CN109423449A - 硒酵母水解物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种硒酵母水解物及其制备方法和应用。本发明硒酵母水解物含有蛋白质、氨基酸态氮、酸溶蛋白和硒代蛋氨酸，其中所述氨基酸态氮含量为2‑3wt％，酸溶蛋白含量为35‑45wt％，其制备方法为通过将硒酵母乳中添加柠檬酸进行自溶处理、酶解处理，在酶解处理中加入的酶包括木瓜蛋白酶，中性蛋白酶，碱性蛋白酶以及风味蛋白酶。本发明的产品容易规模化工业化生产,且经本发明方法制备的硒酵母水解物中功能性成分含量高，硒元素在动物体类的吸收速率大幅增加，可用作饲料产品添加剂使用。
Description
技术领域
本发明涉及一种硒酵母水解物制备方法及产品，属于酵母硒生产、生物酶解技术领域。
背景技术
硒元素是动物生理不可或缺的微量元素，作为动物免疫系统的刺激物，能促进抗体生成，加强动物机体免疫系统和抗感染能力，并可提高动物的繁殖性能。缺硒可导致雄性动物精子数量减少和活力降低及精子畸形率增加。目前在饲料领域添加的硒以无机硒和有机硒两种形式存在，无机硒主要是以无机化合物亚硒酸钠等作为硒源，这类产品吸收率低，毒性高，作为硒源使用不仅无法达到理想的效果，还对环境有很大的破坏作用，也对动物安全有潜在威胁。有机硒则主要是以硒酵母作为硒源，具有安全高效，吸收率高的特点，不仅能够满足动物生理需要，还可以在动物体内储存。
目前市面上的硒产品主要分为无机硒(亚硝酸钠)和有机硒(酵母硒)两大类，关于硒酵母水解物的研究比较少。
《一种酵母硒产品及其生产方法》(CN105559091A)公开了一种酵母硒产品的生产方法，包括将硒酵母乳进行加入乙酸乙酯自溶、酶解处理，获得可溶性酵母硒。可溶性酵母硒富含硒代蛋氨酸、硒代胱氨酸等有机硒，同时含有丰富的核酸、蛋白质、小肽、氨基酸、维生素等营养成分，并且完全可溶。该方法加入了乙酸乙酯作为自溶促进剂，然而乙酸乙酯为高挥发性物质，对环境影响较大。而且该方法通过离心用上清液得到产品完全可溶，去除了大量功能性成分，最终得到的产品产率会大大降低。
发明内容
目前现有技术中存在的技术问题是，目前硒产品中的硒元素在动物体内的吸收速率和沉积量较低，需要提供一种新的硒产品，有效提高硒元素在动物体内的吸收速率和沉积量。
本发明人为解决上述技术问题发现，选用特定的耐高硒含量且具有强大富硒能力的酿酒酵母菌种，经液态深层发酵而获得的一种高有机硒含量的酵母，硒合成到酵母蛋白分子中以硒代氨基酸形式存在。选用2000ppm硒酵母采用多种酶结合水解方法进行系统酶解后，喷雾干燥制备得到的硒酵母水解物产品，硒代蛋氨酸形式存在的硒占总硒比例高达60％。
具体来说，本发明提出了如下技术方案：
本发明提供了硒酵母水解物，含有蛋白质、氨基酸态氮、酸溶蛋白和硒代蛋氨酸，其中，所述氨基酸态氮含量为2-3wt％，酸溶蛋白含量为35-45wt％。
优选的是，上述硒酵母水解物中，所述氨基酸态氮含量为2-3wt％，酸溶蛋白含量为38-45wt％。
优选的是，上述酵母水解物，其中，硒代蛋氨酸质量含量为4300-4500ppm。
另外，本发明还提供了硒酵母水解物的制备方法，通过将硒酵母乳进行自溶处理、酶解处理得到酵母水解产物，所述自溶处理包括向硒酵母乳中添加柠檬酸作为辅助剂，所述酶解处理中加入的酶包括木瓜蛋白酶，中性蛋白酶、碱性蛋白酶、和风味蛋白酶中的两种及以上，且含有中性蛋白酶或碱性蛋白酶的一种。
优选的是，上述方法中，所述木瓜蛋白酶，中性蛋白酶、碱性蛋白酶和风味蛋白酶的用量分别为相对于酵母干物质重量的0.13-0.3％，优选用量分别为木瓜蛋白酶0.13-0.25％，中性蛋白酶0.2-0.3％，碱性蛋白酶0.2-0.3％，风味蛋白酶0.13-0.25％。
