CN114605369A - 一种原花青素b2及其提纯方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种原花青素B2及其提纯方法和应用,涉及活性物质提取技术领域;本发明的提纯方法简单、稳定,且成本低廉,通过利用苹果多酚中的主要成分在水中和有机溶剂的溶解度不同,找出合适的苹果多酚和水的比例,以及合适的有机溶剂,能充分溶解除目标产物(原花青素B2)外的其他成分,达到初步提纯的目的,并利用大孔树脂吸附和重结晶,进一步提高原花青素B2的纯度。
Description
技术领域
本发明涉及活性物质提取技术领域,具体涉及一种原花青素B2及其提纯方法和应用。
背景技术
苹果多酚是苹果中的主要起功效的成分,具有抗氧化,抗衰老,抗癌防治心血管疾病和防辐射等多种作用,苹果多酚的主要成分为原花青素、花青素、儿茶素、绿原酸和黄酮等。其中原花青素类占主要成分,原花青素是由儿茶素,表儿茶素形成的二聚体,此外还有三聚体,四聚体等直到十聚体等。原花青素B2是一种原花青素二聚体,在苹果多酚中含量较高,原花青素B2目前有许多功效研究报道:具有抗氧化,抗肿瘤等功效,还能明显降低糖尿病大鼠血糖,对体内外非酶糖基化反应具有明显的抑制作用。
但由于苹果多酚含有大量的其他物质,导致现有的原花青素B2产品中原花青素B2的纯度较低。
发明内容
为克服现有的技术缺陷,本发明的目的在于提供一种原花青素B2及其提纯方法和应用,本发明的提纯方法能从苹果多酚中快速制备得到高纯度的原花青素B2。
为了解决上述技术问题,本发明提供了以下技术方案:
第一方面,提供了一种原花青素B2的提纯方法,所述提纯方法包括以下步骤:
S1、将苹果多酚溶解于水中,再加入有机溶剂进行萃取,得到第一提取物;所述有机溶剂为乙酸乙酯、乙酸丁酯或正丁醇;
S2、将第一提取物溶于水中,经大孔树脂吸附后,用不同浓度的乙醇溶液梯度依次洗脱,收集洗脱液,减压蒸发乙醇溶液后得到第二提取物;
S3、将第二提取物溶于溶剂中进行重结晶,得到含有原花青素B2的固体;所述溶剂选自甲醇、二氯甲烷、乙醇、乙酸乙酯、石油醚中的至少两种。
步骤S1中,其提纯原理为:苹果多酚的主要成分为原花青素,花青素,儿茶素,绿原酸,黄酮,多糖等物质,而这些物质在水中的溶解度不同,在有机溶剂中的溶解度也不尽相同,基于此,步骤S1通过找出合适的苹果多酚和水的比例,以及合适的有机溶剂,能充分溶解除目标产物(原花青素B2)外的其他成分,达到初步提纯的目的。
在步骤S1的初步提纯后,将第一提取物溶于水中,用大孔树脂选择性地吸附其中的原花青素B2,从而除去其它不被树脂吸附的物质,达到进一步纯化原花青素B2的目的。
具体地,步骤S1中,可通过加热或者超声波超声加快苹果多酚的溶解。上述加热方式不会破坏苹果多酚中的物质,只是为了加快苹果多酚的溶解。
更优选地,在萃取后还可加入干燥剂进行干燥,并通过减压浓缩除去有机溶剂;其中,所述干燥剂优选为无水硫酸钠。
进一步地,步骤S1中,所述萃取次数为1~5次。
优选地,所述萃取次数为3~5次。
进一步地,步骤S1中,所述苹果多酚的质量与水的体积之比为1:5~8。
具体地,在本发明中,苹果多酚的质量与水的体积比为g:mL。
进一步地,步骤S2中,所述大孔树脂为LX-96型大孔树脂、LX-T30型大孔树脂或LX-ss20型大孔树脂。
优选地,步骤S2中,所述大孔树脂为LX-ss20型大孔树脂。
