CN113736662A - 酵母硒蛋白及其制备方法和应用 - Google Patents

酵母硒蛋白及其制备方法和应用 Download PDF

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CN113736662A CN202010477781.9A CN202010477781A CN113736662A CN 113736662 A CN113736662 A CN 113736662A CN 202010477781 A CN202010477781 A CN 202010477781A CN 113736662 A CN113736662 A CN 113736662A
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Abstract

本发明涉及一种酵母硒蛋白及其制备方法和应用，所述酵母硒蛋白的硒含量为2000～4500mg/kg，硒代蛋氨酸含量为3000～7000mg/kg，蛋白含量为60～80％。所述酵母硒蛋白的制备方法包括下述步骤：将富硒酵母经酶解、碱处理后得到所述酵母硒蛋白。优选的，所述酶解过程的酶选自甘露聚糖酶，葡聚糖酶、木瓜蛋白酶的一种或两种以上。本发明所得酵母硒蛋白可增强机体抗氧化功能和免疫功能，所述制备方法应用先进生物技术，不涉及有机溶剂，简化生产工艺，提高生产效率。

Description

酵母硒蛋白及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及微生物应用技术领域，具体涉及一种酵母硒蛋白及其制备方法和应用。
背景技术
硒是人体必需微量元素，具有多种生理功能。开发富硒食品对身体健康具有重要意义。富硒保健食品主要有富硒植物和动物食品、富硒营养强化剂、富硒高新技术保健食品等。
富硒植物食品种类多样，包括富硒蛋白、富硒茶等。富硒大蒜蛋白质，有机硒含量能够达到30～100μg/g，富硒动物食品包括：富硒牛奶、富硒鸡蛋、海洋富硒食品。日常生活中，常将15mg/L的亚硒酸钠溶液加入食盐中作为无机硒营养强化剂；而有机营养强化剂主要通过人工合成硒代氨基酸、硒代含硫氨基酸(属于甲硫基丁氨酸类型)和轻硒基酸代氨基酸。此外还有富硒高新技术保健食品：纳米硒营养强化剂。
无机硒的毒性显著高于有机硒，富硒植物、富硒动物、富硒真菌中含硒蛋白和含硒多肽的毒性较低，可作为营养素强化剂开发的理想硒形态。富硒植物和富硒动物的硒含量受到土壤中硒含量的影响较大，硒取代硫的过程具有随机性使植物中硒蛋白含量存在不确定性，影响其开发和应用。加大行政部门监管力度，能为富硒产品的开发和推广起到积极的促进作用。微生物富硒具有繁殖速度快，生产可控等诸多优点。富硒酵母已经实现工业生产，具有较强的市场应用前景。
现有从富硒酵母中提取硒蛋白的方法包括超声、均质、酸提、碱提、反复冻融等方法，但酵母细胞壁厚，以上方法有破壁率低，易使蛋白质失活，纯化方法复杂等缺点，极大限制了酵母硒蛋白的应用。
目前，有很多改善酵母硒蛋白制备方法的研究，CN201210288241涉及一种含硒蛋白的制备方法，通过均质破壁，利用硫酸铵进行分级沉淀并透析，再经凝胶柱分离得到纯度较高的含硒蛋白。此法得到的硒蛋白因经过凝胶柱纯化，纯度高。CN201810738787涉及一种富含B族维生素的酵母硒寡肽粉的制备方法，利用乙醇盐酸水溶液提取，经超声震荡与负压破壁，低温真空浓缩，再经酶解工艺后真空冷冻干燥得到富含B族维生素的酵母硒寡肽粉。CN201611021089涉及一种利用富硒酵母制备硒酵母蛋白肽粉的工艺，以富硒酵母为原料，经自溶、质壁分离、酶解、超滤、纳滤脱盐、干燥等工艺得到硒酵母蛋白肽粉。
