CN107548461A - 用于执行自身免疫性疾病和感染性疾病的诊断性测定的自动化的免疫分析仪系统 - Google Patents
用于执行自身免疫性疾病和感染性疾病的诊断性测定的自动化的免疫分析仪系统 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107548461A CN107548461A CN201580078733.XA CN201580078733A CN107548461A CN 107548461 A CN107548461 A CN 107548461A CN 201580078733 A CN201580078733 A CN 201580078733A CN 107548461 A CN107548461 A CN 107548461A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- complex
- capture agent
- incubated
- factor
- immune
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/564—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for pre-existing immune complex or autoimmune disease, i.e. systemic lupus erythematosus, rheumatoid arthritis, multiple sclerosis, rheumatoid factors or complement components C1-C9
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54353—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals with ligand attached to the carrier via a chemical coupling agent
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
Abstract
一种用于诊断自身免疫疾病或感染性疾病的量化方法,所述方法包括执行自动诊断性测定,包括:将捕获试剂与链霉亲和素包被的介质一起孵育以形成固相复合物,其中所述捕获试剂是生物素化的自身抗原或感染性疾病抗原;洗涤所述固相复合物以去除过量的捕获试剂;将所述固相复合物与血清样品一起孵育以形成免疫复合物;洗涤所述免疫复合物以去除任何未结合样品;将所述免疫复合物与偶联物一起孵育以产生免疫‑偶联复合物;洗涤所述免疫‑偶联复合物以去除任何未结合偶联物;引入能够生成可量化反应的底物;以及校准由引入所述底物生成的反应。
Description
技术领域
本教导内容涉及用于执行诊断性测定的系统和方法,并且更具体地涉及用于执行感染性疾病和自身免疫性疾病的诊断性测定的自动化的免疫分析仪系统和方法。
发明内容
根据本申请的某些方面,提供了用于执行自身免疫性疾病或感染性疾病的自动化的诊断性测定的量化方法并且所述量化方法包括以下步骤:将捕获试剂与链霉亲和素包被的介质一起孵育以形成固相复合物,其中捕获试剂是生物素化的自身抗原或感染性疾病抗原;洗涤固相复合物以去除过量的捕获试剂;将固相复合物与血清样品一起孵育以形成免疫复合物;洗涤免疫复合物以去除任何未结合样品;将免疫复合物与偶联物一起孵育以产生免疫-偶联复合物;洗涤免疫-偶联复合物以去除任何未结合偶联物;引入能够生成可量化应答的底物;以及校准由底物生成的应答。
根据本申请的又其他方面,提供了用于将荧光标记结合到患者样品内的颗粒的受控方法。根据本公开的这个方面,所述方法包括将荧光标记结合到颗粒,以及量化在一系列洗涤步骤之后保留的颗粒以便归一化来自患者样品的荧光信号。根据这个例示性方法,荧光标记与结合的分析物分子的数量成正比地结合到颗粒。
根据本公开的还其他方面,提供了设计来在自动化的平台上使用的用于评估血清样品中的自身免疫特异性免疫球蛋白的量化方法。根据这个方法,将生物素化的捕获试剂与链霉亲和素包被的固相一起孵育以通过利用生物素-链霉亲和素相互作用来引起(illicit)捕获试剂与固相的粘附。然后洗涤捕获-试剂固相复合物以去除过量的生物素化的捕获试剂。然后将血清样品与捕获试剂固相复合物一起孵育以引起血清中存在的自身抗原特异性免疫球蛋白(IgG、IgM或IgA)与存在的捕获试剂的结合并且产生免疫复合物。然后洗涤免疫复合物以去除未结合的免疫球蛋白并且然后将免疫复合物与标记的抗免疫球蛋白偶联物一起孵育以引起偶联物与免疫复合物的自身抗原特异性免疫球蛋白组分的结合并且产生免疫-偶联复合物。洗涤免疫-偶联复合物以去除未结合的标记的抗免疫球蛋白并且然后引入能够生成可量化应答的底物。校准由加入底物生成的可量化的应答并且针对珠保持(bead retention)调节报告值。
根据本公开的还其他方面,提供了设计来在自动化的平台上使用的用于评估血清样品中的感染性因子特异性免疫球蛋白的量化方法。根据这个方法,将生物素化的捕获试剂与链霉亲和素包被的固相一起孵育以通过利用生物素-链霉亲和素相互作用来引起捕获试剂与固相的粘附。然后洗涤捕获-试剂固相复合物以去除过量的生物素化的捕获试剂。然后将血清样品与捕获-试剂固相复合物一起孵育以引起血清中存在的感染性因子特异性免疫球蛋白(IgG、IgM或IgA)与存在的捕获试剂的结合并且产生免疫复合物。然后洗涤免疫复合物以去除未结合的免疫球蛋白并且然后将免疫复合物与标记的抗免疫球蛋白偶联物一起孵育以引起偶联物与免疫复合物的自身抗原特异性免疫球蛋白组分的结合并且产生免疫-偶联复合物。洗涤免疫-偶联复合物以去除未结合的标记的抗免疫球蛋白并且然后引入能够生成可量化应答的底物。校准由加入底物生成的可量化的应答并且针对珠保持调节报告值。
根据本文的某些方面,生物素化的捕获试剂是生物素化的自身抗原或生物素化的感染性因子。
根据本文的某些方面,生物素化的捕获试剂来源于经纯化的蛋白、酶或抗体的生物素化。
根据本文的其他方面,生物素化的捕获试剂来源于包括多种抗原的感染性因子提取物的生物素化。
根据本公开的具体例示性方面,生物素化的捕获试剂以包括经纯化蛋白、酶、抗体和提取物的不同来源的多种生物素化的捕获试剂的掺混物形式存在。
根据本公开的又另一个具体例示性方面,链霉亲和素包被的固相是通用的荧光标记的磁性微粒。
根据本公开的某些方面,一个或更多个洗涤步骤包括通过在反应试杯的限定区域内磁性隔离复合物来洗涤固相复合物。
根据本公开的又其他例示性方面,将捕获试剂-固相复合物与血清样品一起孵育的步骤包括通过包括高浓度的人血清白蛋白(HSA)的反应稀释液孵育悬浮保持的捕获试剂-固相复合物。
根据本公开的还另一个例示性方面,将免疫复合物与标记的抗免疫球蛋白偶联物一起孵育的步骤包括通过包括标示浓度的聚乙二醇的偶联物稀释液孵育悬浮保持的免疫复合物。
根据本公开的某些具体方面,在洗涤免疫复合物以去除未结合的免疫球蛋白时可使用与抗免疫球蛋白抗体偶联的辣根过氧化物酶(HRP)作为间接标记,具体地是因为PS-Atto与HRP标记的偶联物的反应生成持久的高强度发光用于溶液测定中的最大检测灵敏度。
根据本公开的还其他具体方面,将底物加入免疫-偶联复合物中包括添加LumigenPS-Atto作为能够生成可量化应答的底物,可量化应答以通过HRP-PS-Atto报告系统生成并通过光学盒内的光度计检测的化学发光信号的形式存在。
根据本教导内容的某些方面,针对珠保持调节可量化应答的步骤包括以下步骤:将底物和免疫-偶联复合物转移到光学盒,在其中量化荧光信号和化学发光信号;采用初始与最终荧光的比率以针对珠保持调节量化的化学发光信号;以及校准所调节的化学发光信号以计算报道值。为了将底物和免疫-偶联复合物转移到光学盒,可使用具有抽吸样品的可重复使用的移液管端的自动化的移液管臂。在光学盒内,测量荧光以确定珠保持,并且测量发光以检测由化学作用所生成的RLU信号。将测量值代入算法中以生成“经珠保持调节的RLU”,使其与校准曲线RLU比较,然后分配免疫球蛋白浓度。
本发明的另外其他目的和益处将从以下书面描述和附图中显得明显。
附图说明
通过参照本公开的实施方案的以下描述连同附图,本公开的上述方面和得到它们的方式将会更明显并且本公开自身将被更好地理解,其中:
图1为根据本申请的执行自动化的诊断性测定的方法的示意图;以及
图2为根据本申请的教导内容的自动化的免疫化学分析仪和试剂系统的顶视图。
在几个视图中对应的参考符号始终指示相对应的部件。虽然本文中所述的示例以多种形式说明本公开的实施方案,但以下公开的实施方案并不旨在穷尽或被视为将本公开范围限制为所公开的确切形式。
具体实施方式
本文公开了用于执行感染性疾病和自身免疫性疾病的诊断性测定的自动化的免疫分析仪设备、试剂系统以及方法。
在详细描述本公开的例示性自动化的免疫分析仪系统和方法前,在本文中应理解并认识到,作为一种最小化来自过量或未结合材料的背景信号的方式,免疫测定通常需要在反应试杯中进行一次或多次相分离。为了利于分离或洗涤过程,可使用多种技术,包括但不限于孔包被技术、珠包被技术或使用顺磁性粒子。利用将结合患者血液样品中所关注的分析物分子的捕获试剂包被这些分离介质中的每一种。根据本教导内容的某些方面,生物素化的捕获试剂可以作为掺混物或混合物存在(即,来自类似种类但来自不同属种的捕获试剂)。本领域技术人员在本文中应理解并认识到,可得到多种捕获试剂并可根据本教导内容使用。在本文中应理解,根据本教导内容使用的单独捕获试剂中的每一种的量和体积取决于它们的效力(即,它们产生可检测应答的能力)。
