CN107522684B - 一种高含量鳄梨果核原花青素的制备方法及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种高含量鳄梨果核原花青素的制备方法及其应用，属于鳄梨资源综合利用与开发技术领域。其包括如下步骤：先得到鳄梨果核粗提物；再将鳄梨果核粗提取物富集得到富含原花青素的提取物；最后将得到的富含原花青素的提取物，经高速逆流色谱纯化，以高速逆流分离体系进行分离，收集流出液，浓缩干燥，即得到高含量的鳄梨果核原花青素。本发明还公开了由上述方法制备得到的高含量鳄梨果核原花青素及其应用。本发明得到的鳄梨果核原花青素的含量以原花青素B2当量计，不低于90％，其降糖作用优于阿卡波糖，对自由基清除能力与维生素C的作用相当或更好，具有高活性降糖、清除自由基和抗氧化等多种生物活性功效。
Description
技术领域
本发明涉及一种高含量鳄梨果核原花青素的制备方法及其应用，属于鳄梨资源综合利用与开发技术领域。
背景技术
鳄梨(Persea Americana Mill)又名油梨、牛油果、幸福果等，是一种新兴的热带、亚热带名果，富含人体必需的脂肪酸、蛋白质、矿物质以及各种维生素，在中美洲(原产地)享有“生命之源”的美誉。除了果肉含有丰富的脂肪酸外，鳄梨的其它部位，如果皮、果核中还含有丰富的抗氧化成分，均具有较高的应用开发价值前景。
目前，鳄梨果核活性成分的分析及抗氧化的研究已有报导，但纯化工艺鲜有涉及。中国专利申请号为201410784044.8的《一种从油梨仁中综合提取蛋白、多糖及多酚的方法》公开了从油梨仁中综合提取蛋白、多糖及多酚的方法。该方法中以纯水或10-50％乙醇的水溶液作为溶媒，对鳄梨粉末进行提取，提取液再经D3520树脂进行分步纯化得到多酚提取物，但该方法并未提及原花青素的提取纯化工艺。
鉴于此，有必要提供一种高含量鳄梨果核原花青素、制备方法及其应用，以弥补现有技术的不足。
发明内容
本发明的目的之一，是提供一种高含量鳄梨果核原花青素的制备方法。本发明得到的鳄梨果核原花青素的含量以原花青素B2当量计，不低于90％，其降糖作用优于阿卡波糖，对自由基清除能力与维生素C的作用相当或更好，具有高活性降糖、清除自由基和抗氧化等多种生物活性功效。
本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种高含量鳄梨果核原花青素的制备方法，包括如下步骤：
步骤1：向鳄梨果核粉末加入水或质量百分数为60％的乙醇或质量百分数为60％的甲醇水溶液，超声提取2～3次，每次30～60mi n，料液质量比为1:(10～30)，合并提取液，浓缩，干燥后，得到鳄梨果核粗提物；
步骤2：步骤1得到的鳄梨果核粗提取物经以下任一方法富集得到富含原花青素的提取物，
方法1：以一种或多种有机溶剂组成的两相体系，将步骤1得到的鳄梨果核粗提取物进行萃取，收集上层萃取液，干燥后，得到富含原花青素的提取物；
方法2：将步骤1得到的鳄梨果核粗提取物经大孔树脂吸附，以质量百分数为5-10％的乙醇水溶液去杂，收集质量百分数为55-75％的乙醇洗脱液，干燥后，得到富含原花青素的提取物；
方法3：将步骤1得到的鳄梨果核粗提取物经C18柱分离，以质量百分数为5-10％的乙醇水溶液去杂，收集质量百分数为20-30％的乙醇洗脱液，干燥后，得到富含原花青素的提取物；
步骤3：将步骤2得到的富含原花青素的提取物，经高速逆流色谱纯化，以乙酸乙酯、正丁醇、乙醇和水按体积比40:5:(0-20):50的混合液作为高速逆流分离体系，进行分离，收集流出液，浓缩干燥，即得到高含量的鳄梨果核原花青素。
