CN110596371B - 一种全自动化学发光测定仪磁珠回收率和试剂针精密性评估方法以及试剂盒 - Google Patents

一种全自动化学发光测定仪磁珠回收率和试剂针精密性评估方法以及试剂盒 Download PDF

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Abstract

本发明涉及IVD技术领域，公开了一种全自动化学发光测定仪磁珠回收率和试剂针精密性评估方法以及试剂盒。本发明方法将酶标磁珠原液用封闭液稀释成浓度逐渐降低的多个校准品，酶标磁珠原液表示100％回收率，各校准品浓度与标记酶的磁珠原液浓度的百分比即为各校准品的回收率；发光仪不进行洗涤步骤测定酶标磁珠原液和各校准品的发光值，发光值与回收率百分比建立线性拟合直线；然后进行洗涤步骤测定酶标磁珠原液的发光值，代入线性拟合直线，获得磁珠回收率；将标酶标磁珠原液加入试剂针对应的容器中，不进行洗涤检测发光值，重复测试多次，以CV变异值评估其精密性。所述方法能够快速、可靠、准确地检测磁珠的回收率及试剂针加样精密性。

Description

一种全自动化学发光测定仪磁珠回收率和试剂针精密性评估方法以及试剂盒
技术领域
本发明涉及生物医药IVD技术领域，具体涉及一种全自动化学发光测定仪磁珠回收率和试剂针精密性评估方法以及试剂盒。
背景技术
磁珠是近年来IVD行业使用比较广泛的原料之一，磁珠一般具有超顺磁性，四氧化三铁为内核，惰性高分子材料为外壳，且在外壳上可标记抗体、羧基、氨基等。
上述具有超顺磁性的磁珠在外加电场作用下能够进行定向移动进而达到分离的目的，可以用于分离、检测、纯化特异性分子，因此越来越广泛用于免疫学、病理、生理、药理、微生物、生化以及分子遗传学等各个领域，进行免疫检测、细胞分离及生物大分子纯化。
使用磁珠进行免疫检测时，需对磁珠和免疫复合物进行洗涤，然后进行磁铁分析，期间必然会引起磁珠的损失，磁珠损失后可能会引起免疫检测信号值的降低，势必引起测试数据的准确性，因此对全自动化学发光测定仪洗涤过程中磁珠损失的监控尤为重要。全自动化学发光测定仪进行免疫检测时试剂的加样精密性也会对整体试剂盒变异有很大影响，因此试剂针的加样准确度也尤为重要。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种全自动化学发光测定仪磁珠回收率及试剂针精密性评估方法，使得所述方法能够快速、可靠、准确地检测磁珠的回收率及试剂针加样精密性；
本发明的另外一个目的在于提供基于上述评估方法的试剂盒产品。
为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种全自动化学发光测定仪磁珠回收率及试剂针精密性评估方法，包括：
步骤1、将酶标磁珠原液用封闭液稀释成浓度逐渐降低的多个校准品，酶标磁珠原液表示100％回收率，各校准品浓度与标记酶的磁珠原液浓度的百分比即为各校准品的回收率；全自动化学发光仪不进行洗涤步骤测定酶标磁珠原液和各校准品的发光值，发光值与回收率百分比建立线性拟合直线；全自动化学发光仪进行洗涤步骤测定酶标磁珠原液的发光值，代入线性拟合直线，获得全自动化学发光测定仪磁珠回收率；
步骤2、将标酶标磁珠原液加入试剂针对应的容器中，不进行洗涤检测发光值，重复测试多次，以CV变异值评估其精密性；
其中，步骤1和步骤2为并列关系。
作为优选，所述酶标磁珠原液的配制方法如下：
取磁珠原液用磷酸盐溶液洗涤，加入活化剂震荡混匀活化，活化后采用缓冲溶液洗涤，加入酶和缓冲溶液反应，反应完全后采用封闭液洗涤并定容，获得酶标磁珠原液。
在本发明具体实施方式中，所述酶标磁珠原液的配制方法为：取30ul的100mg/ml磁珠原液用磷酸盐溶液洗涤4次，加入活化剂震荡混匀活化60min，活化后采用缓冲溶液洗涤2次，按一定的比例加入5mg/mL酶和缓冲溶液反应一段时间，反应完全后采用封闭剂洗涤5次，用封闭液定容至3ml，试剂浓度为1mg/mL，获得酶标磁珠原液。
在1mg/mL酶标磁珠原液基础上，依次用封闭液稀释成0.9mg/mL、0.8mg/mL、0.7mg/mL、0.6mg/mL，0.5mg/mL，和酶标磁珠原液1mg/mL即为回收率为90％、80％、70％、60％、50％、100％组成6点校准品。
作为优选，所述磁珠原液为羧基磁珠、氨基磁珠、羟基磁珠、环氧基磁珠和甲苯磺酰基磁珠一种；所述活化剂为EDC、DSC、戊二醛、CDI、硫酸铵的一种；所述酶溶液为辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶和吖啶酯的一种；所述缓冲溶液为磷酸盐、碳酸盐、醋酸盐的一种，PH值范围为4.75～9.5，较佳地PH＝4.75；所述酶和缓冲溶液的体积比为1:2～6；所述反应时间为30～120min；所述封闭剂为市售全自动化学发光测定的洗涤液。
本发明所述试剂针为全自动化学发光测定仪的样本针、磁珠针或酶结合物针。
