CN107853179A - 一种蕙兰的组培快繁方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种蕙兰的组培快繁方法，属于植物组织培养技术领域。该方法包括花梗芽外植体的消毒、诱导培养、继代培养及壮苗培养等步骤。其中，外植体的消毒采用酒精消毒和植物消毒液配合消毒的方式，植物消毒液的有效成分是甘草酸、石榴皮提取物、鱼腥草提取物；各个培养阶段中所使用的培养基中添加了黄秋葵汁和桑叶汁作为营养剂。本发明的方法对花梗芽外植体的伤害小，且采用本发明提供的培养基配方可显著提高蕙兰的诱导分化率、外植体增殖系数及生根率，缩短培养周期，提高蕙兰组培苗的质量。

Description

一种蕙兰的组培快繁方法
【技术领域】
本发明涉及植物组织培养技术领域，具体涉及一种蕙兰的组培快繁方法。
【背景技术】
蕙兰为地生草本植物；有着不明显的假鳞茎，叶有5-8枚，呈带形，直立性比较强，长约25-80厘米左右，宽度在7-12毫米，基部常对折呈V形，叶脉比较透亮，边缘常有粗状锯齿；蕙兰是中国栽培最久和最普及的兰花之一，是国家二级重点保护野生物种，是比较耐寒的兰花品种之一。长期以来，蕙兰以分株繁殖为主，分株繁殖速度较慢。想要在短时间内得到更多的植株，可以利用组织培养的方式繁殖。
目前，国内外对蕙兰组织培养进行了许多研究，蕙兰组织培养程序一般为：(1)选取种子或茎尖做外植体；(2)诱导形成原球茎；(3)原球茎大量增殖；(4)分化出小植株；(5)生根壮苗；(6)温室移栽。但种子无菌播种法繁殖出的种苗变异较多，种苗生长不一致，而取茎尖作为外植体对母株有一定的伤害。花梗芽作为外植体已经在一些兰花品种上得到了实践，而蕙兰的花梗芽在组培方面还没有得到利用。由于每个兰花品种在习性上有其自身的特点，在对蕙兰花梗芽外植体进行组培时，采用现有的外植体消毒方式、采用普通的培养基进行组培，仍不能取得满意的组培效果，致使繁殖周期长，增值率低，所得组培苗的质量不好。
【发明内容】
本发明的发明目的在于：针对上述存在的问题，提供一种蕙兰的组培快繁方法，本发明的方法以蕙兰的花梗芽作为外植体进行组培繁殖，采用对外植体伤害小的植物消毒液进行消毒，且采用本发明提供的培养基进行组培，可显著提高蕙兰的诱导分化率、外植体增殖系数及生根率，缩短培养周期，提高蕙兰组培苗的质量。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一种蕙兰的组培快繁方法，包括外植体的消毒、诱导培养、继代培养及壮苗培养，具体步骤为：
(1)外植体的消毒：以正在开花、生长健壮、无病虫害的蕙兰作为母本，切取母本花梗上的花梗芽作为外植体，首先用流水冲洗花梗芽，再用体积浓度为75％的酒精浸泡1-2min，随后将花梗芽表面的苞叶剥去，接着在植物消毒液中浸泡8min-15min后继续剥去一层苞叶，随后在所述植物消毒液中继续浸泡5-10min，用无菌水3-5次，得消毒后的外植体；所述植物消毒液由以下重量份的原料混合制成：甘草酸0.05-0.08份，石榴皮提取物0.8-1.2份，鱼腥草提取物0.5-0.8份，OP-10 2-4份，水75-100份；
(2)诱导培养：将所述消毒后的外植体的两端切口，将外植体接种在诱导培养基中进行培养，培养时间为45-48天，培养温度18-21℃，光照时间为10-14h/d，光照强度为1500-2000lx；所述诱导培养基为：VW+3-5mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸+0.2-0.4mg/L激动素+40-55g/L黄秋葵汁+30-40g/L桑叶汁+8-12mg/L半胱氨酸+20-25g/L蔗糖+6-8g/L琼脂，pH为5.4-5.6；
(3)继代培养：将诱导培养所萌发的小芽，自基部剥离后，接种到继代培养基上，培养温度18-21℃，光照时间为12-14h/d，光照强度为1500-2000lx；
(4)壮苗培养：继代增殖培养4-6代后，选择高2cm以上、外植体上有明显突起的小苗转入壮苗培养基中培养，培养温度18-21℃，光照时间为12-14h/d，光照强度为2500lx，培养至根数为3-5条，叶片3-4片，苗高4-8cm，即可炼苗，炼苗后得到可以移栽的蕙兰幼苗。