发明内容
本发明解决的技术问题是：上述现有技术中，CN201210288241涉及的方法工艺流程复杂，需要经过硫酸铵沉淀和凝胶柱过滤，导致收率较低。CN201810738787涉及的工艺需引入大量酸碱，且涉及超声震荡，不适用于工业化生产，真空冷冻干燥成本高。即，现有的制备酵母硒蛋白的技术成本较高，工艺较复杂，所得产品的收率和质量都有待提高。
本发明的目的是：提供一种易于实现，收率和质量较高的酵母硒蛋白及其制备方法。
为解决上述技术问题，本发明提供一种酵母硒蛋白及其制备方法，其作为抗氧化剂降低机体氧化应激水平，可将硒蛋白用于增强机体免疫功能保健食品中，属于微生物应用技术。
具体来说，针对现有技术的不足，本发明提供了如下技术方案：
一种酵母硒蛋白，其特征在于，硒含量为2000～4500mg/kg，硒代蛋氨酸含量为3000～7000mg/kg，蛋白含量为60～80％。
优选的，所述酵母硒蛋白的硒含量为2400-4500mg/kg，更优选为3500-4500mg/kg，更优选为3900-4500mg/kg。
优选的，所述酵母硒蛋白的硒代蛋氨酸含量为3500-7000mg/kg，更优选为4000-7000mg/kg，更优选为5000-7000mg/kg，更优选为6000-7000mg/kg，更优选为6500-7000mg/kg。
优选的，所述蛋白含量优选为65-80％，更优选为70-80％。
优选的，上述酵母硒蛋白中，所述酵母硒蛋白由包含下述步骤的方法制备得到：
将富硒酵母经酶解、碱处理后得到所述酵母硒蛋白。
优选的，上述酵母硒蛋白中，所述酶解过程所添加的酶选自甘露聚糖酶，葡聚糖酶、木瓜蛋白酶的一种或两种以上。
本发明还提供一种酵母硒蛋白的制备方法，其特征在于，包含下述步骤：将富硒酵母经酶解、碱处理后得到所述酵母硒蛋白。
优选的，上述制备方法中，所述酶解过程之前还包括下述步骤：
将富硒酵母溶于水中，制成5-15wt％，优选为8-12wt％的酵母悬浮液。
优选的，上述制备方法中，所述酶解过程所添加的酶选自甘露聚糖酶，葡聚糖酶、木瓜蛋白酶的一种或两种以上。
优选的，上述制备方法中，所述酶至少含有葡聚糖酶。
优选的，上述制备方法中，所述酶至少包括葡聚糖酶和甘露聚糖酶。
优选的，上述制备方法中，所述酶至少包括葡聚糖酶和木瓜蛋白酶。
优选的，上述制备方法中，所述酶包括甘露聚糖酶、葡聚糖酶和木瓜蛋白酶。
优选的，上述制备方法中，所述酶的添加量为酵母干重的0.1-2.5％，优选为0.8-1.5％。
优选的，上述制备方法中，所述酶的添加量为酵母干重的0.8-1.2％。
优选的，上述制备方法中，所述甘露聚糖酶的添加量为酵母干重的0.1％-1.0％，优选为0.2％-0.5％；所述葡聚糖酶的添加量为酵母干重的0.1％-1.0％，优选为0.5％-1.0％；所述木瓜蛋白酶的添加量为酵母干重的0.1％-0.5％，优选为0.1％-0.2％。
优选的，上述制备方法中，所述酶解过程包括下述步骤：
调节酵母悬浮液的温度为45～55℃，pH为5.5～7.5，加入酶，进行酶解反应。
优选的，上述制备方法中，酶解过程的温度为50～53℃。
优选的，上述制备方法中，酶解过程的pH为5.5～6.2。
优选的，上述制备方法中，酶解过程的时间为6-24h，优选8-10h。
优选的，上述制备方法中，所述碱处理过程包括下述步骤：
向酶解产物中加入碱，将pH调节为7.5～12.0，调节温度为35～55℃，进行碱处理，碱处理的时间为0.1-4.0h。
