CN107573431A - 一种小球藻多糖的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种小球藻多糖的制备方法，属于多糖提取技术领域，小球藻多糖的提取步骤包括，细胞壁破壁、浓缩醇析、除蛋白、冷冻干燥，细胞壁破壁步骤为：取小球藻粉制成藻液加入活性多肽，选用磷酸钠盐缓冲液作为提取剂，反复冻融，超声波处理，离心，取上清液，得粗蛋白提取液，本发明提取的小球藻多糖具有优异的促进机体免疫力、抗肿瘤效果可在保健品中使用，小球藻多糖的提取工艺简单，可操作性强，生产成本低。
Description
技术领域
本发明属于多糖提取技术领域，具体涉及一种小球藻多糖的制备方法。
背景技术
小球藻(Chlorella pyrenoidosa FACHBS)是一类普生性单细胞藻类。小球藻具有生态分布广、可快速生长和繁殖、易于培养等优点，是地球上动植物中唯一能在20 h增长4倍的生物，具有很高的应用价值。目前小球藻已经广泛地应用在动物饲料、食品添加剂、医药制剂、美容产品等方而,小球藻及其热水抽提物具有促进免疫、抗肿瘤的作用，已有大量试验证明，小球藻的活性成分中，多糖具有促进机体免疫、抗肿瘤等功能，小球藻多糖的提取一般采用热水抽提法，但热水提取多糖时，易引起多糖降解，从而影响多糖的生物活性，而且多糖的得率还具有一定的提升空间。
现有技术，如中国发明授权专利文献，授权公告号CN 103880971 B，一种从小球藻非水溶性部分中提取多糖的方法，包括原料的处理、酶法提取、分离、浓缩、醇沉、干燥等工艺。该发明原料来源丰富、廉价，可来源于小球藻产油后的残渣，而且方法工艺简单、生产成本低廉，是一种有效提升小球藻高附加值和综合利用率的方法，但是该方法在小球藻多糖的得率上还具有一定的提升空间。
发明内容
本发明的目的在于提供一种小球藻多糖的制备方法，通过活性多肽显著提高小球藻细胞壁破碎率，提高小球藻多糖的得率和纯度，不会对小球藻造成营养损失的不良影响，提取的小球藻多糖可用于促进免疫力、抗肿瘤的保健品中。
本发明为实现上述目的所采取的方案为：一种小球藻多糖的制备方法，包括，细胞壁破壁、浓缩醇析、除蛋白、冷冻干燥，细胞壁破壁步骤为：取小球藻粉制成藻液加入活性多肽，选用磷酸钠盐缓冲液作为提取剂，反复冻融，超声波处理，离心，取上清液，得粗蛋白提取液。上述方法通过在小球藻多糖提取之前进行细胞壁破碎处理，利用活性多肽和反复冻融的方法使细胞壁破裂较为彻底，促进胞内物质溶出，不破坏其中有效成分，显著提升了小球藻多糖的得率。
优选的，细胞壁破壁步骤中小球藻粉与水的固液比为1:40-60，所述磷酸钠盐缓冲液的pH值为7-7.2，不同的pH值对多糖的得率有不同的影响，多糖分子中除了存在-OH、-CHO官能团外，还同时或单独存在-NH2、-O-SO3H等能够得到或者给出质子的官能团，由于这些官能团的存在使多糖在不同pH条件下表现出不同的溶解例，选取磷酸钠盐缓冲液pH值为7-7.2，提取液为中性时，多糖的得率最好。
优选的，细胞壁破壁步骤中活性多肽的添加量为小球藻粉重量的0.03%-0.06%，活性多肽的氨基酸序列为QSGFCTSYYCSKFCTAGSLGNLTPGKICLHCSS。该活性多肽具有亲水性和亲脂性，亲水性使其溶于水中，亲脂性使其与小球藻细胞膜结合，使细胞膜下形成小孔，致使细胞内的物质泄漏，有利于小球藻多糖得率，利用活性肽结合冻融法进行细胞破碎，大大缩短了提取时间，提取效果好，得到的粗多糖含量高，还有效避免了破碎处理过程中需因升温及机械力引起的蛋白质变性。
优选的，细胞壁破碎步骤中反复冻融是在-20℃和28℃，反复冻融4-5次，每次3.5-4.5h，冻融结束后超声波处理的超声波功率为400-600w，时间为5-10min。反复冻融法是一种温和的破壁方式，可避免高温对小球藻造成的营养损失等不良影响，再通过超声波辅助破壁，利用超声波产生的空化作用、机械作用加速细胞壁的破壁，促进胞内物质溶出。
优选的，浓缩醇析过程为，在浓缩液中加入85%~94%的乙醇溶液，搅拌10-20min，离心得粗多糖。
优选的，冷冻干燥温度为-38℃至-35℃，冷冻干燥利于保存小球藻多糖原化学组成和物理性质。