针对本发明提供的评估方法，本发明还提供了一种评估全自动化学发光测定仪磁珠回收率及试剂针精密性的试剂盒，包括酶标磁珠原液、校准品和封闭液；
其中，所述校准品以酶标磁珠原液为基础用封闭液稀释而成，酶标磁珠原液表示100％回收率，各校准品浓度与标记酶的磁珠原液浓度的百分比即为各校准品的回收率。
本发明方法一种全自动化学发光测定仪磁珠回收率和试剂针精密性评估方法以及试剂盒，评估方法能够快速便捷地、准确地测定磁珠在全自动化学发光测定仪上回收率及评估仪器试剂针精密性；试剂盒具有操作简便、稳定性好的优点。使用所述评估方法和试剂盒对后期样本异常分析，评估仪器的状态提供有力的证据。
附图说明
图1所示为本发明评估方法的线性拟合直线。
具体实施方式
本发明公开了一种全自动化学发光测定仪磁珠回收率和试剂针精密性评估方法以及试剂盒，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明所述评估方法和试剂盒已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述评估方法和试剂盒进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明所用酶为辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶和吖啶酯的一种，之后仪器加入对应底物是鲁米诺、异鲁米诺和强碱促使其发光。
以下就本发明所提供的一种全自动化学发光测定仪磁珠回收率和试剂针精密性评估方法以及试剂盒做进一步说明。
实施例1：本发明所述试剂盒的制备
试剂盒组分包括酶标磁珠原液、校准品、封闭液(市售全自动化学发光测定的洗涤液，下同)；取30ul的100mg/ml羧基磁珠原液用磷酸盐溶液洗涤4次，加入EDC震荡混匀活化60min，活化后采用PH＝4.75醋酸盐缓冲溶液洗涤2次，按体积比1:6加入5mg/mL酶和缓冲溶液反应120min，反应完全后采用封闭液洗涤5次，用封闭液定容至3ml，试剂浓度为1mg/mL，获得酶标羧基磁珠原液。将酶标羧基磁珠原液依次用封闭液稀释成0.9mg/mL、0.8mg/mL、0.7mg/mL、0.6mg/mL，0.5mg/mL，和酶标羧基磁珠原液1mg/mL即为回收率为90％、80％、70％、60％、50％、100％组成6点校准品。
实施例2：本发明所述试剂盒的制备
试剂盒组分包括磁珠原液、校准品、封闭液；取30ul的100mg/mL氨基磁珠原液用磷酸盐溶液洗涤4次，加入戊二醛震荡混匀活化60min，活化后采用PH＝7.2磷酸盐缓冲溶液洗涤2次，按体积比1:4加入5mg/mL酶和缓冲溶液反应60min，反应完全后采用封闭液洗涤5次，用封闭液定容至3ml，试剂浓度为1mg/mL，获得酶标氨基磁珠原液。将酶标氨基磁珠原液用封闭液稀释成0.9mg/mL、0.8mg/mL、0.7mg/mL、0.6mg/mL，0.5mg/mL，和酶标氨基磁珠原液1mg/mL即为回收率为90％、80％、70％、60％、50％、100％组成6点校准品。
实施例3：本发明所述试剂盒的制备
试剂盒组分包括磁珠原液、校准品、封闭液；取30ul的100mg/mL羟基磁珠原液用磷酸盐溶液洗涤4次，加入DSC试剂震荡混匀活化60min，活化后采用PH＝9.5碳酸盐缓冲溶液洗涤2次，按体积比1:2加入5mg/mL酶和缓冲溶液反应60min，反应完全后采用封闭液洗涤5次，用封闭液定容至3ml，试剂浓度为1mg/mL，获得酶标羟基磁珠原液。将酶标羟基磁珠原液依次用封闭液稀释成0.9mg/mL、0.8mg/mL、0.7mg/mL、0.6mg/mL，0.5mg/mL，和酶标羟基磁珠原液1mg/mL即为回收率为90％、80％、70％、60％、50％、100％组成6点校准品。
实施例4：应用试剂盒评估磁珠回收率和试剂针精密度
磁珠回收率测试：将实施例1试剂盒进行全自动化学发光测定仪进行测试，测试前6点校准品充分混匀，仪器进行加样后，取下反应杯，进行光源检测，测定校准品的发光值；根据校准品发光值与回收率百分比建立线性拟合直线如图1，数据见表1；采用正常测试模式(经过洗涤步骤)测试酶标羧基磁珠原液的发光值，发光值为5465065，计算其回收率为79.32％；
全自动化学发光测定仪试剂针精密性测试：将酶标羧基磁珠混悬液加入样本针(磁珠针、酶结合物针方法相同)对应的试剂瓶中，测试之前将磁珠混悬液混匀，进行光源检测发光值(不洗涤)，重复测试10次，以评估其精密性。试剂针精密性计算其10次测试的CV变异，如表2，其精密性CV为1.89％。
表1
Figure BDA0002209312920000051
表2
Figure BDA0002209312920000052
Figure BDA0002209312920000061
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (7)

