CN109021066A - 一种发酵液提取谷胱甘肽的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种发酵液提取谷胱甘肽的方法,其包括蛋白沉淀、第一清液制备、谷胱甘肽沉淀、第二清液制备、谷胱甘肽纯化、谷胱甘肽结晶6个步骤。本发明的有益效果在于:在菌体破壁后加入一定量的强酸,使菌体破壁更加充分从而提高谷胱甘肽的收率,同时也使发酵液中的蛋白质变性沉淀,降低了谷胱甘肽在铜盐沉淀过程中未知杂质的干扰。本发明的方法既增强了菌体破壁的效果提高收率,又降低了铜盐沉淀过程中杂质的干扰提高纯度。
Description
技术领域
本发明属于生物化工领域,具体涉及一种发酵液提取谷胱甘肽的方法。
背景技术
谷胱甘肽(Glutathione,GSH),全称γ-L-谷氨酸-L-半胱氨酰甘氨酸,是由L-谷氨酸、L-半胱氨酸和甘氨酸缩合而成的含巯基的生物活性三肽化合物,是生物体内重要的非蛋白巯基化合物之一。
谷胱甘肽普遍存在于动植物细胞和微生物中,尤其在酵母、小麦胚芽以及人和动物肝脏、肾、红细胞和眼睛晶状体中含量较为丰富。它主要以还原型(GSH)和氧化型(GSSH)两种形态存在,其中在机体中大量存在并起主要作用的是还原型谷胱甘肽,本发明中提及的谷胱甘肽均是指还原型的谷胱甘肽。谷胱甘肽具有多种生理功能,尤以抗氧化和整合解毒作用最为突出,同时谷胱甘肽在细胞增殖、凋亡、成纤维过程中也扮演着重要角色。随着研究的不断深入,谷胱甘肽在临床医学、保健品、食品添加剂以及动物饲料等方面的应用正引起广泛的关注,市场前景需求量正日益加大。
然而,国内生产谷胱甘肽的工艺还不够成熟,其发展瓶颈主要在于发酵水平低下,后续提纯工艺收率低,因而所得产品纯度低、质量差、成本高。高纯度地从发酵液获得谷胱甘肽一直是谷胱甘肽产业化的障碍,也日益成为研究的热点之一。
解决上述问题对实现我国GSH大规模产业化,改变GSH原料依赖进口的尴尬局面并推动我国医学工业、保健行业和食品工业的发展有着十分重要的意义,同时具有良好的经济效益和社会效益。
现有技术中,已报道的关于从发酵液中提纯分离出GSH的方法主要有:铜盐法、离子交换法、亲和层析法、双水相萃取、反胶束萃取等。其中,铜盐法作为一种传统的提取方法,选择性强,收率高且易于操作,有很强的实用价值;然而,在操作过程中,由于发酵液成分复杂,类似物多,容易引入杂质而造成产品纯度不高。离子交换法也是一种提纯GSH的常用手段,但是,所用填料成本偏高且使用寿命偏短,生产周期长且废水处理量大,因而在工业生产中常被限制。其中,亲和层析法是一种有效分离GSH的方法,但含汞树脂稳定性差且易泄露,因此不宜在食品药品领域应用。应用双水相萃取法分离GSH,虽然效率较高,但由于双水相组成系统一般比较昂贵,生产成本高,这使得它在技术上的优势被削弱。其中,反胶束萃取谷胱甘肽是一种很有发展潜力的方法,但其工业化大规模应用还不成熟,目前还处于实验室研究阶段。
由此可见,铜盐法因其选择性强、收率高、易于工业操作等诸多优点,一直倍受青睐。但由于发酵液成分复杂,类似物较多,且铜盐法可优化空间有限,许多发酵法生产谷胱甘肽的厂家经铜盐法提取后仍有许多杂质存在,现有铜盐法技术尚未有解决这一难题的办法。
发明内容
为了克服现有技术存在的缺陷,本发明的目的是提供一种发酵液提取谷胱甘肽的方法,使得所提取的谷胱甘肽收率更高的同时也易于操作和工业生产。
为了实现上述目的,本发明所采用的的技术方案是:
一种发酵液提取谷胱甘肽的方法,包括如下步骤:
(1)蛋白沉淀步骤:将富含谷胱甘肽的菌体加入强酸后搅拌沉淀,使富含谷胱甘肽的菌体充分破壁并沉淀蛋白得到第一匀浆;
