CN107652301A - 一种植物的提取方法及提取物的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于医药制剂，具体公开了一种植物的提取方法，该植物为虎耳草，其特征在于，取虎耳草药材粉碎后用95％乙醇回流提取3次，每次2h，过滤，滤液减压浓缩至无醇味，将上述浓缩后的提取液，加盐酸调节pH＝3，石油醚萃取3‑5次除去脂溶性成分，萃取后的水层加氨水调节pH＝9，过滤得沉淀，即为虎耳草素，而且其对于肝脏成纤维细胞增殖抑制活性强，具备突出的实质性特点，同时用于抗肝脏成纤维细胞增殖显然具有显著的进步。

Description

一种植物的提取方法及提取物的应用
技术领域
本发明属于医药领域，具体涉及一种植物的提取方法及提取物的应用。
背景技术
肝纤维化是慢性肝损伤向肝硬化发展的动态过程，过去的20年间，肝纤维化的研究取得了长足进展，证实肝纤维化与一定程度的肝硬化都是可逆的。近年来陆续出现了一些抗肝纤维化治疗方法，包括化学药、生物制剂、中药与基因疗法等，但是理想的临床治疗手段仍然缺乏，目前防治肝纤维的关键是针对与肝星状细胞激活相关的环节，主要是：减轻肝损伤；抑制星状细胞激活，减少细胞外基质产生；调节细胞因子紊乱，促进活化肝星状细胞凋亡。
本发明涉及的化合物虎耳草素片用于治疗慢性支气管炎。本发明涉及的虎耳草素在制备抑制肝脏成纤维细胞增殖药物中的用途属于首次公开。
发明内容
本发明的目的在于提供一种植物的提取方法及提取物的应用，该植物为虎耳草。
技术方案：一种植物的提取方法，该植物为虎耳草，取虎耳草药材粉碎后用95％乙醇回流提取3次，每次2h，过滤，滤液减压浓缩至无醇味，将上述浓缩后的提取液，加盐酸调节pH＝3，石油醚萃取3-5次除去脂溶性成分，萃取后的水层加氨水调节pH＝9，过滤得沉淀，即为虎耳草素。
所述虎耳草素在制备预防或治疗肝纤维化药物中的用途。
所述虎耳草素为口服制剂或注射制剂。
所述口服制剂为片剂、胶囊剂或颗粒剂。
所述注射制剂为注射液或注射微乳。
本发明公开了虎耳草素在制备预防或治疗肝纤维化的药物中的应用，其治疗效果好，对成纤维细胞NIH/3T3在10％小牛血清的刺激下的细胞增殖有显著的抑制作用；虎耳草素对成纤维细胞NIH/3T3在TGF-β1的诱导下的细胞增殖有显著的抑制作用，其治疗效果好，对于肝纤维化的治疗效果显著优于虎耳草提取物，本发明所述虎耳草素是从传统中药虎耳草中提取得到的天然中药单体，其对人体毒副作用低，可以显著提高患者的用药安全性和用药依从性，进而大幅度改善了肝纤维化患者的治疗效果和生活质量。本发明不仅拓宽了连翘苷元的应用范围，同时还提高了连翘苷元的市场价值，同时安全性好，因此本发明为虎耳草素治疗提供了一种安全、高效的备选药物，利于满足临床治疗的多方面需求。
具体实施方式
以下通过实施例对本发明作进一步详细的说明，但本发明的保护范围不受具体实施例的任何限制，而是由权利要求加以限定。
实施例1：取虎耳草药材3kg粉碎后用95％乙醇回流提取3次，每次2h，过滤，滤液减压浓缩至无醇味，将上述浓缩后的提取液，加盐酸调节pH＝3，石油醚萃取3次除去脂溶性成分，萃取后的水层加氨水调节pH＝9，过滤得沉淀16.4g，即为虎耳草素。
实施例2：取虎耳草药材3kg粉碎后用95％乙醇回流提取3次，每次2h，过滤，滤液减压浓缩至无醇味，将上述浓缩后的提取液，加盐酸调节pH＝3，石油醚萃取5次除去脂溶性成分，萃取后的水层加氨水调节pH＝9，过滤得沉淀17.8g，即为虎耳草素。