进一步地,步骤S2中,还包括对大孔树脂进行预处理:用无水乙醇洗去大孔树脂中的残留物并活化树脂,再用纯净水洗至流出液无醇。
进一步地,步骤S2中,用不同浓度的乙醇洗脱为:用浓度为20%和30%的乙醇溶液依次洗脱。
进一步地,步骤S3中,所述溶剂选自乙酸乙酯和石油醚的混合物,所述溶剂中乙酸乙酯与石油醚的体积比为2:5~3:5:
第二方面,提供了一种原花青素B2,所述原花青素B2采用第一方面所述的提纯方法制备而得。
第三方面,提供了如第二方面所述的原花青素B2在制备抗氧化、抗肿瘤或降低糖尿病药物中的应用。
与现有技术相比,本发明具有以下有益效果:
本发明的提纯方法简单、稳定,且成本低廉,通过利用苹果多酚中的主要成分在水中和有机溶剂的溶解度不同,找出合适的苹果多酚和水的比例,以及合适的有机溶剂,能充分溶解除目标产物(原花青素B2)外的其他成分,达到初步提纯的目的,并利用大孔树脂吸附和重结晶,进一步提高原花青素B2的纯度。
本发明附加的方面和优点将在下面的描述中部分给出,这些将从下面的描述中变得明显,或通过本发明的实践了解到。
具体实施方式
为了更充分的理解本发明的技术内容,下面将结合具体实施例对本发明作进一步介绍和说明;显然,以下所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例;基于本发明中的实施例,本领域技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例,都属于本发明保护的范围。
对于本领域的技术人员来说,通过阅读本说明书公开的内容,本发明的特征、有益效果和优点将变得显而易见。
除非另外指明,所有百分比、分数和比率都是按本发明组合物的总质量计算的。本文术语“质量含量”可用符号“%”表示。
本文中“包括”、“包含”、“含”、“含有”、“具有”或其它变体意在涵盖非封闭式包括,这些术语之间不作区分。术语“包含”是指可加入不影响最终结果的其它步骤和成分。术语“包含”还包括术语“由...组成”和“基本上由...组成”。本发明的组合物和方法/工艺可包含、由其组成和基本上由本文描述的必要元素和限制项以及本文描述的任一的附加的或任选的成分、组分、步骤或限制项组成。
实施例1
本实施例提供一种原花青素B2的提纯方法,该提纯方法包括:
步骤S1:取100g市售的苹果多酚(其中原花青素B2含量为5%左右)溶解于600mL水中,通过超声波超声使其完全溶解,用300mL乙酸乙酯进行萃取,分出下层水相,再继续用300mL乙酸乙酯萃取,静置分层后,分出下层水相,水相再用200mL乙酸乙酯萃取一次,静置分层后,分出下层水相,将三次萃取得到的乙酸乙酯相合并到一起,加入15g无水硫酸钠进行干燥,干燥两小时后,过滤除去无水硫酸钠,有机相减压浓缩除去有机溶剂,得到第一提取物28.6g(米黄色固体),其中,第一提取物中原花青素B2含量为19.3%。
步骤S2:取步骤S1的到得的第一提取物10g,用200mL水溶解,得到富含原花青素B2的水溶液。取200mLLX-ss20型大孔树脂装柱,用无水乙醇200mL洗去树脂中的残留物,并活化树脂,再用纯净水洗至流出液无醇即可上样;富含原花青素B2的水溶液上完样后,先用200mL20%的乙醇水溶液洗脱,再用30%的乙醇水溶液350mL洗脱,收集30%的乙醇洗脱液,得到富含原花青素B2的洗脱液,将洗脱液减压蒸除乙醇和水,得到第二提取物2.5g(浅黄色固体),第二提取物中原花青素B2含量为70.2%。