(2)第一清液制备步骤:将步骤(1)制得的所述第一匀浆用酸调节pH后离心过滤,得到第一清液;
(3)谷胱甘肽沉淀步骤:向步骤(2)制得的第一清液中加入沉淀剂后搅拌反应,使谷胱甘肽形成沉淀后离心,收集清洗沉淀;
(4)第二清液制备步骤:收集步骤(3)制得的清洗沉淀并用纯化水悬起形成第二匀浆,在所述第二匀浆中加入硫化物,搅拌反应,使谷胱甘肽重新游离至上清液中,得到第二清液;
(5)谷胱甘肽纯化步骤:在步骤(4)中所述的第二清液中加入活性炭脱色并离心过滤,得到第三清液后减压浓缩,制得谷胱甘肽浓缩液;
(6)谷胱甘肽结晶步骤:采用乙醇溶液对步骤(5)制得的谷胱甘肽浓缩液进行结晶操作,得到谷胱甘肽晶体粗品后真空干燥得纯品。
在本发明的一个优选实施例中,步骤(1)中所述的强酸包括三氯乙酸、三氟乙酸、冰醋酸中的任意一种或两种以上的混合,优选三氯乙酸。
在本发明的一个优选实施例中,步骤(1)中所述的强酸的加入量以所述第一匀浆的体积为基准,加入量的范围为1%-5%,优选2%-3%。
在本发明的一个优选实施例中,步骤(1)中所述的搅拌沉淀为300-400rpm搅拌沉淀20-30min。
在本发明的一个优选实施例中,步骤(2)中,所述用于调节pH的酸包括硫酸,所述调节pH的范围为1.5-2.5。
在本发明的一个优选实施例中,步骤(2)中,所述离心的速度为6000-8000rpm,时间范围为60-80min。
在本发明的一个优选实施例中,步骤(3)中,所述沉淀剂包括氧化亚铜、氯化亚铜、氧化铜、硫酸铜的任意一种或两种以上的混合,优选氧化亚铜。
在本发明的一个优选实施例中,步骤(3)中,所述沉淀剂加入比例,按物质的量计,范围为1:1-2:1。
在本发明的一个优选实施例中,步骤(3)中,所述的搅拌反应的速度范围为300-400rpm,时间范围为120-150min。
在本发明的一个优选实施例中,步骤(3)中,所述离心的速度范围为6000-8000rpm,时间范围为30-45min。
在本发明的一个优选实施例中,步骤(3)中,所述收集清洗沉淀为收集沉淀用纯化水淋洗,洗至所述第一清液中不再检出盐分。
在本发明的一个优选实施例中,步骤(4)中,所述硫化物包括硫化氢、硫化钠、硫化钾、硫化铵中任意一种或两种以上的混合,优选硫化氢。
在本发明的一个优选实施例中,步骤(4)中,所述的搅拌反应为300-400rpm搅拌反应120-150min。
在本发明的一个优选实施例中,步骤(5)中,所述加入活性炭脱色为按照0.5%质量分数向所述第二清液中加入活性炭,200-300rpm搅拌脱色30-45min。
在本发明的一个优选实施例中,步骤(5)中,所述离心过滤的速度范围为4000-5000rpm,时间范围为20-30min,使用的过滤膜的孔径范围为0.22μM。
在本发明的一个优选实施例中,步骤(5)中,所述减压浓缩为-0.07Mpa-0Mpa压力下,在55~65℃下进行减压浓缩。
在本发明的一个优选实施例中,步骤(6)中,步骤(6)中,所述乙醇溶液为预热至55-65℃的50-60%的乙醇溶液。
本发明的主要创新点在于:
在菌体破壁后加入一定量的强酸,使菌体破壁更加充分从而提高谷胱甘肽的收率,同时也使发酵液中的蛋白质变性沉淀,降低了谷胱甘肽在铜盐沉淀过程中未知杂质的干扰。本发明的方法既增强了菌体破壁的效果提高收率,又降低了铜盐沉淀过程中杂质的干扰提高纯度。
具体实施方式
以下通过实施例对本发明作进一步的说明,但这些实施例不得用于解释对本发明的限制。
实施例1