较优地，所述继代培养基的组成为：Miller+0.8-1.2mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸+2-4mg/L激动素+40-55g/L黄秋葵汁+30-40g/L桑叶汁+8-12mg/L半胱氨酸+20-25g/L蔗糖+6-8g/L琼脂，pH为5.6-5.8。
较优地，所述壮苗培养基的组成为：Miller+0.3-0.6mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸+3-5mg/L6-BA+40-55g/L黄秋葵汁+30-40g/L桑叶汁+5-8mg/L半胱氨酸+20-25g/L蔗糖+6-8g/L琼脂，pH为5.4-5.6。
较优地，所述鱼腥草提取物的提取方法为：将新鲜鱼腥草用8-10倍量的水煎煮2次，每次1.5-2h，合并提取液，过滤浓缩至干。
较优地，所述黄秋葵汁的制备方法是：先洗净表皮然后用打浆机打成浆状，再用纱布过滤，所述滤液即为黄秋葵汁。
较优地，所述石榴皮提取物通过以下方法得到：先将石榴皮烘干，制成石榴粉，按照固液比为1g：50-60ml用体积浓度为60-70％的乙醇加热回流提取二次，过滤，减压回收乙醇，减压浓缩得醇提物；加水配制成浓度为9-12mg/ml、pH值为5-6的醇提物溶液，上大孔吸附树脂柱，加水洗涤，然后用体积浓度为40-50％的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，得流浸膏，真空干燥即得石榴皮提取物。
综上所述，由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：
(1)本发明以蕙兰的花梗芽作为外植体，对其进行消毒时主要采用植物消毒剂进行浸泡，该植物消毒剂是由甘草酸、石榴皮提取物、鱼腥草提取物加乳化剂OP-10和水混合制成的；其中石榴皮提取物和鱼腥草提取物均具有良好的杀菌抗病毒的作用，但两者复合使用时消毒效果和杀菌谱均不能满足外植体消毒的需要，经本申请人反复试验后发现加入少量的甘草酸配合可起到增效作用，能大大增加消毒的效果；采用该植物消毒液可以大大降低外植体的损伤率和降低接种的污染率。
(2)本发明采用的培养基中添加了黄秋葵汁和桑叶汁作为营养物质，黄秋葵的营养丰富，幼果中含有大量的粘滑汁液，具有特殊的香味；其汁液中混有果胶，牛乳聚糖及阿拉聚糖等；它的果胶为可溶性纤维，在现代保健新观念中极为重视；凡经常食用它有健胃肠，滋补阴阳之功效；据测定每百克嫩果中含蛋白质2.5克、脂肪0.1克、糖类2.7克，纤维素A660国际单位；维生素B1，0.2毫克、维生素B20.06毫克、维生素44毫克、钙81毫克、磷63毫克、铁0.8毫克。桑叶中含有丰富的蛋白质、碳水化合物和无机成分，含有较多的叶酸、较高含量的黄酮化合物和桑苷，丰富的钾、钙、铁和维生素A、B1、B2、B3、C、叶酸以及铜锌等元素，这两种物质的联合添加，与半胱氨酸、生长调节剂、基础培养基一起作用，可以显著提高蕙兰的诱导分化率、外植体增殖系数及生根率，缩短培养周期，并提高蕙兰组培苗的质量。
(3)本发明采用花梗芽作为外植体，所得组培苗生长一致，不会产生变异苗，且能减少因取茎尖外植体引起的母株损失；由于采用科学的消毒方法和研制出专门的培养基，在继代增殖培养过程中，原球茎的增殖可达到8-10倍，组培苗根系健壮，成活率达98％。
【具体实施方式】
为了更清楚地表达本发明，以下通过具体实施例对本发明作进一步说明。
在本发明的实施例中，黄秋葵汁、桑叶汁、鱼腥草提取物和石榴皮提取物的制备方法如下：
黄秋葵汁：先洗净表皮然后用打浆机打成浆状，再用纱布过滤，所述滤液即为黄秋葵汁。
桑叶汁：先洗净叶片然后充分捣碎，再用纱布过滤，所述滤液即为桑叶汁。
鱼腥草提取物：将新鲜鱼腥草用8-10倍量的水煎煮2次，每次1.5-2h，合并提取液，过滤浓缩至干。
在本发明的一些实施例中，石榴皮提取物通过以下方法得到：先将石榴皮烘干，制成石榴粉，按照固液比为1g：50ml用体积浓度为60％的乙醇加热回流提取二次，过滤，减压回收乙醇，减压浓缩得醇提物；加水配制成浓度为9mg/ml、pH值为5的醇提物溶液，上大孔吸附树脂柱，加水洗涤，然后用体积浓度为40％的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，得流浸膏，真空干燥即得石榴皮提取物。
