CN107573430A - 一种小球藻多糖 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种小球藻多糖，属于多糖提取技术领域，小球藻多糖的提取步骤为：1）取小球藻粉制成藻液加入活性多肽，选用磷酸钠盐缓冲液作为提取剂，反复冻融，超声波处理，离心，取上清液，得粗蛋白提取液；2）将上清液真空浓缩至原体积的1/10~3/10，醇析，离心得粗多糖；3）复溶，用三氯乙酸法除蛋白；4）真空浓缩，冷冻干燥，得小球藻多糖，本发明提取的小球藻多糖具有优异的促进机体免疫力、抗肿瘤效果可在保健品中使用，小球藻多糖的提取工艺简单，可操作性强，生产成本低。
Description
技术领域
本发明属于多糖提取技术领域，具体涉及一种小球藻多糖。
背景技术
小球藻(Chlorella pyrenoidosa FACHBS)是一类普生性单细胞藻类。小球藻具有生态分布广、可快速生长和繁殖、易于培养等优点，是地球上动植物中唯一能在20 h增长4倍的生物，具有很高的应用价值。目前小球藻已经广泛地应用在动物饲料、食品添加剂、医药制剂、美容产品等方而,小球藻及其热水抽提物具有促进免疫、抗肿瘤的作用，已有大量试验证明，小球藻的活性成分中，多糖具有促进机体免疫、抗肿瘤等功能，小球藻多糖的提取一般采用热水抽提法，但热水提取多糖时，易引起多糖降解，从而影响多糖的生物活性，而且多糖的得率还具有一定的提升空间。
现有技术，如中国发明授权专利文献，授权公告号CN 103880971 B，一种从小球藻非水溶性部分中提取多糖的方法，包括原料的处理、酶法提取、分离、浓缩、醇沉、干燥等工艺。该发明原料来源丰富、廉价，可来源于小球藻产油后的残渣，而且方法工艺简单、生产成本低廉，是一种有效提升小球藻高附加值和综合利用率的方法，但是该方法在小球藻多糖的得率上还具有一定的提升空间。
发明内容
本发明的目的在于提供一种小球藻多糖，可用于促进免疫力、抗肿瘤的保健品中，通过活性多肽显著提高小球藻细胞壁破碎率，提高小球藻多糖的得率和纯度，不会对小球藻造成营养损失的不良影响。
本发明为实现上述目的所采取的方案为：一种小球藻多糖，多糖的提取步骤为：
1）取小球藻粉制成藻液加入活性多肽，选用磷酸钠盐缓冲液作为提取剂，反复冻融，超声波处理，离心，取上清液，得粗蛋白提取液；
2）将上清液真空浓缩至原体积的1/10~3/10，醇析，离心得粗多糖；
3）复溶，用三氯乙酸法除蛋白；
4）真空浓缩，冷冻干燥，得小球藻多糖，上述方法通过在小球藻多糖提取之前进行细胞壁破碎处理，利用活性多肽和反复冻融的方法使细胞壁破裂较为彻底，促进胞内物质溶出，不破坏其中有效成分，显著提升了小球藻多糖的得率。
优选的，步骤1中小球藻粉与水的固液比为1:35-55，磷酸钠盐缓冲液的pH值为5-7，不同的pH值对多糖的得率有不同的影响，多糖分子中除了存在-OH、-CHO官能团外，还同时或单独存在-NH2、-O-SO3H等能够得到或者给出质子的官能团，由于这些官能团的存在使多糖在不同pH条件下表现出不同的溶解例，选取磷酸钠盐缓冲液pH值为6.8-7.2，提取液为中性时，多糖的得率最好。
优选的，步骤1中活性多肽的添加量为小球藻粉重量的0.02%-0.05%，活性多肽的氨基酸序列为QSGFCTSYYCSKFCGTAGSLYGNLTPGKICCLHCSS，该活性多肽具有亲水性和亲脂性，亲水性使其溶于水中，亲脂性使其与小球藻细胞膜结合，使细胞膜下形成小孔，致使细胞内的物质泄漏，有利于小球藻多糖得率，利用活性肽结合冻融法进行细胞破碎，大大缩短了提取时间，提取效果好，得到的粗多糖含量高，还有效避免了破碎处理过程中需因升温及机械力引起的蛋白质变性。
