CN117503809A - 一种银杏叶的提取方法及应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种银杏叶的提取方法及应用，涉及植物提取技术领域。具体而言包括如下步骤：1)通过乙醇浸提银杏叶，得到浸提液；将所述浸提液蒸发浓缩，得到浓缩液；2)将所述浓缩液与水混合，调节pH至4.2～4.5，而后煮沸；3)待煮沸后的提取液冷却后，先进行过滤，而后通过大孔树脂进行吸附；依次采用乙酸钠溶液和纯水冲洗所述大孔树脂，而后通过乙醇洗脱所述大孔树脂，收集洗脱液；4)将所述洗脱液减压浓缩并干燥，得到银杏叶提取物。本发明在保证提取物总银叶酸的含量为零的前提下，提供了一种提取效率高、提取物有效成分高的银杏叶的提取方法，所用的介质无有害物质残留，提取品质温度，具有良好应用前景。

Description

一种银杏叶的提取方法及应用
技术领域
本发明涉及植物提取技术领域，具体而言，涉及一种银杏叶的提取方法及应用。
背景技术
银杏是世界上最古老的树种之一，被誉为“活化石”，其果和叶均为常用的中药材，从银杏叶中提取出的银杏叶提取物含有黄酮类、萜内酯类、多酚类、有机酸、聚异戊烯醇、多种微量元素等有效成分，具有抗氧化作用、抗血小板激活因子作用、降血脂血糖作用、改善心脑血液循环作用，以及对中枢神经系统、消化系统、呼吸系统的保护作用等药理临床作用等。
银杏叶中除含有功效成分银杏黄酮苷和银杏内酯外，还含有一类引起不良反应的烷基酚酸类物质，约占银杏叶干重的1％～2％，主要由银杏酸、白果酚和白果二酚组成，其中与不良反应有关的主要是银杏酸(Ginkgolic acid，CAS号：22910-60-7)；银杏酸具有潜在的致敏和致突变作用，还有强烈的细胞毒性，可引起严重的过敏反应、基因突变、神经损伤，导致恶心和胃灼热、过敏性休克、过敏性紫癜、剥脱性皮炎、消化道黏膜过敏、痉挛和神经麻痹等不良反应。因此银杏酸被认为是毒副作用成分，应在制剂中严格限定其含量。
现行工艺中对银杏叶的提取方法大多着眼于对银杏黄酮等有效成分的提取，而缺乏对银杏酸等有害成分的关注；这可能导致提取物中银杏酸等烷基酚酸类物质的富集，并影响下游药物制品中的含量超标。
有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种银杏叶的提取方法，用于解决现有工艺未关注负面成分银杏酸、以导致下游药物制品中可能存在银杏酸含量超标的技术缺陷。
本发明的第二目的在于提供所述的银杏叶的提取方法所制得的银杏叶提取物，所述的提取物中总银杏酸含量为零或是接近于零。
本发明的第三目的在于提供所述的银杏叶提取物在药物制备方面的用途。
为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
一种银杏叶的提取方法包括如下步骤：
(1)、通过乙醇浸提银杏叶，得到浸提液；将所述浸提液蒸发浓缩，得到浓缩液；
(2)、将所述浓缩液与水混合，调节pH至4.2～4.5，而后煮沸；
(3)、待煮沸后的提取液冷却后，先进行过滤，而后通过大孔树脂进行吸附；依次采用乙酸钠溶液和纯水冲洗所述大孔树脂，而后通过乙醇洗脱所述大孔树脂，收集洗脱液；
(4)、将所述洗脱液减压浓缩并干燥，得到银杏叶提取物。
优选地，在步骤(1)中，所述银杏叶和所述乙醇的用量的固液比为1：(5～20)kg/L。
优选地，在步骤(1)中，所述浸提的时间为4h～8h；所述浸提的温度为30℃～75℃。
优选地，在步骤(1)中，所述浓缩液的质量与所述银杏叶的质量比为0.5～1。
优选地，在步骤(2)中，所述浓缩液与所述水的体积比为1：(4～6)。
优选地，在步骤(2)中，所述煮沸的持续时间为20min～50min。
优选地，在步骤(3)中，所述冷却的温度为0℃～10℃。
优选地，在步骤(3)中，所述乙酸钠溶液的质量浓度为2％～4％。
优选地，在步骤(3)中，所述乙酸钠溶液与所述大孔树脂的体积比为2～3。