向60L发酵菌体中(含GSH 257g)只加入硫酸,调节pH至2,充分破壁后用转速为6000rpm离心机离心所述发酵液,得到富含谷胱甘肽的上清液。按照比例物质的量0.5:1的比例向清液中加入氧化亚铜,400rpm搅拌反应60min,得到GSCu沉淀悬浮液;用转速为6000rpm离心机离心,得到GSCu沉淀,收集沉淀并用4倍体积纯化水搅拌悬起,制得GSCu沉淀悬浮液;将GSCu沉淀悬浮液转移至另一容器中,向所述GSCu沉淀悬浮液中通入硫化氢,并以250rpm的转速搅拌反应2小时,生成Cu2S沉淀并置换出谷胱甘肽,制得谷胱甘肽母液;用转速为6000rpm离心机离心所述谷胱甘肽母液,得到含谷胱甘肽的上清液;转移至另一容器中,按照质量分数0.5%加入活性炭脱色30min,离心过滤,得到富含谷胱甘肽的清液;用0.45μm的滤膜过滤上清液除去颗粒杂质,得到GSH溶液;将所述GSH溶液在-0.07Mpa压力下且在65℃下减压浓缩,使GSH浓度达到400g/L,即制得谷胱甘肽浓缩液;向所述谷胱甘肽浓缩液中加入预热至55℃的50%的乙醇溶液,以200rpm的转速缓慢搅拌,逐步降温缓慢析出晶体;充分析晶后,抽滤,用浓度65%的乙醇溶液洗涤2次,得到谷胱甘肽晶体粗品;最后,在-0.07Mpa的压力下于60℃真空干燥所述谷胱甘肽晶体粗品,得到177g谷胱甘肽晶体,参考国家进口药品注册标准中谷胱甘肽有关物质检测方法,经高效液相(HPLC)检测纯度为95.6%,总收率为68.9%。
所制得谷胱甘肽晶体的元素分析如下:理论值:C 39.08%、H 5.58%、O 31.24%;测量值:C 39.11%、H 5.54%、O 31.25%。
实施例2
向61L发酵菌体(含GSH 273g)中加入1.525L三氯乙酸,300rpm搅拌20min,再用硫酸调节pH至2,用转速为6000rpm离心机离心所述发酵液,得到富含谷胱甘肽的上清液。按照比例物质的量0.5:1的比例向清液中加入氧化亚铜,400rpm搅拌反应60min,得到GSCu沉淀悬浮液;用转速为6000rpm离心机离心,得到GSCu沉淀,收集沉淀并用4倍体积纯化水搅拌悬起,制得GSCu沉淀悬浮液;将GSCu沉淀悬浮液转移至另一容器中,向所述GSCu沉淀悬浮液中通入硫化氢,并以250rpm的转速搅拌反应2小时,生成Cu2S沉淀并置换出谷胱甘肽,制得谷胱甘肽母液;用转速为6000rpm离心机离心所述谷胱甘肽母液,得到含谷胱甘肽的上清液;转移至另一容器中,按照质量分数0.5%加入活性炭脱色30min,离心过滤,得到富含谷胱甘肽的清液;用0.45μm的滤膜过滤上清液除去颗粒杂质,得SH溶液;将所述GSH溶液在-0.07Mpa压力下且在65℃下减压浓缩,使GSH浓度达到400g/L,即制得谷胱甘肽浓缩液;向所述谷胱甘肽浓缩液中加入预热至55℃的50%的乙醇溶液,以200rpm的转速缓慢搅拌,逐步降温缓慢析出晶体;充分析晶后,抽滤,用浓度65%的乙醇溶液洗涤2次,得到谷胱甘肽晶体粗品;最后,在-0.07Mpa的压力下于60℃真空干燥所述谷胱甘肽晶体粗品,得到194g谷胱甘肽晶体,参考国家进口药品注册标准中谷胱甘肽有关物质检测方法,经高效液相(HPLC)检测纯度为98.9%,总收率为71.1%。
所制得谷胱甘肽晶体的元素分析如下:理论值:C 39.08%、H 5.58%、O 31.24%;测量值:C 39.07%、H 5.57%、O 31.26%。
实施例3
