CN107400174A - 一种小球藻多糖的制备方法 - Google Patents

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    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
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    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/0003—General processes for their isolation or fractionation, e.g. purification or extraction from biomass

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Abstract

本发明公开一种小球藻多糖的制备方法，属于多糖提取技术领域，多糖的提取方法：包括细胞破壁，浓缩醇析，复溶除蛋白，冷冻干燥，细胞破壁步骤为：取小球藻粉制成藻液，超声波破碎，加入活性多肽水浴，离心，除藻体，本发明通过超声波和活性多肽显著提高小球藻细胞壁破碎率，提高小球藻多糖的得率和纯度，不会对小球藻造成营养损失的不良影响，提取的小球藻多糖可用于促进免疫力、抗肿瘤的保健品中。

Description

一种小球藻多糖的制备方法
技术领域
本发明属于多糖提取技术领域，具体涉及一种小球藻多糖的制备方法。
背景技术
小球藻(Chlorella pyrenoidosa FACHBS)是一类普生性单细胞藻类。小球藻具有生态分布广、可快速生长和繁殖、易于培养等优点，是地球上动植物中唯一能在20 h增长4倍的生物，具有很高的应用价值。目前小球藻已经广泛地应用在动物饲料、食品添加剂、医药制剂、美容产品等方而,小球藻及其热水抽提物具有促进免疫、抗肿瘤的作用，已有大量试验证明，小球藻的活性成分中，多糖具有促进机体免疫、抗肿瘤等功能，小球藻多糖的提取一般采用热水抽提法，但热水提取多糖时，易引起多糖降解，从而影响多糖的生物活性，而且多糖的得率还具有一定的提升空间。
现有技术，如中国发明授权专利文献，授权公告号CN 103880971 B，一种从小球藻非水溶性部分中提取多糖的方法，包括原料的处理、酶法提取、分离、浓缩、醇沉、干燥等工艺。该发明原料来源丰富、廉价，可来源于小球藻产油后的残渣，而且方法工艺简单、生产成本低廉，是一种有效提升小球藻高附加值和综合利用率的方法，但是该方法在小球藻多糖的得率上还具有一定的提升空间。
发明内容
本发明的目的在于提供一种小球藻多糖的制备方法，通过超声波和活性多肽显著提高小球藻细胞壁破碎率，提高小球藻多糖的得率和纯度，不会对小球藻造成营养损失的不良影响，提取的小球藻多糖可用于促进免疫力、抗肿瘤的保健品中。
本发明为实现上述目的所采取的方案为：一种小球藻多糖的制备方法，包括细胞破壁，浓缩醇析，复溶除蛋白，冷冻干燥，细胞破壁步骤为：取小球藻粉制成藻液，超声波破碎，加入活性多肽水浴，离心，除藻体。通过在小球藻多糖提取之前进行细胞壁破碎处理，利用超声波、活性多肽和水浴使细胞壁破裂较为彻底，促进胞内物质溶出，不破坏其中有效成分，显著提升了小球藻多糖的得率。
作为优选，细胞破壁步骤中藻液中的藻粉与水的固液比为1:70-80，超声波破碎功率为800w-1000w，时间为8-16min。超声波辅助破壁，利用超声波产生的空化作用、机械作用加速细胞壁的破壁，促进胞内物质溶出。
作为优选，细胞破壁步骤中加入藻液重量0.02%-0.04%的活性多肽，所述活性多肽的氨基酸序列为QSGFCTSYYCSKFCGTAGSLYGNLTGICLHCSS。该活性多肽具有亲水性和亲脂性，亲水性使其溶于水中，亲脂性使其与小球藻细胞膜结合，使细胞膜下形成小孔，致使细胞内的物质泄漏，有利于小球藻多糖得率，利用活性肽结合水浴法进行细胞破碎，大大缩短了提取时间，提取效果好，还有效避免了破碎处理过程中需因升温及机械力引起的蛋白质变性。
作为优选，细胞破壁步骤中水浴温度为95℃~100℃，时间为3-5h。
作为优选，浓缩醇析步骤为，将藻液浓缩至原体积的1/4-1/3，加入85%~94%的乙醇溶液，乙醇与浓缩液的体积比例为3-4：1，乙醇溶液在0.1T-0.2T磁场中静置2-4h，经过磁化的乙醇溶液有利于提高醇析的效果。
作为优选，除蛋白步骤采用三氯乙酸法除蛋白，采用三氯乙酸法除蛋白，三氯乙酸是一种有机酸，可以使多糖中的蛋白质变性沉淀，该方法操作简单、结果稳定、反应温和，在除蛋白时能很好保证多糖的活性，除蛋白简单有效。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：本发明通过在小球藻多糖提取之前进行细胞壁破碎处理，利用活性多肽和反复冻融的方法使细胞壁破裂较为彻底，活性多肽使细胞膜下形成小孔，致使细胞内的物质泄漏，有利于小球藻多糖得率，多糖的提取率在6.12%以上，纯度可达80%，且提取的小球藻多糖具有优异的促进机体免疫力、抗肿瘤效果可在保健品中使用，本发明的小球藻多糖的提取工艺简单，可操作性强，生产成本低。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明的技术方案作进一步详细描述：
实施例1：
一种小球藻多糖的制备方法，具体步骤如下：
1）取小球藻粉制成藻液，小球藻粉与水的固液比为1:74，超声波破碎，功率为900w，时间为10min，加入藻液重量0.02%的活性多肽，活性多肽的氨基酸序列为QSGFCTSYYCSKFCGTAGSLYGNLTGICLHCSS，在98℃下水浴3h，6500r/min离心6min，除藻体；
2）将藻液放入真空浓缩罐中真空浓缩至原体积的1/4，加入90%的乙醇溶液，乙醇与浓缩液的体积比例为3：1，乙醇溶液在0.1T磁场中静置4h；
3）复溶，在溶液中加入20%的三氯乙酸调pH值至3.4，静置过夜，7500r/min离心12min，取上清液；
4）真空浓缩至原液体积的1/5，在-30℃条件下冷冻干燥，得小球藻多糖。
实施例2：
一种小球藻多糖的制备方法，优选步骤如下：
1）取小球藻粉制成藻液，小球藻粉与水的固液比为1:70，超声波破碎，功率为1000w，时间为12min，加入藻液重量0.03%的活性多肽，活性多肽的氨基酸序列为QSGFCTSYYCSKFCGTAGSLYGNLTGICLHCSS，在100℃下水浴4h，8000r/min离心min，除藻体；
2）将藻液放入真空浓缩罐中真空浓缩至原体积的1/3，加入92%的乙醇溶液，乙醇与浓缩液的体积比例为4：1，乙醇溶液在0.2T磁场中静置3h；
3）复溶，在溶液中加入20%的三氯乙酸调pH值至4，静置过夜，7000r/min离心12min，取上清液；
4）真空浓缩至原液体积的1/5，在-34℃条件下冷冻干燥，得小球藻多糖。
实施例3：
一种小球藻多糖的制备方法，具体步骤如下：
1）取小球藻粉制成藻液，小球藻粉与水的固液比为1:75，超声波破碎，功率为800w，时间为10min，加入藻液重量0.02%的活性多肽，活性多肽的氨基酸序列为QSGFCTSYYCSKFCGTAGSLYGNLTGICLHCSS，在100℃下水浴3.5h，6800r/min离心7 min，除藻体；
2）将藻液放入真空浓缩罐中真空浓缩至原体积的1/3，加入94%的乙醇溶液，乙醇与浓缩液的体积比例为3：1，乙醇溶液在0.1T磁场中静置3h；
3）复溶，在溶液中加入20%的三氯乙酸调pH值至4.2，静置过夜，8000r/min离心10min，取上清液；
4）真空浓缩至原液体积的1/4，在-38℃条件下冷冻干燥，得小球藻多糖。
本发明的操作步骤中的常规操作为本领域技术人员所熟知，在此不进行赘述。
以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明，应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等，均应包含在本发明的保护范围之内。
SEQUENCE LISTING
<110> 浦江县酉泽水产科技有限公司
<120> 一种小球藻多糖的制备方法
<130> 1
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 33
<212> PRT
<213> 人工合成
<400> 1
Gln Ser Gly Phe Cys Thr Ser Tyr Tyr Cys Ser Lys Phe Cys Gly Thr
1 5 10 15
Ala Gly Ser Leu Tyr Gly Asn Leu Thr Gly Ile Cys Leu His Cys Ser
20 25 30
Ser