本发明的原理是：以步骤1的极性溶剂(水、乙醇或甲醇)将原花青素从鳄梨果核中提取出来，通过步骤2相似相溶原理利用有机溶剂对原花青素进行富集，或者利用大孔树脂、C18等材料的分离特性富集原花青素；鳄梨果核中的原花青素在中等极性的两相溶剂体系中具有较适宜的分配系数，在步骤3的两相溶剂体系(乙酸乙酯、正丁醇、乙醇和水的混合液)中，通过高速逆流色谱分离，实现原花青素的富集。
在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。
进一步，步骤1所述鳄梨果核粉末，是鳄梨果核经粉碎、干燥、过20-40目筛所得。
采用上述进一步的有益效果是：适当的粉碎度有利于原花青素的提取和过滤。
进一步，步骤1和2所述干燥均为喷雾干燥、真空干燥或冷冻干燥中的一种；干燥至含水率为10-15％。
采用上述进一步的有益效果是：避免鳄梨果核中的原花青素因长时间高温发生氧化或聚合。
进一步，步骤2所述两相溶剂体系为乙酸乙酯和水按体积比1:1的混合液或者乙酸乙酯、正丁醇和水按体积比40:(5～20):50的混合液。
进一步，步骤2所述大孔树脂的型号为HPD826、D101或AB-8中的一种。
其中，HPD826的平均孔径90-100A°，比表面积500-600m2/g；D101的平均孔径90-100A°，比表面积550-650m2/g；AB-8的平均孔径130-140A°，比表面积480-520m2/g。
采用上述进一步的有益效果是：上述树脂能够有效富集原花青素，并且易于规模化、连续化生产。
进一步，步骤3所述高速逆流色谱纯化所用的溶液体系为乙酸乙酯、正丁醇、乙醇和水按体积比40:5:10:50的混合液。
本发明的目的之二，是提供由上述方法制备得到的高含量鳄梨果核原花青素。
本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种由上述方法制备的高含量鳄梨果核原花青素。
本发明的目的之三，是提供上述鳄梨果核原花青素的应用。本发明得到的鳄梨果核原花青素提取物可应用于制备治疗糖尿病药物。
本发明解决上述技术问题的技术方案如下：上述高含量鳄梨果核原花青素在制备治疗糖尿病药物上的应用。
本发明的有益效果是：
(1)本发明得到的鳄梨果核原花青素的含量以原花青素B2当量计，不低于90％，其降糖作用优于阿卡波糖，对自由基清除能力与维生素C的作用相当或更好，具有高活性降糖、清除自由基和抗氧化等多种生物活性功效。
(2)本发明的制备方法简单，市场前景广阔，适合工业化生产。
(3)本发明得到的鳄梨果核原花青素提取物可应用于制备治疗糖尿病药物。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
实施例1：
本实施例的高含量鳄梨果核原花青素的制备方法，包括如下步骤：
步骤1：鳄梨果核经粉碎、干燥、过20目筛得到鳄梨果核粉末，加入水，超声提取2次，每次60min，料液质量比为1:10，合并提取液，浓缩，喷雾干燥至含水率为10％后，得到鳄梨果核粗提物；
步骤2：以乙酸乙酯、正丁醇和水按体积比40:(5～20):50的混合液为两相溶剂体系，将步骤1得到的鳄梨果核粗提取物进行萃取，收集上层萃取液，喷雾干燥至含水率为10％后，得到富含原花青素的提取物；
步骤3：将步骤2得到的富含原花青素的提取物，经高速逆流色谱纯化，以乙酸乙酯、正丁醇和水按体积比40:5:50的混合液作为高速逆流分离体系，进行分离，收集流出液，浓缩，喷雾干燥至含水率为10％后，即得到高含量的鳄梨果核原花青素。
本实施例得到的高含量的鳄梨果核原花青素中原花青素含量测定，采用正丁醇-盐酸显色法。以原花青素B2为对照品，原花青素B2当量计，为90.8％。