当将顺磁性粒子用作分离介质时,在洗涤过程期间将顺磁性粒子通过磁体拉向试杯壁,然后抽吸所有液体。本领域技术人员在本文中应理解并认识到,在常规洗涤过程期间,一些顺磁性粒子可连同液体一起被抽吸并因此对于进一步化学处理会损失。如果免疫测定步骤涉及多个洗涤步骤,则磁性粒子的损失变得甚至更加明显。
本教导内容的一个目的是考虑在这些洗涤过程期间在免疫化学分析仪上发生的顺磁性粒子的损失。为此,根据本教导内容的某些方面,使患者血液样品中所关注的分析物结合捕获试剂,所述捕获试剂已继而结合顺磁性粒子的表面。发光标记然后结合这些分析物分子。当将发光试剂或底物加入试杯中时,其与发光标记反应以产生可由分析仪的光学检测器检测到的光。此外,如果顺磁性粒子连接荧光标记,则以荧光的方式读取试杯内的内容物将提供一种确定在洗涤步骤期间损失的粒子的分率的手段。
根据本公开的某些方面,自动化的分析仪利用用于测定的常见顺磁性粒子,包括但不限于磁珠或微粒。对于在分析仪上的每次测定,孵育捕获试剂并使其结合到反应试杯中的通用粒子以产生测定特异性、基于粒子的试剂,在文中有时被称为捕获-试剂固相复合物。根据本公开的某些方面,可用于执行诊断免疫测定的捕获试剂由生物素抗原、10mM磷酸钠、pH 7.4,0.9%NaCl、0.05%吐温-20、l%(w/v)人血清白蛋白、1%(v/v)ProClin 950、最高5%(v/v)甘油组成。根据本公开的还其他方面,可用于执行诊断免疫测定的另一种捕获试剂由生物素抗原、10mM磷酸钠、pH 7.4,0.9%(w/v)NaCl、0.05%吐温-20、l%(w/v)牛血清白蛋白、1%(v/v)ProClin 950、1%蛋白酶抑制剂混合物、0.1mM DTT、25%(最高30%)(v/v)甘油组成。
在经历洗涤过程后,向试杯中的粒子中加入患者样品以及任选地稀释液(根据需要)并进行孵育。这导致患者血液样品中特定分析物分子的捕获。根据本公开的一个具体例示性方面,反应稀释液(样品稀释液)由10mM磷酸钠、pH 7.4,500mM NaCl、0.02%吐温-20、1%(w/v)人血清白蛋白、1%(v/v)人IgG、1%(v/v)ProClin 950、0.005%消泡剂-B v/v、2%(w/v)PEG 6,000组成。根据本公开的又另一个具体例示性方面,反应稀释液(样品稀释液)由10mM磷酸钠、pH 7.4,500mM NaCl、0.02%吐温-20、25%(w/v)人血清白蛋白、1%(v/v)ProClin 950组成。
根据这些例示性实施方案,在本文中应理解,高百分比的HSA(25%)部分地用于增加反应介质的粘度以在孵育步骤期间保持珠悬浮。此外,高HSA也在此孵育期间减小非特异性结合,并在患者样品稀释时改善相对光单位(RLU)线性。
然后进行另一次洗涤过程以去除任何过量或未结合样品,随后将发光标记和偶联物加入试杯中。当加入试杯中时,可预期到,在孵育期后,一部分偶联物将结合到顺磁性粒子上的捕获试剂/样品复合物。粒子随后经历另一次洗涤过程以去除任何未结合偶联物,然后将底物加入试杯中并短时间培养以允许化学发光反应达到平衡。
达到平衡后,取得样品的发光和荧光读数。因为顺磁性粒子容纳在分析仪上的常见试剂瓶中并在吸入反应试杯中前保持均匀悬浮状态,所以将粒子吸入试杯后它们的初始荧光测量值,当与每个测试的最终荧光测量值组合时,可用于确定在免疫测定法后保留在试杯中的初始粒子的分率。保留分率由下式给出:
其中F表示校正的荧光信号(即,通过光学检测器的计数效率校正的测量信号)。因为光学检测器具有一定的时间分辨率,所以当每单位时间检测的光子数增加,两个光子在时间分辨率内到达检测器的可能性也增加。因为这两个光子不能通过检测器分辨出,所以它们按单个光子计数。因此,光学检测器的检测效率随入射光子通量增加而减小。
因为与顺磁性粒子的容器壁相互作用并自所述容器壁散射的极高通量的荧光激发光子,所以光学检测器会计数到一定量的光子,即使不存在荧光材料。此校正的背景信号由F背景表示。
使用荧光测量值来确定在免疫测定法中保留在反应试杯中的初始顺磁性粒子的百分比是有利的,因此该方法不限制系统吞吐量,尤其是因为该方法不限制可实现的定时或平行处理。另一方面,大多数常规免疫测定分析仪依赖于顺磁性粒子和样品的再现性处理,这确实限制了可实现的定时或平行处理,因此,也限制系统吞吐量。虽然在这些常规免疫测定分析仪中检测不到处理效率随时间的变化,但是这些变化可利用荧光检测而检测到。本公开的教导内容允许使用平行处理(例如,多个洗涤臂),其洗涤效率因微小的机械对准或流体差异而变化。在免疫测定法的每个步骤后取得的荧光读数可用于核实平行处理的等效功能。
现在将更详细地描述根据上述方法和技术的用于执行感染性疾病和自身免疫性疾病的诊断性测定的自动化的免疫分析设备和试剂系统。如该方法所述,在本文中应理解并认识到,用于执行测定的所公开的设备可被配置成接收标准或通用的收集管以便利用该系统进行多种不同试验。本领域技术人员在本文中也应理解并认识到,存在用于分离抗原(包括来自来源材料的感染性疾病和自身免疫抗原)的多种已知方法。因为这些分离方法在本领域被广泛理解并接受,所以在本文中不详细讨论,尤其因为本领域的技术人员将认识到可在不脱离其精神或范围的情况下将任何可接受的抗原分离法并入本发明系统中。在感染性疾病或自身免疫抗原被分离后,随后可使它们与生物素偶联以产生生物素化的抗原或捕获试剂。生物素化的抗原随后与链霉亲和素连接的固相载体或膜接触。根据本公开的某些方面,生物素化的捕获试剂可来源于包括但不限于以下的组分:经纯化的蛋白、酶、抗体、DNA、核提取物、细胞提取物和非蛋白抗原(例如,药物或与蛋白交联的材料)。
本领域技术人员在本文中应理解和认识到,常用于感染性疾病和自身免疫性疾病诊断性免疫测定的标准生物素化方法和技术可根据本教导内容使用;然而,反应的生物素/蛋白比可根据需要优化以确保用于化学作用的多种生物素化试剂的优化性能。根据本教导内容的某些方面,生物素试剂的特定尺寸的连接臂为NHS-PEG12-生物素。此外,对于非蛋白抗原,可使材料与生物素化的蛋白交联以包被到链霉亲和素珠固相上,但对于自身免疫抗原,诸如DNA,可将生物素化的双脱氧核苷酸并入DNA中。
图1中示出了根据本公开的某些方面的自动化的诊断性测定法的示意图。根据此例示性实施方案,所制造的具有链霉亲和素涂层的磁珠或微粒与已知的生物素化的抗原混合(孵育)(步骤10)。本领域技术人员在本文中应理解并认识到,链霉亲和素与生物素之间熟知的亲和结合有利于抗原包被到珠表面上并因此允许使用具有装载试剂制剂的通用珠。在本文中也应理解并认识到,为根据本教导内容将生物素化的捕获试剂与链霉亲和素包被的固相一起孵育所需的时间量和相关的实验室条件可根据进行的特定实验而变化,然而,根据本公开的某些方面,特别有效的孵育时间范围为约1分钟至约15分钟,更具体地约5分钟至约10分钟并在约2℃至约40℃,更具体地约36.8℃至约37.2℃的温度下。
如下表1中所示,根据本公开的这个方面,以下珠可用于本文中所公开的磁性载体:
表1
虽然可以利用多种方法将生物素化的抗原与链霉亲和素包被的珠混合或一起孵育,然而根据某些具体实施方案,将产物在反应试杯中混合以使得抗原由于生物素/链霉亲和素相互作用而包被珠。根据一个例示性实施方案,将10μL链霉亲和素(SA)包被的珠分配到反应试杯中,然后分配40μL生物素化的抗原,在分配期间进行混合。使混合物孵育1-15分钟。然后通过将磁珠拉向反应试杯的一侧并固定它们同时使缓冲液洗涤通过反应试杯可洗涤掉过量的生物素化的抗原(步骤20)。根据一个例示性实施方案,缓冲液可由10mM磷酸钠、pH 7.4,0.9%(w/v)NaCl、0.05%(v/v)吐温-20、10mg/mL HSA和1%(v/v)ProClin 950组成。虽然本领域技术人员可利用本领域中已知的任何易得的固定技术来使磁珠保留在反应试杯一侧,但是根据某些具体的例示性实施方案,使用外部磁体以固定磁珠同时进行洗涤步骤。
然后,将链霉亲和素包被的磁珠从磁场中释放出来并允许其在反应试杯内自由移动。然后,将生物样品(血清或血浆)加入反应试杯中,然后添加40μL反应缓冲液,从而重悬磁珠(步骤30)。除了生物样品,根据本公开的某些方面,在悬浮液内也可使用高浓度的人血清白蛋白(HSA)以促进大分子结合,并保持磁珠在溶液内。将人IgG加入缓冲液中以保持反应线性。
如果样品含有对任何抗原珠涂层具有反应性的任何抗体(例如,IgE、IgG、IgM、IgA),则这些抗体在此样品孵育步骤期间将结合。样品孵育在37℃下保持40分钟。在患者样品内的任何抗体与珠结合后,则进行第二洗涤步骤以去除任何未结合的患者样品(步骤40)。添加加入150μL冼涤缓冲浓缩液(50mM磷酸钠、pH 7.4,4.5%(w/v)NaCl、0.05%吐温-20、0.05%(v/v)ProClin 950、0.02%(v/v)消泡剂-C v/v)以重悬珠并然后利用磁体下拉珠1.5min。去除溶液后,移开磁体,加入200μL洗涤缓冲液以重悬该珠。然后,重复洗涤一次以上。