步骤S3:取步骤S2中得到的固体5g,加入乙酸乙酯和石油醚的混合溶剂20mL,其中,乙酸乙酯:石油醚的体积比为2:5,加热回流,使固体完全溶解,自然降温至室温,于室温析晶12小时,有浅黄色固体析出。将析出的晶体过滤,真空干燥后,得到最终产物1.8g(类白色固体),最终产物中原花青素B2含量为93.7%。
实施例2
本实施例提供一种原花青素B2的提纯方法,该提纯方法包括:
步骤S1:取100g市售的苹果多酚(其中原花青素B2含量为5%左右)溶解于550mL水中,加热使其完全溶解,用200mL乙酸丁酯进行萃取,分出下层水相,再用200mL乙酸丁酯萃取,静置分层后,分出下层水相,水相再用200mL乙酸丁酯萃取一次,静置分层后,分出下层水相,将三次萃取得到的乙酸丁酯相合并到一起,加入15g无水硫酸钠进行干燥,干燥两小时后,过滤除去无水硫酸钠,有机相减压浓缩除去有机溶剂,得到第一提取物30.4g(米黄色固体),第一提取物中原花青素B2含量为21.2%。
步骤S2:取步骤S1的到得的第一提取物10g,用200mL水溶解,得到富含原花青素B2的水溶液。取200mLLX-ss20型大孔树脂装柱,用无水乙醇200mL洗去树脂中的残留物,并活化树脂,再用纯净水洗至流出液无醇即可上样,富含原花青素B2的水溶液上完样后,先用200mL15%的乙醇水溶液洗脱,再用25%的乙醇水溶液400mL洗脱,收集25%的乙醇洗脱液,得到富含原花青素B2的洗脱液,将洗脱液减压蒸除乙醇和水,得到第二提取物3.1g(浅黄色固体),第二提取物中原花青素B2含量为67.2%。
步骤S3:取步骤S2中得到的固体5g,加入乙酸乙酯和石油醚的混合溶剂25mL,其中乙酸乙酯和石油醚的体积比为3:5,加热回流,使固体完全溶解,自然降温至室温,于室温析晶12小时,有浅黄色固体析出。将析出的晶体过滤,真空干燥后,得到最终产物1.9g(类白色固体),最终产物中原花青素B2含量为90.1%。
实施例3
本实施例提供一种原花青素B2的提纯方法,该提纯方法包括:
步骤S1:取100g市售的苹果多酚(其中原花青素B2含量为5%左右)溶解于650mL水中,通过超声波超声使其完全溶解,用200mL正丁醇进行萃取,分出下层水相,再用200mL正丁醇萃取,静置分层后,分出下层水相,水相再用200mL正丁醇萃取一次,静置分层后,分出下层水相,将三次萃取得到的正丁醇相合并到一起,加入10g无水硫酸钠进行干燥,干燥两小时后,过滤除去无水硫酸钠,有机相减压浓缩除去溶剂,得到第一提取物29.7g(米黄色固体),第一提取物中原花青素B2含量为23.3%。
步骤S2:取步骤S1的第一提取物10g,用200mL水溶解,得到富含原花青素B2的水溶液。取200mL大孔树脂装柱,用无水乙醇200mL洗去树脂中的残留物,并活化树脂,再用纯净水洗至流出液无醇即可上样;富含原花青素B2的水溶液上完样后,先用200mL20%的乙醇水溶液洗脱,再用30%的乙醇水溶液350mL洗脱,收集30%的乙醇洗脱液,得到富含原花青素B2的洗脱液,将洗脱液减压蒸除乙醇和水,得到第二提取物2.6g(浅黄色固体),第二提取物中原花青素B2含量为72.2%。
步骤S3:取步骤S2中得到的固体5g,加入乙酸乙酯和石油醚的混合溶剂25mL,其中乙酸乙酯和石油醚的体积比为3:5,加热回流,使固体完全溶解,自然降温至室温,于室温析晶12小时,有浅黄色固体析出。将析出的晶体过滤,真空干燥后,得到最终产物1.7g(类白色固体),最终产物中原花青素B2含量为94.4%。