优选地，在步骤(3)中，通过所述纯水冲洗所述大孔树脂至冲洗出水的导电率为10μs/cm～30μs/cm。
优选地，在步骤(3)中，所述洗脱采用一次洗脱，所述乙醇的浓度为30％～90％；或者，所述洗脱采用梯度洗脱，先采用浓度为10％～30％的乙醇进行洗脱，再采用浓度为70％～90％的乙醇进行洗脱。
优选地，在步骤(4)中，所述减压浓缩、所述干燥均在-0.06MPa～-0.09MPa下进行，所述减压浓缩和所述干燥的温度≤70℃。
一种银杏叶提取物，通过所述的银杏叶的提取方法制备得到。
所述的银杏叶提取物在药物制备方面的用途；本领域技术人员可以将所述的银杏叶提取物用于如营养神经类药品、他汀类药品、抗血小板凝聚类药品、扩血管的钙离子拮抗剂等类型的药品的制备。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
(1)本发明提供的银杏叶的提取方法具有容易操控、制造成本低廉、提取得率高、产品有效成分含量高、品质稳定等优势，且方法工艺中所采用的介质无有害物质残留，获得安全可靠的优质银杏叶提取物产品。
(2)本发明提供的银杏叶提取物中几乎不含有银杏酸，能够能够有效地规避银杏酸的毒副作用在提取物及其下游产品中的毒害风险。
具体实施方式
下面将结合具体实施方式对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，但是本领域技术人员将会理解，下列所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例，仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
本发明的第一方面在于提供一种银杏叶的提取方法。
所述的银杏叶的提取方法主要包括如下步骤：(1)、通过乙醇浸提银杏叶，得到浸提液；将所述浸提液蒸发浓缩，得到浓缩液；(2)、将所述浓缩液与水混合，调节pH至4.2～4.5，而后煮沸；(3)、待煮沸后的提取液冷却后，先进行过滤，而后通过大孔树脂进行吸附；依次采用乙酸钠溶液和纯水冲洗所述大孔树脂，而后通过乙醇洗脱所述大孔树脂，收集洗脱液；(4)、将所述洗脱液减压浓缩并干燥，得到银杏叶提取物。
作为一种优选的实施方式，在步骤(1)中，所述乙醇的浓度为90％～95％。需要注意的是，在本发明中所有涉及的乙醇纯度均为常规理解的体积分数，即乙醇的体积比浓度。
作为一种优选的实施方式，在步骤(1)中，所述浸提在30℃～75℃下进行；作为一种可选的实施方式，在步骤(1)中，所述浸提的温度包括但不限于30、35、40、45、50、55、60、65、70、75(℃)中的任意一种或是任意两种所构成的数值区间。
作为一种优选的实施方式，在步骤(1)中，所述浸提独立地依次进行1～5次，并合并获得所述浸提液。
作为一种优选的实施方式，在步骤(1)中，所述银杏叶和所述乙醇的用量的固液比为1：(5～20)(以kg/L计)；作为一种可选的实施方式，所述银杏叶和所述乙醇的用量的固液比包括但不限于1：5、1：6、1：7、1：8、1：9、1：10、1：11、1：12、1：13、1：14、1：15、1：16、1：17、1：18、1：19、1：20(kg/L)中的任意一种或是任意两种所构成的数值区间。
需要注意的是，在本实施方式中所给出的固液比用于衡量乙醇的总用量，当所述浸提进行了若干次时，应当计算各次浸提所采用的乙醇的体积之和，使其满足本实施方式。
作为一种优选的实施方式，在步骤(1)中，所述浸提的时间为4h～8h；作为一种可选的实施方式，在步骤(1)中，所述浸提的时间包括但不限于4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8(h)中的任意一种或是任意两种所构成的数值区间。
需要注意的是，在本实施方式中给出的浸提时间用于衡量浸提的总用时，当所述浸提进行了若干次时，应当计算各次浸提所采用的时间之和，使其满足本实施方式。