优选的是，上述制备方法，其中，所述自溶处理包括向硒酵母乳中添加相对于酵母干物质重量的2-6％的柠檬酸作为辅助剂，优选添加3-4％的柠檬酸作为辅助剂。
优选的是，上述制备方法，其中，所述的自溶处理包括以下步骤:
步骤(1)向所述硒酵母乳中加入柠檬酸调节pH为4-5，优选调节pH为4.5-4.8；
步骤(2)将步骤(1)调节pH后的硒酵母乳升温至35-42℃，保温，优选保温1-2h；升温至42-49℃，保温，优选保温1-2h，再升温至51.5℃-55.5℃；
和步骤(3)维持酵母乳温度51.5℃-55.5℃，保温，优选保温6-12h。
优选的是，上述制备方法，其中，所述酶解处理包括以下步骤：
步骤(1)调节自溶处理后的溶液pH为5-6.4，温度55-65℃，优选pH为5.6-6.0，温度55～60℃；
步骤(2)加入酶进行酶解反应，优选酶解反应维持4-14h，更优选维持6-10h；
和步骤(3)酶解反应结束后，将酵母水解液加热至68℃-85℃，保温0.5-4h，优选加热至70℃-75℃。
优选的是，上述制备方法，其中，还包括将酵母酶解后进行蒸发浓缩得到浓缩品，优选浓缩品中的固形物含量在35-45wt％。
优选的是，上述制备方法，其中，还包括将所述浓缩品进行喷雾干燥，喷雾干燥的进风温度控制在160-180℃，优选为165-168℃；出风温度控制在95-110℃优选为96-98℃；雾化压力控制在100-160bar，优选为120-135bar；收料温度控制在30-40℃，优选为35-37℃。
另外，本发明还提供了通过本发明的方法制备的硒酵母水解物，含有干物质、蛋白质、氨基酸态氮、酸溶蛋白和硒代蛋氨酸。
优选的是，上述硒酵母水解物，其中，所述氨基酸态氮含量为2-3wt％，优选为2-2.6wt％；
和/或所述酸溶蛋白含量为35-45wt％，优选为38-45wt％；
和/或所述蛋白质含量为47-52wt％；
和/或所述硒代蛋氨酸质量含量为4300-4500ppm；
和/或所述干物质含量为95-97wt％。
优选的是，上述硒酵母水解物，其中，总硒的质量含量为2500-2600ppm。
另外，本发明还提供了硒酵母水解物在饲养动物中的应用，优选在饲养猪及蛋鸡动物中的应用。
另外，本发明还提供了硒酵母水解用蛋白酶组合物，包括木瓜蛋白酶，中性蛋白酶、碱性蛋白酶、和风味蛋白酶中的两种及以上，且含有中性蛋白酶或碱性蛋白酶的一种。
本发明的有益效果包括：
1.硒酵母水解物所用原料为硒酵母，已可以规模化生产，同时本发明生产方法相对来说较为简单，各种中间过程添加酶制剂等其它产品均为工业化产品，本发明的产品容易形成规模化工业化产品。
2.本发明通过动物实验验证，确定了硒酵母及硒酵母水解物在动物饲养中的优势，硒酵母的使用对动物生长有利，硒酵母水解物加快了育肥猪机体对硒的吸收速度，使机体快速利用硒源，硒酵母水解物对富硒蛋生产中硒的沉积有优势。
3.经本发明方法制备的硒酵母水解物中功能性成分含量高，本发明产品的硒元素在动物体类的吸收速率大幅增加，可用作饲料产品添加剂使用。
4.本发明产品中，酵母经处理后得到的产品经浓缩干燥可全部用于饲料原料，产率高。
下面结合具体实施方式，对本发明及其有益技术效果进行详细说明。
菌株保藏信息及获取鉴定信息
本发明所用的菌种酿酒酵母FX-2(Saccharomyces cerevisiae)于2016年8月1日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO:M2016418，保藏地址：中国.武汉.武汉大学，邮政编码：430072；电话：(027)-68754052。酿酒酵母FX-2记载在专利文献201611141122.8《酿酒酵母高密度培养方法及其pH调控方法》中。