在进行第二洗涤步骤后,使珠重悬于对人免疫球蛋白G、M、E或A(IgG/M/E/A)具特异性的抗体中。根据本公开的某些方面,使抗体与酶(诸如辣根过氧化物酶)偶联以结合被珠捕获的任何特定的患者抗体(步骤50)。然后,再次洗涤珠子以去除任何过量的抗体(步骤60),并且加入高度灵敏的光形成试剂(例如,化学发光底物)以最大化检测灵敏度(步骤70)。根据本公开的教导内容,可用作化学发光底物的例示性试剂包括但不限于,PS-atto、ELISA Pico化学发光底物或ELISAFemto最大灵敏度底物。本领域的技术人员将理解并认识到,具有各种结构种类的多种化合物,包括咕吨染料、芳香胺和杂环胺可用于在这些条件下产生化学发光。这些化合物在专利文献中是熟知的并容易通过许多商业供应商得到。一些非限制性化学发光化合物包括但不限于二氧杂环丁烷类型分子、荧光素、PS-2、PS-3、TMA-6、TMA-3。
一旦将高度灵敏的光形成试剂加入反应试杯中,就产生光(步骤80)。根据某些实施方案,可通过将移液管端中的溶液转移到读取台中以读取发光信号和荧光信号二者来测量所述光。然而,应理解,根据本公开发出的光可通过本领域内可得的任何合适的已知检测手段检测,包括但不限于,光度计、x-射线胶片、高速照相胶片、CCD照相机、闪烁计数器、化学光量计或目测。本领域的技术人员应轻易地理解并认识到,每种检测手段本身具有不同的光谱灵敏度;所选的检测装置可受多个因素支配,包括应用和用途、成本和便利性。此外,如本文所用,可根据本公开测量的可量化或可检测应答意味着具有引起抗Ig-HRP的结合的抗原特异性免疫球蛋白(Ig,例如IgE、IgG、IgM、IgA)的阳性样品,所述结合在添加底物时产生发光(即,RLU=相对光单位)。此外,在本文中还应理解到可量化或可检测应答也可应用于阴性样品所生成的可量化应答。
根据本教导内容的某些方面,使由任何抗原特异性Ig(sIg)的阳性/阴性样品生成的RLU与整个IgE(tIg)校准曲线产生的RLU比较。通过利用生物素化的抗Ig捕获试剂评价一系列预先稀释的总Ig(tIg)校准物(由WHO标准生成)来生成校准曲线。
为了更好地理解本公开的机械方面,图2说明了自动化的免疫化学分析仪和试剂系统100,其可根据本公开的教导内容用于量化和标准化分析物样品的发光信号。根据此例示性方面,自动化的免疫化学分析仪100开始于先将荧光标记的顺磁性粒子或荧光珠分配到位于反应旋转器106内的试杯中。根据本文的一个实施方案,一个示例性荧光珠包括荧光珠(SA-Speed Bead、Atto 590标记的),1mg/mL。
起初可使荧光珠位于涡旋器102中并通过Rl移液器104转移到反应旋转器106。R1移液器104可抽吸所需量的荧光珠混合物并将所抽吸量转移到反应旋转器106,在此处将其注入反应旋转器106的试杯中。在注入试杯后,光学移液器108可从反应旋转器106的试杯中抽吸试验样品并将测试样品转移到光学盒110。一旦将样品置于光学盒110内,可记录荧光和发光测量值。荧光和发光信号的初始记录可用作可对应于样品中荧光珠的初始浓度的荧光信号的基线测量。记录测量值后,多次冲洗移液器112可利用洗涤缓冲液冲洗试杯。
接着,可通过R1移液器104将荧光珠从涡旋器102转移到反应旋转器106中的试杯中。然后,Rl移液器104可从试剂旋转器114中抽吸捕获试剂并将捕获试剂注射到位于反应旋转器106中的试杯中。在孵育期后,单次冲洗移液器116可注射冲洗缓冲液以重悬荧光珠。然后在一段时间内通过磁体可将大量悬浮的荧光珠集中在反应旋转器106内。在磁体实质上已经将荧光珠集中在试杯中后,多次冲洗移液器112可抽吸并处理一部分冲洗缓冲液,在试杯内留下一部分荧光珠。多次冲洗移液器112可继续将洗涤缓冲液注射到反应旋转器106的试杯中,重悬荧光珠。荧光珠可再次通过磁体被集中在反应旋转器106内,然后多次冲洗移液器112从反应旋转器106的试杯中抽吸并丢弃未集中的一部分样品。
可将患者样品容置在样品管或样品旋转器118中。可利用样品稀释液进一步对患者样品部分地稀释。此时,样品移液器120可抽吸一部分患者样品并将患者样品注射到反应旋转器106的试杯中以重悬荧光珠。然后,可使反应旋转器106内含有患者样品的试杯在特定温度下孵育一段特定时间。在孵育后,单次冲洗移液器116可注射冲洗缓冲液以重悬荧光珠。通过使荧光珠实质上收集在反应旋转器106中的磁体附近的试杯内而通过反应旋转器106执行另一次集中过程。在荧光珠集中后,多次冲洗移液器112可抽吸并丢弃在集中过程期间未集中在反应旋转器106的试杯中的一部分流体。
然后可对反应旋转器106的试杯内的样品执行几次冲洗循环。冲洗循环可包括利用多次冲洗移液器112以将洗涤缓冲液注射到试杯中以重悬荧光珠。另一个集中步骤可允许通过磁体将荧光珠收集在反应旋转器106内的试杯内。在允许荧光珠充分集中的一段时间后,多次冲洗移液器112可抽吸并无意地丢弃一部分样品,在反应旋转器106的试杯内留下一部分荧光珠。然后,可通过利用多次冲洗移液器112执行另一次冲洗循环以再次将洗涤缓冲液注射到试杯中并允许荧光珠重悬。另一个荧光珠集中过程可在反应旋转器106内使用磁体以从其余样品中集中荧光珠。最后,多次冲洗移液器112可抽吸通过集中过程未集中的一部分样品。
此时,R2移液器122可抽吸试剂旋转器114内偶联物试杯中所含的偶联物。然后,R2移液器122可将先前抽吸的偶联物注射到反应旋转器106的试杯中。在反应旋转器106中在控制时间和温度下孵育试杯后,单次冲洗移液器116可将冲洗缓冲液注射到反应旋转器106的试杯中。可通过允许反应旋转器106内的磁体实质地集中试杯内的荧光珠进行另一次荧光珠集中循环。多次冲洗移液器112可抽吸并丢弃试杯内的在集中循环期间没有被集中的一部分样品。
可对反应旋转器106的试杯内的样品再进行两次冲洗循环。多次冲洗移液器112可注射洗涤缓冲液以将荧光珠重悬在试杯内。另一个荧光珠集中循环可通过使试杯在足够长的时间段内邻接反应旋转器106中的磁体定位来集中荧光珠。在集中循环后,多次冲洗移液器112可抽吸并丢弃在集中循环期间未集中的一部分样品。然后,可通过利用多次冲洗移液器112进行第二洗涤循环以注射洗涤缓冲液,以重悬荧光珠。另一次集中循环可以利用反应旋转器106内的磁铁来集中试杯内的荧光珠。在集中过程后,多次冲洗移液器112可再次抽吸并丢弃在集中循环期间未集中的一部分样品。
此时,R2移液器122可从试剂旋转器114中抽吸一部分偶联物并将偶联物注射到混合的底物容器124中,产生混合的底物样品。然后,R2移液器可从混合的底物容器124中抽吸混合的底物样品并将混合的底物样品注射到反应旋转器106的试杯中,利用混合的底物样品重悬荧光珠。可然后利用光学移液器108抽吸反应旋转器106的试杯中的样品并放于光学盒110中。在光学盒观察荧光和发光后,丢弃样品并且多次冲洗移液器冲洗反应器旋转器106的试杯,准备用于下一次试验。
抗原可以是蛋白质、多肽、肽、核酸、脂质、酶、免疫球蛋白或核苷酸。如本文所用,术语“蛋白质”是指长于100个氨基酸的氨基酸序列。如本文所用,术语“多肽”是指长度在10个与100个氨基酸之间的氨基酸序列。如本文所用,术语“肽”是指长度小于10个氨基酸之间的氨基酸序列。如本文所用,“核苷酸”是指单嘌呤或嘧啶分子,而术语“核酸”是指核苷酸序列。例如,DNA是核酸,而鸟嘌呤是核苷酸。
本文还公开了用于执行检测来自受试者的血清样品中的自身抗原特异性抗体的自动化的诊断性测定以诊断自身免疫性疾病的量化方法。
可使用本文公开的方法诊断的自身免疫性病症的非限制性实例包括急性播散性脑脊髓炎(ADEM),阿狄森病,抗磷脂抗体综合征(APS),关节炎(例如单关节炎、少关节炎或多关节炎如骨关节炎、类风湿关节炎、幼年特发性关节炎、化脓性关节炎)脊椎关节病,自身免疫溶血性贫血,自身免疫性肝炎,自身免疫性内耳疾病,大疱性类天疱疮,腹腔疾病,恰加斯氏病(Chagas disease),慢性障碍性肺病(COPD),妊娠期糖尿病1型(IDDM),子宫内膜异位,胃肠病症(例如,应激性肠病或炎性肠病如克罗恩氏病或溃疡性结肠炎),古德帕斯丘综合症(Goodpasture's syndrome),格雷夫斯氏病,格林-巴利综合征(GBS),桥本氏甲状腺炎,化脓性汗腺炎,特发性血小板减少性紫癜,间质性膀胱炎,狼疮(例如,盘状红斑狼疮、药物诱导性红斑狼疮、狼疮肾炎、新生儿狼疮、亚急性皮肤型红斑狼疮、系统性红斑狼疮),硬斑病,多发性硬化症(MS),重症肌无力,肌病(例如,皮肌炎、包含体肌炎、多肌炎、肌炎),神经性肌强直,帕金森病,寻常性天疱疮,恶性贫血,原发性胆汁性肝硬化,银屑病,复发性散播性脑脊髓炎,风湿热,精神分裂症,硬皮病,氏综合征,皮肤病症(例如皮炎、湿疹、淤积性皮炎(statis dermatitis)、化脓性汗腺炎、银屑病、红斑痤疮或硬皮病),腱鞘炎,葡萄膜炎,血管炎(例如伯格氏病、脑血管炎、变应性肉芽肿性血管炎、冷球蛋白血症、原发性冷球蛋白血症血管炎、巨细胞性动脉炎、Golfer's血管炎、亨-舍二氏紫癜、过敏性血管炎、川崎氏病、微观多动脉炎/多血管炎、多动脉炎结节、风湿性多肌痛(PMR)、Takayasu大动脉炎、韦格纳肉芽肿病)或白斑病。