在本发明的另一些实施例中，夹竹桃提取物通过以下方法得到：先将石榴皮烘干，制成石榴粉，按照固液比为1g：60ml用体积浓度为70％的乙醇加热回流提取二次，过滤，减压回收乙醇，减压浓缩得醇提物；加水配制成浓度为12mg/ml、pH值为6的醇提物溶液，上大孔吸附树脂柱，加水洗涤，然后用体积浓度为50％的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，得流浸膏，真空干燥即得石榴皮提取物。
上述方法得到的石榴皮提取物的抗菌活性没有显著的差异，故在以下实施例中，不通过具体实施例进行赘述。
实施例1
一种蕙兰的组培快繁方法，包括外植体的消毒、诱导培养、继代培养及壮苗培养，具体步骤为：
(1)外植体的消毒：以正在开花、生长健壮、无病虫害的蕙兰作为母本，切取母本花梗上的花梗芽作为外植体，首先用流水冲洗花梗芽，再用体积浓度为75％的酒精浸泡1min，随后将花梗芽表面的苞叶剥去，接着在植物消毒液中浸泡8min后继续剥去一层苞叶，随后在所述植物消毒液中继续浸泡5min，用无菌水3次，得消毒后的外植体；所述植物消毒液由以下重量份的原料混合制成：甘草酸0.05份，石榴皮提取物0.8份，鱼腥草提取物0.5份，OP-102份，水75份；
(2)诱导培养：将所述消毒后的外植体的两端切口，将外植体接种在诱导培养基中进行培养，培养时间为48天，培养温度18-21℃，光照时间为10h/d，光照强度为1500lx；所用诱导培养基为：VW+3mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸+0.2mg/L激动素+40g/L黄秋葵汁+30g/L桑叶汁+8mg/L半胱氨酸+20g/L蔗糖+6g/L琼脂，pH为5.4；
(3)继代培养：将诱导培养所萌发的小芽，自基部剥离后，接种到继代培养基上，培养温度18-21℃，光照时间为12h/d，光照强度为2000lx；继代培养基的组成为：Miller+0.8mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸+2mg/L激动素+40g/L黄秋葵汁+30g/L桑叶汁+8mg/L半胱氨酸+20g/L蔗糖+6g/L琼脂，pH为5.6；
(4)壮苗培养：继代增殖培养4代后，选择高2cm以上、外植体上有明显突起的小苗转入壮苗培养基中培养，培养温度18-21℃，光照时间为12h/d，光照强度为2500lx，培养至根数为3-5条，叶片3-4片，苗高4-8cm，即可炼苗，炼苗后得到可以移栽的蕙兰幼苗；壮苗培养基的组成为：Miller+0.3mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸+3mg/L 6-BA+40g/L黄秋葵汁+30g/L桑叶汁+8mg/L半胱氨酸+20g/L蔗糖+6g/L琼脂，pH为5.4。
实施例2
一种蕙兰的组培快繁方法，包括外植体的消毒、诱导培养、继代培养及壮苗培养，具体步骤为：
(1)外植体的消毒：以正在开花、生长健壮、无病虫害的蕙兰作为母本，切取母本花梗上的花梗芽作为外植体，首先用流水冲洗花梗芽，再用体积浓度为75％的酒精浸泡1.5min，随后将花梗芽表面的苞叶剥去，接着在植物消毒液中浸泡12min后继续剥去一层苞叶，随后在所述植物消毒液中继续浸泡8min，用无菌水4次，得消毒后的外植体；所述植物消毒液由以下重量份的原料混合制成：甘草酸0.06份，石榴皮提取物1.0份，鱼腥草提取物0.6份，OP-10 3份，水80份；
(2)诱导培养：将所述消毒后的外植体的两端切口，将外植体接种在诱导培养基中进行培养，培养时间为45天，培养温度18-21℃，光照时间为12h/d，光照强度为1800lx；所用诱导培养基为：VW+4mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸+0.3mg/L激动素+50g/L黄秋葵汁+35g/L桑叶汁+10mg/L半胱氨酸+22g/L蔗糖+7g/L琼脂，pH为5.5；