本发明所使用的酿酒酵母FX-2来自于发酵面团，发酵面团中含有多种野生菌，以发酵面团为样品，制备面团浸出液，经过稀释涂布平板分离法分离得到纯种的菌株，经鉴定确认该菌株属于酿酒酵母。
菌株鉴定方法为:将菌株的26S rDNA的D1/D2区序列，与GenBank核酸数据库中的序列进行同源性分析，结果表明序列同源性大于99％，从而确定本发明分离得到的菌株属于酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)，生物学分类为酿酒酵母FX-2(Saccharomycescerevisiae)。
具体实施方式
如上所述，本发明的目的在于，提供了一种硒酵母水解物产品生产方法，有效提高硒元素在动物体内的吸收速率和沉积量。
术语“硒酵母”是指在含有无机硒盐的培养基中培养的任何酵母(例如酿酒酵母)。
本发明中硒酵母水解物优选的制备方法，包括以下步骤：
(1)将硒酵母乳进行2-8℃保存，添加相对于酵母干物质重量2％-6％的柠檬酸调节硒酵母乳的pH为4～5，优选调节pH为4.5-4.8。
柠檬酸用量过高，产品粗蛋白、氨氮、酸溶蛋白含量会降低，同时过量的柠檬酸的加入会增加氢氧化钠的用量，也会间接导致粗蛋白、酸溶蛋白、氨氮降低。本发明优选添加占酵母干物质重量3-4％的柠檬酸，添加的柠檬酸用量在此范围内可降低转料升温过程中微生物污染风险，并能够对产品部分功能指标有促进作用。
(2)将步骤(1)保存的硒酵母采用与85℃-95℃蒸汽进行短时间热交换的方式进行升温，升温至35-42℃，保温1-2h；升温至42-49℃保温1-2h，再升温至51.5℃-55.5℃。
本发明升温后保温1-2h可使得升温过程更加缓慢，一方面考虑到自溶罐容量问题，缓慢升温能够缓解酵母在升温过程中自身代谢产生气体，降低对加入酵母乳体积的影响，另一方面缓慢升温能够更加贴切设备生产的情况，稳定产品生产工艺。使水解物的生产过程更加可控。
(3)将步骤(2)升温后的酵母乳，维持温度51.5℃-55.5℃，保温6-12h。
(4)将步骤(3)保温后的酵母乳利用氢氧化钠调节pH 5.0-6.4，优选控制在5.6-6.2之间，升温至55℃-65℃，然后加入木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、风味蛋白酶等进行酶解反应4-14h，得到酵母水解液。
所述酶的加入量均以其占所述酵母乳中酵母干物质总重量的百分数计算，所述木瓜蛋白酶的加入量为0.13-0.3％，中性蛋白酶的加入量0.13-0.3％，碱性蛋白酶的加入量0.13-0.3％，酵母抽提物酶的加入量0.13-0.3％，风味蛋白酶的加入量0.13-0.3％。
其中，优选控制pH在5.6-6.2之间，一方面酵母内源酶发挥较好的作用，另一方面添加外源酶有较好的酶活。同时，由于pH偏低可能导致产品出现的酸味问题，因此在酶解结束后为了产品口味合适，还需进一步调节pH，将pH优选控制在5.6-6.2之间，后续可不用调节pH，进一步俭省工序，有助于保证生产的产品稳定性。
(5)将步骤(4)得到的水解液加热至68℃-85℃，保温0.5-4h。蒸发浓缩后进行喷雾干燥即得到硒酵母水解物。
蒸发浓缩工艺为常规工艺，优选进行三效或四效蒸发浓缩。浓缩后的固形物浓度控制在35-45wt％，能够提高干燥塔干燥的效率。如果经浓缩后固形物含量过高，由于物料流动性变差，输送阻力增大，反而会影响干燥效率。
喷雾干燥的温度会直接影响产品水分及产品颜色，温度控制过低，产品颜色较浅水分含量高，难以控制产品卫生指标，温度高，产品颜色深水分少，难以控制产品质量。因此保持合适的温度对生产外观和水分均满足要求的产品至关重要。按照本要求生产的产品更加满足产品生产标准。