自身抗原的非限制性实例包括但不限于聚集蛋白聚糖,丙氨酰tRNA合成酶(PL-12),αβ晶状体蛋白,α胞衬蛋白(Sptan 1),α辅肌动蛋白,α1抗胰凝乳蛋白酶,α1抗胰蛋白酶,α1微球蛋白,醛缩酶(alsolase),氨酰tRNA合成酶,淀粉样蛋白(例如粉状蛋白β、粉状蛋白P),膜联蛋白(例如,膜联蛋白II、膜联蛋白V),载脂蛋白(例如ApoB、ApoE、ApoE4、ApoJ),水通道蛋白(例如AQP1、AQP2、AQP3、AQP4),杀菌/渗透性增高蛋白(BPI),β球蛋白前体BP1,β肌动蛋白,β乳球蛋白A,β2糖蛋白I,β2微球蛋白,血型抗原(例如Rh血型抗原、I血型抗原、ABO血型抗原),C反应蛋白(CRP),钙调蛋白,钙网蛋白,心磷脂,过氧化氢酶,组织蛋白酶B,着丝粒蛋白(例如CENP-A、CENP-B),硫酸软骨素,核染质,胶原(例如I型、II型、III型、IV型、V型、VI型胶原),补体组分(例如C1q、C3、C3a、C3b、C4、C5、C6、C7、C8、C9),细胞色素C,细胞色素P450 2D6,细胞角蛋白,核心蛋白聚糖,硫酸皮肤素,DNA(例如双链DNA、单链DNA),DNA拓扑异构酶I,弹性蛋白,爱泼斯坦-巴尔核抗原1(EBNA1),弹性蛋白,巢蛋白(entactin),可提取核抗原(Ro、La、Sm、RNP、Scl-70、Jo1),因子I,因子P,因子B,因子D,因子H,因子X,纤维蛋白原(例如纤维蛋白原IV、纤维蛋白原S),纤连蛋白,亚氨甲基转移酶环化脱氨酶(LC-1),麦醇溶蛋白和酰胺化麦醇溶蛋白肽(DGP),gp210核包膜蛋白,GP2(主要酶原颗粒膜糖蛋白),糖蛋白gpIIb/IIIa,胶质纤维酸性蛋白(GFAP),糖化白蛋白,甘油醛3-磷酸脱氢酶(GAPDH),触珠蛋白A2,热激蛋白(例如Hsp60、HSP70),血蓝蛋白,肝素,组蛋白(例如组蛋白H1、H2A、H2B、H3、H4),组氨tRNA合成酶(Jo-1),透明质酸酶,免疫球蛋白,胰岛素,胰岛素受体,整联蛋白(例如整联蛋白α1β1、α2β1、α3β1、α4β1、α5β1、α6β1、α7β1、αLβ2、αMβ2、αIIbβ3、αVβ1、αVβ3、αVβ5、αVβ6、αVβ8、α6β3、α1β1),间质性视黄醇结合蛋白3,内因子,Ku(p70/p80),乳酸脱氢酶,层粘连蛋白,肝细胞溶质抗原1型(LC1),肝/肾微粒体抗原1(LKM1),溶菌酶,黑色素瘤分化相关蛋白5(MDA5),Mi-2(染色质域解旋酶DNA结合蛋白4),线粒体蛋白(例如M1、M2、M3、M4、M5、M6、M7、M8、M9、BCOADC-E2、OGDC-E2、PDC-E2),毒蕈碱受体,髓鞘相关糖蛋白,肌球蛋白,髓鞘碱性蛋白,髓鞘少突胶质糖蛋白,髓过氧化物酶(MPO),类风湿性因子(IgM抗IgG),神经元特异性烯醇化酶,烟碱乙酰胆碱受体α链,核仁素,核孔蛋白(例如Nup62),核小体抗原,PM/Scl100,PM/Scl 75,胰腺β细胞抗原,胃蛋白酶原,过氧化物还原酶1,磷酸葡萄糖异构酶,磷脂,磷脂酰肌醇,血小板衍生生长因子,聚合酶β(POLB),钾通道KIR4.1,增殖细胞核抗原(PCNA),蛋白酶-3,蛋白脂质蛋白,蛋白多糖,凝血酶原,恢复蛋白,视紫红质,核糖核酸酶,核糖核蛋白(例如Ro、La、snRNP、scRNP),核糖体,核糖体磷蛋白(例如P0、P1、P2),RNA(双链RNA、单链RNA),Sm蛋白(例如SmB、SmB’、SmD1、SmD2、SmD3、SmF、SmG、SmN),Sp100核蛋白,SRP54(信号识别粒子54kDa),选择素,平滑肌蛋白,鞘磷脂,链球菌抗原,超氧化物歧化酶,滑膜关节蛋白,T1F1γ胶原,苏氨酰-tRNA合成酶(PL-7),组织转谷氨酰胺酶,甲状腺过氧化物酶,甲状腺球蛋白,促甲状腺激素受体,转铁蛋白,磷酸丙糖异构酶,微管蛋白,肿瘤坏死α,拓扑异构酶,U1-dnRNP 68/70kDa,U1-snRNP A,U1-snRNP C,U-snRNP B/B’,泛素蛋白,血管内皮生长因子,波形蛋白和玻连蛋白。
本文还公开了用于执行通过检测针对来自受试者的血清样品中的感染性因子的抗体来检测感染性疾病的自动化的诊断性测定以诊断自身免疫性疾病的量化方法。
感染性因子包括但不限于细菌,病毒,类病毒,朊病毒,鼻虫(例如蛔虫、蛲虫),寄生虫(疟疾、绦虫)和真菌(例如酵母、癣)。如本文所使用,术语“感染性因子”,“病原体”,“病原微生物”和“微生物”中均指上列感染性因子。
来自感染性因子的抗原可以是来自感染性因子的任何分离的蛋白质、糖蛋白、核酸、酶、脂质、脂多糖或其组合。抗原还可以包括来自感染性因子的提取物或均质制剂,其包括多种不同的抗原部分。
为了确定样品是否含有针对自体抗原(自身抗原)的自身免疫抗体,或针对感染性因子的抗体,根据本文公开的方法将荧光标记的顺磁性微粒(例如,荧光珠)与自身抗原或感染性疾病抗原结合以形成捕获试剂。在洗涤荧光读数之前获得试杯的样品,以确定反应试杯中磁珠的起始数量。
在进行洗涤过程之后,将患者样品和可选的稀释液(如果需要)加入到试杯中的颗粒中并孵育。这导致在患者的血液样品中捕获到特异性分析物分子(抗体)。然后进行另一个洗涤过程以除去任何过量或未结合的样品,然后将发光标记和偶联物加入到试杯中。当加入到试杯中时,可以预计偶联物的某些部分将在孵育期后结合到顺磁性颗粒上的捕获试剂/样品复合物。然后,颗粒经历另一个洗涤过程以除去任何未结合的偶联物,然后将底物加入到试杯中并孵育较短时间以使化学发光反应达到平衡。
达到平衡后,取样品的发光和荧光读数,并且确定抗体对抗原的水平,如本文所公开。
在以下实施例中示出了本公开的过程、方法的优点和改进。这些实施例仅是说明性的,并非旨在限制或排除本公开的其他实施方案。
实施例1:抗人Ig或抗原提取物的生物素化:
将2微升在DMSO中为250mM的NHS-PEG12-生物素(Pierce)加入到1mL在磷酸盐缓冲盐水(PBS)中为5.0mg/mL的亲和纯化的抗人Ig(例如,IgE,IgG,IgA,IgM)中。或者,将1.6μL在DMSO中为250mM的NHS-PEG12-生物素(Pierce)加入到1mL在PBS中为1.0mg/mL的抗原提取物中。
将试剂溶液混合并在冰上放置2小时。通过在2-8℃下针对PBS(抗体与缓冲液体积比为1:100)在4小时及过夜时的两种变化进行渗析将游离生物素试剂与生物素化的抗体分离。
实施例2:荧光珠的制备:
将5微升在ddH2O中为1mM的Biotin-Fluo(Alexa Fluor 594生物素,钠盐,LifeTechnologies)加入45mL PBSTHP缓冲液(10mM硫酸钠,pH 7.4,0.9%(w/v)NaCl,0.05%(v/v)吐温-20,10mg/mL HAS,1%(v/v)ProClin 950)中。混合均匀。
将5毫升的10mg/mL SA-Speed珠(Sera-mag Speedbeads链霉亲和素包被的磁性颗粒,Thermo)加入到生物素–荧光溶液中并混合均匀。
实施例3:测定抗原的特异性免疫球蛋白水平
将珠浓度为1mg/mL的10微升荧光珠(荧光标记的顺磁性微粒)分配到反应试杯中;将40μL生物素抗原(例如感染性疾病抗原,自身抗原等)或生物素抗Ig抗体分配到荧光珠中并混合,并在37℃下孵育1-10分钟。洗涤后,将抗原或抗Ig包被的珠重悬于40μL反应缓冲液中。针对抗原测定从适当个体获得的血清样品。将10μL样品加入到40μL在反应试杯中悬浮的抗原包被的珠中。对于六点标准曲线,将10μL血清标准品(针对WHO IgG标准品校准的二级标准品)各自加入到40μL在反应试杯中抗Ig包被的珠中。虽然根据本教导可以使用各种不同标记的抗Ig偶联物,但是根据某些教导,使用以下抗Ig偶联物:用于测定:抗IgE-HRP,抗IgA-HRP,抗IgG-HRP,抗IgM-HRP,抗ECP-HRP和抗类胰蛋白酶-HRP。此外,如本文所使用,每个偶联物具有用于化学过程的最佳HRP掺入比。根据本教导的某些方面,用于所列的偶联物的HRP掺入比在约1.2到约5.4之间。此外,本教导还考虑并入其它类型的偶联物-报告系统,包括但不限于:碱性磷酸酶偶联物和b-半乳糖苷酶偶联物。
将溶液混合并在37℃下孵育40分钟。洗涤后,将珠重新悬浮于50μL抗人IgE-HRP偶联物中,并在37℃下孵育30分钟。将50μL PS-atto(Lumigen)加入每个试杯中,珠重新悬浮。将珠悬浮液转移到移液管末端,并在光学盒中读取荧光和发光信号。使用四参数逻辑函数方程和从标准曲线插补的抗原的特异性Ig水平确定标准曲线。
可以根据本教导使用的示例性试剂和组分的列表包括但不必限于:珠:荧光珠(SA-Speed Bead,Atto 590标记的),1mg/mL;捕获试剂稀释液:IgE:10mM磷酸钠,pH 7.4,0.9%(w/v)NaCl,0.05%吐温-20,1%(w/v)人血清白蛋白,1%(v/v)ProClin 950,最高5%(v/v)甘油;ANA:10mM磷酸钠,pH 7.4,0.9%(w/v)NaCl,0.05%吐温-20,1%(w/v)牛血清白蛋白,1%蛋白酶抑制剂混合物,0.1mM DTT,1%(v/v)ProClin 950,25%(最高30%)(v/v)甘油;洗涤缓冲液浓缩液(5×):50mM磷酸钠,pH 7.4,4.5%(w/v)NaCl,0.05%吐温-20,0.05%(v/v)ProClin 950,0.02%(v/v)消泡-C v/v;试剂稀释液(反应稀释液和样品稀释液)IgE--10mM磷酸钠,pH 7.4,500mM NaCl,0.02%吐温-20,1%(w/v)人血清白蛋白,1%(v/v)人IgG,1%(v/v)ProClin 950,0.005%消泡-B v/v,2%(w/v)PEG 6,000;ANA--10mM磷酸钠,pH 7.4,500mM NaCl,0.02%吐温-20,25%(w/v)人血清白蛋白,1%(v/v)ProClin950;校准品和对照品:校准品:稀释成样品稀释液的患者样品;对照品:患者样品池;偶联物:偶联物稀释液:50mM磷酸钠,pH 6.7,150mM NaCl,0.05%吐温-20,1%BSA,5%(w/v)PEG6,000,1%(v/v)ProClin 950;IgE:100ng/mL抗IgE-HRP,100μg/mL apo-HRP,在稀释液中,0.015%消泡-B v/v;以及底物:PS-atto A&B,0.01%消泡-B v/v。