优选的，上述制备方法中，碱处理过程的pH为8.0～8.6。
优选的，上述制备方法中，碱处理过程的温度为50～53℃。
优选的，上述制备方法中，碱处理过程的时间为1.5-2.5h。
优选的，上述制备方法中，所述碱选自氢氧化钠或氢氧化钾，更优选为氢氧化钠。
优选的，上述制备方法中，所述碱处理的过程包括下述步骤为：以200r/min-400r/min的速度进行搅拌。
优选的，上述制备方法中，所述碱处理后还包括下述过程：将碱处理后所得产物离心分离，得到重相产物，将重相产物配制成悬浮液，干燥后得到酵母硒蛋白。
优选的，上述制备方法中，所述干燥过程选自喷雾干燥或冷冻干燥，优选为喷雾干燥。
优选的，上述制备方法中，所述离心分离的过程包括下述步骤：
将碱处理所得产物的pH调节为6.5-7.5，离心分离得到重相产物。
优选的，上述制备方法中，所述悬浮液的浓度为10wt％-16wt％。
优选的，上述制备方法中，所述喷雾干燥的条件为：进风温度为140～180℃，出风温度为80～110℃。
优选的，喷雾干燥的过程，进风温度为150～160℃，出风温度为95～100℃。
本发明还提供一种酵母硒蛋白，其特征在于，由上述方法制备得到。
本发明还提供上述酵母硒蛋白在食品、保健食品、饲料、化妆品或药物领域的应用。
如无特殊说明，本发明中的百分数都为质量百分数。
本发明的优点是：(1)为市场提供一种微生物来源的硒蛋白，填补此类产品市场空白。酵母来源有机硒，安全性高，并能提供蛋白质矿物质B族维生素，为机体提供丰富营养。酵母已经实现工业化生产销售，运用生物技术进行产品开发增加产品附加值，提升国际竞争力。(2)提供一种酵母硒蛋白的制备方法，应用先进生物技术，不涉及有机溶剂，简化生产工艺，提高生产效率。(3)为市场提供一种增强机体抗氧化功能和免疫功能的原料。
附图说明
图1为实施例1所得酵母硒蛋白对DPPH自由基的清除率随蛋白浓度的变化曲线。
图2为实施例1所得酵母硒蛋白对PTIO自由基的清除率随蛋白浓度的变化曲线。
具体实施方式
鉴于目前硒蛋白的制备工艺复杂，成本高，硒蛋白质量无法控制，得率有待提高，本发明提供一种酵母硒蛋白，其中硒含量2000～4500mg/kg；硒代蛋氨酸含量：3000～7000mg/kg；蛋白含量：60～80％；制备硒蛋白所使用的制备方法，包括：调配、酶解、碱处理、离心、干燥等步骤。
一种优选的实施方式中，本发明提供一种酵母硒蛋白，其特征在于，硒含量2000～4500mg/kg；硒代蛋氨酸含量：3000～7000mg/kg；蛋白含量：60～80％。
本发明所述酵母硒蛋白的制备方法包括下述步骤：
(a)调配：以富硒酵母产品(含富硒酵母生产时的酵母乳)作为原料，溶于水中制备成一定浓度的悬浮液；富硒酵母混悬液的配制：浓度5-15wt％，优选浓度8-12wt％。
(b)酶解：调节悬浮液在适宜温度，pH条件下，通过酶解处理得到悬浮液；加入的生物酶制剂为破壁酶：甘露聚糖酶，葡聚糖酶，蛋白酶，所述甘露聚糖酶，葡聚糖酶，蛋白酶添加量为酵母干重的0.1-2.5％，优选0.8-1.5％。酶解温度为45～55℃，优选50～53℃；酶解时间为6-24h，优选8-10h；酶解pH为5.5～7.5,优选5.5～6.2。
(c)碱处理：向富硒酵母混悬液中加入碱进行处理，优选氢氧化钠。碱提取温度为35～55℃，优选50～53℃；碱提取时间为0.1-4.0h，优选1.5-2.5h；碱提取pH为7.5～12.0,优选8.0～8.6。
(d)离心：调节悬浮液的pH，经过离心分离重相，重相重新溶解得到混悬液。