对比例1:
本对比例提供一种原花青素B2的提纯方法,该提纯方法与实施例2的区别在于:
步骤S1中未采用正丁醇进行萃取,同时未进一步采用步骤S3中的溶剂进行重结晶,经过步骤S2后最终得到第二提取物3.4g(浅黄色固体),第二提取物中原花青素B2含量为32.2%。
对比例2
本对比例提供一种原花青素B2的提纯方法,该提纯方法与实施例3的区别在于:
步骤S1中未采用正丁醇进行萃取,同时未进一步采用步骤S3中的溶剂进行重结晶,经过步骤S2后最终得到第二提取物3.8g(浅黄色固体),第二提取物中原花青素B2含量为28.1%。
综上所述,本发明通过利用苹果多酚中的主要成分在水中和有机溶剂的溶解度不同,找出合适的苹果多酚和水的比例,以及合适的有机溶剂,能充分溶解除目标产物(原花青素B2)外的其他成分,达到初步提纯的目的,并利用大孔树脂吸附和重结晶,进一步提高原花青素B2的纯度。
本发明采用上述提纯方法得到的产物中原花青素B2的纯度极高,在制备抗氧化、抗肿瘤或降低糖尿病药物具有更好的治疗效果。
以上对本发明实施例所提供的技术方案进行了详细介绍,本文中应用了具体个例对本发明实施例的原理以及实施方式进行了阐述,以上实施例的说明只适用于帮助理解本发明实施例的原理;同时,对于本领域的一般技术人员,依据本发明实施例,在具体实施方式以及应用范围上均会有改变之处,综上所述,本说明书内容不应理解为对本发明的限制。
Claims (10)
1.一种原花青素B2的提纯方法,其特征在于,包括以下步骤:
S1、将苹果多酚溶解于水中,再加入有机溶剂进行萃取,得到第一提取物;所述有机溶剂为乙酸乙酯、乙酸丁酯或正丁醇;
S2、将第一提取物溶于水中,经大孔树脂吸附后,用不同浓度的乙醇溶液梯度依次洗脱,收集洗脱液,减压蒸发乙醇溶液后得到第二提取物;
S3、将第二提取物溶于溶剂中进行重结晶,得到含有原花青素B2的固体;所述溶剂选自甲醇、二氯甲烷、乙醇、乙酸乙酯、石油醚中的至少两种。
2.根据权利要求1所述的原花青素B2的提纯方法,其特征在于,步骤S1中,所述苹果多酚的质量与水的体积之比为1:5~8。
3.根据权利要求1所述的原花青素B2的提纯方法,其特征在于,步骤S1中,所述萃取次数为1~5次。
4.根据权利要求1所述的原花青素B2的提纯方法,其特征在于,步骤S2中,所述大孔树脂为LX-96型大孔树脂、LX-T30型大孔树脂或LX-ss20型大孔树脂。
5.根据权利要求4所述的原花青素B2的提纯方法,其特征在于,步骤S2中,所述大孔树脂为LX-ss20型大孔树脂。
6.根据权利要求1所述的原花青素B2的提纯方法,其特征在于,步骤S2中,还包括对大孔树脂进行预处理:用无水乙醇洗去大孔树脂中的残留物并活化树脂,再用纯净水洗至流出液无醇。
7.根据权利要求1所述的原花青素B2的提纯方法,其特征在于,步骤S2中,用不同浓度的乙醇洗脱为:用浓度为20%和30%的乙醇溶液依次洗脱。
8.根据权利要求1所述的原花青素B2的提纯方法,其特征在于,步骤S3中,所述溶剂选自乙酸乙酯和石油醚的混合物,所述溶剂中乙酸乙酯与石油醚的体积比为2:5~3:5。
9.一种原花青素B2,其特征在于,所述原花青素B2采用权利要求1-8任一项所述的提纯方法制备而得。
10.根据权利要求9所述的原花青素B2在制备抗氧化、抗肿瘤或降低糖尿病药物中的应用。
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