(3)继代培养：将诱导培养所萌发的小芽，自基部剥离后，接种到继代培养基上，培养温度18-21℃，光照时间为13h/d，光照强度为1500lx；继代培养基的组成为：Miller+1.0mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸+3mg/L激动素+50g/L黄秋葵汁+35g/L桑叶汁+10mg/L半胱氨酸+22g/L蔗糖+7g/L琼脂，pH为5.7。
(4)壮苗培养：继代增殖培养5代后，选择高2cm以上、外植体上有明显突起的小苗转入壮苗培养基中培养，培养温度18-21℃，光照时间为13h/d，光照强度为2500lx，培养至根数为3-5条，叶片3-4片，苗高4-8cm，即可炼苗，炼苗后得到可以移栽的蕙兰幼苗；壮苗培养基的组成为：Miller+0.5mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸+4mg/L 6-BA+50g/L黄秋葵汁+35g/L桑叶汁+10mg/L半胱氨酸+22g/L蔗糖+7g/L琼脂，pH为5.5。
实施例3
一种蕙兰的组培快繁方法，包括外植体的消毒、诱导培养、继代培养及壮苗培养，具体步骤为：
(1)外植体的消毒：以正在开花、生长健壮、无病虫害的蕙兰作为母本，切取母本花梗上的花梗芽作为外植体，首先用流水冲洗花梗芽，再用体积浓度为75％的酒精浸泡2min，随后将花梗芽表面的苞叶剥去，接着在植物消毒液中浸泡15min后继续剥去一层苞叶，随后在所述植物消毒液中继续浸泡10min，用无菌水5次，得消毒后的外植体；所述植物消毒液由以下重量份的原料混合制成：甘草酸0.08份，石榴皮提取物1.2份，鱼腥草提取物0.8份，OP-10 4份，水100份；
(2)诱导培养：将所述消毒后的外植体的两端切口，将外植体接种在诱导培养基中进行培养，培养时间为47天，培养温度18-21℃，光照时间为14h/d，光照强度为2000lx；所用诱导培养基为：VW+5mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸+0.4mg/L激动素+55g/L黄秋葵汁+40g/L桑叶汁+12mg/L半胱氨酸+20-25g/L蔗糖+8g/L琼脂，pH为5.6；
(3)继代培养：将诱导培养所萌发的小芽，自基部剥离后，接种到继代培养基上，培养温度18-21℃，光照时间为14h/d，光照强度为1500lx；继代培养基的组成为：Miller+1.2mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸+4mg/L激动素+55g/L黄秋葵汁+40g/L桑叶汁+12mg/L半胱氨酸+25g/L蔗糖+8g/L琼脂，pH为5.8。
(4)壮苗培养：继代增殖培养4-6代后，选择高2cm以上、外植体上有明显突起的小苗转入壮苗培养基中培养，培养温度18-21℃，光照时间为14h/d，光照强度为2500lx，培养至根数为3-5条，叶片3-4片，苗高4-8cm，即可炼苗，炼苗后得到可以移栽的蕙兰幼苗；壮苗培养基的组成为：Miller+0.6mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸+5mg/L 6-BA+55g/L黄秋葵汁+40g/L桑叶汁+12mg/L半胱氨酸+25g/L蔗糖+8g/L琼脂，pH为5.6。
对比例1
采用质量浓度为1％的次氯酸钠代替植物消毒液进行消毒，其他条件与实施例2相同，考察消毒方式对诱导分化率、外植体增殖系数及生根率的影响。
对比例2
采用香蕉泥代替黄秋葵汁和桑叶汁，且不添加半胱氨酸，其他条件与实施例2相同，即诱导培养基的组成为：VW+4mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸+0.3mg/L激动素+100g/L香蕉泥+22g/L蔗糖+7g/L琼脂，pH为5.5；继代培养基的组成为：Miller+1.0mg/L2,4-二氯苯氧乙酸+3mg/L激动素+100g/L香蕉泥+22g/L蔗糖+7g/L琼脂，pH为5.7；壮苗培养基的组成为：Miller+0.5mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸+4mg/L 6-BA+100g/L香蕉泥+22g/L蔗糖+7g/L琼脂，pH为5.5；采用实施例2相同的方法培养蕙兰苗，培养过程中统计诱导分化率、外植体增殖系数及生根率。