实施例4:测定自身抗原的特异性免疫球蛋白水平
将珠浓度为1mg/mL的10微升荧光珠(荧光标记的顺磁性微粒)分配到反应试杯中;将40μL生物素抗原(例如髓鞘碱性蛋白,胶原蛋白,胰岛素等)或生物素抗IgG抗体(或者可替换地,抗-IgM或抗-IgA)分配到荧光珠中并混合,并在37℃下孵育1-10分钟。获得标记的荧光珠样品,以确定珠的起始数量。洗涤后,将抗原或抗IgG包被的珠重新悬浮在40μL反应缓冲液中。针对抗原测定从个体获得的血清样品。将10μL样品加入到40μL在反应试杯中悬浮的抗原包被的珠中。对于六点标准曲线,将10μL血清标准品(针对WHO IgG标准品校准的二级标准品)各自加入到40μL在反应试杯中抗IgG包被的珠中。
将溶液混合并在37℃下孵育40分钟。洗涤后,将珠重新悬浮于50μL抗人IgG-HRP偶联物中,并在37℃下孵育30分钟。将50μL PS-atto(Lumigen)加入每个试杯中,珠重新悬浮。将珠悬浮液转移到移液管末端,并在光学盒中读取荧光和发光信号。使用四参数逻辑函数方程和从标准曲线插补的自身抗原的特异性IgG水平确定标准曲线。
实施例5:测定感染性因子抗原的特异性IgG水平
将珠浓度为1mg/mL的10微升荧光珠(荧光标记的顺磁性微粒)分配到反应试杯中;将40μL生物素抗原(来自例如人免疫缺陷病毒,埃博拉病毒,Mycobacterium tuberculosis等)或生物素抗IgG抗体(或者可替换地,抗-IgM或抗-IgA)分配到荧光珠中并混合,并在37℃下孵育1-10分钟。获得标记的荧光珠样品,以确定珠的起始数量。洗涤后,将抗原或抗IgG包被的珠重新悬浮在40μL反应缓冲液中。针对抗原测定从个体获得的血清样品。将10μL样品加入到40μL在反应试杯中悬浮的抗原包被的珠中。对于六点标准曲线,将10μL血清标准品(针对WHO IgG标准品校准的二级标准品)各自加入到40μL在反应试杯中抗IgG包被的珠中。
将溶液混合并在37℃下孵育40分钟。洗涤后,将珠重新悬浮于50μL抗人IgG-HRP偶联物中,并在37℃下孵育30分钟。将50μL PS-atto(Lumigen)加入每个试杯中,珠重新悬浮。将珠悬浮液转移到移液管末端,并在光学盒中读取荧光和发光信号。使用四参数逻辑函数方程和从标准曲线插补的感染性因子抗原的特异性IgG水平确定标准曲线。
除非另有说明,否则在说明书和权利要求书中使用的表示成分的量,表示诸如分子量、反应条件等性质的所有数字应被理解为在所有情况下被术语“约”修饰。如本文所使用,术语“约”和“近似”是指在10至15%范围内,优选在5至10%范围内。因此,除非有相反指示,否则在说明书和所附权利要求书中陈述的数值参数是近似值,其可以根据本发明要求保护的期望性质而有所不同。至少并不是试图将等同原则的适用范围限制在权利要求的范围内,所以每个数值参数至少应该根据报告的有效数字的数量通过应用普通的舍入技术来理解。尽管示出本发明的广泛范围的数值范围和参数是近似值,但是尽可能精确地报告具体实施例中列出的数值。然而,任何数值固有地包含必须由其各自测试测量值中出现的标准偏差导致的某些误差。
在描述本发明的上下文中使用的术语“一个(a/an)”,“所述(the)”和相似的参照(特别是在以下权利要求的上下文中)应被理解为涵盖单数和复数,除非本文另有说明或与上下文明显矛盾。本文中对数值范围的描述仅仅旨在作为单独参考落入该范围内的每个单独数值的速记方法。除本文非另外指出,否则将每个单独的数值并入本说明书中,如同其在本文中单独列出一样。文本描述的全部方法可以以任何合适的顺序执行,除非本文另有指示或者除非明显地与上下文矛盾。使用本文提供的任何以及全部示例,或示例性语言(例如,“如”)仅旨在更好地说明本发明,并且除非另有请求,否则不对本发明的范围构成限制。说明书中的语言不应被理解为指示实践本发明所必须的任何未请求保护的元素。
本文公开的本发明的替代元素或实施方案的分组不应被理解为进行限制。每个组成员可以单独地或者与组的其他成员或本文中找到的其它元素任意组合在一起被引用并要求保护。为了方便起见和/或可专利性,预期组中的一个或更多个成员可以被包含在组中或从组中删除。当发生任何这种包含或删除时,认为说明书包含经修改从而满足所附权利要求中使用的所有马库什组的书面描述的组。
本文描述了本发明的某些实施方案,包括发明人已知的用于实施本发明的最佳方式。当然,阅读前述说明后,这些所述实施方案的变形对本领域普通技术人员而言将是明显的。发明人期望本领域的技术人员酌情使用这种变型,并且发明人打算以本文具体描述的方式之外的其他方式来实践本发明。另外,本发明包括适用法律所许可的此处所附权利要求书中叙述的主题的全部修改和等同物。而且,本公开涵盖了上述元素的所有可能变型的组合,除非本文另有指示或者除非明显地与上下文矛盾。
本文公开的具体实施方式可以在权利要求中使用语言由……组成或基本上由……组成来进一步限定。当在权利要求中使用时,无论是根据修改提交还是添加,过渡术语“由……组成”都不包括权利要求中未指定的任何元素,步骤或成分。过渡术语“基本上由……组成”将权利要求的范围限定为指定的材料或步骤以及实质上不影响基本特性和新颖特性的内容。所要求保护的本发明的实施方案在本文中被清楚地或明确地描述和实现。
此外,在整篇说明书中已经对专利和印刷出版物进行了许多参考。上述引用的每一个参考文献和印刷出版物的全部内容均单独通过引用并入本文。
最后,应当理解,本文公开的本发明的实施方案是对本发明的原理的说明。可以采用的其它修改在本发明的范围内。因此,作为示例而非限制,可以根据本文的教导来利用本发明的替代配置。因此,本发明不限于精确地如示出和描述的内容。
Claims (27)
1.一种用于执行自身免疫性疾病的自动化的诊断性测定的量化方法,包括:
将捕获试剂与链霉亲和素包被的介质一起孵育以形成固相复合物,其中所述捕获试剂是生物素化的自身抗原;
洗涤所述固相复合物以去除过量的捕获试剂;
将所述固相复合物与血清样品一起孵育以形成免疫复合物;
洗涤所述免疫复合物以去除任何未结合样品;
将所述免疫复合物与偶联物一起孵育以产生免疫-偶联复合物;
洗涤所述免疫-偶联复合物以去除任何未结合偶联物;
引入能够生成可量化应答的底物;以及
校准由所述底物生成的应答。
2.根据权利要求1的方法,其中将所述固相复合物与血清样品一起孵育的步骤包括将存在于所述血清样品中的自身免疫特异性人免疫球蛋白G(IgG),自身免疫特异性人免疫球蛋白M(IgM)或自身免疫特异性人免疫球蛋白A(IgA)结合到所述捕获试剂。
3.根据权利要求1的方法,其中所述自身抗原是聚集蛋白聚糖,丙氨酰tRNA合成酶(PL-12),αβ晶状体蛋白,α胞衬蛋白(Sptan 1),α辅肌动蛋白,α1抗胰凝乳蛋白酶,α1抗胰蛋白酶,α1微球蛋白,醛缩酶,氨酰tRNA合成酶,淀粉样蛋白(例如,淀粉样蛋白β、淀粉样蛋白P),膜联蛋白(例如,膜联蛋白II、膜联蛋白V),载脂蛋白(例如,ApoB、ApoE、ApoE4、ApoJ),水通道蛋白(例如,AQP1、AQP2、AQP3、AQP4),杀菌/渗透性增高蛋白(BPI),β球蛋白前体BP1,β肌动蛋白,β乳球蛋白A,β2糖蛋白I,β2微球蛋白,血型抗原(例如,Rh血型抗原、I血型抗原、ABO血型抗原),C反应蛋白(CRP),钙调蛋白,钙网蛋白,心磷脂,过氧化氢酶,组织蛋白酶B,着丝粒蛋白(例如,CENP-A、CENP-B),硫酸软骨素,核染质,胶原(例如,I型、II型、III型、IV型、V型、VI型胶原),补体组分(例如,C1q、C3、C3a、C3b、C4、C5、C6、C7、C8、C9),细胞色素C,细胞色素P450 2D6,细胞角蛋白,核心蛋白聚糖,硫酸皮肤素,DNA(例如,双链DNA、单链DNA),DNA拓扑异构酶I,弹性蛋白,爱泼斯坦-巴尔核抗原1(EBNA1),弹性蛋白,巢蛋白(entactin),可提取的核抗原(Ro、La、Sm、RNP、Scl-70、Jo1),因子I,因子P,因子B,因子D,因子H,因子X,纤维蛋白原(例如,纤维蛋白原IV、纤维蛋白原S),纤连蛋白,亚氨甲基转移酶环化脱氨酶(LC-1),麦醇溶蛋白和酰胺化麦醇溶蛋白肽(DGP),gp210核包膜蛋白,GP2(主要酶原颗粒膜糖蛋白),糖蛋白gpIIb/IIIa,胶质纤维酸性蛋白(GFAP),糖化白蛋白,甘油醛3-磷酸脱氢酶(GAPDH),触珠蛋白A2,热激蛋白(例如,Hsp60、HSP70),血蓝蛋白,肝素,组蛋白(例如,组蛋白H1、H2A、H2B、H3、H4),组氨酰tRNA合成酶(Jo-1),透明质酸酶,免疫球蛋白,胰岛素,胰岛素受体,整联蛋白(例如,整联蛋白α1β1、α2β1、α3β1、α4β1、α5β1、α6β1、α7β1、αLβ2、αMβ2、αIIbβ3、αVβ1、αVβ3、αVβ5、αVβ6、αVβ8、α6β3、α1β1),间质性视黄醇结合蛋白3,内因子,Ku(p70/p80),乳酸脱氢酶,层粘连蛋白,肝胞质溶胶抗原1型(LC1),肝/肾微粒抗原1(LKM1),溶菌酶,黑色素瘤分化相关蛋白5(MDA5),Mi-2(染色质域解旋酶DNA结合蛋白4),线粒体蛋白(例如,M1、M2、M3、M4、M5、M6、M7、M8、M9、BCOADC-E2、OGDC-E2、PDC-E2),毒蕈碱受体,髓鞘相关糖蛋白,肌球蛋白,髓鞘碱性蛋白,髓鞘少突胶质糖蛋白,髓过氧化物酶(MPO),类风湿性因子(IgM抗IgG),神经元特异性烯醇化酶,烟碱乙酰胆碱受体α链,核仁素,核孔蛋白(例如,Nup62),核小体抗原,PM/Scl100,PM/SCL 