作为一种优选的实施方式，在步骤(1)中，在进行所述浸提前还包括：将所述银杏叶在室温下浸渍8h～20h，而后将所述浸渍后固液混合物共同地用于所述浸提；
作为一种更优选的实施方式，所述浸渍的溶剂同样为90％～95％乙醇溶液，所述浸渍的溶剂用量以质量计为所述银杏叶质量的3～6倍。
作为一种优选的实施方式，在步骤(1)中，所述浓缩液的质量与原生药量的质量比为0.5～1；其中，所述原生药量指的是未经处理的所述银杏叶的药材原料。
作为一种优选的实施方式，在步骤(2)中，所述浓缩液与所述水的体积比为1：(4～6)；作为一种可选的实施方式，在步骤(2)中，所述浓缩液与所述水的体积比包括但不限于1：4、1：4.5、1：5、1：5.5、1：6中的任意一种或是任意两种所构成的数值区间。
作为一种优选的实施方式，在步骤(2)中，所述煮沸的持续时间为20min～50min；作为一种可选的实施方式，在步骤(2)中，所述煮沸的持续时间包括但不限于20、25、30、35、40、45、50(min)中的任意一种或是任意两种所构成的数值区间。
作为一种优选的实施方式，在步骤(3)中，先将所述煮沸后的提取液自然冷却至室温后，再冷却至10℃以下，而后进行固液分离操作。
作为一种更优选的实施方式，在步骤(3)中，进行所述过滤前还包括：在进行所述冷却的过程中，静置所述提取液，至固体药料自然沉降，以增加后续过滤的处理效率。
经实验发现，煮沸后的药液在低温状态时，药液中不溶性杂质的沉降效果很好；通过在10℃以下进行沉降，能够高效地除去药液中的杂质，增加过滤效率。还需要注意的是，在进行过滤时，药液会缓慢升温，在大孔树脂吸附步骤前，需要待药液升温至室温温度后再进行吸附操作。
作为一种优选的实施方式，在步骤(3)中，进行所述冷却至0℃～10℃。
作为一种优选的实施方式，在步骤(3)中，本领域技术人员可以根据过滤情况选择所述过滤所采用的滤网型号，在本发明中仅要求过滤所得的液体中不含有人眼可见的固体悬浮物，并呈现澄清状态即可，因此对过滤设备不作过多的限制。
作为一种优选的实施方式，在步骤(3)中，所述大孔树脂包括HPD450型、聚酰胺树脂、D101型树脂、ADS-17型树脂或AB-8型树脂中的一种。
作为一种优选的实施方式，在步骤(3)中，所述大孔树脂与原生药量的质量比为(1～2)：1。
作为一种优选的实施方式，在步骤(3)中，所述乙酸钠溶液的质量浓度为2％～4％；作为一种可选的实施方式，所述乙酸钠溶液的质量浓度包括但不限于2％、2.2％、2.4％、2.5％、2.6％、2.8％、3％、3.2％、3.4％、3.5％、3.6％、3.8％、4％中的任意一种或是任意两种所构成的数值区间。
作为一种优选的实施方式，在步骤(3)中，所述乙酸钠溶液与所述大孔树脂的体积比为2～3；作为一种可选的实施方式，所述乙酸钠溶液与所述大孔树脂的体积比包括但不限于2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3。
作为一种优选的实施方式，在步骤(3)中，通过所述纯水冲洗所述大孔树脂，至冲洗出水的导电率为10μs/cm～30μs/cm；本领域技术人员可以依据此电导率限度为准，对所述纯水的冲洗用量进行把控；作为一种可选的实施方式，停止所述纯水冲洗时，冲洗出水的导电率包括但不限于10、12、14、15、16、18、20、22、24、25、26、28、30(μs/cm)。
作为一种优选的实施方式，在步骤(3)中，进行洗脱采用梯度洗脱或是一次洗脱进行；
当采用所述梯度洗脱时，先采用浓度为10％～30％的乙醇进行洗脱，再采用浓度为70％～90％的乙醇进行洗脱；
当采用所述一次洗脱时，所述乙醇的浓度为30％～90％。
作为一种可选的实施方式，当采用所述梯度洗脱时，先采用低浓度乙醇进行洗脱，再用高浓度乙醇进行洗脱；其中，所述低浓度乙醇包括但不限于10％、12％、15％、18％、20％、22％、25％、28％、30％，所述高浓度乙醇包括但不限于70％、75％、80％、85％、90％；当采用一次洗脱时，所述乙醇30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％；以上取值均可以采用任意一种或是任意两种构成的数值区间。