对比例3
与实施例2中采用的培养基不同，具体培养基为：诱导培养基的组成为：MS+活性炭1g/L+6-BA 0.8mg/L+NAA0.2mg/L+琼脂6g/L+蔗糖20g/L；继代培养基的组成为：MS+活性炭1g/L+6-BA 0.8mg/L+NAA0.2mg/L+琼脂6g/L+蔗糖20g/L；壮苗培养基的组成为：MS+活性炭1g/L+6-BA 0.8mg/L+NAA0.2mg/L+琼脂6g/L+蔗糖20g/L。采用实施例2相同的方法培养蕙兰苗，培养过程中统计诱导分化率、外植体增殖系数及生根率。
组培试验方法及结果：
每组取200个外植体样本，分别采用实施例1-3以及对比例1-3的方法进行组培，试验过程中，统计各组的染菌情况、增殖情况、分化生根情况，考察各因素对蕙兰组培的影响。
1、外植体接种后的染菌情况：
在诱导培养15天后，统计各组的染菌数量，其结果如下表1：
表1
实施例1 实施例2 实施例3 对比例1 对比例2 对比例3
染菌数 3 3 4 19 4 4
从表1的结果可以看出，采用本发明的植物消毒液，蕙兰外植体的染菌情况比采用常规的次氯酸消毒好。
2、组培过程中的生长情况：
将蕙兰的外植体诱导培养48天后，统计各组外植体的分化增殖情况，将诱导培养的原球茎继代培养80天后，统计平均芽分化率和平均生根率；继续壮苗培养65天后统计平均根长，各组的结果如表2所示。
表2
实施例1 实施例2 实施例3 对比例1 对比例2 对比例3
平均茎长(cm) 4.6 4.9 4.8 3.5 3.2 3.0
增值系数 8.2 10.0 9.0 6.2 4.5 4.3
平均芽分化率(％) 69.5 73.5 65.4 60.4 54.2 54.8
平均生根率(％) 95 98 92 90 80 72
平均根长 2.9 3.0 2.8 2.7 2.1 2.0
从表2的结果可以看出，实施例1-3的平均茎长、增殖系数、平均芽分化率、平均生根率、平均根长均好于对比例1，说明由于消毒方式的改变，采用本发明的方式，不伤害外植体，组培过程中，各个阶段的生长情况都相对较好。相对于对比例2，实施例1-3的平均茎长、增殖系数平均芽分化率、平均生根率、平均根长均明显较好，说明相较添加香蕉泥，采用黄秋葵汁、桑叶汁、半胱氨酸相配合作为营养剂，使培养基的组成更适合蕙兰外植体的生长。相对于对比例3，实施例3因为采用的培养基不同，各个阶段的生长情况也明显较好。
另外，将所得组培苗进行种植试验，2个月后统计结果，结果表明实施例1-3中的组培苗种植成活率可达98％，说明本发明采用花梗芽做外植体获得了较大成功。
上述说明是针对本发明较佳可行实施例的详细说明，但实施例并非用以限定本发明的专利申请范围，凡本发明所提示的技术精神下所完成的同等变化或修饰变更，均应属于本发明所涵盖专利范围。

Claims (6)

1.一种蕙兰的组培快繁方法，包括外植体的消毒、诱导培养、继代培养及壮苗培养，其特征在于具体步骤为：
(1)外植体的消毒：以正在开花、生长健壮、无病虫害的蕙兰作为母本，切取母本花梗上的花梗芽作为外植体，首先用流水冲洗花梗芽，再用体积浓度为75％的酒精浸泡1min-2min，随后将花梗芽表面的苞叶剥去，接着在植物消毒液中浸泡8min-15min后继续剥去一层苞叶，随后在所述植物消毒液中继续浸泡5min-10min，用无菌水3-5次，得消毒后的外植体；所述植物消毒液由以下重量份的原料混合制成：甘草酸0.05-0.08份，石榴皮提取物0.8-1.2份，鱼腥草提取物0.5-0.8份，OP-10 2-4份，水75-100份；
(2)诱导培养：将所述消毒后的外植体的两端切口，将外植体接种在诱导培养基中进行培养，培养时间为45-48天，培养温度18-21℃，光照时间为10-14h/d，光照强度为1500-2000lx；所述诱导培养基为：VW+3-5mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸+0.2-0.4mg/L激动素+40-55g/L黄秋葵汁+30-40g/L桑叶汁+8-12mg/L半胱氨酸+20-25g/L蔗糖+6-8g/L琼脂，pH为5.4-5.6；
(3)继代培养：将诱导培养所萌发的小芽自基部剥离后，接种到继代培养基上，培养温度18-21℃，光照时间为12-14h/d，光照强度为1500-2000lx；