下面通过具体实施例来说明本发明的酵母水解物，以及酵母水解物在动物饲养中的应用。
下面实施例中所用到各试剂和仪器来源如下：
表1实施例所用试剂
实施例中未注明的具体技术或条件，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。实施例中未注明的仪器和试剂均是本领域技术人员熟知的，可通过正规渠道购买得到的常规产品。
一硒酵母水解物制备
下述实施例中，加入量均为相对于加入的酵母乳中酵母干物质重量的百分数。
在实验过程中，由于仪器或者环境影响，温度、pH在一定的范围之内波动，但并不会对产品造成实质性的影响。
本发明实施例所用硒酵母乳通过酿酒酵母FX-2(Saccharomyces cerevisiae)藏编号为CCTCC NO.M2016418进行发酵培养。培养基中含有27wt％的水解糖、17wt％的氨水以及10wt％的亚硒酸钠，经分离获得硒酵母乳。
实施例1：
(1)将分离好的硒酵母乳进行3-4℃保存，添加2％的柠檬酸调节pH为4.9-5.0。
(2)将步骤(1)保存的硒酵母采用与93-95℃蒸汽进行短时间热交换的方式进行快速升温，升温至37.5-39.5℃保温1h；升温至46.5-48.5℃保温1h，再升温至51.5-53.5℃。
(3)将步骤(2)升温后的酵母乳，维持温度为51.5-53.5℃，保温6h。
(4)将步骤(3)保温6h后的酵母乳调节pH为5.6-5.7，升温至55.5-57.5℃，然后加入0.13％木瓜蛋白酶，0.13％中性蛋白酶，0.13％碱性蛋白酶进行酶解反应10h。
(5)将步骤(4)得到的水解液加热，在73-75℃保温1h，蒸发浓缩至固形物含量为40％，喷雾干燥后即得到所述的硒酵母水解物。
喷雾干燥条件为：进风温度控制在168-170℃；出风温度控制在98-100℃；雾化压力控制在135-137bar；收料温度控制在35-37℃
实施例2：
(1)将分离好的硒酵母乳进行2-3℃保存，添加3％的柠檬酸调节pH为4.7-4.8。
(2)将步骤(1)保存的硒酵母采用与90-92℃蒸汽进行短时间热交换的方式进行快速升温，升温至35.5-37.5℃，保温1.5h；升温至45.5-47.5℃保温1.5h，再升温至53.5-55.5℃。
(3)将步骤(2)升温后的酵母乳，维持温度53.5-55.5℃，保温10h。
(4)将步骤(3)自溶后的酵母乳调节pH为6.1-6.2，升温至57.5-59.5℃，然后加入0.3％木瓜蛋白酶、0.3％碱性蛋白酶和0.3％风味蛋白酶进行酶解反应6h。
(5)将步骤(5)得到的水解液加热70-72℃，保温2h，蒸发浓缩到固形物含量为37％，喷雾干燥后即得到所述的硒酵母水解物。
喷雾干燥条件为：进风温度控制在166-168℃；出风温度控制在96-98℃；雾化压力控制在133-135bar；收料温度控制在33-35℃
实施例3：
(1)将分离好的硒酵母乳进行5-6℃保存，添加4％的柠檬酸调节pH为4.5-4.6。
(2)将步骤(1)保存的硒酵母采用90-92℃蒸汽进行短时间热交换的方式进行快速升温，升温至36.5-38.5℃，保温1.5h；升温至46-48℃保温1.5h，再升温至51.5-53.5℃。
(3)将步骤(2)升温后的酵母乳，维持温度51.5-53.5℃12h。
(4)将步骤(3)自溶后的酵母乳调节pH 5.8-5.9，升温至63.5-65.5℃，然后加入0.25％木瓜蛋白酶、0.2％中性蛋白酶和0.13％风味蛋白酶酶进行酶解反应8h。