优选的，步骤1中反复冻融是在-20℃和37℃，反复冻融4-5次，每次3.5-4.5h，冻融结束后超声波处理的超声波功率为350-600w，时间为10-15min，反复冻融法是一种温和的破壁方式，可避免高温对小球藻造成的营养损失等不良影响，再通过超声波辅助破壁，利用超声波产生的空化作用、机械作用加速细胞壁的破壁，促进胞内物质溶出。
优选的，步骤2中醇析过程为，在浓缩液中加入85%~94%的乙醇溶液，搅拌10-20min，离心得粗多糖。
优选的，步骤4中冷冻干燥温度为-38℃至-35℃，冷冻干燥利于保存小球藻多糖原化学组成和物理性质。
优选的，小球藻多糖在具有促进机体免疫力、抗肿瘤的保健品中使用，小球藻多糖具有显著的促进机体免疫力和抗肿瘤的作用，利于提升加入的保健品的功效和经济价值。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：本发明通过在小球藻多糖提取之前进行细胞壁破碎处理，利用活性多肽和反复冻融的方法使细胞壁破裂较为彻底，活性多肽使细胞膜下形成小孔，致使细胞内的物质泄漏，有利于小球藻多糖得率，多糖的提取率在6.2%以上，纯度可达80%，且提取的小球藻多糖具有优异的促进机体免疫力、抗肿瘤效果可在保健品中使用，本发明的小球藻多糖的提取工艺简单，可操作性强，生产成本低。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明的技术方案作进一步详细描述：
实施例1：
一种小球藻多糖，多糖的提取步骤为：
1）取小球藻粉制成藻液，小球藻粉与水的固液比为1:40，加入活性多肽，添加量为小球藻粉重量的0.04%，活性多肽的氨基酸序列为QSGFCTSYYCSKFCGTAGSLYGNLTPGKICCLHCSS，选用磷酸钠盐缓冲液作为提取剂，磷酸钠盐缓冲液的pH值为7.1，在-20℃和37℃，反复冻融5次，每次4h，超声波处理，超声波功率为500w，时间为10min，8000r/min，下离心8min，取上清液，得粗蛋白提取液；
2）将上清液放入真空浓缩罐中真空浓缩至原体积的1/5，真空浓缩压力在-0.9Mpa以下，在浓缩液中加入85%的乙醇溶液，搅拌14min，离心得粗多糖；
3）复溶，在粗糖溶液中加入20%的三氯乙酸调pH值至4，静置过夜，离心取上清液；
4）真空浓缩至原液体积的1/5，在-35℃条件下冷冻干燥，得小球藻多糖。
小球藻多糖在具有促进机体免疫力、抗肿瘤的保健品中使用，小球藻多糖具有显著的促进机体免疫力和抗肿瘤的作用，利于提升加入的保健品的功效和经济价值。
实施例2：
一种小球藻多糖，多糖的提取步骤为：
1）取小球藻粉制成藻液，小球藻粉与水的固液比为1:38，加入活性多肽，添加量优选为小球藻粉重量的0.03%，活性多肽的氨基酸序列为QSGFCTSYYCSKFCGTAGSLYGNLTPGKICCLHCSS，选用磷酸钠盐缓冲液作为提取剂，磷酸钠盐缓冲液的pH值优选为7.0，在-20℃和37℃，反复冻融5次，每次4h，超声波处理，超声波功率优选为600w，时间为10min，7500r/min，下离心10min，取上清液，得粗蛋白提取液；
2）将上清液放入真空浓缩罐中真空浓缩至原体积的3/10，真空浓缩压力在-0.9Mpa以下，在浓缩液中加入90%的乙醇溶液，搅拌15min，离心得粗多糖；
3）复溶，在粗糖溶液中加入优选20%的三氯乙酸调pH值至4，静置过夜，离心取上清液；
4）真空浓缩至原液体积的1/4，在-38℃条件下冷冻干燥，得小球藻多糖。
小球藻多糖在具有促进机体免疫力、抗肿瘤的保健品中使用，小球藻多糖具有显著的促进机体免疫力和抗肿瘤的作用，利于提升加入的保健品的功效和经济价值。
实施例3：
一种小球藻多糖，多糖的提取步骤为：