(4)壮苗培养：继代增殖培养4-6代后，选择高2cm以上、外植体上有明显突起的小芽苗转入壮苗培养基中培养，培养温度18-21℃，光照时间为12-14h/d，光照强度为2500lx，培养至根数为3-5条，叶片3-4片，苗高4-8cm，即可炼苗，炼苗后得到可以移栽的蕙兰幼苗。
2.根据权利要求1所述的蕙兰的组培快繁方法，其特征在于：所述继代培养基的组成为：Miller+0.8-1.2mg/L2,4-二氯苯氧乙酸+2-4mg/L激动素+40-55g/L黄秋葵汁+30-40g/L桑叶汁+8-12mg/L半胱氨酸+20-25g/L蔗糖+6-8g/L琼脂，pH为5.6-5.8。
3.根据权利要求1所述的蕙兰的组培快繁方法，其特征在于：所述壮苗培养基的组成为：Miller+0.3-0.6mg/L2,4-二氯苯氧乙酸+3-5mg/L 6-BA+40-55g/L黄秋葵汁+30-40g/L桑叶汁+5-8mg/L半胱氨酸+20-25g/L蔗糖+6-8g/L琼脂，pH为5.4-5.6。
4.根据权利要求1所述的蕙兰的组培快繁方法，其特征在于：所述鱼腥草提取物的提取方法为：将新鲜鱼腥草用8-10倍量的水煎煮2次，每次1.5-2h，合并提取液，过滤浓缩至干。
5.根据权利要求1所述的蕙兰的组培快繁方法，其特征在于：所述黄秋葵汁的制备方法是：先洗净表皮然后用打浆机打成浆状，再用纱布过滤，所述滤液即为黄秋葵汁。
6.根据权利要求1所述的蕙兰的组培快繁方法，其特征在于：所述石榴皮提取物通过以下方法得到：先将石榴皮烘干，制成石榴粉，按照固液比为1g：50-60ml用体积浓度为60-70％的乙醇加热回流提取二次，过滤，减压回收乙醇，减压浓缩得醇提物；加水配制成浓度为9-12mg/ml、pH值为5-6的醇提物溶液，上大孔吸附树脂柱，加水洗涤，然后用体积浓度为40-50％的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，得流浸膏，真空干燥即得石榴皮提取物。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111264394A (zh) * 2020-04-07 2020-06-12 无锡向山兰园科技有限公司 一种大花蕙兰的组织培养方法
CN111903530A (zh) * 2020-09-23 2020-11-10 宣威市福康生物科技有限公司 一种白芨的组培育苗方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106069772A (zh) * 2016-07-12 2016-11-09 成都东山兰韵农业有限公司 一种建兰组培快速繁殖方法
CN106386899A (zh) * 2016-09-07 2017-02-15 马鞍山纽泽科技服务有限公司 一种环保型果蔬消毒液

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106069772A (zh) * 2016-07-12 2016-11-09 成都东山兰韵农业有限公司 一种建兰组培快速繁殖方法
CN106386899A (zh) * 2016-09-07 2017-02-15 马鞍山纽泽科技服务有限公司 一种环保型果蔬消毒液

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
南朝君: "《食疗 营养与烹调》", 31 January 2014, 中国医药科技出版社 *
姚荣林等: "《中药鉴定技术》", 31 January 2017, 中国医药科技出版社 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111264394A (zh) * 2020-04-07 2020-06-12 无锡向山兰园科技有限公司 一种大花蕙兰的组织培养方法
CN111903530A (zh) * 2020-09-23 2020-11-10 宣威市福康生物科技有限公司 一种白芨的组培育苗方法

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