(5)将步骤(4)得到的水解液加热72-74℃，保温2h，蒸发浓缩到固形物含量为36％，喷雾干燥后即得到所述的硒酵母水解物。
喷雾干燥条件为：进风温度控制在166-168℃；出风温度控制在96-98℃；雾化压力控制在133-135bar；收料温度控制在35-37℃
实施例4：
(1)将分离好的硒酵母乳进行3-4℃保存，添加4％的柠檬酸调节pH为4.5-4.6。
(2)将步骤(1)保存的硒酵母采用93-95℃蒸汽进行短时间热交换的方式进行快速升温，升温至41.5-43.5℃，保温2h；升温至46.5-48.5℃保温2h，再升温至53.5-55℃。
(3)将步骤(2)升温后的酵母乳，维持温度53.5-55℃10h。
(4)将步骤(3)自溶后的酵母乳调节pH 6.2-6.3，升温至59.5-61.5℃，然后加入0.3％木瓜蛋白和0.2％碱性蛋白酶进行酶解反应14h。
(5)将步骤(4)得到的水解液加热至73-75℃，保温4h，蒸发浓缩到固形物含量为35％，喷雾干燥后即得到所述的硒酵母水解物。
喷雾干燥条件为：进风温度控制在166-168℃；出风温度控制在96-98℃；雾化压力控制在133-135bar；收料温度控制在33-35℃
实施例5：
(1)将分离好的硒酵母乳进行5-6℃保存，添加3.5％的柠檬酸调节pH为4.6-4.7。
(2)将步骤(1)保存的硒酵母采用90-95℃蒸汽进行短时间热交换的方式进行快速升温，升温至35.5-37.5℃，保温1h；升温至43.5-45.5℃保温1h，再升温至51.5-53.5℃。
(3)将步骤(2)升温后的酵母乳，维持温度51.5-53.5℃8h。
(4)将步骤(3)自溶后的酵母乳调节pH 5.6-5.7，升温至58-60℃，然后加入木瓜蛋白酶0.25％，中性蛋白酶和碱性蛋白酶分别添加0.3％，风味蛋白酶0.25％。进行酶解反应9h。
(5)将步骤(4)得到的水解液加热73-75℃，保温1h，蒸发浓缩到固形物含量为40％，喷雾干燥后即得到硒酵母水解物。
喷雾干燥的条件为：进风温度控制在178-180℃；出风温度控制在108-110℃；雾化压力控制在100-102bar；收料温度控制在30-32℃。
实施例6：
(1)将分离好的硒酵母乳进行5-6℃保存，添加6％的柠檬酸调节pH为4.3-4.4。
(2)将步骤(1)保存的硒酵母采用93-95℃蒸汽进行短时间热交换的方式进行快速升温，升温至35-36.5℃，保温1h；升温43.5-45.5℃保温1h，再升温至51.5-53.5℃。
(3)将步骤(2)升温后的酵母乳，维持温度51.5-53.5℃8h。
(4)将步骤(3)自溶后的酵母乳调节pH 5.6-5.7，升温至58-60℃，然后加入木瓜蛋白酶0.25％，中性蛋白酶和碱性蛋白酶分别添加0.3％，风味蛋白酶0.25％。进行酶解反应9h。
(5)将步骤(4)得到的水解液加热70-72℃，保温1h，蒸发浓缩到固形物含量为40％，喷雾干燥后即得到硒酵母水解物。
喷雾干燥的条件为：进风温度控制在178-180℃；出风温度控制在108-110℃；雾化压力控制在100-102bar；收料温度控制在30-32℃。
对比例1
将分离好的硒酵母乳进行2-3℃保存，采用93-95℃蒸汽进行热交换的方式，将硒酵母乳加热到51.5-53.5℃，保温6h，再加热至56-58℃，保温7h，蒸发浓缩到固形物含量为35％，经喷雾干燥得到酵母水解物。
喷雾干燥条件为：进风温度控制在178-180℃；出风温度控制在108-110℃；雾化压力控制在98-100bar；收料温度控制在30-32℃。
对比例2
按照CN105559091A中公开的方法制备酵母水解物。