75,胰腺β细胞抗原,胃蛋白酶原,过氧化物还原酶1,磷酸葡萄糖异构酶,磷脂,磷脂酰肌醇,血小板衍生生长因子,聚合酶β(POLB),钾通道KIR4.1,增殖细胞核抗原(PCNA),蛋白酶-3,蛋白脂质蛋白,蛋白聚糖,凝血酶原,恢复蛋白,视紫红质,核糖核酸酶,核糖核蛋白(例如,Ro、La、snRNP、scRNP),核糖体,核糖体磷蛋白(例如,P0、P1、P2),RNA(双链RNA、单链RNA),Sm蛋白质(例如,SmB、SmB’、SmD1、SmD2、SmD3、SmF、SmG、SmN),SP100核蛋白质,SRP54(信号识别粒子54kDa),选择素,平滑肌蛋白,鞘磷脂,链球菌抗原,超氧化物歧化酶,滑膜关节蛋白,T1F1γ胶原,苏氨酰tRNA合成酶(PL-7),组织型转谷氨酰胺酶,甲状腺过氧化物酶,甲状腺球蛋白,促甲状腺激素受体,转铁蛋白,磷酸丙糖异构酶,微管蛋白,肿瘤坏死α,拓扑异构酶,U1-dnRNP 68/70kDa,U1-snRNP A,U1-snRNP C,U-snRNP B/B’,泛素,血管内皮生长因子,波形蛋白,或者玻连蛋白。
4.根据权利要求1的方法,其中所述链霉亲和素包被的介质包括通用的荧光标记的磁性微粒。
5.根据权利要求1的方法,其中一个或更多个洗涤步骤包括通过在反应试杯的限定区域内磁性隔离被洗涤的复合物来洗涤所述复合物。
6.根据权利要求1的方法,其中将捕获试剂与链霉亲和素包被的介质一起孵育的步骤包括通过包括高浓度的人血清白蛋白(HSA)的反应稀释液孵育悬浮保持的捕获试剂。
7.根据权利要求1的方法,其中将免疫复合物与偶联物一起孵育的步骤包括通过包括标示浓度的聚乙二醇的偶联物稀释液孵育悬浮保持的免疫复合物。
8.根据权利要求1的方法,还包括在洗涤所述免疫复合物以去除未结合的样品时使用辣根过氧化物酶(HRP)作为间接标记的步骤。
9.根据权利要求1的方法,还包括通过以下方式调节可量化应答的步骤:
将所述底物和所述免疫-偶联复合物转移到光学盒,其中量化荧光信号和化学发光信号;以及
采用初始与最终荧光的比率调节量化的化学发光信号以计算报道值。
10.根据权利要求9的方法,还包括:
测量所述光学盒内的荧光以确定珠保持;以及
测量所述光学盒内的发光以检测生成的相对发光单位信号。
11.根据权利要求10的方法,还包括将荧光和发光测量值代入算法中以生成经珠保持调节的相对发光单位信号。
12.根据权利要求10的方法,还包括将所生成的经珠保持调节的相对发光单位信号与校准曲线相对发光单位信号比较。
13.一种用于执行感染性疾病的自动化的诊断性测定的量化方法,包括:
将捕获试剂与链霉亲和素包被的介质一起孵育以形成固相复合物,其中所述捕获试剂是生物素化的感染性疾病抗原;
洗涤所述固相复合物以去除过量的捕获试剂;
将所述固相复合物与血清样品一起孵育以形成免疫复合物;
洗涤所述免疫复合物以去除任何未结合样品;
将所述免疫复合物与偶联物一起孵育以产生免疫-偶联复合物;
洗涤所述免疫-偶联复合物以去除任何未结合偶联物;
引入能够生成可量化应答的底物;以及
校准由所述底物生成的应答。
14.根据权利要求13的方法,其中将所述固相复合物与血清样品一起孵育的步骤包括将存在于所述血清样品中的感染性因子特异性人IgG、IgM或IgA结合至所述生物素化的捕获试剂。
15.根据权利要求13的方法,其中所述感染性疾病抗原来自选自细菌、病毒、类病毒、朊病毒、鼻虫、寄生虫和真菌的感染性因子。
16.根据权利要求13的方法,其中所述捕获试剂来源于包括多个抗原的感染性因子提取物的生物素化。
17.根据权利要求13的方法,其中所述感染性疾病抗原是蛋白质、糖蛋白、核酸、酶、脂质、脂多糖、抗体或其组合。
18.根据权利要求13的方法,其中所述捕获试剂是选自纯化的蛋白质、酶、抗体以及感染性因子提取物的多种生物素化的捕获试剂的掺混物。
19.根据权利要求13的方法,其中所述链霉亲和素包被的介质包括通用的荧光标记的磁性微粒。
20.根据权利要求13的方法,其中一个或更多个洗涤步骤包括在反应试杯的限定区域内通过磁性隔离被洗涤的复合物来洗涤所述复合物。
21.根据权利要求13的方法,其中将捕获试剂和链霉亲和素包被的介质一起孵育的步骤包括通过包括高浓度的人血清白蛋白(HSA)的反应稀释液孵育悬浮保持的捕获试剂。
22.根据权利要求13的方法,其中将免疫复合物与偶联物一起孵育的步骤包括通过包括标示浓度的聚乙二醇的偶联物稀释液孵育悬浮保持的免疫复合物。
23.根据权利要求13的方法,还包括在洗涤所述免疫复合物以去除未结合的样品时使用辣根过氧化物酶(HRP)作为间接标记的步骤。
24.根据权利要求13的方法,还包括通过以下方式调节可量化应答的步骤:
将所述底物和所述免疫-偶联复合物转移到光学盒,其中量化荧光信号和化学发光信号;以及
采用初始与最终荧光的比率调节量化的化学发光信号以计算报道值。
25.根据权利要求24的方法,还包括:
测量所述光学盒内的荧光以确定珠保持;以及
测量所述光学盒内的发光以检测生成的相对发光单位信号。
26.根据权利要求25的方法,还包括将荧光和发光测量值代入算法中以生成经珠保持调节的相对发光单位信号。
27.根据权利要求25的方法,还包括将所生成的经珠保持调节的相对发光单位信号与校准曲线相对发光单位信号比较。
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
PCT/US2015/023408 WO2016159960A1 (en) | 2015-03-30 | 2015-03-30 | Automated immunoanalyzer system for performing diagnostic assays for autoimmune and infectious diseases |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN107548461A true CN107548461A (zh) | 2018-01-05 |
Family
ID=57004502
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201580078733.XA Pending CN107548461A (zh) | 2015-03-30 | 2015-03-30 | 用于执行自身免疫性疾病和感染性疾病的诊断性测定的自动化的免疫分析仪系统 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP3278109A4 (zh) |
JP (1) | JP2018510354A (zh) |
CN (1) | CN107548461A (zh) |
AU (1) | AU2015389978A1 (zh) |
CA (1) | CA2981455A1 (zh) |
HK (1) | HK1248804A1 (zh) |
WO (1) | WO2016159960A1 (zh) |
Cited By (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109142750A (zh) * | 2018-08-14 | 2019-01-04 | 江苏浩欧博生物医药股份有限公司 | 一种测定抗组蛋白抗体IgG的试剂盒及检测方法 |
CN109212191A (zh) * | 2018-09-27 | 2019-01-15 | 郑州安图生物工程股份有限公司 | 一种用于检测细胞角蛋白19片段的试剂盒 |
WO2019169799A1 (zh) * | 2018-03-07 | 2019-09-12 | 深圳市伯劳特生物制品有限公司 | 一种生物素化的insulin抗原及其生物素化工艺 |
CN110320087A (zh) * | 2019-07-30 | 2019-10-11 | 河南赛诺特生物技术有限公司 | 一种含色素组织免疫组化染色试剂盒及染色方法 |
CN110596371A (zh) * | 2019-09-20 | 2019-12-20 | 郑州安图生物工程股份有限公司 | 一种全自动化学发光测定仪磁珠回收率和试剂针精密性评估方法以及试剂盒 |
CN111007256A (zh) * | 2019-12-10 | 2020-04-14 | 迪瑞医疗科技股份有限公司 | 钙调素化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法 |
CN111272999A (zh) * | 2020-02-17 | 2020-06-12 | 珠海丽珠试剂股份有限公司 | 抗原偶联磁微粒及其制备方法、抗U1-snRNP抗体的检测方法和试剂盒 |