作为一种更优选的实施方式，在步骤(3)中：当采用所述梯度洗脱时，以质量计，低浓度乙醇的用量为所述大孔树脂的质量的1～2倍，高浓度乙醇的用量为所述大孔树脂的质量的5～6倍；
当采用所述一次洗脱时，所述洗脱用乙醇的质量为所述大孔树脂的体积的5～6倍。
作为一种优选的实施方式，在步骤(3)中，进行洗脱后的所述大孔树脂可以返回至本步骤中的吸附工序，以作重复利用。
作为一种优选的实施方式，在步骤(4)中，所述减压浓缩、所述干燥均在-0.06MPa～-0.09MPa下进行，所述减压浓缩和所述干燥的温度≤70℃；作为一种可选的实施方式，所涉及的压力条件包括但不限于-0.06、-0.065、-0.07、-0.075、-0.08、-0.085、-0.09(MPa)中的任意一种或的任意两种构成的数值区间，所涉及的温度条件包括但不限于70、65、60、55、50、45、40、35、30、25、20(℃)中的任意一种或的任意两种构成的数值区间。
本发明的第二方面在于提供所述第一方面中所述的银杏叶的提取方法所制得的银杏叶提取物。所述的银杏叶提取物中不含有总银杏酸，且能够最大限度地保留其他活性有效成分。
本发明的第三方面在于提供所述第二方面中所述的银杏叶提取物在药物制备方面的用途。本领域技术人员应当理解的是：当采用如所述的银杏叶提取物进行药品的制备工艺、或是包含有所述的银杏叶提取物的药品都应当属于本发明的第三方面所涉及的权利范围。
实施例1
步骤一、取银杏叶100kg，采用500L乙醇于室温浸渍过夜(12h)，而后将固液混合的浸渍液用于进一步的浸提；
步骤二、采用90％乙醇进行浸提，浸提温度为40℃；第一次浸提的乙醇用量为500L，浸提时间为2h；第二次浸提的乙醇用量为400L，浸提时间为1.5h；第三次浸提的乙醇用量为400L，浸提时间为1.5h；
步骤三、合并上述各次浸提的浸提液，蒸发浓缩至100L，即每1ml含原生药量1g；
步骤四、加入步骤三中浓缩液的5倍体积的纯化水，而后调节pH至4.4；
步骤五、将步骤四所得到的稀释液煮沸，沸腾时间为30min；
步骤六、待沸腾液冷却至10℃，静置沉降；取沉降后的上清液，进行过滤，得到滤液；
步骤七、将滤液通过HPD450型大孔吸附树脂柱进行吸附；先用200L的纯水进行冲洗，再用400L 3％质量浓度的乙酸钠溶液冲洗，而后用纯水冲洗，直至所得到的冲洗液的电导率为20μs/cm；
步骤八、采用1000L 70％乙醇进行大孔吸附树脂的洗脱，收集洗脱液；
步骤九、将洗脱液在60℃、-0.08MPa下进行脱水干燥，并得到银杏叶提取物。
实施例2
与实施例1基本相同，区别仅在于：
在步骤一中：将同批次的银杏叶药材破碎至3mm～5mm的药粉进行操作；
在步骤二中：将90％乙醇替换为92％乙醇；将浸提温度替换为75℃；
在步骤四中：调节pH值至4.2；
在步骤六中：冷却至5℃。
实施例3
与实施例1基本相同，区别仅在于：
在步骤二中：将90％乙醇替换为92％乙醇；将浸提温度替换为60℃；
在步骤四中：调节pH值至4.5；
在步骤六中：冷却至0℃。
实施例4
与实施例1基本相同，区别仅在于：
在步骤二中：将90％乙醇替换为93％乙醇；将浸提温度替换为75℃；
在步骤七中：将3％质量浓度的乙酸钠溶液替换为2％质量浓度的乙酸钠溶液；将电导率替换为10μs/cm；
在步骤八中：将70％乙醇替换为90％乙醇。
实施例5
与实施例1基本相同，区别仅在于：
在步骤二中：将90％乙醇替换为95％乙醇；将浸提温度替换为60℃；
步骤八整体替换为：先用300L 20％乙醇进行大孔吸附树脂的洗脱，再用1000L70％乙醇进行大孔吸附树脂的洗脱，收集洗脱液。
实施例6
与实施例1基本相同，区别仅在于：
在步骤二中：将90％乙醇替换为92％乙醇；将浸提温度替换为75℃；