将分离好的硒酵母乳进行2-6℃保存，在硒酵母乳原料中添加干物质0.7％的乙酸乙酯，加入氢氧化钠调节pH至5.2-5.3,利用93-95℃蒸汽进行热交换的方式，将硒酵母乳1h内升温至33℃，再在1h内升温至41℃，再在1h内升温至47.5℃，加入氢氧化钠调节pH至5.3-5.4,1h内升温至51.5℃，调节pH值在5.4-5.5，保持温度51.5-53.5℃，持续2h；
加占原料硒酵母乳干物质重量1‰的木瓜蛋白酶，持续2h；再加入占原料硒酵母乳干物质重量1‰的葡聚糖酶，持续1h；然后升温至55℃，再加入所述原料硒酵母乳干物质重量1‰的风味蛋白酶，在55-57℃保温6h；
调节pH值为5.7-5.8，升温，在75-77℃保温30min，灭酶，蒸发浓缩到固形物含量为40％，经喷雾干燥得到酵母水解物。喷雾干燥条件为：进风温度控制在183-185℃；出风温度控制在98-100℃；雾化压力控制在135-137bar；收料温度控制在35-37℃。
对比例3
与实施例1的区别在于，步骤(4)的具体操作为：将步骤(3)自溶后的酵母乳调节pH为6.1-6.2，升温至57.5-59.5℃，然后加入0.12％木瓜蛋白酶和0.12％风味蛋白酶进行酶解反应6h。
将实施例1～6和对比例1-3中得到的酵母水解物进行分析检测。
其中，粗蛋白：GB/T6432-94饲料中粗蛋白测定方法(7.2推荐法)；氨氮(即氨基酸态氮)采用甲醛滴定法；酸溶蛋白采用GB/T 22492-2008大豆肽粉(包含酸溶蛋白)测定；水分：GB/T 6435-2006饲料中水分和其他挥发性物质含量的测定；总硒：GB/T 13883-2008饲料中硒的测定；硒代蛋氨酸：将样品用复合酶水解释放出硒代蛋氨酸后，通过气相色谱-质谱联用检测；溶解率：使样品溶解于水，通过离心收集沉淀，计算出溶出物质重量占总重的比例。得到的理化指标如表2中所示。
由表2所示，在硒酵母水解物中，得到的产品氨氮的范围值为2-2.6wt％，酸溶蛋白含量为38wt％-45wt％，同时硒代蛋氨酸和总硒含量的损失控制在5wt％以内。对比例1未经酶解过程，因此酸溶蛋白含量不到9wt％，氨氮含量仅1.35wt％，其功能性成分很低；应用对比例2中的水解工艺，其酸溶蛋白含量只有32.05wt％，氨氮含量1.85wt％，因此与本发明水解工艺相比，对比例2中的水解工艺难以赋予酵母水解物更多功能性成分。
表2硒酵母水解物的主要理化指标
二 动物实验
在进行动物实验中，本发明实验生产所得的产品统称为水解硒，而对比例得到的产品统称为粉体硒。为进一步加强对本发明方法得到的产品功能效果进行验证，分别添加了粉体硒和硒酵母水解得到的水解硒进行畜禽实验，来证明本产品在应用中的优势。利用对比例1得到的粉体硒和实施例5中的水解硒进行动物试验。
应用例1：硒酵母水解物育肥猪动物实验
从猪的生长性能和器官中的硒的沉积来判断粉体硒和水解硒的应用效果。
选取60.34±1.64kg育肥猪64头。按体重相近，公母各半的原则分为3个处理组，即对照组、粉体硒组和水解硒组，每个处理2个重复，每个重复2栏猪，每栏4头猪,试验日粮在当阳正天饲料公司配制，在不含硒产品的日粮中，对照组额外添加0.3ppm硒含量的亚硒酸钠，水解硒组额外添加0.3ppm硒含量的实施例5中的水解硒，粉体硒组额外添加0.3ppm硒含量的对比例1制备的粉体硒。
记录每天的喂食量；猪的健康状况。试验前和结束时，先禁食12h(自由饮水)后称重，记录重量并计算试验猪的平均日采食量(ADFI)、平均日增重(ADG)、平均重量以及料重比(F/G)；每个重复选择一头阉公猪，共12头，将试验猪绑定，从前腔静脉采血，于37℃水浴中静置，于3000rpm下离心10分钟，分离血清，用于检测血清中的硒含量。采样猪做好栏号标记，运送至屠宰场屠宰，取肝脏小叶中部约40g和左侧胴体第11和12肋骨间里脊肉约40g，做好标号，置于-20℃冰箱中保存用于分析肌肉中的硒含量。