Claims (6)

1.一种小球藻多糖的制备方法，包括细胞破壁，浓缩醇析，复溶除蛋白，冷冻干燥，其特征在于：所述细胞破壁步骤为：取小球藻粉制成藻液，超声波破碎，加入活性多肽水浴，离心，除藻体。
2.根据权利要求1所述的一种小球藻多糖的制备方法，其特征在于：所述细胞破壁步骤中藻液中的藻粉与水的固液比为1:70-80，超声波破碎功率为800w-1000w，时间为8-16min。
3.根据权利要求1所述的一种小球藻多肽的制备方法，其特征在于：所述细胞破壁步骤中加入藻液重量0.02%-0.04%的活性多肽，所述活性多肽的氨基酸序列为QSGFCTSYYCSKFCGTAGSLYGNLTGICLHCSS。
4.根据权利要求1所述的一种小球藻多糖的制备方法，其特征在于：所述细胞破壁步骤中水浴温度为95℃~100℃，时间为3-5h。
5.根据权利要求1所述的一种小球藻多糖的制备方法，其特征在于：所述浓缩醇析步骤为，将藻液浓缩至原体积的1/4-1/3，加入85%~94%的乙醇溶液，乙醇与浓缩液的体积比例为3-4：1，所述乙醇溶液在0.1T-0.2T磁场中静置2-4h。
6.根据权利要求1所述的一种小球藻多糖的制备方法，其特征在于：所述除蛋白步骤采用三氯乙酸法除蛋白。
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