(e)干燥:将混悬液经过喷雾干燥得到终产品酵母硒蛋白。将混悬液进行喷雾干燥，进风温度为140～180℃，优选150～160℃；出风温度为80～110℃，优选95～100℃。
下面通过具体实施例来进一步说明本发明所述酵母硒蛋白及其制备方法和应用。下面对本实施例所用的原料及设备的生产厂家，以及产品分析使用的设备和分析方法进行说明如下，其中所述的化学物质没有标明的均为常规试剂的化学纯级别。其中，实施例和对比例中所用到的原料的信息如下表所示。
表1实施例中原料和设备信息表
Figure BDA0002516358300000061
实施例1
一种利用富硒酵母制备酵母硒蛋白的工艺，具体工艺如下：
(1)以富硒酵母为原料，用水配置成5％浓度的悬浮液。
(2)调节悬浮液pH为5.5，在温度45℃下加入0.2％甘露聚糖酶，0.5％葡聚糖酶，0.1％木瓜蛋白酶，酶解6h。所述浓度为酶占酵母干重的质量百分数。
(3)用4％的氢氧化钠溶液调节酶解后悬浮液pH为8.0，在温度45℃条件下搅拌(搅拌速度为400r/min)提取4h。
(4)用5％的盐酸溶液调节悬浮液pH至7.0，离心分离重相。
(5)用水将重相配置成10％浓度的悬浮液，再进行喷雾干燥，得到酵母硒蛋白。其中，喷雾干燥条件为：进风温度155℃，出风温度95℃，雾化压力135bar；收料温度控制在35℃。
然后分别按照如下的方法测定所制备得到的酵母硒蛋白的水分，灰分，蛋白，总硒和硒代蛋氨酸的含量，测定结果见表2。
水分的测定：采用国家标准GB 5009.3-2016食品安全国家标准食品中水分的测定规定的方法。
灰分的测定：采用国家标准GB/T 23530-2009中6.8的方法：样品经550℃灼烧后所残留的物质，以百分数表示，即为该样品的灰分。
粗蛋白的测定：采用国家标准GB 5009.5-2016《食品中蛋白质的测定》第一法凯氏定氮法：将试样与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵，然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质含量。
总硒的测定：采用国家标准GB 5009.93-2017《食品中硒的测定》第一法原子荧光光谱法：将待测样品经酸加热消化，在6mol/L盐酸介质中，将样品中的六价硒还原成四价硒，用硼氢化钠或硼氢化钾作为还原剂，将四价硒在盐酸介质中还原成硒化氢，用原子荧光光谱仪检测硒含量。
硒代蛋氨酸的测定：采用企业标准Q/YB.J19.051-2018，具体过程为：精确称取50mg(称准至0.1mg)样品于50ml离心管中，加入2.5ml缓冲液(pH＝3.7)，加入50ul葡聚糖酶，于50℃水浴振荡器中，150转/min酶解16～18小时。然后加入400ul碱性蛋白酶酶解6小时。取出转移至25ml容量瓶内，并定容。过0.45um膜，经氯甲酸乙酯衍生，用正己烷萃取，取萃取液上气质联用仪分析，内标法定量。
实施例2
一种利用富硒酵母制备酵母硒蛋白粉的工艺，具体工艺如下：
(1)以富硒酵母为原料，用水配置成15％浓度的悬浮液。
(2)调节悬浮液pH为7.5，在温度55℃下加入0.1％甘露聚糖酶，0.5％葡聚糖酶，0.2％木瓜蛋白酶的浓度，酶解24h。
(3)用4％的氢氧化钠溶液调节酶解后悬浮液pH为10.0，在温度55℃条件下搅拌(速度为300r/min)提取0.5h。
(4)用5％的盐酸溶液调节悬浮液pH至7.0，离心分离重相。
(5)用水将重相配置成15％浓度的悬浮液，再进行喷雾干燥，得到所述酵母硒蛋白。其中，喷雾干燥条件为：进风温度160℃，出风温度100℃，雾化压力140bar；收料温度控制在40℃。