优选的，小球藻多糖在具有促进机体免疫力、抗肿瘤的保健品中使用。小球藻多糖具有显著的促进机体免疫力和抗肿瘤的作用，利于提升加入的保健品的功效和经济价值。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：本发明通过在小球藻多糖提取之前进行细胞壁破碎处理，利用活性多肽和反复冻融的方法使细胞壁破裂较为彻底，活性多肽使细胞膜下形成小孔，致使细胞内的物质泄漏，有利于小球藻多糖得率，多糖的提取率在6.14%以上，纯度可达80%，且提取的小球藻多糖具有优异的促进机体免疫力、抗肿瘤效果可在保健品中使用，本发明的小球藻多糖的提取工艺简单，可操作性强，生产成本低。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明的技术方案作进一步详细描述：
实施例1：
一种小球藻多糖的制备方法为：
1）取小球藻粉制成藻液，小球藻粉与水的固液比为1:48，加入活性多肽，添加量为小球藻粉重量的0.04%，活性多肽的氨基酸序列为QSGFCTSYYCSKFCTAGSLGNLTPGKICLHCSS，选用磷酸钠盐缓冲液作为提取剂，磷酸钠盐缓冲液的pH值为7.2，在-20℃和28℃，反复冻融5次，每次4h，超声波处理，超声波功率为500w，时间为8min，7000r/min下离心6min，取上清液，得粗蛋白提取液；
2）将上清液放入真空浓缩罐中真空浓缩至原体积的3/10，真空浓缩压力在-0.9Mpa以下，在浓缩液中加入85%的乙醇溶液，搅拌15min，8000r/min下离心7min，得粗多糖；
3）复溶，在粗糖溶液中加入20%的三氯乙酸调pH值至4，静置过夜，离心取上清液；
4）真空浓缩至原液体积的1/4，在-38℃-35℃条件下冷冻干燥，得小球藻多糖。
小球藻多糖在具有促进机体免疫力、抗肿瘤的保健品中使用，小球藻多糖具有显著的促进机体免疫力和抗肿瘤的作用，利于提升加入的保健品的功效和经济价值。
实施例2：
一种小球藻多糖的制备方法为：
1）取小球藻粉制成藻液，小球藻粉与水的固液比优选为1:45，加入活性多肽，添加量为小球藻粉重量的0.05%，活性多肽的氨基酸序列为QSGFCTSYYCSKFCTAGSLGNLTPGKICLHCSS，选用磷酸钠盐缓冲液作为提取剂，磷酸钠盐缓冲液的pH值优选为7，在-20℃和28℃，反复冻融4次，每次3.8h，超声波处理，超声波功率优选为600w，时间为8min， 8000r/min下离心6min，取上清液，得粗蛋白提取液；
2）将上清液放入真空浓缩罐中真空浓缩至原体积的1/5，真空浓缩压力在-0.9Mpa以下，在浓缩液中加入92%的乙醇溶液，搅拌14min，10000r/min下离心8min，得粗多糖；
3）复溶，在粗糖溶液中加入22%的三氯乙酸调pH值至优选的4，静置过夜，离心取上清液；
4）真空浓缩至原液体积的1/4，在-38℃-35℃条件下冷冻干燥，得小球藻多糖。
小球藻多糖在具有促进机体免疫力、抗肿瘤的保健品中使用，小球藻多糖具有显著的促进机体免疫力和抗肿瘤的作用，利于提升加入的保健品的功效和经济价值。
实施例3：
一种小球藻多糖的制备方法为：
1）取小球藻粉制成藻液，小球藻粉与水的固液比为1:48，加入活性多肽，添加量为小球藻粉重量的0.03%，活性多肽的氨基酸序列为QSGFCTSYYCSKFCTAGSLGNLTPGKICLHCSS，选用磷酸钠盐缓冲液作为提取剂，磷酸钠盐缓冲液的pH值为7，在-20℃和28℃，反复冻融5次，每次4h，超声波处理，超声波功率为450w，时间为5min，6000r/min下离心10min，取上清液，得粗蛋白提取液；
2）将上清液放入真空浓缩罐中真空浓缩至原体积的1/10，真空浓缩压力在-0.9Mpa以下，在浓缩液中加入88%的乙醇溶液，搅拌14min，8000r/min下离心8min，得粗多糖；
3）复溶，在粗糖溶液中加入21%的三氯乙酸调pH值至4，静置过夜，离心取上清液；
4）真空浓缩至原液体积的1/5，在-38℃-35℃条件下冷冻干燥，得小球藻多糖。
小球藻多糖在具有促进机体免疫力、抗肿瘤的保健品中使用，小球藻多糖具有显著的促进机体免疫力和抗肿瘤的作用，利于提升加入的保健品的功效和经济价值。