步骤八整体替换为：先用300L 20％乙醇进行大孔吸附树脂的洗脱，再用1000L85％乙醇进行大孔吸附树脂的洗脱，收集洗脱液。
实施例7
与实施例1基本相同，区别仅在于：
在步骤二中：将90％乙醇替换为95％乙醇；将浸提温度替换为75℃；
步骤八整体替换为：先用300L 20％乙醇进行大孔吸附树脂的洗脱，再用1200L85％乙醇进行大孔吸附树脂的洗脱，收集洗脱液。
实施例8
与实施例1基本相同，区别仅在于：
在步骤二中：将90％乙醇替换为92％乙醇；将浸提温度替换为60℃；
步骤八整体替换为：先用300L 20％乙醇进行大孔吸附树脂的洗脱，再用1200L85％乙醇进行大孔吸附树脂的洗脱，收集洗脱液。
对上述各实施例获得的银杏叶提取物进行检测，按照《中国药典》(2020年版)中银杏叶提取物的检测方法进行检验。检验结果如下表1所示。
表1提取物成分表
尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明，然而应意识到，以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；本领域的普通技术人员应当理解：在不背离本发明的精神和范围的情况下，可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围；因此，这意味着在所附权利要求中包括属于本发明范围内的所有这些替换和修改。

Claims (10)

1.一种银杏叶的提取方法，其特征在于，所述提取方法包括如下步骤：
(1)、通过乙醇浸提银杏叶，得到浸提液；将所述浸提液蒸发浓缩，得到浓缩液；
(2)、将所述浓缩液与水混合，调节pH至4.2～4.5，而后煮沸；
(3)、待煮沸后的提取液冷却后，先进行过滤，而后通过大孔树脂进行吸附；依次采用乙酸钠溶液和纯水冲洗所述大孔树脂，而后通过乙醇洗脱所述大孔树脂，收集洗脱液；
(4)、将所述洗脱液减压浓缩并干燥，得到银杏叶提取物。
2.根据权利要求1所述的银杏叶的提取方法，其特征在于，在步骤(1)中：所述银杏叶和所述乙醇的用量的固液比为1：(5～20)kg/L；
优选地，所述浸提独立地依次进行1～5次，并合并获得所述浸提液；
优选地，所述浸提的时间为4h～8h；
优选地，所述浸提的温度为30℃～75℃。
3.根据权利要求1所述的银杏叶的提取方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述浓缩液的质量与所述银杏叶的质量比为0.5～1。
4.根据权利要求1所述的银杏叶的提取方法，其特征在于，在步骤(2)中：所述浓缩液与所述水的体积比为1：(4～6)；
优选地，所述煮沸的持续时间为20min～50min。
5.根据权利要求1所述的银杏叶的提取方法，其特征在于，在步骤(3)中，所述冷却的温度为0℃～10℃。
6.根据权利要求1所述的银杏叶的提取方法，其特征在于，在步骤(3)中，所述乙酸钠溶液的质量浓度为2％～4％；
优选地，所述乙酸钠溶液与所述大孔树脂的体积比为2～3；
优选地，通过所述纯水冲洗所述大孔树脂至冲洗出水的导电率为10μs/cm～30μs/cm。
7.根据权利要求1所述的银杏叶的提取方法，其特征在于，在步骤(3)中，所述洗脱采用一次洗脱，所述乙醇的浓度为30％～90％；
或者，所述洗脱采用梯度洗脱，先采用浓度为10％～30％的乙醇进行洗脱，再采用浓度为70％～90％的乙醇进行洗脱。
8.根据权利要求1所述的银杏叶的提取方法，其特征在于，在步骤(4)中，所述减压浓缩和所述干燥的压力为-0.06MPa～-0.09MPa，所述减压浓缩和所述干燥的温度≤70℃。
9.如权利要求1～8任一项所述的银杏叶的提取方法所制备得到的银杏叶提取物。
10.如权利要求9所述的银杏叶提取物在药物制备方面的用途。
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