然后分别按照实施例1中的方法测定所制备得到的酵母硒蛋白的水分，灰分，蛋白，总硒和硒代蛋氨酸的含量，测定结果见表2。
实施例3
一种利用富硒酵母制备酵母硒蛋白粉的工艺，具体工艺如下：
(1)以富硒酵母为原料，用水配置成10％浓度的悬浮液。
(2)调节悬浮液pH为6.0，在温度55℃下加入0.5％甘露聚糖酶，0.5％葡聚糖酶，0.1％蛋白酶的浓度，酶解10h。
(3)用4％的氢氧化钠溶液调节酶解后悬浮液pH为8.5，在温度55℃条件下搅拌(速度为400r/min)提取2h。
(4)用5％的盐酸溶液调节悬浮液pH至7.0，离心分离重相。
(5)用水将重相配置成16％浓度的悬浮液，再进行喷雾干燥，得到所述酵母硒蛋白。其中，喷雾干燥条件为：进风温度160℃，出风温度100℃，雾化压力140bar；收料温度制在40℃。
然后分别按照实施例1中的方法测定所制备得到的酵母硒蛋白的水分，灰分，蛋白，总硒和硒代蛋氨酸的含量，测定结果见表2。
实施例4
一种利用富硒酵母制备酵母硒蛋白粉的工艺，具体工艺如下：
(1)以富硒酵母为原料，用水配置成8％浓度的悬浮液。
(2)调节悬浮液pH为6.2，在温度55℃下加入0.1％葡聚糖酶，酶解6h。
(3)用4％的氢氧化钠溶液调节酶解后悬浮液pH为7.5，在温度35℃条件下搅拌(200r/min)提取0.1h。
(4)用5％的盐酸溶液调节悬浮液pH至6.5，离心分离重相。
(5)用水将重相配置成15％浓度的悬浮液，再进行喷雾干燥，得到酵母硒蛋白。其中，喷雾干燥条件为：进风温度160℃，出风温度100℃，雾化压力140bar；收料温度制在40℃。
然后分别按照实施例1中的方法测定所制备得到的酵母硒蛋白的水分，灰分，蛋白，总硒和硒代蛋氨酸的含量，测定结果见表2。
实施例5
一种利用富硒酵母制备酵母硒蛋白粉的工艺，具体工艺如下：
(1)以富硒酵母为原料，用水配置成12％浓度的悬浮液。
(2)调节悬浮液pH为6.0，在温度50℃下加入0.1％甘露聚糖酶，0.1％葡聚糖酶，0.5％蛋白酶，酶解8h。
(3)用4％的氢氧化钠溶液调节酶解后悬浮液pH为8.6，在温度50℃条件下搅拌(200r/min)提取1.5h。
(4)用5％的盐酸溶液调节悬浮液pH至7.5，离心分离重相。
(5)用水将重相配置成15％浓度的悬浮液，再进行喷雾干燥，得到酵母硒蛋白。其中，喷雾干燥条件为：进风温度160℃，出风温度100℃，雾化压力140bar；收料温度制在40℃。
然后分别按照实施例1中的方法测定所制备得到的酵母硒蛋白的水分，灰分，蛋白，总硒和硒代蛋氨酸的含量，测定结果见表2。
实施例6
一种利用富硒酵母制备酵母硒蛋白粉的工艺，具体工艺如下：
(1)以富硒酵母为原料，用水配置成10％浓度的悬浮液。
(2)调节悬浮液pH为6.0，在温度55℃下加入0.4％甘露聚糖酶，0.7％葡聚糖酶，0.1％蛋白酶，酶解10h。
(3)用4％的氢氧化钠溶液调节酶解后悬浮液pH为12，在温度53℃条件下搅拌(速度为400r/min)提取2.5h。
(4)用5％的盐酸溶液调节悬浮液pH至7.0，离心分离重相。
(5)用水将重相配置成15％浓度的悬浮液，再进行喷雾干燥，得到酵母硒蛋白。其中，喷雾干燥条件为：进风温度160℃，出风温度100℃，雾化压力140bar；收料温度制在40℃。
然后分别按照实施例1中的方法测定所制备得到的酵母硒蛋白的水分，灰分，蛋白，总硒和硒代蛋氨酸的含量，测定结果见表2。
实施例7
一种利用富硒酵母制备酵母硒蛋白粉的工艺，具体工艺如下：
(1)以富硒酵母为原料，用水配置成10％浓度的悬浮液。