一种由上述方法制备的高含量鳄梨果核原花青素。
上述高含量鳄梨果核原花青素在制备治疗糖尿病药物上的应用。
实施例2：
本实施例的一种高含量鳄梨果核原花青素的制备方法，包括如下步骤：
步骤1：鳄梨果核经粉碎、干燥、过30目筛得到鳄梨果核粉末，加入质量百分数为60％的乙醇，超声提取3次，每次30min，料液质量比为1:20，合并提取液，浓缩，真空干燥至含水率为12％后，得到鳄梨果核粗提物；
步骤2：步骤1得到的鳄梨果核粗提取物经大孔树脂HPD826吸附，以质量百分数为5％的乙醇水溶液去杂，收集质量百分数为55％的乙醇洗脱液，真空干燥至含水率为12％后，得到富含原花青素的提取物；
步骤3：将步骤2得到的富含原花青素的提取物，经高速逆流色谱纯化，以乙酸乙酯、正丁醇、乙醇和水按体积比40:5:10:50的混合液作为高速逆流分离体系，进行分离，收集流出液，浓缩，真空干燥至含水率为12％，即得到高含量的鳄梨果核原花青素。
本实施例得到的高含量的鳄梨果核原花青素中原花青素含量测定，方法同实施例1，原花青素B2当量计，为96.2％。
一种由上述方法制备的高含量鳄梨果核原花青素。
上述高含量鳄梨果核原花青素在制备治疗糖尿病药物上的应用。
实施例3：
本实施例的一种高含量鳄梨果核原花青素的制备方法，包括如下步骤：
步骤1：鳄梨果核经粉碎、干燥、过40目筛得到鳄梨果核粉末，加入质量百分数为60％的甲醇水溶液，超声提取3次，每次40min，料液质量比为1:25，合并提取液，浓缩，冷冻干燥至含水率为15％后，得到鳄梨果核粗提物；
步骤2：将步骤1得到的鳄梨果核粗提取物经C18柱分离，以质量百分数为10％的乙醇水溶液去杂，收集质量百分数为30％的乙醇洗脱液，冷冻干燥至含水率为15％后，得到富含原花青素的提取物；
步骤3：将步骤2得到的富含原花青素的提取物，经高速逆流色谱纯化，以乙酸乙酯、正丁醇、乙醇和水按体积比40:5:20:50的混合液作为高速逆流分离体系，进行分离，收集流出液，浓缩，冷冻干燥至含水率为15％后，即得到高含量的鳄梨果核原花青素。
本实施例得到的高含量的鳄梨果核原花青素中原花青素含量测定，方法同实施例1，原花青素B2当量计，为92.4％。
一种由上述方法制备的高含量鳄梨果核原花青素。
上述高含量鳄梨果核原花青素在制备治疗糖尿病药物上的应用。
实施例4：
本实施例的高含量鳄梨果核原花青素的制备方法，包括如下步骤：
步骤1：鳄梨果核经粉碎、干燥、过20目筛得到鳄梨果核粉末，加入水，超声提取2次，每次60min，料液质量比为1:10，合并提取液，浓缩，喷雾干燥至含水率为12％后，得到鳄梨果核粗提物；
步骤2：以乙酸乙酯和水按体积比1:1的混合液为两相体系，将步骤1得到的鳄梨果核粗提取物进行萃取，收集上层萃取液，喷雾干燥至含水率为12％后，得到富含原花青素的提取物；
步骤3：将步骤2得到的富含原花青素的提取物，经高速逆流色谱纯化，以乙酸乙酯、正丁醇、乙醇和水按体积比40:5:15:50的混合液作为高速逆流分离体系，进行分离，收集流出液，浓缩，喷雾干燥至含水率为12％后，即得到高含量的鳄梨果核原花青素。
本实施例得到的高含量的鳄梨果核原花青素中原花青素含量测定，采用正丁醇-盐酸显色法。以原花青素B2为对照品，原花青素B2当量计，为91.7％。
一种由上述方法制备的高含量鳄梨果核原花青素。
上述高含量鳄梨果核原花青素在制备治疗糖尿病药物上的应用。
对比例1：
与实施例1不同的是，不包括步骤(3)，其余步骤都相同。得到的原花青素含量为54.7％。
对比例2：
与实施例2不同的是，不包括步骤(3)，其余步骤都相同。得到的原花青素含量为67.3％。
对比例3：