表3育肥猪生长性能
| 初始重(kg) | 末重(kg) | ADG(kg/d) | ADFI(kg/d) | F/G | |
| 对照组 | 60.74±6.76 | 87.95±1.98 | 1.00±0.02 | 2.93±0.12b | 2.94±0.16 |
| 粉体硒组 | 60.72±5.04 | 89.58±2.01 | 1.03±0.04 | 2.69±0.09ab | 2.61±0.15 |
| 水解硒组 | 60.64±5.77 | 88.89±0.77 | 1.01±0.09 | 2.70±0.15ab | 2.70±0.27 |
表4育肥猪主要器官硒数据
| 血清硒(mg/kg) | 肝脏硒(mg/kg) | 肌肉硒(mg/kg) | |
| 对照组 | 0.21<sup>a</sup> | 0.53<sup>a</sup> | 0.16<sup>a</sup> |
| 粉体硒组 | 0.33<sup>b</sup> | 0.73<sup>b</sup> | 0.30<sup>b</sup> |
| 水解硒组 | 0.44<sup>b</sup> | 0.74<sup>b</sup> | 0.30<sup>b</sup> |
其中，表4中a，b的含义为：.相同的字母表示差异不显著，不同字母表示显著性差异。
如表3、表4所示，水解硒组与对照组相比具有提高育肥猪生长速度，降低料肉比的趋势。水解硒和粉体硒对猪的生长性能和器官沉积(肝脏和肌肉)无显著性差异，但在血清中水解硒组有较大的增长率。本工艺生产的水解硒加速了动物机体对硒元素的吸收速率，在动物应激等方面有更好的应用。
应用例2：硒酵母水解物蛋鸡动物实验
从鸡蛋的总重和鸡蛋中硒的沉积量来判断粉体硒和水解硒的应用效果。
试验选用17周龄海兰褐壳蛋鸡350羽，每个处理分6个重复，每个重复8只产蛋鸡，分4个饲养阶段：17～21周预饲、试验期I 22～25周、26周预饲、试验期II 27～30周；以产蛋高峰料作为无硒基础日粮，该饲料为不含硒的常规蛋鸡饲料。在无硒基础日粮中，对照组添加亚硒酸钠，水解硒组添加实施例5中的水解硒，粉体硒组添加对比例1制备的粉体硒，最终三组日粮中硒含量分别为0.3ppm。
三组日粮饲喂后得到的鸡蛋中硒的沉积量和鸡蛋净重如表5所示。
表5鸡蛋实验主要数据
| 组别 | 硒mg/kg | 鸡蛋净重/g |
| 对照组 | 0.24<sup>a</sup> | 31.99<sup>a</sup> |
| 粉体硒组 | 0.29<sup>b</sup> | 34.34<sup>b</sup> |
| 水解硒组 | 0.38<sup>c</sup> | 35.39<sup>b</sup> |
由表5所示，水解硒和粉体硒对鸡蛋的净重无显著性差异，但与对照组存在显著性差异。在鸡蛋的总硒沉积中，水解硒、粉体硒和对照组均有显著性差异，水解硒沉积效果最好。本工艺生产的水解硒加速了蛋鸡对硒元素的吸收，在增加蛋重的同时也增加了鸡蛋中硒的沉积，在富硒蛋等方面有更好的应用。
虽然上文中已经用一般性说明及具有实施案例方案对本发明做了详尽的描述，但在本发明的基础上，可以对之做一些修改或改进，这对本领域的技术人员来说显而易见，因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进及其工业化生产均属于本发明要求保护的范围。
Claims (15)
1.硒酵母水解物，含有蛋白质、氨基酸态氮、酸溶蛋白和硒代蛋氨酸，其特征在于，所述氨基酸态氮含量为2-3wt％，酸溶蛋白含量为35-45wt％。