1.一种全自动化学发光测定仪磁珠回收率及试剂针精密性评估方法，其特征在于，包括：
步骤1、将酶标磁珠原液用封闭液稀释成浓度逐渐降低的多个校准品，酶标磁珠原液表示100％回收率，各校准品浓度与标记酶的磁珠原液浓度的百分比即为各校准品的回收率；全自动化学发光仪不进行洗涤步骤测定酶标磁珠原液和各校准品的发光值，发光值与回收率百分比建立线性拟合直线；全自动化学发光仪进行洗涤步骤测定酶标磁珠原液的发光值，代入线性拟合直线，获得全自动化学发光测定仪磁珠回收率；
步骤2、将酶标磁珠原液加入试剂针对应的容器中，不进行洗涤检测发光值，重复测试多次，以CV变异值评估其精密性；
其中，步骤1和步骤2为并列关系；
所述酶标磁珠原液的配制方法如下：
取磁珠原液用磷酸盐溶液洗涤，加入活化剂震荡混匀活化，活化后采用缓冲溶液洗涤，加入酶和缓冲溶液反应，反应完全后采用封闭液洗涤并定容，获得酶标磁珠原液；
所述封闭液为市售全自动化学发光测定的洗涤液；
所述酶和缓冲溶液的体积比为1:2～6。
2.根据权利要求1所述评估方法，其特征在于，所述酶为辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶或吖啶酯。
3.根据权利要求1所述评估方法，其特征在于，所述磁珠为羧基磁珠、氨基磁珠、羟基磁珠、环氧基磁珠或甲苯磺酰基磁珠。
4.根据权利要求1所述评估方法，其特征在于，所述缓冲溶液为磷酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液或醋酸盐缓冲液，pH值范围为4 .75～9 .5。
5.根据权利要求1所述评估方法，其特征在于，所述活化剂为EDC、DSC、戊二醛、CDI或硫酸铵。
6.根据权利要求1所述评估方法，其特征在于，所述试剂针为全自动化学发光测定仪的样本针、磁珠针或酶结合物针。
7.一种评估全自动化学发光测定仪磁珠回收率及试剂针精密性的试剂盒，其特征在于，包括酶标磁珠原液、校准品和封闭液；
其中，所述校准品以酶标磁珠原液为基础用封闭液稀释而成，酶标磁珠原液表示100％回收率，各校准品浓度与标记酶的磁珠原液浓度的百分比即为各校准品的回收率；
所述酶标磁珠原液的配制方法如下：
取磁珠原液用磷酸盐溶液洗涤，加入活化剂震荡混匀活化，活化后采用缓冲溶液洗涤，加入酶和缓冲溶液反应，反应完全后采用封闭液洗涤并定容，获得酶标磁珠原液；
所述封闭液为市售全自动化学发光测定的洗涤液；
所述酶和缓冲溶液的体积比为1:2～6。
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