CN113447648A (zh) * | 2021-07-01 | 2021-09-28 | 浙江大学医学院附属儿童医院 | 检测抗富含丝氨酸/精氨酸剪接因子9-IgG抗体的试剂盒 |
CN113447658A (zh) * | 2021-07-01 | 2021-09-28 | 浙江大学医学院附属儿童医院 | 一种检测抗过氧化物还原酶-1-IgG抗体的试剂盒 |
CN114152741A (zh) * | 2021-11-18 | 2022-03-08 | 上海北昂医药科技股份有限公司 | 一种提高有效微珠比例的dELISA样品及其制备与检测方法 |
CN114594245A (zh) * | 2022-01-26 | 2022-06-07 | 浙江莱阅病理诊断科技有限公司 | 一种全自动免疫组化染色机适配的清洗缓冲液及其制备方法 |
CN115656154A (zh) * | 2022-10-26 | 2023-01-31 | 广东优尼德生物科技有限公司 | 一种基于重组rnp多抗原的抗rnp抗体化学发光检测试剂盒 |
CN116148463A (zh) * | 2022-09-08 | 2023-05-23 | 浙江省血液中心 | 一种磁珠-抗体-膜糖蛋白复合物、应用及试剂盒 |
Families Citing this family (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN107847933B (zh) | 2015-07-15 | 2021-02-05 | Hycor生物医学有限责任公司 | 可定制仪器 |
EP3325965B1 (en) * | 2015-07-23 | 2022-02-09 | Hycor Biomedical, Inc. | On-board kitting |
TW201832726A (zh) * | 2016-11-01 | 2018-09-16 | 美商海科生醫有限責任公司 | 可基於輸入數據建議檢測之免疫檢測系統 |
EP3358355B1 (en) | 2017-02-04 | 2023-10-11 | Warszawski Uniwersytet Medyczny | Use of serum 2-cysteine peroxiredoxins (2-cys-prdx) as biomarkers of chronic kidney diseases (ckd) such as lupus nephritis (ln), iga nephropathy (igan) and autosomal-dominant polycystic kidney disease (adpkd) useful for diagnosing, these diseases and method of differentiation of these diseases |
CN107022548B (zh) * | 2017-03-22 | 2019-02-01 | 陕西脉元生物科技有限公司 | 一种人体抗aqp4自身抗体检测材料及其制备方法 |
CN107870239B (zh) * | 2017-09-14 | 2020-10-23 | 上海长海医院 | nAChR-α1-ECD蛋白在医疗检测中的应用 |
CN112272773A (zh) * | 2018-05-22 | 2021-01-26 | 过敏原有限责任公司 | 用于检测花生过敏的肽和方法 |
CN109142743B (zh) * | 2018-07-25 | 2022-02-08 | 宙斯生命科技(常州)有限公司 | 一种自免肝抗体的多项检测试剂盒 |
CN112485432A (zh) * | 2020-10-26 | 2021-03-12 | 绍兴梅奥心磁医疗科技有限公司 | 一种心血管疾病标志物的免疫定量检测装置、检测方法及用途 |
CN112505319A (zh) * | 2020-10-26 | 2021-03-16 | 绍兴梅奥心磁医疗科技有限公司 | 一种待检标志物免疫定量检测装置、检测方法及用途 |
CN112710833B (zh) * | 2021-01-13 | 2023-01-31 | 上海交通大学 | 基于微管流控芯片的细胞捕获方法 |
CN113125422B (zh) * | 2021-04-16 | 2023-07-25 | 合肥工业大学 | 化学发光水凝胶微珠的制备方法、制得的水凝胶微珠及其应用 |
CN113702647B (zh) * | 2021-08-31 | 2024-03-15 | 普十生物科技(北京)有限公司 | 人生长分化因子15即时检测试剂盒、其制备方法及其应用 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20110151582A1 (en) * | 2008-09-02 | 2011-06-23 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of | Method for detection of antigen-specific antibodies in biological samples |
US20140274784A1 (en) * | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Hycor Biomedical, Inc. | Automated immunoanalyzer system for performing diagnostic assays for allergies and autoimmune diseases |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE4418223A1 (de) * | 1994-05-25 | 1995-11-30 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zum Nachweis des Vorliegens eines Insulin-abhängigen Diabetes mellitus |
WO2001003721A1 (en) * | 1999-07-12 | 2001-01-18 | Merlin Biomedical & Pharmaceutical, Ltd. | Improved assays for detecting human immunodeficiency virus infection |
CA2492200A1 (en) | 2002-07-12 | 2004-01-22 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Novel compositions and methods for the generation of mhc class ii compounds by peptide exchange |
EP3325965B1 (en) | 2015-07-23 | 2022-02-09 | Hycor Biomedical, Inc. | On-board kitting |
TW201832726A (zh) | 2016-11-01 | 2018-09-16 | 美商海科生醫有限責任公司 | 可基於輸入數據建議檢測之免疫檢測系統 |
-
2015
- 2015-03-30 CA CA2981455A patent/CA2981455A1/en not_active Abandoned
- 2015-03-30 AU AU2015389978A patent/AU2015389978A1/en not_active Abandoned
- 2015-03-30 WO PCT/US2015/023408 patent/WO2016159960A1/en active Application Filing
- 2015-03-30 EP EP15887969.2A patent/EP3278109A4/en not_active Withdrawn
- 2015-03-30 JP JP2017551241A patent/JP2018510354A/ja active Pending
- 2015-03-30 CN CN201580078733.XA patent/CN107548461A/zh active Pending
-
2018
- 2018-06-25 HK HK18108131.3A patent/HK1248804A1/zh unknown
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20110151582A1 (en) * | 2008-09-02 | 2011-06-23 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of | Method for detection of antigen-specific antibodies in biological samples |
