CN107525933A - 一种d‑二聚体的测定试剂盒及其应用方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种D‑二聚体的测定试剂盒，其特征在于，包括D‑二聚体抗体酶结合物、D‑二聚体抗体包被板、校准品、质控品、浓缩洗涤液、洗涤稀释液、第一发光试剂和第二发光试剂，D‑二聚体抗体酶结合物中D‑二聚体抗体浓度为2.5ug/mL，D‑二聚体抗体包被板为白色不透明的96孔聚苯乙烯塑料板，D‑二聚体标准品的标准品浓度分别为0ng/mL，50ng/mL，100ng/mL，200ng/mL，400ng/mL，D‑二聚体标准品的稀释液采用质量分数为0.9％的生理盐水。该测定试剂具有准确度高、线性相关良好、灵敏度高、批内和批间精密度差异小、稳定性好等优点。

Description

一种D-二聚体的测定试剂盒及其应用方法
技术领域
本发明涉及体外诊断试剂技术领域，尤其是一种用于检测血清中D-二聚体含量的检测试剂以及该试剂的应用方法。
背景技术
目前，D-二聚体的含量检测是深静脉血栓，肺栓塞，弥漫性血管内凝血等疾病的关键指标。这些疾病会造成体内凝血系统或纤溶系统的激活，从而造成D-二聚体水平的升高，而且这种凝血系统或纤溶系统的激活与疾病的病期、严重程度、治疗情况密切相关，因而在这些疾病中检测D-二聚体的水平，可以作为疾病分期、判断预后和指导治疗的一项评判标志。
目前，应用较多的D-二聚体检测方法主要有：酶联免疫吸附试验、乳胶颗粒凝集试验、免疫过滤胶体金染色法、双抗体RBC凝集法和放免法。临床最常用的是：酶联免疫吸附试验、乳胶颗粒凝集试验和免疫过滤胶体金染色法，其中乳胶颗粒凝集试验法测定速度快，但敏感度不如酶联免疫吸附试验法；酶联免疫吸附试验法敏感度高，但检测时耗时较长。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明提供了一种检测D-二聚体的测定试剂盒，该测定试剂具有准确度高、线性相关良好、灵敏度高、批内和批间精密度差异小、稳定性好等优点。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是：一种D-二聚体的测定试剂盒，其特征在于，包括D-二聚体抗体酶结合物、D-二聚体抗体包被板、校准品、质控品、浓缩洗涤液、洗涤稀释液、第一发光试剂和第二发光试剂，所述D-二聚体抗体酶结合物中D-二聚体抗体浓度为2.5ug/mL，D-二聚体抗体包被板为白色不透明的96孔聚苯乙烯塑料板，D-二聚体标准品的校准品浓度分别为0ng/mL，50ng/mL，100ng/mL，200ng/mL，400ng/mL，D-二聚体标准品的稀释液采用质量分数为0.9％的生理盐水，质控品包括D-二聚体抗原、质量分数为0.1％的BSA、质量分数为0.9％的氯化钠、10mM的pH为7.4的磷酸盐缓冲液、质量分数为0.05％的PC-300，浓缩洗涤溶液包括150mM的pH＝7.0～8.0的磷酸盐缓冲液、质量分数为0.05％的PC-300，所述150mM的pH＝7.0～8.0的磷酸盐缓冲液中含有体积分数为0.1％的Brij-35，洗涤稀释液采用由磷酸氢二钠、磷酸二氢钾组成的磷酸盐缓冲液，浓缩洗涤溶液包括150mM的pH＝7.0～8.0的磷酸盐缓冲液、质量分数为0.05％的PC-300，所述150mM的pH＝7.0～8.0的磷酸盐缓冲液中含有体积分数为0.1％的Brij-35，洗涤稀释液采用由磷酸氢二钠、磷酸二氢钾组成的磷酸盐缓冲液，所述第一发光试剂包括20mM的3-氨基邻苯二甲酰肼、15g/L的甘氨酸、5mM的硫酸镁的100mM碳酸钾，第二发光试剂包括体积分数为10％的过氧化氢、15mM的磷酸缓冲液。
本发明的另一个发明目的是提供了一种D-二聚体的测定试剂盒的应用方法，其特征在于：可应用于化学发光仪中测定血清中D-二聚体的含量，检测主波长为450nm。
采用上述方案，本发明中的测定试剂具有准确度高、线性相关良好、灵敏度高、批内和批间精密度差异小、稳定性好等优点。化学发光免疫分析是快速发展起来的灵敏度相对其他方法较高的一种检测技术；而采用该测定试剂利用化学发光法的方式检测血液血清中D-二聚体的含量，还具有灵敏度高，操作简单，线性范围宽等优点。
下面结合附图对本发明作进一步描述。
附图说明
附图1为本发明具体实施例2中试剂理论浓度与实际浓度检测结果相关分析图，采用化学发光仪，对5个校准品进行测定，并对其进行相关分析，其中相关系数：r2＝0.999，线性方程为：y＝1.000x+0.004。
具体实施方式
本发明的具体实施例采用的D-二聚体的测定试剂盒，其包括D-二聚体抗体酶结合物、D-二聚体抗体包被板、校准品、质控品、浓缩洗涤液、洗涤稀释液、第一发光试剂和第二发光试剂，上述试剂均置于一试剂盒中，并储存于4℃冰箱中，其中，D-二聚体抗体酶结合物中D-二聚体抗体浓度为2.5ug/mL，D-二聚体抗体包被板为白色不透明的96孔聚苯乙烯塑料板，D-二聚体标准品的校准品浓度分别为0ng/mL，50ng/mL，100ng/mL，200ng/mL，400ng/mL，D-二聚体标准品的稀释液采用质量分数为0.9％的生理盐水，质控品包括D-二聚体抗原、质量分数为0.1％的BSA、质量分数为0.9％的氯化钠、10mM的pH为7.4的磷酸盐缓冲液、质量分数为0.05％的PC-300，浓缩洗涤溶液包括150mM的pH＝7.0～8.0的磷酸盐缓冲液、质量分数为0.05％的PC-300，所述150mM的pH＝7.0～8.0的磷酸盐缓冲液中含有体积分数为0.1％的Brij-35，洗涤稀释液采用由磷酸氢二钠、磷酸二氢钾组成的磷酸盐缓冲液，浓缩洗涤溶液包括150mM的pH＝7.0～8.0的磷酸盐缓冲液、质量分数为0.05％的PC-300，所述150mM的pH＝7.0～8.0的磷酸盐缓冲液中含有体积分数为0.1％的Brij-35，洗涤稀释液采用由磷酸氢二钠、磷酸二氢钾组成的磷酸盐缓冲液，第一发光试剂包括20mM的3-氨基邻苯二甲酰肼、15g/L的甘氨酸、5mM的硫酸镁的100mM碳酸钾，第二发光试剂包括体积分数为10％的过氧化氢、15mM的磷酸缓冲液。
具体实施例1
按照下述操作程序通过对质控品的测定，来评价该试剂盒的准确度。
自4℃冰箱中取出试剂盒，室温平衡15分钟，然后按下表程序进行操作：
D-二聚体加样测定程序表
单位：μL
注：待测样品的浓度计算按下列方法进行：用化学发光分析仪中的数据处理程序(拟合类型：线性拟合，坐标选择：log(X)-log(Y)，实验方法：夹心法。)直接给出校准曲线及样品的浓度值。
试剂盒的准确度结果如下：
通过实际浓度与理论浓度比较结果表明，二者差异较小并且在±5％之内。
具体实施例2
线性、灵敏度的检测：利用实施例1中试剂组成和相同的操作程序，利用该浓度的校准品定标之后，对其当做样本分别进行，检测结果如下理论浓度与实际浓度差异较小，线性相关良好。通过上述不同浓度的反应曲线，根据光子数的变化，计算其灵敏度为0.001(ng/mL)
具体实施例3
精密度的检测：利用实施例1中试剂组成和相同的操作程序，分别对其批内精密度和批间精密度的进行测定，结果如下：
批内精密度：对某一血清样本测定10次，对下述数据计算，批内精密度差异结果为0.79％，测得差异较小。
批间精密度：选取3个不同批号的试剂盒，分别对某一血清样本测定10次，结果如下表格所示，分别算出3批浓度的差异结果为0.67％，1.13％，1.02％；3个不同批号的试剂盒相比较，差异变化较小。
具体实施例4
稳定性的检测：利用实施例1中试剂组成和相同的操作程序，采用37℃下加速破坏稳定性试验的测试，周期为1周，测得稳定性结果如下表：
根据上述表中不同天数之间的光子数比较，光子数之间变化差异较小，因此在加速热稳定破坏中，对于试剂的稳定性影响较小。
本发明不局限于上述具体实施方式，本领域一般技术人员根据本发明公开的内容，可以采用其他多种具体实施方式实施本发明的，或者凡是采用本发明的设计结构和思路，做简单变化或更改的，都落入本发明的保护范围。