实施例3：取虎耳草药材3kg粉碎后用95％乙醇回流提取3次，每次2h，过滤，滤液减压浓缩至无醇味，将上述浓缩后的提取液，加盐酸调节pH＝3，石油醚萃取4次除去脂溶性成分，萃取后的水层加氨水调节pH＝9，过滤得沉淀16.2g，即为虎耳草素。
实施例4：采用MTT法评价虎耳草素对肝纤维化的抑制作用
1、方法：NIH/3T3细胞株购自引自ATCC(American Type Culture Collection)的中科院上海细胞所细胞库。将对数生长期的亚融合的NIH/3T3细胞用0.25％胰酶消化，洗涤，离心后，用DMEM培养液(含10％FCS)制成1×104cell/ml的细胞悬液，台盼蓝染色鉴定存活率大于95％，按每孔100ul加入96孔板中，在37℃、5％CO2培养24h同步处理后，弃上清，加入含有不同稀释浓度药物的DMEM培养液(含10％FCS)200ul，培养48h，每孔加入MTT溶液孵育4h。弃去培养液，加入150ulDMSO，振荡10分钟，使结晶溶解，酶标仪490nm处读取OD值，结果以OD490表示。
2.结果：
2.1形态学观察
NIH/3T3在用药前伸展良好，折光性较弱，有方向性，呈放射状，细胞增殖的速度快；而加药物24h后，成纤维细胞数目减少，形状变得不规则，突起变短，细胞排列混乱，细胞内代谢产物增多。
表1：MTT法检测本发明药物对NIH/3T3增殖的抑制作用
注：与细胞阴性对照比较*P<0.05；**P<0.01
结果：本发明在10ug/ml-40ug/ml的浓度范围内对成纤维细胞NIH/3T3在10％小牛血清的刺激下的细胞增殖有显著的抑制作用。表明本发明体外对纤维细胞的增殖有显著抑制作用。
实验例5：本发明对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的成纤维细胞增殖的抑制作用
TGF-β1是促进细胞增殖和胶原生成的强活性因子，在细胞中加入TGF-β110ng/ml刺激细胞增殖，在检测药物对TGF-β1诱导的细胞增殖的抑制作用，以分析判断本发明药物的作用机理。
表2：MTT法检测本发明药物对TGF诱导NIH/3T3增殖的抑制作用
注：*，与细胞+TGF对照P<0.05；**，与细胞+TGF对照P<0.01
结果：本发明在10-40ug/ml两个浓度区间内对成纤维细胞NIH/3T3在TGF-β1的诱导下的细胞增殖有显著的抑制作用。表明本发明体外对纤维细胞增殖的抑制作用可能是通过干预TGF信号通路实现的。
由上述实施例表明，本发明对成纤维细胞NIH/3T3在10％小牛血清的刺激下的细胞增殖有显著的抑制作用；虎耳草素对成纤维细胞NIH/3T3在TGF-β1的诱导下的细胞增殖有显著的抑制作用。由此证明，虎耳草素可以明显抑制肝纤维化的发生和发展，可用于制备抗肝纤维化、防治肝硬化的药物。

Claims (5)

1.一种植物的提取方法，该植物为虎耳草，其特征在于，取虎耳草药材粉碎后用95％乙醇回流提取3次，每次2h，过滤，滤液减压浓缩至无醇味，将上述浓缩后的提取液，加盐酸调节pH＝3，石油醚萃取3-5次除去脂溶性成分，萃取后的水层加氨水调节pH＝9，过滤得沉淀，即为虎耳草素。
2.如权利要求1所述虎耳草素在制备预防或治疗肝纤维化药物中的用途。
3.如权利要求2所述的用途，其特征在于所述虎耳草素为口服制剂或注射制剂。
4.如权利要求3所述的用途，其特征在于所述口服制剂为片剂、胶囊剂或颗粒剂。
5.如权利要求3所述的用途，其特征在于所述注射制剂为注射液或注射微乳。
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