CN111388550B - 一种李子抗癌活性多酚的制备方法 - Google Patents

一种李子抗癌活性多酚的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种李子抗癌活性多酚的制备方法，包括如下步骤：(1)制备李子干粉；(2)将李子干粉与乙醇按质量体积比为1g：3‑25mL混合，搅拌得浆液，对浆液进行超声处理，然后进行抽滤；重复上述步骤三次，合并获得的滤液后进行蒸馏，获得旋蒸液；(3)将步骤(2)获得的旋蒸液置于真空冷冻干燥机干燥处理，得到李子多酚粗提物；(4)按质量体积比为1g：10‑20mL将李子多酚粗提物溶于去离子水中，过滤，滤液采用大孔树脂进行洗脱纯化处理，收集洗脱液；(5)洗脱液于下真空蒸发回收乙醇，余下旋蒸液经冷冻干燥，即可得到具有抗癌活性的李子多酚。本发明提供的方法制备的李子多酚纯度高且组分明确，有利于提高李子多酚的利用范围和生理活性。

Description

一种李子抗癌活性多酚的制备方法
技术领域
本发明属于多酚的制备技术领域，具体涉及一种李子抗癌活性多酚的制备方法。
背景技术
多酚类物质是指分子中具有多个酚羟基的植物酚类。李子渣果实内有很高含量的天然多酚类化合物，植物多酚类物质具有很强的抗氧化能力，是相同剂量下维生素C的抗氧化能力的20倍，因此可有效的清除人体内的氧自由基，从而减少氧自由基对正常细胞的破坏，起到保护作用。同时，多酚类化合物还可以预防潜在的致癌性物质在人体内的形成和聚焦，改善新陈代谢，防癌作用显著。
中国专利CN106890226A(申请号201510954347.4)公开了一种李子渣制备多酚的方法，将李子渣干粉与乙醇混合，搅拌，萃取，静置、过滤，萃取，并合并萃取液，蒸发干燥；干燥产物用石油醚萃取，合并上清液回收石油醚后，加入乙酸乙酯进行2次萃取，合并上清液蒸发出乙酸乙酯，固体冻结后冷冻干燥的李子渣多酚粗提物。该方法采用常规的多酚溶剂萃取方法制备李子渣多酚，但该方法存在较多不足；
(1)采用石油醚萃取，仅仅获取了极性较小的组分，而含量更多活性可能更强的组分被遗弃在萃余液中，导致资源浪费，且继续采用更大极性的乙酸乙酯萃取并不形成极性梯度，因此该步骤并无明显意义。
(2)采用石油醚和乙酸乙酯为萃取溶剂，存在石油醚和乙酸乙酯溶剂残留风险。
(3)石油醚和乙酸乙酯价格昂贵、易挥发燃烧，大量使用成本高且存在安全风险。
(4)该方法仅用乙醇浸提，采用石油醚和乙酸乙酯萃取，所制备的多酚并没有经过纯化，含有较多杂质，会导致多酚活性不强，且不利于进一步利用。
发明内容
针对现有技术中存在的上述不足，本发明的目的在于提供一种李子抗癌活性多酚的制备方法，该制备方法未采用石油醚和乙酸乙酯作为萃取剂，降低了萃取剂残留的风险，提高了原料利用率，降低了成本，制备出的李子多酚纯度高且组分明确，有利于提高李子多酚的利用范围和生理活性。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种李子抗癌活性多酚的制备方法，包括如下步骤：
(1)制备李子干粉；
(2)将李子干粉与乙醇按质量体积比为1g：3-25mL混合，搅拌得浆液，对浆液进行超声处理，然后进行抽滤；重复上述步骤三次，合并获得的滤液后进行蒸馏，获得旋蒸液；
(3)将步骤(2)获得的旋蒸液置于真空冷冻干燥机干燥处理36-72h，得到李子多酚粗提物；
(4)按质量体积比为1g：10-20mL将李子多酚粗提物溶于去离子水中，过滤，滤液采用大孔树脂进行洗脱纯化处理，收集洗脱液；
(5)洗脱液于25-45℃下真空蒸发回收乙醇，余下旋蒸液经冷冻干燥，即可得到具有抗癌活性的李子多酚。
进一步，步骤(4)中进行洗脱纯化处理具体步骤为：过滤后的滤液泵入预先填充好的D101大孔吸附树脂柱中，先采用去离子水冲洗25-40min，然后采用乙醇洗脱30-90min。