向57L发酵菌体(含GSH 253g)中加入1.525L三氟乙酸,300rpm搅拌20min,再用硫酸调节pH至2,用转速为6000rpm离心机离心所述发酵液,得到富含谷胱甘肽的上清液。按照比例物质的量0.5:1的比例向清液中加入氧化亚铜,400rpm搅拌反应60min,得到GSCu沉淀悬浮液;用转速为6000rpm离心机离心,得到GSCu沉淀,收集沉淀并用4倍体积纯化水搅拌悬起,制得GSCu沉淀悬浮液;将GSCu沉淀悬浮液转移至另一容器中,向所述GSCu沉淀悬浮液中通入硫化氢,并以250rpm的转速搅拌反应2小时,生成Cu2S沉淀并置换出谷胱甘肽,制得谷胱甘肽母液;用转速为6000rpm离心机离心所述谷胱甘肽母液,得到含谷胱甘肽的上清液;转移至另一容器中,按照质量分数0.5%加入活性炭脱色30min,离心过滤,得到富含谷胱甘肽的清液;用0.45μm的滤膜过滤上清液除去颗粒杂质,得SH溶液;将所述GSH溶液在-0.07Mpa压力下且在65℃下减压浓缩,使GSH浓度达到400g/L,即制得谷胱甘肽浓缩液;向所述谷胱甘肽浓缩液中加入预热至55℃的50%的乙醇溶液,以200rpm的转速缓慢搅拌,逐步降温缓慢析出晶体;充分析晶后,抽滤,用浓度65%的乙醇溶液洗涤2次,得到谷胱甘肽晶体粗品;最后,在-0.07Mpa的压力下于60℃真空干燥所述谷胱甘肽晶体粗品,得到179g谷胱甘肽晶体,参考国家进口药品注册标准中谷胱甘肽有关物质检测方法,经高效液相(HPLC)检测纯度为98.3%,总收率为70.8%。
所制得谷胱甘肽晶体的元素分析如下:理论值:C 39.08%、H 5.58%、O 31.24%;测量值:C 39.04%、H 5.59%、O 31.29%。
实施例4
向58L发酵菌体(含GSH 263g)中加入0.5L三氟乙酸,300rpm搅拌20min,再用硫酸调节pH至2,充分破壁后用转速为6000rpm离心机离心所述发酵液,得到富含谷胱甘肽的上清液。按照比例物质的量0.5:1的比例向清液中加入氧化亚铜,400rpm搅拌反应60min,得到GSCu沉淀悬浮液;用转速为6000rpm离心机离心,得到GSCu沉淀,收集沉淀并用4倍体积纯化水搅拌悬起,制得GSCu沉淀悬浮液;将GSCu沉淀悬浮液转移至另一容器中,向所述GSCu沉淀悬浮液中通入硫化氢,并以250rpm的转速搅拌反应2小时,生成Cu2S沉淀并置换出谷胱甘肽,制得谷胱甘肽母液;用转速为6000rpm离心机离心所述谷胱甘肽母液,得到含谷胱甘肽的上清液;转移至另一容器中,按照质量分数0.5%加入活性炭脱色30min,离心过滤,得到富含谷胱甘肽的清液;用0.45μm的滤膜过滤上清液除去颗粒杂质,得到GSH溶液;将所述GSH溶液在-0.07Mpa压力下且在65℃下减压浓缩,使GSH浓度达到400g/L,即制得谷胱甘肽浓缩液;向所述谷胱甘肽浓缩液中加入预热至55℃的50%的乙醇溶液,以200rpm的转速缓慢搅拌,逐步降温缓慢析出晶体;充分析晶后,抽滤,用浓度65%的乙醇溶液洗涤2次,得到谷胱甘肽晶体粗品;最后,在-0.07Mpa的压力下于60℃真空干燥所述谷胱甘肽晶体粗品,得到185g谷胱甘肽晶体,参考国家进口药品注册标准中谷胱甘肽有关物质检测方法,经高效液相(HPLC)检测纯度为97.1%,总收率为70.3%。
所制得谷胱甘肽晶体的元素分析如下:理论值:C 39.08%、H 5.58%、O 31.24%;测量值:C 39.09%、H 5.59%、O 31.23%。
实施例5