2.根据权利要求1所述的硒酵母水解物，其中，所述酸溶蛋白含量为38-45wt％。
3.根据权利要求1或2所述的硒酵母水解物，其中，硒代蛋氨酸质量含量为4300-4500ppm。
4.权利要求1-3任一项所述硒酵母水解物的制备方法，通过将硒酵母乳进行自溶处理、酶解处理得到酵母水解产物，其特征在于，所述自溶处理包括向硒酵母乳中添加柠檬酸作为辅助剂，所述酶解处理中加入的酶包括木瓜蛋白酶，中性蛋白酶、碱性蛋白酶、和风味蛋白酶中的两种及以上，且含有中性蛋白酶或碱性蛋白酶的一种。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其中，所述木瓜蛋白酶，中性蛋白酶、碱性蛋白酶和风味蛋白酶的重量分别相对于酵母干物质重量的比值为0.13-0.3％，优选比值分别为木瓜蛋白酶0.13-0.25％，中性蛋白酶0.2-0.3％，碱性蛋白酶0.2-0.3％，风味蛋白酶0.13-0.25％。
6.根据权利4或5所述的制备方法，其中，所述自溶处理包括向硒酵母乳中添加相对于酵母干物质重量的2-6％的柠檬酸作为辅助剂，优选添加3-4％的柠檬酸作为辅助剂。
7.根据权利要求4-6任一项所述的制备方法，其中，所述的自溶处理包括以下步骤:
步骤(1)向所述硒酵母乳中加入柠檬酸调节pH为4-5，优选调节pH为4.5-4.8；
步骤(2)将步骤(1)调节pH后的硒酵母乳升温至35-42℃，保温，优选保温1-2h；升温至42-49℃，保温，优选保温1-2h，再升温至51.5℃-55.5℃；
和步骤(3)维持酵母乳温度51.5℃-55.5℃，保温，优选保温6-12h。
8.根据权利要求4-7任一项所述的制备方法，其中，所述酶解处理包括以下步骤：
步骤(1)调节自溶处理后的溶液pH为5-6.4，温度55-65℃，优选pH为5.6-6.0，温度55～60℃；
步骤(2)加入酶进行酶解反应，优选酶解反应维持4-14h，更优选维持6-10h；
和步骤(3)酶解反应结束后，将酵母水解液加热至68℃-85℃，保温0.5-4h，优选加热至70℃-75℃。
9.根据权利要求4-8任一项所述的制备方法，其中，还包括将酵母酶解后进行蒸发浓缩得到浓缩品，优选浓缩品中的固形物含量在35-45wt％。
10.权利要求9所述的制备方法，其中，还包括将所述浓缩品进行喷雾干燥，喷雾干燥的进风温度控制在160-180℃，优选为165-168℃；出风温度控制在95-110℃优选为96-98℃；雾化压力控制在100-160bar，优选为120-135bar；收料温度控制在30-40℃，优选为35-37℃。
11.权利要求4-10任一项所述的方法制备的硒酵母水解物，含有干物质、蛋白质、氨基酸态氮、酸溶蛋白和硒代蛋氨酸。
12.根据权利要求11所述的硒酵母水解物，其中，所述氨基酸态氮含量为2-3wt％，优选为2-2.6wt％；
和/或所述酸溶蛋白含量为35-45wt％，优选为38-45wt％；
和/或所述蛋白质含量为47-52wt％；
和/或所述硒代蛋氨酸质量含量为4300-4500ppm；
和/或所述干物质含量为95-97wt％。
13.根据权利要求11或12所述的硒酵母水解物，其中，总硒的质量含量为2500-2600ppm。
14.权利要求1-3或11-13任一项所述的硒酵母水解物在饲养动物中的应用，优选在饲养猪及蛋鸡动物中的应用。
15.硒酵母水解用蛋白酶组合物，其特征在于，包括木瓜蛋白酶，中性蛋白酶、碱性蛋白酶、和风味蛋白酶中的两种及以上，且含有中性蛋白酶或碱性蛋白酶的一种。
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