进一步，步骤(4)中过滤采用的滤膜为0.22μm水系超滤膜或0.45μm水系超滤膜。
进一步，步骤(2)中超声频率为25-50MHz，超声时间为30-90min。
进一步，步骤(2)中所述乙醇为质量分数为75％-85％的乙醇。
进一步，步骤(1)中将李子去核后冻干并粉粹，即可获得李子干粉。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
(1)本发明采用75％-85％乙醇溶液浸取李子多酚，且采用超声技术进行辅助浸提，能有效提升李子多酚的提取率，降低了现有因采用石油醚和乙酸乙酯作为萃取剂而带来的萃取剂残留的风险；随后冻干为李子多酚粗提物，继而通过大孔树脂进行纯化，从而获得具有抗癌活性的李子多酚，该李子多酚纯度高且组分明确，有利于提高李子多酚的利用范围和生理活性。
(2)本发明在制备过程中采用大孔树脂对多酚粗提物进行纯化，减少了多酚提取物中糖等杂质的含量，有助于提高多酚纯度和活性。
(3)本发明制备过程中仅采用乙醇和水为浸取液和洗脱液，具有成本低和无毒，对环境更友好，工艺简单等特点。
(4)本发明具有明确的抗癌细胞增殖生理活性，能更好的被用于相关领域。
(5)本发明含有芦丁、绿原酸、木犀草素、根皮素、柚皮素和根皮苷，其中芦丁的相对含量超过80％。
(6)本发明采用水溶解李子多酚粗提物并用水洗脱除杂，避免了乙醇溶解导致进一步纯化过程中多酚组分的损失。
附图说明
图1为本发明李子多酚的主要成分；
图2为本发明李子多酚对肺癌细胞的抑制活性；
图3为本发明李子多酚浓度与活性氧荧光相对强度的关系。
具体实施方式
下面结合具体实施例，对本发明方法进行详细说明。
一、本发明李子抗癌活性多酚的制备
实施例1
一种李子抗癌活性多酚的制备方法，包括如下步骤：
(1)将李子去核后冻干并粉粹为李子干粉；
(2)将100g李子干粉与1000mL质量分数为80％的乙醇混合，在转速为10000r/min下，匀速转动2min获得匀浆；将匀浆置于容器中进行超声处理，超声频率为45MHz，超声处理30min，然后进行抽滤；重复上述步骤三次(即为再次称取相同质量体积的李子干粉和乙醇，搅拌均匀后进行超声、抽滤处理)，合并获得的滤液后进行蒸馏，获得旋蒸液，蒸馏过程中乙醇可以回收再利用；
(3)将步骤(2)获得的旋蒸液置于真空冷冻干燥机内进行干燥处理48h，得到李子多酚粗提物；
(4)将2g李子多酚粗提物溶于20mL去离子水中，用0.22μm水系超滤膜进行过滤，滤液用恒流泵泵入预先填充好的D101大孔吸附树脂柱中，先用去离子水进行冲洗35min，以去除糖等杂质，然后用乙醇洗脱60min，以解吸多酚，收集洗脱液；
(5)将上述洗脱液置于40℃下真空蒸发回收乙醇，余下旋蒸液冷冻干燥，即可得到具有抗癌活性的李子多酚。
实施例2
一种李子抗癌活性多酚的制备方法，包括如下步骤：
(1)将李子去核后冻干并粉粹为李子干粉；
(2)将100g李子干粉与300mL质量分数为75％的乙醇混合，在转速为10000r/min下，匀速转动2min获得匀浆；将匀浆置于容器中进行超声处理，超声频率为25MHz，超声处理60min，然后进行抽滤；重复上述步骤三次，合并获得的滤液后进行蒸馏，获得旋蒸液，蒸馏过程中乙醇可以回收再利用；
(3)将步骤(2)获得的旋蒸液置于真空冷冻干燥机内进行干燥处理36h，得到李子多酚粗提物；
(4)将1g李子多酚粗提物溶于15mL去离子水中，用0.22μm水系超滤膜进行过滤，滤液用恒流泵泵入预先填充好的D101大孔吸附树脂柱中，先用去离子水进行冲洗25min，以去除糖等杂质，然后用乙醇洗脱30min，以解吸多酚，收集洗脱液；
(5)将上述洗脱液置于25℃下真空蒸发回收乙醇，余下旋蒸液冷冻干燥，即可得到具有抗癌活性的李子多酚。
实施例3
一种李子抗癌活性多酚的制备方法，包括如下步骤：
(1)将李子去核后冻干并粉粹为李子干粉；