向57L发酵菌体(含GSH 269g)中加入1.5L冰醋酸,300rpm搅拌20min,再用硫酸调节pH至2,充分破壁后用转速为6000rpm离心机离心所述发酵液,得到富含谷胱甘肽的上清液。按照比例物质的量0.5:1的比例向清液中加入氧化亚铜,400rpm搅拌反应60min,得到GSCu沉淀悬浮液;用转速为6000rpm离心机离心,得到GSCu沉淀,收集沉淀并用4倍体积纯化水搅拌悬起,制得GSCu沉淀悬浮液;将GSCu沉淀悬浮液转移至另一容器中,向所述GSCu沉淀悬浮液中通入硫化氢,并以250rpm的转速搅拌反应2小时,生成Cu2S沉淀并置换出谷胱甘肽,制得谷胱甘肽母液;用转速为6000rpm离心机离心所述谷胱甘肽母液,得到含谷胱甘肽的上清液;转移至另一容器中,按照质量分数0.5%加入活性炭脱色30min,离心过滤,得到富含谷胱甘肽的清液;用0.45μm的滤膜过滤上清液除去颗粒杂质,得到GSH溶液;将所述GSH溶液在-0.07Mpa压力下且在65℃下减压浓缩,使GSH浓度达到400g/L,即制得谷胱甘肽浓缩液;向所述谷胱甘肽浓缩液中加入预热至55℃的50%的乙醇溶液,以200rpm的转速缓慢搅拌,逐步降温缓慢析出晶体;充分析晶后,抽滤,用浓度65%的乙醇溶液洗涤2次,得到谷胱甘肽晶体粗品;最后,在-0.07Mpa的压力下于60℃真空干燥所述谷胱甘肽晶体粗品,得到183g谷胱甘肽晶体,参考国家进口药品注册标准中谷胱甘肽有关物质检测方法,经高效液相(HPLC)检测纯度为96.7%,总收率为68%。
所制得谷胱甘肽晶体的元素分析如下:理论值:C 39.08%、H 5.58%、O 31.24%;测量值:C 39.07%、H 5.59%、O 31.25%。
实施例6
向59L发酵菌体(含GSH 291g)中加入1.5L二氯甲烷,300rpm搅拌20min,再用硫酸调节pH至2,充分破壁后用转速为6000rpm离心机离心所述发酵液,得到富含谷胱甘肽的上清液。按照比例物质的量0.5:1的比例向清液中加入氧化亚铜,400rpm搅拌反应60min,得到GSCu沉淀悬浮液;用转速为6000rpm离心机离心,得到GSCu沉淀,收集沉淀并用4倍体积纯化水搅拌悬起,制得GSCu沉淀悬浮液;将GSCu沉淀悬浮液转移至另一容器中,向所述GSCu沉淀悬浮液中通入硫化氢,并以250rpm的转速搅拌反应2小时,生成Cu2S沉淀并置换出谷胱甘肽,制得谷胱甘肽母液;用转速为6000rpm离心机离心所述谷胱甘肽母液,得到含谷胱甘肽的上清液;转移至另一容器中,按照质量分数0.5%加入活性炭脱色30min,离心过滤,得到富含谷胱甘肽的清液;用0.45μm的滤膜过滤上清液除去颗粒杂质,得到GSH溶液;将所述GSH溶液在-0.07Mpa压力下且在65℃下减压浓缩,使GSH浓度达到400g/L,即制得谷胱甘肽浓缩液;向所述谷胱甘肽浓缩液中加入预热至55℃的50%的乙醇溶液,以200rpm的转速缓慢搅拌,逐步降温缓慢析出晶体;充分析晶后,抽滤,用浓度65%的乙醇溶液洗涤2次,得到谷胱甘肽晶体粗品;最后,在-0.07Mpa的压力下于60℃真空干燥所述谷胱甘肽晶体粗品,得到201g谷胱甘肽晶体,经高效液相(HPLC)检测纯度为96.3%,总收率为69.1%。
所制得谷胱甘肽晶体的元素分析如下:理论值:C 39.08%、H 5.58%、O31.24%;测量值:C 39.10%、H 5.56%、O 31.26%。
Claims (17)
1.一种发酵液提取谷胱甘肽的方法,包括如下步骤:
(1)蛋白沉淀步骤:将富含谷胱甘肽的菌体加入强酸后搅拌沉淀,使富含谷胱甘肽的菌体充分破壁并沉淀蛋白得到第一匀浆;
(2)第一清液制备步骤:将步骤(1)制得的所述第一匀浆用酸调节pH后离心过滤,得到第一清液;
(3)谷胱甘肽沉淀步骤:向步骤(2)制得的第一清液中加入沉淀剂后搅拌反应,使谷胱甘肽形成沉淀后离心,收集清洗沉淀;