(2)调节悬浮液pH为6.0，在温度53℃下加入0.3％甘露聚糖酶，1.0％葡聚糖酶，0.2％蛋白酶，酶的总浓度为2.0％，酶解10h。
(3)用4％的氢氧化钠溶液调节酶解后悬浮液pH为8.5，在温度53℃条件下搅拌(速度为400r/min)提取2.5h。
(4)用5％的盐酸溶液调节悬浮液pH至7.0，离心分离重相。
(5)用水将重相配置成15％浓度的悬浮液，再进行喷雾干燥，得到酵母硒蛋白。其中，喷雾干燥条件为：进风温度160℃，出风温度100℃，雾化压力140bar；收料温度制在40℃。
然后分别按照实施例1中的方法测定所制备得到的酵母硒蛋白的水分，灰分，蛋白，总硒和硒代蛋氨酸的含量，测定结果见表2。
实施例8
本实施例与实施例3类似，区别为：本实施例的步骤(2)为：调节悬浮液pH为6.0，在温度55℃下加入1.0％的甘露聚糖酶，酶解10h。
实施例9
本实施例与实施例3类似，区别为：本实施例的步骤(2)为：调节悬浮液pH为6.0，在温度55℃下加入0.2％的木瓜蛋白酶，酶解10h。
实施例10
本实施例与实施例3类似，区别为：本实施例的步骤(2)为：调节悬浮液pH为6.0，在温度55℃下加入0.5％的甘露聚糖酶和0.6％的葡聚糖酶，酶解10h。
实施例11
本实施例与实施例3类似，区别为：本实施例的步骤(2)为：调节悬浮液pH为6.0，在温度55℃下加入0.6％的葡聚糖酶和0.2％的木瓜蛋白酶，酶解10h。
实施例12
本实施例与实施例3类似，区别为：本实施例的步骤(2)为：调节悬浮液pH为6.0，在温度55℃下加入1.0％的甘露聚糖酶，1.0％的葡聚糖酶和0.5％的蛋白酶，酶解10h。
分别按照实施例1中的方法测定实施例8-12所制备得到的酵母硒蛋白的水分，灰分，蛋白，总硒和硒代蛋氨酸的含量，测定结果见表2。
对比例
本对比例与实施例3类似，区别为：本对比例的步骤(2)为：调节悬浮液pH为6.0，在温度55℃下加入1.5％的甘露聚糖酶，1.0％的葡聚糖酶和0.6％的木瓜蛋白酶，酶解10h。
表2实施例和对比例中不同酵母硒蛋白的含量测定结果
Figure BDA0002516358300000111
Figure BDA0002516358300000121
本发明所得酵母硒蛋白可作为抗氧化剂降低机体氧化应激水平。验证过程为：
试验例1酵母硒蛋白对DPPH自由基的清除作用
实验方法
在试管中加入3.0mL浓度为600μg/mL DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)溶液，再将实施例1所得酵母硒蛋白作为供试品，配置成梯度供试品溶液，分别取3.0mL加入其中。同时设立对照组(等量乙醇代替供试液)，空白组(无水乙醇)。溶液加好后用锡箔纸包好，37℃避光反应30min。测定517nm处的吸光度值A。每样品设3个平行。以相同浓度的酵母蛋白作为对比试验。
自由基清除率D＝(A对照组-A样品组)/(A对照组-A空白)
实验结果：实施例1所得酵母硒蛋白对DPPH自由基的清除率随蛋白浓度的变化如图1所示，由图可知，酵母硒蛋白对DPPH自由基有较强的清除能力。酵母硒蛋白对DPPH自由基的清除率随剂量的增大而升高，而酵母蛋白基本不变，且同等浓度下的酵母硒蛋白自由基清除率高于酵母蛋白。当酵母硒蛋白浓度为6mg/mL时，清除率达到57％。后增加酵母硒蛋白浓度，清除率增长变缓。
试验例2酵母硒蛋白对PTIO自由基的清除作用
实验方法