US20140274784A1 (en) * | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Hycor Biomedical, Inc. | Automated immunoanalyzer system for performing diagnostic assays for allergies and autoimmune diseases |
Cited By (19)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2019169799A1 (zh) * | 2018-03-07 | 2019-09-12 | 深圳市伯劳特生物制品有限公司 | 一种生物素化的insulin抗原及其生物素化工艺 |
CN109142750A (zh) * | 2018-08-14 | 2019-01-04 | 江苏浩欧博生物医药股份有限公司 | 一种测定抗组蛋白抗体IgG的试剂盒及检测方法 |
CN109142750B (zh) * | 2018-08-14 | 2021-10-22 | 江苏浩欧博生物医药股份有限公司 | 一种测定抗组蛋白抗体IgG的试剂盒及检测方法 |
CN109212191A (zh) * | 2018-09-27 | 2019-01-15 | 郑州安图生物工程股份有限公司 | 一种用于检测细胞角蛋白19片段的试剂盒 |
CN110320087A (zh) * | 2019-07-30 | 2019-10-11 | 河南赛诺特生物技术有限公司 | 一种含色素组织免疫组化染色试剂盒及染色方法 |
CN110320087B (zh) * | 2019-07-30 | 2021-03-02 | 河南赛诺特生物技术有限公司 | 一种含色素组织免疫组化染色试剂盒及染色方法 |
CN110596371A (zh) * | 2019-09-20 | 2019-12-20 | 郑州安图生物工程股份有限公司 | 一种全自动化学发光测定仪磁珠回收率和试剂针精密性评估方法以及试剂盒 |
CN110596371B (zh) * | 2019-09-20 | 2023-04-07 | 郑州安图生物工程股份有限公司 | 一种全自动化学发光测定仪磁珠回收率和试剂针精密性评估方法以及试剂盒 |
CN111007256A (zh) * | 2019-12-10 | 2020-04-14 | 迪瑞医疗科技股份有限公司 | 钙调素化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法 |
CN111272999B (zh) * | 2020-02-17 | 2022-11-22 | 珠海丽珠试剂股份有限公司 | 抗原偶联磁微粒及其制备方法、抗U1-snRNP抗体的检测方法和试剂盒 |
CN111272999A (zh) * | 2020-02-17 | 2020-06-12 | 珠海丽珠试剂股份有限公司 | 抗原偶联磁微粒及其制备方法、抗U1-snRNP抗体的检测方法和试剂盒 |
CN113447648A (zh) * | 2021-07-01 | 2021-09-28 | 浙江大学医学院附属儿童医院 | 检测抗富含丝氨酸/精氨酸剪接因子9-IgG抗体的试剂盒 |
CN113447648B (zh) * | 2021-07-01 | 2022-04-19 | 浙江大学 | 检测抗富含丝氨酸/精氨酸剪接因子9-IgG抗体的试剂盒 |
CN113447658A (zh) * | 2021-07-01 | 2021-09-28 | 浙江大学医学院附属儿童医院 | 一种检测抗过氧化物还原酶-1-IgG抗体的试剂盒 |
CN114152741B (zh) * | 2021-11-18 | 2022-08-19 | 上海北昂医药科技股份有限公司 | 一种提高有效微珠比例的dELISA样品及其制备与检测方法 |
CN114152741A (zh) * | 2021-11-18 | 2022-03-08 | 上海北昂医药科技股份有限公司 | 一种提高有效微珠比例的dELISA样品及其制备与检测方法 |
CN114594245A (zh) * | 2022-01-26 | 2022-06-07 | 浙江莱阅病理诊断科技有限公司 | 一种全自动免疫组化染色机适配的清洗缓冲液及其制备方法 |
CN116148463A (zh) * | 2022-09-08 | 2023-05-23 | 浙江省血液中心 | 一种磁珠-抗体-膜糖蛋白复合物、应用及试剂盒 |
CN115656154A (zh) * | 2022-10-26 | 2023-01-31 | 广东优尼德生物科技有限公司 | 一种基于重组rnp多抗原的抗rnp抗体化学发光检测试剂盒 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP3278109A4 (en) | 2018-08-15 |
CA2981455A1 (en) | 2016-10-06 |
AU2015389978A1 (en) | 2017-09-28 |
WO2016159960A1 (en) | 2016-10-06 |
EP3278109A1 (en) | 2018-02-07 |
JP2018510354A (ja) | 2018-04-12 |
HK1248804A1 (zh) | 2018-10-19 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN107548461A (zh) | 用于执行自身免疫性疾病和感染性疾病的诊断性测定的自动化的免疫分析仪系统 | |
US10739262B2 (en) | Automated immunoanalyzer system for performing diagnostic assays for autoimmune and infectious diseases | |
CN104764888A (zh) | 一种抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒 | |
US20210190768A1 (en) | Methods for depletion and enrichment | |
JP2023017986A (ja) | 自己抗体の直接イムノアッセイ測定法 | |
Tešija Kuna et al. | Comparison of diagnostic accuracy for eight SARS-CoV-2 serological assays | |
JP7194746B2 (ja) | HBsAgの定量検出のためのキット及び方法 | |
US20230091170A1 (en) | Enrichment of antigen-specific antibodies for analytic and therapeutic use | |
Duverlie et al. | A nylon membrane enzyme immunoassay for rapid diagnosis of influenza A infection | |
WO2010123083A1 (ja) | マウス肝炎ウイルス由来ポリペプチドおよび/またはセンダイウイルス由来ポリペプチド、これらを用いたマウス肝炎ウイルス感染および/またはセンダイウイルス感染検査キット、ならびにマウス肝炎ウイルス感染および/またはセンダイウイルス感染の検出方法 | |
Bernuz et al. | Magnetic Separation of Cell-Secreted Vesicles with Tailored Magnetic Particles and Downstream Applications | |
US20220236272A1 (en) | Synthrocyte: erythrocyte-mimicking reagent and fast methods for pathogen characterization and serology testing | |
JP2008145181A (ja) | パルボウイルスb19の検出法 | |
Ohnishi | Establishment and characterization of monoclonal antibodies against SARS coronavirus | |
JP2010254601A (ja) | マウス肝炎ウイルス由来ポリペプチドおよびこれを用いたマウス肝炎ウイルス感染検査キットならびにマウス肝炎ウイルス感染の検出方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
REG | Reference to a national code |
Ref country code: HK Ref legal event code: DE Ref document number: 1248804 Country of ref document: HK |
|
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20180105 |