0.4mg/L-0.6mg/L+萘乙酸0.5mg/L-0.6mg/L+琼脂5.0g/L-8.0g/L+黄秋葵汁5.0g/L-8.0g/L+辣木叶汁12.0g/L-15.0g/L+蔗糖2.0g/L-4.0g/L，pH值5.5-5.6。
2.根据权利要求1所述的石斛兰组培快繁培养基，其特征在于：所述诱导培养基的组成为：WPM培养基+玉米素0.6mg/L+NAA0.25mg/L+琼脂6.0g/L+蔗糖3.0g/L+黄秋葵汁7.0g/L+辣木叶汁14.0g/L，pH值5.2。
3.根据权利要求1所述的石斛兰组培快繁培养基，其特征在于：所述继代培养基的组成为：WPM培养基+活性炭1g/L+赤霉素0.6mg/L+萘乙酸2.5mg/L+琼脂6.0g/L+黄秋葵汁7.0g/L+辣木叶汁14.0g/L+蔗糖3.0g/L，pH值5.5。
4.根据权利要求1所述的石斛兰组培快繁培养基，其特征在于：所述壮苗培养基的组成为：1/2MS+活性炭1g/L+吲哚丁酸0.5mg/L+萘乙酸0.5mg/L+琼脂6.0g/L+黄秋葵汁7.0g/L+辣木叶汁14.0g/L+蔗糖3.0g/L，pH值5.6。
5.根据权利要求1所述的石斛兰组培快繁培养基，其特征在于各培养基的具体组成如下：
诱导培养基：WPM培养基+玉米素0.6mg/L+NAA0.25mg/L+琼脂6.0g/L+蔗糖3.0g/L+黄秋葵汁7.0g/L+辣木叶汁14.0g/L，pH值5.2；
继代培养基：WPM培养基+活性炭1g/L+赤霉素0.6mg/L+萘乙酸2.5mg/L+琼脂6.0g/L+黄秋葵汁7.0g/L+辣木叶汁14.0g/L+蔗糖3.0g/L，pH值5.5；
壮苗培养基：1/2MS+活性炭1g/L+吲哚丁酸0.5mg/L+萘乙酸0.5mg/L+琼脂6.0g/L+黄秋葵汁7.0g/L+辣木叶汁14.0g/L+蔗糖3.0g/L，pH值5.6。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的石斛兰组培快繁培养基，其特征在于：所述辣木叶汁的制备方法是：先洗净原料，然后充分捣碎，再用纱布过滤，所述滤液即为辣木叶汁。
7.根据权利要求1-5中任一项所述的石斛兰组培快繁培养基，其特征在于：所述黄秋葵汁是将黄秋葵表皮洗净后，用机器搅打成汁得到的。
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