在试管中加入3.0mL浓度为60μg/mL 2-苯基-4,4,5,5-四甲基咪唑啉-1-氧基-3-氧化物基团(PTIO)溶液，再将实施例1所得酵母硒蛋白作为供试品，配制成梯度溶液，分别取3.0mL加入其中。同时设立对照组(等量纯水代替供试液)，空白组(纯水)。溶液加好后用锡箔纸包好，避光反应30min。测定345nm处的吸光度值A。每样品设3个平行。以相同浓度的酵母蛋白作为对比试验。
自由基清除率D＝(A对照组-A样品组)/(A对照组-A空白)
实验结果：实施例1所得酵母硒蛋白对PTIO自由基的清除率随蛋白浓度的变化如图2所示，由图可知，酵母硒蛋白对PTIO自由基有较强的清除能力。酵母硒蛋白对PTIO自由基的清除率随剂量的增大而升高，而酵母蛋白基本不变，且同等浓度下的酵母硒蛋白自由基清除率高于未富硒的酵母蛋白。当酵母硒蛋白浓度为6mg/mL时，清除率达到65％。后增加酵母硒蛋白浓度，清除率增长变缓。
试验结论：综上所述，本发明所制得的酵母硒蛋白对活性氧与活性氮自由基具有较好的清除作用，酵母硒蛋白与酵母蛋白相比，有较强的抗氧化性，且具有一定的量效关系，酵母硒蛋白在作为优质的补硒剂的同时也有很好的抗氧化活性。可以应用于食品、保健食品、饲料、化妆品或药物领域。

Claims (14)

1.一种酵母硒蛋白，其特征在于，硒含量为2000～4500mg/kg，硒代蛋氨酸含量为3000～7000mg/kg，蛋白含量为60～80％。
2.一种酵母硒蛋白的制备方法，其特征在于，包含下述步骤：将富硒酵母经酶解、碱处理后得到所述酵母硒蛋白。
3.根据权利要求2所述制备方法，其中，所述酶解过程之前还包括下述步骤：
将富硒酵母溶于水中，制成5-15wt％，优选为8-12wt％的酵母悬浮液。
4.根据权利要求2或3所述制备方法，其中，所述酶解过程所添加的酶选自甘露聚糖酶，葡聚糖酶、木瓜蛋白酶的一种或两种以上。
5.根据权利要求4所述制备方法，其中，所述酶解过程所添加的酶至少含有葡聚糖酶。
6.根据权利要求4或5所述制备方法，其中，所述酶的添加量为酵母干重的0.1-2.5％，优选为0.8-1.5％。
7.根据权利要求4-6任一项所述制备方法，其中，所述甘露聚糖酶的添加量为酵母干重的0.1％-1.0％，优选为0.2％-0.5％；所述葡聚糖酶的添加量为酵母干重的0.1％-1.0％，优选为0.5％-1.0％；所述木瓜蛋白酶的添加量为酵母干重的0.1％-0.5％，优选为0.1％-0.2％。
8.根据权利要求2-7任一项所述制备方法，其中，所述酶解过程包括下述步骤：
调节酵母悬浮液的温度为45～55℃，pH为5.5～7.5，加入酶，进行酶解反应。
9.根据权利要求2-8任一项所述制备方法，其中，所述碱处理过程包括下述步骤：
向酶解产物中加入碱，将pH调节为7.5～12.0，调节温度为35～55℃，进行碱处理，碱处理的时间为0.1-4.0h。
10.根据权利要求2-9任一项所述制备方法，其中，所述碱处理后还包括下述过程：将碱处理后所得产物离心分离，得到重相产物，将重相产物配制成悬浮液，干燥后得到酵母硒蛋白。
11.根据权利要求10所述制备方法，其中，所述离心分离的过程包括下述步骤：
将碱处理所得产物的pH调节为6.5-7.5，离心分离得到重相产物。
12.根据权利要求10或11所述制备方法，其中，所述喷雾干燥的条件为：进风温度为140～180℃，出风温度为80～110℃。
13.一种酵母硒蛋白，其特征在于，由权利要求2-12任一项所述方法制备得到。
14.权利要求1或13所述酵母硒蛋白在食品、保健食品、饲料、化妆品或药物领域的应用。
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