(2)将100g李子干粉与2500mL质量分数为85％的乙醇混合，在转速为10000r/min下，匀速转动2min获得匀浆；将匀浆置于容器中进行超声处理，超声频率为50MHz，超声处理90min，然后进行抽滤；重复上述步骤三次，合并获得的滤液后进行蒸馏，获得旋蒸液，蒸馏过程中乙醇可以回收再利用；
(3)将步骤(2)获得的旋蒸液置于真空冷冻干燥机内进行干燥处理72h，得到李子多酚粗提物；
(4)将2g李子多酚粗提物溶于40mL去离子水中，用0.45μm水系超滤膜进行过滤，滤液用恒流泵泵入预先填充好的D101大孔吸附树脂柱中，先用去离子水进行冲洗40min，以去除糖等杂质，然后用乙醇洗脱90min，以解吸多酚，收集洗脱液；
(5)将上述洗脱液置于45℃下真空蒸发回收乙醇，余下旋蒸液冷冻干燥，即可得到具有抗癌活性的李子多酚。
二、本发明制备的李子抗癌活性多酚的性能测试
1、李子抗癌活性多酚主要成分的分析
本发明对制备的李子抗癌活性多酚的主要成分进行了分析，结果如图1所示，从图中可知，从图中可知，李子多酚由芦丁、绿原酸、木犀草素、根皮素、柚皮苷和根皮苷组成。本发明李子多酚的主要成分为芦丁，相对含量超过了80％。明确的成分有助于本发明的应用。
2、李子抗癌活性多酚对肺癌细胞的抑制情况
本发明将制备得到的纯化的李子多酚、李子多酚粗提物和维生素C在，这三种对肺癌细胞活性的抑制情况，结果如图2所示。从图中可知，从图中可知，随着李子多酚浓度的增加，肺癌细胞的活力逐渐减弱，说明高浓度李子多酚更有利于抑制肺癌细胞的增殖。当浓度大于125μg/mL时，本发明制备的纯化李子多酚对肺癌细胞活性的抑制效果显著强于李子多酚粗提物和维生素C。特别是本发明的抗癌活性明显强于维生素C，而很多果蔬多酚提取物的抗癌活性弱于维生素C。
3、李子多酚浓度对活性氧荧光相对强度的影响
本发明对李子多酚浓度对活性氧荧光相对强度影响进行了测试，具体结果见图3。从图中可知，随着李子纯化多酚浓度的增加，肺癌细胞中活性氧浓度随之增加，从而更有效地诱导肺癌细胞启动凋亡程序，说明李子多酚具有较强抗氧化能力，可通过抗氧化/促氧化途径抑制肺癌细胞增殖。
最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (5)

1.一种李子抗癌活性多酚的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）制备李子干粉；
（2）将李子干粉与乙醇按质量体积比为1 g：3-25 mL混合，搅拌得浆液，对浆液进行超声处理，然后进行抽滤；重复上述步骤三次，合并获得的滤液后进行蒸馏，获得旋蒸液；所述乙醇为质量分数为75%-85%的乙醇；
（3）将步骤（2）获得的旋蒸液置于真空冷冻干燥机干燥处理36-72 h，得到李子多酚粗提物；
（4）按质量体积比为1 g：10-20 mL将李子多酚粗提物溶于去离子水中，过滤，滤液采用大孔树脂进行洗脱纯化处理，收集洗脱液；
（5）洗脱液于25-45℃下真空蒸发回收乙醇，余下旋蒸液经冷冻干燥，即可得到具有抗癌活性的李子多酚；其中，所述癌为肺癌。
2.根据权利要求1所述的李子抗癌活性多酚的制备方法，其特征在于，步骤（4）中进行洗脱纯化处理具体步骤为：过滤后的滤液泵入预先填充好的D101大孔吸附树脂柱中，先采用去离子水冲洗25-40 min，然后采用乙醇洗脱30-90 min。
3.根据权利要求1所述的李子抗癌活性多酚的制备方法，其特征在于，步骤（4）中过滤采用的滤膜为0.22 μm水系超滤膜或0.45 μm水系超滤膜。
4.根据权利要求1所述的李子抗癌活性多酚的制备方法，其特征在于，步骤（2）中超声频率为25-50 MHz，超声时间为30-90 min。
5.根据权利要求1所述的李子抗癌活性多酚的制备方法，其特征在于，步骤（1）中将李子去核后冻干并粉粹，即可获得李子干粉。
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