与实施例3不同的是，不包括步骤(3)，其余步骤都相同。得到的原花青素含量为74.5％。
对比例4：
与实施例4不同的是，不包括步骤(3)，其余步骤都相同。得到的原花青素含量为77.8％。
对比例5：降糖活性测定
采用4-硝基酚-α-D-吡喃葡萄糖苷(PNPG)为底物的降血糖筛选模型开展鳄梨果核原花青素的降血糖活性测定。以阿卡波糖为阳性对照。阿卡波糖是Ⅱ型糖尿糖的处方药，许多成分的降血糖活性筛选实验中常作用阳性对照。实施例1-4所得鳄梨果核原花青素提取物的降糖作用如表1所示。
表1实施例1-4所得鳄梨果核原花青素提取物的降糖能力评价
对比例6：鳄梨生物活性提取物清除自由基能力测定
采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼法(DPPH法)。以维生素C作为阳性对照，实施例1-4所得鳄梨果核原花青素提取物的清除自由基能力如表2所示。
表2实施例1-4所得鳄梨果核原花青素提取物的清除自由基能力评价
对比例7：鳄梨生物活性提取物总抗氧化能力测定
采用总抗氧化能力检测试剂盒法(FRAP法)。以维生素C为阳性对照，实施例1-4所得鳄梨果核原花青素提取物的抗氧化能力如表3所示。试剂盒购买于南京建成生物工程研究所。
表3实施例1-4所得鳄梨果核原花青素提取物的抗氧化能力评价
由此可见，本发明得到的鳄梨果核原花青素的含量以原花青素B2当量计，不低于90％，其降糖作用优于阿卡波糖，对自由基清除能力与维生素C的作用相当或更好，具有高活性降糖、清除自由基和抗氧化等多种生物活性功效。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (3)
1.一种高含量鳄梨果核原花青素的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1：向鳄梨果核粉末加入水或质量百分数为60%的乙醇或质量百分数为60%的甲醇水溶液，超声提取2～3次，每次30～60min，料液质量比为1:（10～30），合并提取液，浓缩，干燥后，得到鳄梨果核粗提物；
步骤2：步骤1得到的鳄梨果核粗提取物经以下任一方法富集得到富含原花青素的提取物，
方法1：以一种或多种有机溶剂组成的两相体系，所述两相体系为乙酸乙酯、正丁醇和水按体积比40:（5～20）:50的混合液，将步骤1得到的鳄梨果核粗提取物进行萃取，收集上层萃取液，干燥后，得到富含原花青素的提取物；
方法2：将步骤1得到的鳄梨果核粗提取物经大孔树脂吸附，所述大孔树脂的型号为HPD826、D101或AB-8中的一种，以质量百分数为5-10%的乙醇水溶液去杂，收集质量百分数为55-75%的乙醇洗脱液，干燥后，得到富含原花青素的提取物；
方法3：将步骤1得到的鳄梨果核粗提取物经C18柱分离，以质量百分数为5-10%的乙醇水溶液去杂，收集质量百分数为20-30%的乙醇洗脱液，干燥后，得到富含原花青素的提取物；
步骤3：将步骤2得到的富含原花青素的提取物，经高速逆流色谱纯化，以乙酸乙酯、正丁醇、乙醇和水按体积比40:5:10:50的混合液作为高速逆流分离体系，进行分离，收集流出液，浓缩干燥，即得到高含量的鳄梨果核原花青素。
2.根据权利要求1所述的一种高含量鳄梨果核原花青素的制备方法，其特征在于，步骤1所述鳄梨果核粉末，是鳄梨果核经粉碎、干燥、过20-40目筛所得。
3.根据权利要求1所述的一种高含量鳄梨果核原花青素的制备方法，其特征在于，步骤1和2所述干燥均为喷雾干燥、真空干燥或冷冻干燥中的一种；干燥至含水率为10-15%。
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