本发明的操作步骤中的常规操作为本领域技术人员所熟知，在此不进行赘述。
以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明，应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等，均应包含在本发明的保护范围之内。
SEQUENCE LISTING
<110> 兰溪市酉泽饲料技术服务有限公司
<120> 一种小球藻多糖的制备方法
<130> 1
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 33
<212> PRT
<213> 人工合成
<400> 1
Gln Ser Gly Phe Cys Thr Ser Tyr Tyr Cys Ser Lys Phe Cys Thr Ala
1 5 10 15
Gly Ser Leu Gly Asn Leu Thr Pro Gly Lys Ile Cys Leu His Cys Ser
20 25 30
Ser
Claims (7)
1.一种小球藻多糖的制备方法，包括，细胞壁破壁、浓缩醇析、除蛋白、冷冻干燥，其特征在于：所述细胞壁破壁步骤为：取小球藻粉制成藻液加入活性多肽，选用磷酸钠盐缓冲液作为提取剂，反复冻融，超声波处理，离心，取上清液，得粗蛋白提取液。
2.根据权利要求1所述的一种小球藻多糖的制备方法，其特征在于：所述细胞壁破壁步骤中小球藻粉与水的固液比为1:40-60，所述磷酸钠盐缓冲液的pH值为7-7.2。
3.根据权利要求1所述的一种小球藻多糖的制备方法，其特征在于：所述细胞壁破壁步骤中活性多肽的添加量为小球藻粉重量的0.03%-0.06%，所述活性多肽的氨基酸序列为QSGFCTSYYCSKFCTAGSLGNLTPGKICLHCSS。
4.根据权利要求1所述的一种小球藻多糖的制备方法，其特征在于：所述细胞壁破碎步骤中反复冻融是在-20℃和28℃，反复冻融4-5次，每次3.5-4.5h，冻融结束后超声波处理的超声波功率为400-600w，时间为5-10min。
5.根据权利要求1所述的一种小球藻多糖的制备方法，其特征在于：所述浓缩醇析过程为，在浓缩液中加入85%~94%的乙醇溶液，搅拌10-20min，离心得粗多糖。
6.根据权利要求1所述的一种小球藻多糖的制备方法，其特征在于：所述冷冻干燥温度为-38℃至-35℃。
7.根据权利要求1所述的一种小球藻多糖的制备方法，其特征在于：所述小球藻多糖在具有促进机体免疫力、抗肿瘤的保健品中使用。
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|---|---|---|---|---|
| CN110742900A (zh) * | 2019-11-22 | 2020-02-04 | 湘潭大学 | 一种具有免疫调节活性的小球藻胞外多糖复合物及其制备方法和应用 |
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|---|---|---|---|---|
| CN105085697A (zh) * | 2015-08-05 | 2015-11-25 | 都宝君 | 一种小球藻多糖的提取方法 |
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2017
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| CN110742900A (zh) * | 2019-11-22 | 2020-02-04 | 湘潭大学 | 一种具有免疫调节活性的小球藻胞外多糖复合物及其制备方法和应用 |
| CN110742900B (zh) * | 2019-11-22 | 2022-06-14 | 湘潭大学 | 一种具有免疫调节活性的小球藻胞外多糖复合物及其制备方法和应用 |
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