(4)第二清液制备步骤:收集步骤(3)制得的清洗沉淀并用纯化水悬起形成第二匀浆,在所述第二匀浆中加入硫化物,搅拌反应,使谷胱甘肽重新游离至上清液中,得到第二清液;
(5)谷胱甘肽纯化步骤:在步骤(4)中所述的第二清液中加入活性炭脱色并离心过滤,得到第三清液后减压浓缩,制得谷胱甘肽浓缩液;
(6)谷胱甘肽结晶步骤:采用乙醇溶液对步骤(5)制得的谷胱甘肽浓缩液进行结晶操作,得到谷胱甘肽晶体粗品后真空干燥得纯品。
2.如权利要求1所述的一种发酵液提取谷胱甘肽的方法,其特征在于,所述步骤(1)中所述的强酸包括三氯乙酸、三氟乙酸、冰醋酸中的任意一种或两种以上的混合。
3.如权利要求1所述的一种发酵液提取谷胱甘肽的方法,其特征在于,所述步骤(1)中所述的强酸的加入量以所述第一匀浆的体积为基准,加入量的范围为1%-5%。
4.如权利要求1所述的一种发酵液提取谷胱甘肽的方法,其特征在于,所述步骤(1)中所述的搅拌沉淀为300-400rpm搅拌沉淀20-30min。
5.如权利要求1所述的一种发酵液提取谷胱甘肽的方法,其特征在于,所述步骤(2)中,所述用于调节pH的酸包括硫酸,所述调节pH的范围为1.5-2.5。
6.如权利要求1所述的一种发酵液提取谷胱甘肽的方法,其特征在于,所述步骤(2)中,所述离心的速度范围为6000-8000rpm,时间范围为60-80min。
7.如权利要求1所述的一种发酵液提取谷胱甘肽的方法,其特征在于,所述步骤(3)中,所述沉淀剂包括氧化亚铜、氯化亚铜、氧化铜、硫酸铜的任意一种或两种以上的混合。
8.如权利要求1所述的一种发酵液提取谷胱甘肽的方法,其特征在于,所述步骤(3)中,所述沉淀剂加入比例,按物质的量计,范围为1:1-2:1。
9.如权利要求1所述的一种发酵液提取谷胱甘肽的方法,其特征在于,所述步骤(3)中,所述的搅拌反应的速度范围为300-400rpm,时间范围为120-150min。
10.如权利要求1所述的一种发酵液提取谷胱甘肽的方法,其特征在于,所述步骤(3)中,所述离心的速度范围为6000-8000rpm,时间范围为30-45min。
11.如权利要求1所述的一种发酵液提取谷胱甘肽的方法,其特征在于,所述步骤(3)中,所述收集清洗沉淀为收集沉淀用纯化水淋洗,洗至所述第一清液中不再检出盐分。
12.如权利要求1所述的一种发酵液提取谷胱甘肽的方法,其特征在于,所述步骤(4)中,所述硫化物包括硫化氢、硫化钠、硫化钾、硫化铵中任意一种或两种以上的混合。
13.如权利要求1所述的一种发酵液提取谷胱甘肽的方法,其特征在于,所述步骤(4)中,所述的搅拌反应为300-400rpm搅拌反应120-150min。
14.如权利要求1所述的一种发酵液提取谷胱甘肽的方法,其特征在于,所述步骤(5)中,所述加入活性炭脱色为按照0.5%质量分数向所述第二清液中加入活性炭,200-300rpm搅拌脱色30-45min。
15.如权利要求1所述的一种发酵液提取谷胱甘肽的方法,其特征在于,所述步骤(5)中,所述离心过滤的速度范围为4000-5000rpm,时间范围为20-30min,使用的过滤膜的孔径范围为0.22μM。
16.如权利要求1所述的一种发酵液提取谷胱甘肽的方法,其特征在于,所述步骤(5)中,所述减压浓缩为-0.07Mpa-0Mpa压力下,在55~65℃下进行减压浓缩。
17.如权利要求1所述的一种发酵液提取谷胱甘肽的方法,其特征在于,所述步骤(6)中,所述乙醇溶液为预热至55-65℃的50-60%的乙醇溶液。
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