1）取小球藻粉制成藻液，小球藻粉与水的固液比为1:47，加入活性多肽，添加量为小球藻粉重量的0.05%，活性多肽的氨基酸序列为QSGFCTSYYCSKFCGTAGSLYGNLTPGKICCLHCSS，选用磷酸钠盐缓冲液作为提取剂，磷酸钠盐缓冲液的pH值为6.9，在-20℃和37℃，反复冻融4次，每次3.5h，超声波处理，超声波功率为450w，时间为10min，6000r/min，下离心12min，取上清液，得粗蛋白提取液；
2）将上清液放入真空浓缩罐中真空浓缩至原体积的1/10，真空浓缩压力在-0.9Mpa以下，在浓缩液中加入85%的乙醇溶液，搅拌20min，离心得粗多糖；
3）复溶，在粗糖溶液中加入18%的三氯乙酸调pH值至3.8，静置过夜，离心取上清液；
4）真空浓缩至原液体积的11/50，在-36℃条件下冷冻干燥，得小球藻多糖。
小球藻多糖在具有促进机体免疫力、抗肿瘤的保健品中使用，小球藻多糖具有显著的促进机体免疫力和抗肿瘤的作用，利于提升加入的保健品的功效和经济价值。
本发明的操作步骤中的常规操作为本领域技术人员所熟知，在此不进行赘述。
以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明，应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等，均应包含在本发明的保护范围之内。
SEQUENCE LISTING
<110> 兰溪市哥特生物技术有限公司
<120> 一种小球藻多糖
<130> 1
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 36
<212> PRT
<213> 人工合成
<400> 1
Gln Ser Gly Phe Cys Thr Ser Tyr Tyr Cys Ser Lys Phe Cys Gly Thr
1 5 10 15
Ala Gly Ser Leu Tyr Gly Asn Leu Thr Pro Gly Lys Ile Cys Cys Leu
20 25 30
His Cys Ser Ser
35
Claims (7)
1.一种小球藻多糖，其特征在于：所述小球藻多糖的提取步骤为：
1）取小球藻粉制成藻液加入活性多肽，选用磷酸钠盐缓冲液作为提取剂，反复冻融，超声波处理，离心，取上清液，得粗蛋白提取液；
2）将上清液真空浓缩至原体积的1/10~3/10，醇析，离心得粗多糖；
3）复溶，用三氯乙酸法除蛋白；
4）真空浓缩，冷冻干燥，得小球藻多糖。
2.根据权利要求1所述的一种小球藻多糖，其特征在于：所述步骤1中小球藻粉与水的固液比为1:35-55，所述磷酸钠盐缓冲液的pH值为6.8-7.2。
3.根据权利要求1所述的一种小球藻多糖，其特征在于：所述步骤1中活性多肽的添加量为小球藻粉重量的0.02%-0.05%，所述活性多肽的氨基酸序列为QSGFCTSYYCSKFCGTAGSLYGNLTPGKICCLHCSS。
4.根据权利要求1所述的一种小球藻多糖，其特征在于：所述步骤1中反复冻融是在-20℃和37℃，反复冻融4-5次，每次3.5-4.5h，冻融结束后超声波处理的超声波功率为350-600w，时间为10-15min。
5.根据权利要求1所述的一种小球藻多糖，其特征在于：所述步骤2中醇析过程为，在浓缩液中加入85%~94%的乙醇溶液，搅拌10-20min，离心得粗多糖。
6.根据权利要求1所述的一种小球藻多糖，其特征在于：所述步骤4中冷冻干燥温度为-38℃至-35℃。
7.根据权利要求1所述的一种小球藻多糖，其特征在于：所述小球藻多糖在具有促进机体免疫力、抗肿瘤的保健品中使用。
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