Claims (2)

1.一种D-二聚体的测定试剂盒，其特征在于，包括D-二聚体抗体酶结合物、D-二聚体抗体包被板、校准品、质控品、浓缩洗涤液、洗涤稀释液、第一发光试剂和第二发光试剂，
所述D-二聚体抗体酶结合物中D-二聚体抗体浓度为2.5ug/mL，
D-二聚体抗体包被板为白色不透明的96孔聚苯乙烯塑料板，
D-二聚体标准品的校准品浓度分别为0ng/mL，50ng/mL，100ng/mL，200ng/mL，400ng/mL，D-二聚体标准品的稀释液采用质量分数为0.9％的生理盐水，
质控品包括D-二聚体抗原、质量分数为0.1％的BSA、质量分数为0.9％的氯化钠、10mM的pH为7.4的磷酸盐缓冲液、质量分数为0.05％的PC-300，
浓缩洗涤溶液包括150mM的pH＝7.0～8.0的磷酸盐缓冲液、质量分数为0.05％的PC-300，所述150mM的pH＝7.0～8.0的磷酸盐缓冲液中含有体积分数为0.1％的Brij-35，洗涤稀释液采用由磷酸氢二钠、磷酸二氢钾组成的磷酸盐缓冲液，
所述第一发光试剂包括20mM的3-氨基邻苯二甲酰肼、15g/L的甘氨酸、5mM的硫酸镁的100mM碳酸钾，第二发光试剂包括体积分数为10％的过氧化氢、15mM的磷酸缓冲液。
2.一种如权利要求1所述的D-二聚体的测定试剂盒的应用方法，其特征在于：可应用于化学发光仪中测定血清中D-二聚体的含量，检测主波长为450nm。
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